双亲灭活原生质体融合法选育阿维菌素高产菌株

目的选育高产阿维菌素产生菌。方法分别以紫外线和加热灭活阿维菌素产生菌Strepto-myces avermitilis620和Streptomyces avermitilis632原生质体,并将2种灭活的原生质体用PEG4000融合,从融合株中筛选阿维菌素高产菌种。结果获得高产阿维菌素融合株StreptomycesavermitilisF32,总发酵单位达3 904 mg.L-1,其中B1a组分产量较高,达1 016 mg.L-1,分别较出发菌株S.avermitilis 620、S.avermitilis 632提高117.1%和103.6%。结论双亲灭活原生质体融合法选育阿维菌素高产菌株是值得推广的一种选育方法。     

应用双亲株灭活原生质体融合法选育林可霉素高产菌株

目的：选育高产优质林可霉素产生菌。方法：将林可霉素产生菌S78－1^#,N65-2^#的原生质体分别热灭活和紫外灭活，并将两种灭活原生质体用PEG融合，从融合株中筛选高产优质菌种。结果：获得82－201^#融合株，其摇瓶效价分别较N65－2^#,S78-2^#提高17％和52％，且色素分泌少，传代稳定性强。结论：双亲株灭活原生质体融合选育林可霉素高产菌株是值得推广的一种选育方法。     

紫外诱变和终产物抗性筛选头孢菌素C高产菌株

目的建立筛选头孢菌素C高产菌株的有效方法。方法出发菌株Cephalosporium acrem onium NS-1,经过紫外线诱变处理,筛选头孢菌素C高产菌株;然后通过头孢菌素C梯度平板筛选终产物抗性突变菌株。结果得到比出发菌株头孢菌素C产量提高45%的突变菌株RM-8。结论紫外线诱变结合终产物抗性筛选的方法是一种高效的头孢菌素C高产菌株选育方法 。     

基因组重排选育麦迪霉素高产菌株

目的以生米卡链霉菌(Streptomyces mycarofaciens)突变株为研究对象,选育麦迪霉素高产菌株。探索并验证基因组重排技术在菌种选育中的重要作用。方法通过2轮多亲株灭活原生质体融合技术实现基因组重排。将来自不同育种方法的5株麦迪霉素高产菌株B64-5、01-GM-1、H-101、H-106和H-108作为第一轮亲本,在质量浓度为3 g.L-1溶菌酶3、2℃水浴60 min条件下制备原生质体,分别采用紫外线照射148 s和52℃加热60 min灭活原生质体,然后采用质量分数35%PEG 4000、37℃保温2 min诱导原生质体融合。融合子经过初筛和复筛,获得产量进一步提高的重组子作为亲本进行第二轮的多亲株灭活原生质体融合实验。用生物学方法测定麦迪霉素效价,用HPLC方法测定麦迪霉素A1含量。结果与结论经过2轮基因组重排实验成功选育出3株高产且遗传稳定的麦迪霉素生产菌株。其中1株菌株GSZ2-32发酵前补加前体X-1后摇瓶产量比原始出发菌株Streptomyces mycarofaciens var.464提高1.1倍,麦迪霉素A1(MDMA1)质量分数含量保持在80%以上。     

含硫化合物对头孢菌素生物合成的调节作用

本文研究了国内生产用头孢菌素产生菌(Cephalosporium acremonium)C—82—123对DL-蛋氨酸等十种含硫化合物的利用。在不含任何含硫化合物的合成培养基中分别添加DL-蛋氨酸、硫酸钠、硫代硫酸钠、     

头孢菌素C高产菌株的推理选育

目的 优化推理选育条件,获得头孢菌素C高产菌株.方法 根据头孢菌素C的生物合成途径和代谢调控机制设计菌种推理选育方案,原始出发菌株经紫外诱变后,采用托盘琼脂柱筛选法依次对铜离子、丙二酸及头孢菌素C耐受菌株进行选育.结果 最终获得一株头孢菌素C高产菌株TBC-68071,其产量较原始菌株提高了154.6％,且高产特性稳定.结论 对铜离子、丙二酸及头孢菌素C耐受的顶头孢霉菌株可以高产头孢菌素C,推理选育克服了随机筛选的盲目性,提高了菌种筛选的效率.     

