三种方法测定蚯蚓脱氧核糖核酸酶（EWD2）的分子量

目的用不同方法测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶分子量。方法采用凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD2)的分子量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其分子量分别为62.16kD、62.08kD和69.075kD。结论EWD2为单亚基脱氧核糖核酸酶,其分子量在60-70kD。     

不同分子量麦冬寡糖体外抑制α-葡萄糖苷酶活性的研究

目的制备不同分子量范围的麦冬寡糖,考察其体外抗α-葡萄糖苷酶活性,探究麦冬寡糖的分子量与抗α-葡萄糖苷酶活性的关系。方法采用乙醇和水提取麦冬,以Sephadex G-75柱层析法进行脱色脱蛋白,以Sephadex G-15柱层析法对麦冬寡糖进行分级分离。利用基质辅助激光解析飞行质谱仪(MALDI-TOF-MASS)检测其分子量范围;并采用来源于啤酒酵母的α-葡萄糖苷酶和来源于大鼠的具有α-葡萄糖苷酶活性的小肠绒毛提取物测定各麦冬寡糖的抑制α-葡萄糖苷酶活性。结果采用Sephadex G-15柱层析法对麦冬寡糖进行分级分离,得到两种不同分子量的麦冬寡糖组分,经MALDI-TOF-MASS检测,其分子量范围分别为1100~2500(MDPS-1)和500~1500(MDPS-2)。该两部分麦冬寡糖组分对啤酒酵母来源的α-葡萄糖苷酶和来源于大鼠小肠绒毛提取物的α-葡萄糖苷酶均有明显的抑制作用,且在50~200 mg/m L的浓度范围内呈一定量效关系。其中分子量范围为500~1 500的麦冬寡糖组分的抑制作用更强。结论麦冬寡糖的分子量与其抗α-葡萄糖苷酶活性有密切关系,分子量范围为500~1 500的麦冬寡糖具有更显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,为重要的功效组分。     

鸡胚脊髓背角神经营养物质的HPLC纯化分析

目的　纯化鸡胚脊髓背角内的神经营养物质。方法　采用 Sephadex G- 2 0 0凝胶过滤层析法分离鸡胚脊髓背角内的神经营养物质 ,以鸡胚背根神经节细胞培养结合 MTT法检测各洗脱峰液的神经营养活性。所得活性组分用高效液相色谱技术 (HPL C)进一步分离 ,同前用 MTT法检测各洗脱峰液的神经营养活性。结果　经层析获得三个洗脱峰 ,其中第 2洗脱峰液促进培养神经细胞生长的活性最强 (P<0 .0 1) ,提示 2峰洗脱液含有神经营养物质。 HPL C后获得 7个洗脱峰。经 MTT法测定各峰洗脱液对鸡胚 DRG神经细胞的生长活性发现 F峰有明显的神经营养活性 (P<0 .0 5 )。结论　通过分离纯化获得了有较强活性的神经营养物质。     

全蝎抗凝活性成分的定性分析

目的鉴定与探讨全蝎抗凝活性成分。方法用不同的展开剂，采用薄层色谱法和纸层析法对全蝎抗凝活性成分进行鉴定和分析。结果全蝎抗凝活性成分中不含生物碱、糖类、甾体和萜类，含蛋白质和多肽，但在氨基酸的定性检测中，分离得到6个成分的斑点，与14种氨基酸对照品在相同位置上有相同颜色的斑点。结论全蝎抗凝活性成分中含有多种氨基酸、蛋白质和多肽。     

人精浆中γ—精浆蛋白的分离纯化研究

通过离心，透析分离正常人精浆，再经二次Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析，成功的纯化了γ－精浆蛋白。等电聚焦电泳法测等电点的约为ｐＩ６．５，凝胶过滤层析法测其分子量约为２８０００。     

