复元胶囊对实验性骨关节软骨细胞凋亡及Bax和Bcl-2mRNA表达的影响

目的 观察复元胶囊对大鼠膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-2的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用机制.方法 48只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、壮骨关节丸组、复元胶囊组,每组12只.除正常组外,其余各组采用Hulth法建立膝骨关节炎动物模型.4周后,壮骨关节丸组、复元胶囊组分别给予壮骨关节丸、复元胶囊灌胃,而正常组、模型组给予生理盐水.8周后,取大鼠膝关节软骨作透射电镜观察细胞超微结构,原位末端标记法(TUNEL法)检测软骨细胞凋亡,逆转录/聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Bax和Bcl-2mRNA的表达.结果 复元胶囊能抑制骨关节炎软骨细胞过度凋亡,降低促凋亡基因Bax mRNA表达,增加凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的表达,并调节Bax/Bcl-2的比例.结论 复元胶囊通过降低促凋亡基因Bax mRNA表达、增加凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的表达、调节Bax/Bcl-2的比例而抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡.     

复元胶囊对骨关节炎软骨细胞凋亡中JNK/Bax信号通路的影响

目的探讨复元胶囊对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡影响的作用机制。方法体外培养人软骨肉瘤细胞(SW1353),给予白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)刺激,复元胶囊含药血清和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的特异抑制剂SP600125干预,随机分为正常组、模型组、抑制剂组、复元胶囊组、复元胶囊+抑制剂组,流式细胞仪分别检测细胞周期百分率和细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞信号因子磷酸化c-Jun氨基末端活化蛋白激酶(p-JNK)和Bax的蛋白表达。结果 IL-1β诱导SW1353后,模型组G1期的百分比增加,S期及G2期的百分比减少,细胞凋亡率显著增高(P0.01);抑制剂组、复元胶囊组和复元胶囊+抑制剂组G1期的百分比减少,S期及G2期的百分比增加,细胞凋亡率显著降低,p-JNK和Bax表达明显减少(P0.05或P0.01),其中以复元胶囊+抑制剂组的各项指标变化最显著(与模型组比较,P0.01)。结论复元胶囊可抑制骨关节炎软骨细胞中p-JNK及下游信号因子Bax的活化和表达,抑制细胞凋亡并促进增殖,可用于防治骨关节炎。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白影响内皮细胞Bcl-2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达的调节

目的：研究沥水调脂胶囊抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的机制。方法：沥水调脂胶囊舍药血清和ox-LDL与人脐静脉内皮细胞(hUVEC)共同孵育15h，用免疫荧光标记结合流式细胞仪分别测定Bcl—2、Bax、p53和caspase-3蛋白表达量。结果：发现ox-LDL可使hUVEC Bcl—2蛋白表达降低，Bax、p53和caspase-3蛋白表达量升高，而沥水调脂胶囊可使ox-LDL对Bcl-2、p53和caspase-3的上述作用明显减弱，但对Bax未见明显影响。结论：沥水调脂胶囊抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能是从正反两个方面、多条途径调节与凋亡密切相关的基因表达以及保护细胞结构功能有关。     

活血散结方对PDGF干预下兔RPE细胞凋亡及caspase-3、P53表达的影响

目的:观察活血散结方含药血浆对血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)干预下兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡的影响以及对caspase-3、P53蛋白表达的干预作用.方法:采用高效液相色谱法检测活血散结方主要成分...     

两种木贼提取物对高血脂大鼠内皮凋亡及p53、caspase-3表达干预

目的:观察木贼提取物对高血脂大鼠内皮细胞周期、凋亡及相关基因突变型p53、caspase-3蛋白的表达。结果:两种木贼提取物均能显著降低TG、VLDL水平;下调突变型P53、caspase-3基因蛋白表达,抑制内皮细胞凋亡;正丁醇提取剩余物升高HDL作用突出。     

实验性骨关节炎MMP-3与软骨细胞凋亡

目的:为观察实验性骨关节炎中MMP-3和软骨细胞凋亡情况,并对二者表达作相关分析。方法:采用改良Hulth’s法制造兔骨关节炎模型,分别在8周、16周抽取关节液测定MMP-3的含量,切取关节软骨。采用TUNEL法标记凋亡软骨细胞计数,并对软骨进行HE染色和透视电镜观察。结果:HE染色中,正常组软骨细胞排列规则,关节炎组中软骨细胞排列紊乱。透视电镜观察各组均可见凋亡细胞,但在关节炎组中可见胶原纤维失去正常的结构,排列紊乱,可见钙盐沉积。在MMP-3测定中,早期骨关节炎(20.91±2.48)ng.mL-1和晚期骨关节炎(41.68±5.71)ng.mL-1均高于正常对照组(4.34±2.13)ng·mL-1,差异有统计学意义P0.01;晚期骨关节炎和早期关节炎组比较(P0.01);早期骨关节炎(10.18±1.90)和晚期骨关节炎(35.47±3.46)软骨细胞凋亡指数都高于正常对照组(3.93±1.91),P0.01;晚期骨关节炎早期关节炎组比较,(P0.01)。MMP-3变化和软骨细胞的凋亡在各个时期均存在相关性(r=0.82,P=0.03;r=0.64,P=0.049;r=0.69,P0.029)。结论:实验性骨关节炎中,关节滑液中MMP-3含量在模型组中明显升高,晚期含量升高更明显;软骨细胞的凋亡指数和MMP-3的变化密切相关,MMP-3的升高可能是导致软骨基质破坏,软骨细胞凋亡的重要因素。     

