PCR—ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA

目的 采用PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA。方法 采用PCR技术扩增结核杆菌DNA，并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板，再加入结核杆菌显色探针，同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色。共检测肺部疾病患者痰标本510例。结果 该法的灵敏度为59．3％，特异性为95．0％；阳性预测值为96．3％，阴性预测值为51．4％。结论 PCR-ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA，是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法。     

微孔杂交技术诊断肺外结核

目的　将聚合酶链反应(PCR)、核酸杂交、酶联免疫吸附三种技术有机结合,从分子水平检测结核杆菌,为临床诊断肺外结核提供病原学依据。方法 使用生物素标记的特异性引物扩增结核杆菌(TB)DNA,带有生物素的产物与包被在微孔板内的靶基因杂交,加入酶标链毒亲和素与生物素结合,最后加辣根过氧化物酶显色,2MH₂SO₄终止反应。根据酶标仪检测各孔吸光度判断结果。结果通过对临床高度怀疑为肺外结核的408份标本的检测,PCR微孔板杂交法的检出率为43.6%,培养法的检出率为25.9%直接涂片抗酸染色为6.4%。结论 PCR杂交法灵敏度高,特异性强,有助于临床准确、快速诊断肺外结核。     

rDNA探针杂交检测病人痰标本中结核杆菌的研究

目的 应用结核分枝杆菌特异的rDNA探针杂交检测痰标本中的结核杆菌rDNA,评价其在临床标本检测中的应用价值。方法 用引物b对结核分枝杆菌16S-23SrDNA间隔区序列进行扩增,同时加入生物素标记,制成250bp的rDNA探针。对该探针的敏感性、特异性进行了研究,并对90份结核病人,30份非结核病人痰标本的PCR产物进行了斑点杂交检测。结果 rDNA探针检测引物bPCR扩增产物的敏感性为100pg。rDNA探针与受试24种分枝杆菌和11种非分枝杆菌引物bPCR扩增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝杆菌为阳性杂交,特异性较高。而rDNA探针对90份结核病人痰标本引物b扩增产物检测的阳性率为80.2%,高于PCR扩增产物电泳检测结果 (64%)。rDNA探针与30份非结核病人痰标本杂交结果均为阴性杂交。结论 rDNA探针与引物bPCR扩增相结合能提高结核病人痰标本检测的敏感性与特异性。     

16S-23SrDNA间隔区序列PCR扩增及探针杂交用于偶然分支杆菌暴发感染的研究

目的　从基因水平上确认福建省南平市注射后偶然分支杆菌暴发感染的致病菌,并建立PCR结合DNA探针杂交快速鉴定偶然分支杆菌的方案。方法 根据偶然分支杆菌16S-23S rDNA间隔区序列,设计合成一段寡核苷酸探针,采用PCR扩增、RFLP和DNA斑点杂交技术,对29株偶然分支杆菌临床分离株进行鉴定。结果 29株偶然分支杆菌临床分离株均被PCR扩增出一条约470bp的DNA条带,DNA探针杂交也出现特异的杂交斑点。结论 16S23SrDNA间隔区序列PCR扩增及DNA探针杂交在基因水平上确认引起此次注射后暴发感染的致病菌为偶然分支杆菌,该方法具有灵敏、特异的特点。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

聚合酶链反应-增强化学发光法快速检测结核杆菌的研究

目的　建立聚合酶链反应 -增强化学发光法 (polymerase chain reaction-enhanced chemilumine cence ,PCR-ECL)快速高灵敏度和高特异性检测结核杆菌的方法。方法 以结核分支杆菌、牛分支杆菌特异性抗原Pab基因的419bp片段为靶序列,PCR体系经优化,直接酶标法标记探针 ,增强化学发光检测(ECL)进行分子杂交。结果 PCR体系对结核分支杆菌、牛分支杆菌、卡介苗的扩增为阳性,PCR体系灵敏度为5fgDNA分子。ECL体系灵敏度为0.5pgDNA分子。采用模拟痰样,可检至10个以下结核杆菌。结论 建立了结核杆菌的PCR-ECL快速检测方法,整个过程可在一天半内完成。     