米糠蛋白酶解产物中血管紧张素转化酶抑制剂的研究

目的从米糠蛋白酶解产物中提取制备血管紧张素转化酶（ACE）抑制剂。方法采用等电点沉淀的方法提取米糠中的蛋白质，先后经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后，采用凝胶层析法分离酶解组分，检测各组分ACE抑制性，对活性较强的组分用阳离子交换树脂SP—Sephadex C-25作进一步的分离检测。结果获得的ACE抑制肽分子量为307．1，其等电点在5～6之间。它在消化液中具有稳定性。其IC50为0．061mg／ml。结论从米糠蛋白酶解产物中获取了ACE抑制剂。     

免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠NK细胞活性的影响

目的:提取低分子量免疫活性地龙肽,并就其对自然杀伤(NK)细胞活性的影响进行体外研究。方法:采用粗分离、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法分离纯化地龙肽;采用乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性。结果:用凝胶过滤层析分离得到地龙肽T(分子量8000～20000,含有7种蛋白)。用离子交换层析又将地龙肽T分为A、B两部分,地龙肽A由5种蛋白组成,其中有4种分子量在13000以下;地龙肽B仅由一种蛋白构成,分子量约11000;地龙肽A和T可明显提高NK细胞的活性;地龙肽A、B和T皆可减弱环磷酰胺和地塞米松的免疫抑制作用,提高NK细胞的杀伤率。结论:地龙肽T、A单独应用即可以增强NK细胞的活性,并与IL-2具有协同作用;地龙肽T、A和B还可以拮抗地塞米松、环磷酰胺等免疫抑制剂。     

家蚕蚕蛹变应原的鉴定、分离与纯化

目的鉴定、分离和纯化大造(Dazao)品系家蚕(Bombyxmori)的蚕蛹粗提液中的变应原蛋白质组分,为家蚕变应原的蛋白质组学和功能基因组学深入研究奠定基础。方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blotting,鉴定了家蚕蚕蛹粗浸液中变应原蛋白质分子,并通过阴离子交换和凝胶过滤层析分别对家蚕蚕蛹变应原蛋白质进行初步纯化。结果在家蚕蚕蛹粗浸液中含有表观分子量分别为80000及30000的蚕蛹变应原;从家蚕蛹全虫粗提液中初步分离到分子量为30000的蛹变应原蛋白组分。结论分离得到的家蚕蚕蛹变应原蛋白组分可用于系统研究家蚕过敏原蛋白分子的蛋白质组学和功能基因组学。     

雷氏大疣蛛毒素纤溶酶的两种分离方法比较

用反相层析及阳离子交换法分离雷氏大疣蛛毒素,比较不同分离方法分离蜘蛛毒素的差异以及分离方法的先后顺序对分离效果的影响.结果 表明:反相层析分离蜘蛛毒素的效果较好.收集14种组分,将其中的活性组分2、10利用阳离子交换再分,得到单一活性组分;若先用离子交换法分离,再用反相层析法再分.则收集的条带众多且蛋白含量稀释的很多,不适宜作活性测定及SDS电泳检测纯度.因此,通过比较,得出了分离蜘蛛毒素的适宜方法,即首先采用反相层析分离,检测活性后将活性组分利用离子交换再分,可得出单一蛋白组分.     

人精浆中γ－精浆蛋白的分离纯化研究

通过离心，透析分离正常人精浆，再经二次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，成功的纯化了γ－精浆蛋白。等电聚焦电冰法测其等电点约为ｐＩ６．５，凝胶过滤层析法测其分子量约为２８０００。免疫电泳结果证明其纯度较高，并与人血清、唾液、初乳等无交叉抗原。在法医物征实践及临床诊断方面均具有重要意义。     

Preliminary separation of the growth factors in platelet-rich plasma: effects on the proliferation of human marrow-derived mesenchymal stem cells