复元胶囊对兔膝骨关节炎滑膜形态影响的实验研究

目的观察复元胶囊对实验性兔膝骨关节炎滑膜组织形态学变化的影响,探讨复元胶囊对实验性兔膝骨关节炎的治疗作用及其机理。方法60只新西兰兔,随机分为复元胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组、模型组和正常组,用改良Hulth法制造兔膝骨关节炎模型,中药组给予复元胶囊灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,分别于用药后4周、8周和12周处死动物4只,获取滑膜。HE染色光镜观察滑膜组织形态并从炎细胞浸润程度、纤维组织增生程度、滑膜细胞增生程度及血管增生程度4个方面进行评分,透射电镜观察滑膜组织超微结构,实验后对滑膜各方面评分进行组间比较。结果复元胶囊低剂量组、中剂量组和高剂量组3个时间段的滑膜组织形态评分和同期模型组比较有差异,中、高剂量组和模型组差异尤为明显（P〈0.01）。结论复元胶囊可明显改善实验性兔膝骨关节炎滑膜组织形态学的病理改变。     

麝香乌龙丸对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的 观察麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2及其抑制基因bax的影响,探讨麝香乌龙丸对关节软骨的保护作用是否与抑制细胞凋亡与调节bcl-2及bax的表达有关.方法 选用健康日本大耳白兔30只,随机分成正常对照组、造模组、麝香乌龙丸组.用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射,建立兔膝骨关节炎模型, 4周后处死全部动物,取右膝关节胫骨内侧髁软骨,软骨组织切片用TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化法检测关节软骨中bcl-2、bax的水平.结果 麝香乌龙丸组细胞凋亡率明显低于造模组(P＜0.05),bcl-2在麝香乌龙丸组中的表达高于造模组(P＜0.05),bax的表达低于造模组(P＜0.05).结论 麝香乌龙丸通过上调bcl-2的表达,下调bax的表达,达到抑制兔实验性膝骨关节炎软骨中软骨细胞的过度凋亡,这可能是该药治疗骨性关节炎机制之一.     

复元胶囊对实验性大鼠骨关节炎软骨中TNF-α和VEGF的影响

目的 观察复元胶囊对实验性大鼠骨关节炎软骨中的TNF-α和VEGF的影响.方法 56只SD大鼠随机分为:正常对照组6只,生理盐水灌胃;模型对照组10只,造模后生理盐水灌胃;四环素组,复元胶囊低、中、高剂量组各10只,造模后分别用四环素、复元胶囊不同剂量灌胃.治疗10周后分别取各组胫骨平台关节软骨,采用HE染色进行Mankin's评分,免疫组织化学染色法测定关节软骨中的TNF-α和VEGF表达的阳性细胞数.结果 正常对照组HE染色Mankin's评分与实验组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).各组关节软骨切片TNF-α和VEGF免疫组化染色分析,正常对照组TNF-α和VEGF与实验组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 复元胶囊可能通过调控TNF-α和VEGF抑制炎症和血管增生,从而达到延缓关节软骨退行性改变的作用.     

电针治疗对膝骨关节炎兔膝关节软骨细胞凋亡的影响

目的:观察电针治疗对膝骨关节炎兔膝关节软骨细胞凋亡的影响,探讨电针治疗膝骨关节炎的作用机制.方法:将30只健康新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型对照组和电针治疗组,每组10只.采用Hulth法对模型对照组及电针治疗组实验兔左膝关节进行造模,造模后第5周开始对电针治疗组实验兔进行电针治疗,正常对照组、模型对照组同期正常饲养,不作任何治疗.治疗4周后同时处死3组实验兔,取左膝关节股骨端制成切片,观察各组实验兔软骨组织形态及软骨细胞凋亡情况.结果:①软骨组织形态.正常对照组软骨表层光滑、平整,4层结构清晰,软骨细胞分布均匀、无簇聚,潮线完整;模型对照组关节软骨厚度减小,表面毛糙,可见明显纤维化、裂隙、软骨细胞簇聚,潮线断裂;电针治疗组关节软骨厚度减小,表面不光滑,少见纤维化、裂隙、软骨细胞簇聚,潮线断裂.②软骨细胞凋亡情况.3组实验兔软骨细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(F=126.753,P=0.000);进一步两两比较,模型对照组软骨细胞凋亡率大于正常对照组和电针治疗组(LSD -t=3.769,P=0.000;LSD-t=7.000,P =0.000),电针治疗组软骨细胞凋亡率大于正常对照组(LSD -t=10.769,P =0.000).结论:电针治疗可以通过抑制软骨细胞凋亡,减轻膝骨关节炎软骨的损伤,这可能是电针治疗膝骨关节炎的机制之一.     