通过双亲株灭活原生质体融合方法提高链霉素产量

<正> 关于带遗传标记的链霉菌原生质体融合已有报道。近年来,国内外研究人员为了节约杂交育种时间,避免进行遗传标记可带来的不利于生产的突变株,故在摆脱遗传标记方面做了一定的工作。我们在进行链霉素产生菌灰色链霉菌的细胞融合工作中,采用高产菌株两株和野生菌株两株均不带遗传标记,将4株菌的原生质体混合在一起,然后分成两份,分别用热和UV灭活,使原生质体的存活率接近于零,融合得到重组子。其重组率低于文献报道。通过筛选,得到一株生长快、效价与对照相当的菌株,并得到10株摇瓶效价提高10～35%的菌株,其中前者已通过中试。这就为缩短微生物杂交育种时间提供了可行途径。     

基因组重组技术选育埃博霉素B高产菌株

目的 用基因重组技术选育埃博霉素高产菌株.方法 本研究首先从不同生境中分离筛选到4株能产生埃博霉素B的纤维堆囊菌,以这些野生菌株作为Genome shuffling递归原生质体融合出发菌株.结果 通过五轮基因组重组成功选育到了3株遗传稳定的高产埃博霉素B重组菌株,其中一株重组菌株So F5-09的埃博霉素B产量达到了15.8mg/L,比原始出发菌株So 07-9埃博霉素B产量提高了35.1倍.结论 本研究证明使用野生菌株作为Genome shuffling递归原生质体融合出发菌株也能有效提高目标代谢产物的产量.     

他克莫司高产菌株选育及发酵配方优化

目的 选育他克莫司高产菌株,优化培养基配方,提高发酵产量。方法 采用原生质体融合技术对2株筑波链霉菌进行基因组重排,并经响应面设计对发酵培养基配方进行优化。结果 以紫外灭活作为遗传标记经过4轮基因组重排育种后,摇瓶筛选获得3株高产菌株,其中菌株FK22-71菌丝球松散、椭圆状,发酵浸泡液颗粒状。该菌株稳定高产,采用响应面设计优化后的配方在50 L罐发酵产量平均达1684 mg/L。结论 基因组重排技术应用于他克莫司高产菌株选育,可大幅提高发酵产量,为其工业化发酵生产奠定了基础。     

应用原生质体融合法选育林可霉素高产菌株

将林可霉素产生菌N65—2^#、S78—1^#的原生质体分别热灭活和紫外灭活，并将灭活原生质体用PEG融合，从中获得92-201^#融合株，其摇瓶效价分别较N65—2^#、S78—1^#提高17％、52％，且色素分泌少，传代稳定性强。     

Occurrence of a new cephalosporoate in a culture broth of a Cephalosporium acremonium mutant.

A new metabolite was isolated from the culture filtrate of a deacetylcephalosporin C-producing mutant, derived from Cephalosporium acremonium ATCC 14553, by means of adsorption on activated carbon, column chromatography on DEAE-Sephadex A-25 and gel filtration through a Sephadex G-10 column. The compound was identified as D-5-amino-5-carboxyvaleramido-(5-formyl-4-carboxy-2H, 3H, 6H-tetrahydro-1, 3-thiazinyl) glycine by spectral analyses, elucidation of hydrolysis products of the compound, and comparison of characteristics of the compound with those of a synthetic authentic compound.     

Strain improvement studies for cephalosporin C production by Cephalosporium acremonium

Treatment of spore suspension of Cephalosporium acremonium ATCC 48272 with UV rays and N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG) induced mutants capable of producing higher yields of cephalosporin C. Antibiotic yield was improved from 630 micrograms/ml to 1995 micrograms/ml of the broth resulting in a high yielding mutant.     