PCR-荧光探针杂交技术诊断肺结核的价值及卫生经济学评价

目的　探讨PCR -荧光双标记探针杂交定量结核杆菌技术对肺结核的诊断价值并进行卫生经济学评价。方法 对 2 0 0 2年 5月至 2 0 0 2年 11月收治的 30 1例患者进行回顾性研究 ,将痰PCR-荧光探针杂交法与荧光抗酸染色涂片法进行比较 ,以综合临床资料最后确诊为诊断标准 ,计算两种方法的诊断效率及进行成本 -效果分析。结果 痰PCR -荧光探针法诊断肺结核的灵敏度为5 1.9% ,涂片法 1次、3次、6次的灵敏度分别为 4 9.2 %、5 7.4 %、6 1.2 % ,经统计学分析 ,两种方法的检出率比较差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,进行成本 -效果分析 ,每检出 1例肺结核行 1次痰PCR -荧光探针法患者要花费 2 5 3.4 7元 ,行 1次涂片法要花费 5 0 .17元。结论 PCR -荧光探针杂交法与涂片法比较同样具有快速、有效等优点 ,但经济效率低于荧光涂片法 ,目前尚不能取代后者在诊断结核病中的传统地位。     

几种检测方法对胸腔积液性质鉴别的意义

目的 探讨几种检测方法对胸腔积液性质鉴别的意义。方法 几种检测方法分别用于89例胸腔积液患者。结果 胸膜活检术的综合鉴别意义明显高于其它几种检测方法。结核杆菌 脱氧核糖核酸聚合酶链反应 (TB DNA PCR)对于肺结核的诊断意义较大,而检测外周血的意义较检测胸液大,二者存在显著性差异 (P＜0.01)。结论 胸膜活检术与PCR的联合应用可更有效、更准确地鉴别胸腔积液的性质。     

四种实验室检测技术对利福平和异烟肼耐药性检测的临床价值

目的 探讨微孔板法、实时荧光PCR熔解曲线技术(简称“熔解曲线法”)、多色巢式实时荧光定量PCR技术(简称“Xpert 法”)和罗氏药物敏感性试验(L-J药敏试验,简称“比例法”)用于快速筛查耐多药结核病(MDR-TB)的临床价值。方法 从医院信息系统(hospital information system,HIS)连续收集2014年7月至2018年3月重庆市公共卫生医疗救治中心收治的确诊为结核病,且具有微孔板法、比例法、熔解曲线法、Xpert 法检测MTB对利福平、异烟肼耐药性诊断结果的2792例患者资料;其中微孔板法、比例法采用阳性分离菌株检测,熔解曲线法和Xpert 法采用患者标本直接检测。纳入同时具有微孔板法和比例法耐药性检测结果的1488例患者作为研究对象,其中341例行微孔板法+比例法+Xpert法检测利福平耐药性,87例行微孔板法+比例法+熔解曲线法检测利福平耐药性,66例行微孔板法+比例法+熔解曲线法检测异烟肼耐药性。以比例法为标准,采用SPSS 13.0软件分别计算微孔板法、熔解曲线法、Xpert法检测利福平和(或)异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率、Kappa值等。结果 以比例法为标准,微孔板法、Xpert法、熔解曲线法检测利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值分别为97.2%(731/752)、96.9%(713/736)、96.9%(731/754)、97.1%(713/734)、97.0%(1444/1488)、0.94,97.2%(140/144)、94.9%(187/197)、93.3%(140/150)、97.9%(187/191)、95.9%(327/341)、0.92,97.1%(33/34)、84.9%(45/53)、80.5%(33/41)、97.8%(45/46)、89.7%(78/87)、0.79;微孔板法和熔解曲线法检测异烟肼耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值分别为94.8%(751/792)、95.7%(667/697)、96.3%(751/780)、94.2%(667/708)、97.9%(1418/1448)、0.91, 97.3%(36/37)、86.2%(25/29)、90.0%(36/40)、96.2%(25/26)、92.4%(61/66)、0.84。结论 微孔板法、熔解曲线法、Xpert 法检测利福平和(或)异烟肼耐药性均具有较高的敏感度和特异度,适合快速筛查耐多药结核病;微孔板法还能获得各药物最低药物浓度,为临床用药剂量的选择提供参考依据。     