针刀疗法对膝骨关节炎兔关节软骨细胞凋亡的影响

目的:观察针刀疗法治疗膝骨关节炎兔对其细胞凋亡的影响,探讨可能的作用机制。方法:正常新西兰兔随机分为:正常组、模型组、针刀组、中药组。左后膝伸直位石膏管型固定6周建立膝骨关节炎兔模型,原位末端标记(TUNEL)检测关节软骨细胞凋亡。结果:细胞凋亡指数正常组为(4.9±1.7),模型组为(25·2±4.3),针刀组为(11.6±3.1),中药组为(19.1±3.4)。模型组细胞凋亡指数显著升高,与正常组比较,经统计学处理,差异具有显著性意义(P<0.01)。针刀治疗和中药治疗均能降低细胞凋亡指数,两组比较,差异具有显著性意义(P<0.01)。结论:针刀疗法能抑制膝骨关节炎兔关节软骨细胞的凋亡,促进关节软骨形态恢复,这可能是针刀治疗膝骨关节炎的作用机制之一。     

健膝壮骨方对大鼠骨性关节炎软骨细胞凋亡及其调控基因P53、Bcl-2表达作用的影响

目的:明确健膝壮骨方对骨性关节炎模型大鼠的药效作用,初步探讨其治疗骨性关节炎的作用机理,为将其研发为中药新药提供实验基础。方法:将60只大鼠随机分成正常组(A)10只和手术组50只,将手术组造成膝骨性关节炎模型。造模方法:采用改良Hulth法制备大鼠膝骨性关节炎模型,并按随机数字法分为模型对照组(B)、壮骨关节丸阳性对照组(C)、健膝壮骨方高剂量组(D)、健膝壮骨方中剂量组(E)、健膝壮骨方低剂量组(F)5组。于造模7天后,高、中、低剂量给药组每日灌服健膝壮骨方药液(按每100g体重灌胃2mL),剂量分别相当于生药8g、4g、2g;阳性对照组每日灌服壮骨关节丸水溶液(按每100g体重灌胃2mL),相当于成药2 g;正常组和模型组分别灌服等量生理盐水。分别在治疗后1个月和2个月处死一半动物,取股骨内侧髁软骨,检测各组软骨细胞凋亡及其调控基因P53、Bcl-2的表达情况。结果:健膝壮骨方高、中、低剂量组及壮骨关节丸阳性对照组均在一定程度上转变了软骨细胞凋亡亢进的趋势,在下调P53过度表达及调高受抑制的Bcl-2蛋白表达方面均优于模型对照组,治疗组与阳性药物对照组之间有显著性差异(P﹤0.05)。结论:软骨细胞凋亡是导致骨性关节炎发病的重要机制之一,健膝壮骨方能较好地转变软骨细胞凋亡亢进的趋势,这种作用可能与影响P53、Bcl-2的表达有关,从而在一定程度上保护软骨细胞,对骨性关节炎的发生和发展有预防和延缓作用。     

骨舒汤对实验性膝骨关节炎家兔软骨细胞凋亡的影响

目的观察骨舒汤对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡的影响,探讨其治疗膝骨关节炎的机制。方法将48只家兔随机分为4组,每组12只,分别为空白组、模型组、壮骨关节丸组、骨舒汤组,造模成功后,术后第4、6、8 W每组各处死4只兔,进行关节软骨细胞凋亡率观察。结果骨舒汤组软骨细胞凋亡指数明显低于OA模型组。结论骨舒汤可以明显抑制骨关节炎中软骨细胞的凋亡率,达到保护软骨细胞,延缓发病的目的。     

温针灸对膝骨关节炎大鼠P53、Map2k3和PGE2的影响

目的 通过观察温针灸对KOA大鼠肿瘤抑制蛋白P53(P53)、促分裂原活化蛋白激酶3(Map2k3)mRNA和前列腺素E2(PGE2)蛋白含量的影响,探讨温针灸治疗KOA的可能机制.方法 将28只健康的雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和温针灸组,每组7只.正常组常规饲养,余3组大鼠采用关节腔注射木瓜蛋白酶pa...     