Background Platelet-rich plasma （PRP） as a storage vehicle of growth factors has been successfully used in clinical applications, but in most cases the platelets were autologous. However, the large volume of blood withdrawn has detrimental effects on patients with anemia or poor general health. To overcome these limitations, this study was designed to separate the growth factors in homologous platelet-rich plasma.
Methods The gel chromatography with Superdex-75 column fractions. Then the four fractions were vacuumed freeze-dried was applied to separate PRP supernatants into 4 major and re-dissolved in phosphate buffered saline. Proteins concentrations in PRP and in four fractions were detected by bicinchoninic acid protein assay; platelet derived growth factor-AB （PDGF-AB） and transforming growth factor β1 （TGF-β1） levels were determined by sandwich enzyme-linked immunosorbent assays. The effects of fractions on the proliferation of human marrow-derived mesenchymal stem cells （MSCs） were determined by 3-（4, 5- dimethylthiazol-2-yl）-2, 5-diphenyltetrazolium bromide （MTT） assay.
Results PRP supernatants were separated into four major fractions by gel chromatography. The proteins recovery was 96.72%. Of the four fractions, fraction B contained the highest TGF-β1 and PDGF-AB levels, and the highest proteins concentrations. Cell proliferation curves of MSC demonstrated that fraction B and C induced a remarkable increase of MTT values compared to the untreated culture （P 〈0.05）, and the effects of fraction B and C showed no significant difference compared to the PRP group （P 〉0.05）. Fraction A and D showed no significant difference to the negative control group （P 〉0.05）.
Conclusions The growth factors in PRP supernatants could be preliminarily separated into four fractions by gel chromatography, and the freeze-drying fractions retained the biological activity of growth factors. The growth factors were mostly presented in fraction B and C, and they promoted cell proliferation effectively.     

蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白体内抗凝作用的研究

目的：从中国产蝮蛇毒中分离纯化电泳纯度的类狼疮抗凝蛋白,研究其对动物体内的抗凝作用及机制。方法：测定蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白对新西兰白兔的活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间的影响;对小鼠凝血时间的影响;对大鼠静脉血栓和血小板聚集功能的影响,以及类狼疮抗凝蛋白的溶血性试验。结果：类狼疮抗凝蛋白能显著地延长活化部分凝血活酶时间和凝血时间,明显地抑制静脉血栓的形成,无溶血作用。结论：类狼疮抗凝     

小鼠肝脏磷酸化蛋白质组的二维液相色谱分离

目的 利用二维液相色谱法分离小鼠肝脏磷酸化蛋白质组。方法 取正常小鼠肝脏,裂解肝脏后利用金属磷酸盐亲和层析树脂提取磷酸化蛋白。将磷酸化蛋白用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,再将一维收集的pH值在8.5至4.0之间的组分分别进行二维无孔硅胶反相高效液相色谱分离。最后利用ProteoVue软件将二维UV图转换成胶图进行分析。结果 成功提取了小鼠肝脏磷酸化蛋白,并在浓缩除盐后通过二维液相色谱分离成功建立小鼠肝脏磷酸化蛋白质组pI/UV图谱。其中,一维色谱聚焦分离pH值在8.5至4.0之间共收集16个组分,每个组分的二维UV图转换成pI/UV胶图。结论 磷酸化蛋白纯化技术与二维液相色谱技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为下一步鉴定和研究磷酸化蛋白的功能打下坚实的基础。     

小鼠肝脏磷酸化蛋白质组的二维液相色谱分离

目的利用二维液相色谱法分离小鼠肝脏磷酸化蛋白质组。方法取正常小鼠肝脏，裂解肝脏后利用金属磷酸盐亲和层析树脂提取磷酸化蛋白．将磷酸化蛋白用初始缓冲液置换后，进行一维色谱聚焦分离，再将一维收集的pH值在8．5至4．0之间的组分分别进行二维无孔硅胶反相高效液相色谱分离。最后利用ProteoVue软件将二维UV图转换成胶图进行分析。结果成功提取了小鼠肝脏磷酸化蛋白，并在浓缩除盐后通过二维液相色谱分离成功建立小鼠肝脏磷酸化蛋白质组pI／UV图谱。其中．一维色谱聚焦分离pH值在8．5至4．0之间共收集16个组分，每个组分的二维UV图转换成pI／UV胶图。结论磷酸化蛋白纯化技术与二维液相色谱技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法，为下一步鉴定和研究磷酸化蛋白的功能打下坚实的基础。     