顶头孢霉229与12的分生孢子及原生质体的形成和再生

头孢菌素产生菌顶头孢霉菌株229的沉没培养或斜面培养都可形成分生孢子,并可用普通滤纸将它们与菌丝及节孢子分开,但是它们成活率极低.这种成活的分生孢子的数量与培养基成分有关.菌丝培养基成分对制备顶头孢霉原生质体有显著影响.用一种MM培养基培养的菌丝,不经巯基化合物预处理,酶解(1%纤维素酶)3小时后,可得到大量原生质体.原生质体的再生频率为1.8～4.6%.与分生孢子形成的菌落相比,原生质体再生菌落的产抗生素能力显示出较大的变异性.本文还讨论了山梨醇与Nikkomycin对菌丝生长形态及原生质体形成的影响.     

带TrpC启动子的质粒pYG715／Vgb对顶头孢霉的转化

分别以来自于构巢曲霉和酿酒酵母的启动子ＴｒｐＣ和ＴＥＦ１来构建质粒ｐＹＧ７１５／ＴｒｐＣ和ｐＺＲ３３３并转化头孢菌素Ｃ工业生产菌种顶头孢霉,结果发现只有ｐＹＧ７１５／ＴｒｐＣ产生转化子。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明质粒整合进顶头孢霉的染色体中     

响应面法优化头孢菌素C发酵条件

目的 研究顶头孢霉发酵制备头孢菌素C的过程，确定关键影响因素，优化发酵条件，提高发酵水平。 方法 采用Plackett-Burman方法对影响头孢菌素C发酵水平的11个因素进行考察，评估各因素的影响程度，筛查影响发酵水平的关键因素，再采用响应面方法建立这些因素与发酵水平间的数学模型，为发酵条件的优化提供指导。 结果 Plackett-Burman实验发现，金枪鱼浸膏浓度和蛋氨酸浓度是对头孢菌素C发酵产量影响最显著的2个因素，经响应面方法优化后头孢菌素C的产量从32.59g/L提高到了35.99g/L，提高了10.4%。 结论 合适浓度的金枪鱼浸膏和蛋氨酸可提高头孢菌素C发酵产量，通过统计优化方法，可有效提高头孢菌素C发酵水平。     

Effect of methionine on cephalosporin C and penicillin N production by a mutant of Cephalosporium acremonium.

A mutant with enhanced potential to utilize sulfate for cephalosporin C production was isolated from a strain of Cephalosporium acremonium. The mutant displayed potency levels more than twofold that of the parent in the presence of sulfate but its productivity was severely inhibited by more than 0.5% of methionine which gave high cephalosporin C production with the parent. In a complex medium norleucine stimulated cephalosporin C production by the mutant in the presence of sulfate, whereas it showed no effect on the parent. In an incubation system with sulfur-starved cells of the mutant, L-methionine, but not the D-isomer, gave lower cephalosporin C production and a delayed production of penicillin N. However, it exhibited a stimulatory effect in the presence of valine or alpha-aminoadipic acid, the constituent amino acids of the antibiotic. Norleucine showed a similar effect to that of L-methionine in the presence of sulfate. On the basis of these results, characteristics of the mutant are discussed in connection with the effect of methionine.     

The origin of cephalosporins

The origin of cephalosporins is investigated. In 1945, Giuseppe Brotzu, who was the rector of the University of Cagliari in Sardina, Italy, isolated a cephalosporin-producing strain, Cephalosporium acremonium. Although as many as 48 cephalosporin derivatives have been developed in Japan, how a cephalosporin-producing organism was discovered is not widely known here. This article contains the first Japanese translation of Brotzu's Italian publication entitled "Ricerche su di un nuovo antibiotico (Research on a new Antibiotic)" and reveals how cephalosporin was developed, together with a cross reference to the first report of penicillin, a similar antibiotic compound, which was discovered by A. Fleming in 1928. Brotzu's brief academic and social background is also presented.     

微波诱变头孢菌素C产生顶头孢霉菌的研究

本实验以头孢菌素C高产菌L32为出发菌株,通过微波诱变,得到变株L32-104,初复筛证明其发酵单位提高20%,且遗传性状非常稳定。该菌株在中试以及大生产中均获成功。实验表明微波诱变法操作简便、安全可靠、方法可行。