熊果酸对乳腺癌细胞caspase-3和PARP表达的影响

目的:探讨三萜类中药成分熊果酸(UA)诱导乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用,并通过分析UA作用后MCF-7细胞的caspase-3和多聚ADP核糖多聚糖(PARP)蛋白表达的变化,探讨其诱导MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法:采用细胞培养技术,用不同浓度的药物在一定的时间内处理细胞株,采用MTT法、活细胞原位光镜和荧光染色技术、流式细胞技术(FCM)、荧光免疫组织化学技术,图象分析技术,研究UA对caspase-3和PARP蛋白表达的影响,诱导细胞凋亡的作用。结果:UA剂量依赖性的抑制MCF-7细胞增殖,半数生长抑制剂量(IC₅₀)为(22.6±3.0)μmol.L^-1,诱导caspase-3和PARP表达增加,使细胞呈现典型的凋亡形态学特征,核质浓集,有凋亡小体。结论:UA诱导MCF-7细胞凋亡,其机制涉及到caspase-3和PARP依赖性凋亡调节信号通路。     

电针对兔膝骨关节炎家兔模型软骨细胞凋亡的影响

目的 观察电针对兔膝骨关节炎家兔模型软骨细胞凋亡的影响.方法 40只新西兰大白兔随机分成空白对照组、模型组、电针组和西药组.除空白对照组外,各组动物采用左后肢膝关节伸直位石膏固定7周建立膝骨关节炎动物模型.造模成功后,电针组取左后肢梁丘、血海、阳陵泉、足三里和内外膝眼6个穴位,用毫针斜刺或直剌得气后,进行电针操作,连续治疗3周;西药组灌服氨基葡萄糖胶囊,治疗3周.处理前后,对各组家兔膝关节滑膜和软骨标本,进行HE染色、免疫组化法染色观察膝关节滑膜和软骨的病理变化;采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡并计算凋亡指数（AI）.结果 经治疗后,电针组和西药组关节软骨细胞凋亡、凋亡指数与模型组比较明显降低（P＜0.05）.结论 电针能改善膝骨关节炎家兔模型软骨细胞的过度凋亡,降低膝骨关节炎软骨细胞的凋亡率.     

解毒胶囊对乳腺增生大鼠乳腺组织P16和P53表达的影响

目的:探究解毒胶囊对乳腺增生大鼠乳腺组织中P16、P53表达的影响。方法:选取SD雌性未孕12周龄大鼠50只,随机分为正常组、模型组、方药组、三苯氧胺组、乳癖消组5组,每组各10只。药物治疗4周后检测各组大鼠乳腺组织P16和P53表达情况。结果:模型组较正常组比较,P16和P53呈现高表达,其差异有统计学意义;药物治疗后的3组大鼠P16和P53表达均减弱,其中方药组及三苯氧胺组比乳癖消组减弱明显,其结果有统计学意义(P0.01,P0.05);而方药组与三苯氧胺组差异无统计学意义(P0.05)。结论:解毒胶囊能够干预乳腺增生大鼠的乳腺组织P16和P53的表达情况,对乳腺增生大鼠有调节和治疗作用。     

花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响

目的探讨花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法采用体外培养人肺癌SPC-A-1细胞,实验随机分为正常对照组、花边莲处理组(浓度分别为12.5,25和50 m l/L)和顺铂(DDp25mg/L)组,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达水平,二步法免疫组化检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化。结果与正常对照组相比,花边莲各浓度组caspase-3 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.01),survivin mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论花边莲提取液诱导SPC-A-1细胞凋亡的分子机理可能与上调caspase-3基因表达和下调survivin基因表达有关。     

活血通络药物对膝骨关节炎小鼠凋亡软骨细胞体外干预的影响

目的 体外培养膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)小鼠凋亡软骨细胞模型,对凋亡软骨细胞模型进行形态学观察和鉴定,传代培养第一代凋亡软骨细胞模型.培养成功后,分别以不同浓度的骨痹合剂以及氨糖美辛、生理盐水干预后,进行形态学观察和绘制细胞生长曲线,确定凋亡软骨细胞变化最明显的时间点以及促进凋亡软骨细...     

益肾为主对兔膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡的影响

目的:观察益肾为主治法对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法:取新西兰白兔20只,随机分为三组,模型组、中药组用石膏外固定兔右后肢膝关节造模,造模后同空白组分别灌服生理盐水、益肾方和生理盐水,6周后取兔膝关节软骨,肉眼、光镜观察形态学变化,用原位末端标记法观察软骨细胞凋亡。结果:中药组软骨细胞凋亡指数明显低于模型组(P<0.01)。结论:益肾为主能减少兔膝实验性膝骨关节炎软骨细胞的凋亡,具有关节软骨保护作用。