NR4A1 DNA 结合域的表达纯化

目的：寻求一种核受体家族蛋白NR4A1 DNA结合域(NR4A1 DNA binding domain,NR4A1-DBD)表达纯化的 方法。方法：构建融合蛋白PET28a-NR4A1-DBD表达载体,分别通过镍亲和层析、阳离子交换层析及凝胶过滤的方法 对目的蛋白进行纯化。结果：PET28a-NR4A1-DBD蛋白在低温诱导(24 ℃)时多以可溶性形式存在,通过此纯化,可达 到每升培养基产生2~3 mg蛋白,纯度高达95%以上。结论：镍亲和层析是一种可靠、实用的蛋白表达纯化方法,后续 使用阳离子交换层析及凝胶过滤可以进一步提高蛋白纯度。     

通塞脉微丸活性部位群化学成分的研究

目的:分离鉴定通塞脉微丸活性部位群中的化学成分。方法:通塞脉微丸活性部位群经硅胶柱层析分离,IR,NMR和MS方法确定结构。结果:分得9个化合物,经鉴定分别是:肉桂酸,阿魏酸,甘草素,木犀草素,异甘草素,甘草苷,咖啡酸,绿原酸,甘草次酸。结论:通塞脉微丸中主要活性部位群是黄酮类、酚酸类及皂苷类等。      

聚焦层析分离人肝精氨酸酶同工酶组分

用聚焦层析结合DEAE-Sephadex A-50离子交换层析,从正常人肝浸液中分离得两个精氨酸酶同工酶组分.经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定从聚焦层析得到的第一峰同工酶组分为一条蛋白带,第二峰具有精氨酸酶活性的蛋白组分的主要蛋白带也极明显。各蛋白质成分向阴极电泳的前后顺序与从聚焦层析洗脱的先后次序一致。两型同工酶的比活力分别约为2050U/mg及790U/mg。用SDS-PAGE检测两型同工酶均由两种亚基组成,且分子量近似。     

Purification and characterization of anti-clotting protein component （ACPF-7221） from venom of Agkistrodon acutus

Background Snake venom contains a number of components with different pharmacological and biological activities, especially in cancer therapy, and has increasingly become a research focus. This study was designed to isolate and purify a novel anti-clotting protein component from the venom of Agkistrodon acutus, and to explore its physico-chemical properties and biological activity. Methods The venom of Agkistrodon was isolated and purified by ion-exchange chromatography on diethylaminoethyl （DEAE）-Sepharose Fast Flow, molecular sieve filtration through Sephadex G75, SP-Sepharose Fast Flow and molecular sieve filtration through Sephadex G50. We detected the activated partial thromboplastin time （APTT） of the eluant to select the anti-clotting protein component of interest. The molecular weight was determined by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamid gel electrphoresis （SDS-PAGE） and liquid chromatography. Its protein content was detected by bicinchoninic acid （BCA）. Results SDS-PAGE vertical gel electrophoresis showed that the anticoagulant factor is a tripolymer composed of three proteins whose molecular weights are 25 KDa, 30 KDa and 50 KDa. The factor contains about 65% percent protein. Conclusions A novel anti-clotting protein component was purified by ion-exchange chromatography and molecular sieve filtration from the venom of Agkistrodon acutus and was found to be composed of three kinds of proteins.     

蛇六谷石油醚萃取物柱层析部位抗肿瘤活性组分再筛选

[目的]对中药蛇六谷石油醚萃取物采用硅胶柱层析后的所得组分进行体外抗肿瘤活性筛选。[方法]采用硅胶吸附层析分离技术,对蛇六谷石油醚萃取物的化学成分进行分离,应用MTT法检测各组分对HepG-2、SGC-7901及C6细胞增殖的影响。[结果]蛇六谷石油醚萃取物经硅胶柱层析分离后,得到7个组分;MTT法实验结果显示石A和石B组分对HepG-2、SGC-7901及C6细胞均有较明显的抑瘤作用,其中以石B组分抑瘤作用最强。[结论]蛇六谷石油醚萃取物经硅胶柱层析分离得7个组分中石B组分抑瘤作用最强。