4种方法联合检测在菌阴肺结核临床诊断价值的研究

目的　探讨痰聚合酶链反应——微孔板杂交技术(PCR ELISA)、抗脂阿拉伯甘露糖(LAM-IgG)抗体、结核菌素(PPD)1TU皮试以及血清可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)水平,4种方法联合检测对初治菌阴肺结核患者临床诊断的意义。方法 以上述4种方法检测初治菌阳肺结核57例,初治菌阴肺结核58例,非结核肺疾病41例,健康对照36例。分别进行单项与联合检测,观察初治菌阴肺结核的特异性与敏感性。结果 PCR-ELISA、LAM-IgG、TB-PPD及sIL-2R单项检测对菌阴肺结核的阳性检出率依次分别为 43.1%,37.9%,31.0%,50.0%。联合检测对菌阴肺结核的阳性检出率2联、3联及4联依次分别为 56.9%,70.7%,84.5%,与单项检测的最高阳性检出率相比由50.0%提高到84.5%;联合检测的特异性分别为92.2%,88.3%和84.4%。结论 通过4种方法联合检测能显著提高菌阴肺结核的阳性检出率,同时也保持了相对高的特异性。联合检测对于菌阴肺结核的诊断,具有实用意义。     

T-SPOT.TB在肺结核合并糖尿病患者诊断中的价值分析

目的 研究分析在肺结核合并糖尿病患者中采用结核杆菌T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)诊断的价值影响.方法 通过抽签选出于2017年10月—2019年4月期间收治的60名非肺结核合并糖尿病患者作为该次研究的一号组,同时选取同时期在该院确诊的60例患有肺结核合并糖尿病的患者作为该次研究的二号组.对两组患者统一实施结核杆菌...     

肠结核和克罗恩病的鉴别诊断

肠结核（IT）和克罗恩病（CD）的鉴别诊断一直是临床难题。临床研究显示内镜检查和手术标本组织病理学在两者的鉴别诊断中具有重要价值，而临床特征、放射影像学、结核杆菌抗酸染色、结核杆菌培养、结核杆菌聚合酶链反应（PCR）以及血清标志物（血管紧张素转换酶和抗酿酒酵母抗体）的价值有限。     

Diagnosis of invasive pulmonary aspergillosis using polymerase chain reaction-based detection of aspergillus in BAL

STUDY OBJECTIVE: To assess the value of Aspergillus polymerase chain reaction (PCR) test performed on the BAL in diagnosing invasive pulmonary aspergillosis (IPA). DESIGN: Between January 1996 and 1997, we prospectively followed up 249 cancer patients with pulmonary infiltrates suggestive of pneumonia. Bronchoscopy with fungal stains, cultures, and PCR was performed on all patients. PCR was used for the detection of Aspergillus mitochondrial and alkaline protease gene DNA. The PCR products were visualized either directly on polyacrylamide gel or after Southern transfer and probing with specific probes for mitochondrial and alkaline protease DNA. RESULTS: The 249 patients consisted of 10 patients with proven IPA (tissue invasion), 22 patients with probable IPA (microbiologic culture), 18 patients with possible IPA (consistent clinical and radiologic findings), and 199 control patients with no evidence of IPA. PCR positivity was strongly associated with all forms of IPA (p < 0.002). The sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value of PCR were 80%, 93%, 38%, and 99%, respectively, for proven IPA, and 64%, 93%, 52%, and 96%, respectively, for probable IPA. Southern blotting analysis did not improve the diagnostic yield of the PCR test. CONCLUSION: PCR performed on BAL is associated with high specificity and negative predictive value for IPA. The low positive predictive value could be related to the transient colonizing presence of aspergilli in the respiratory tract. The sensitivity correlates with the certainty of the diagnosis based on tissue invasion.     

聚合酶链式反应与DNA探针检测临床标本中结核分支杆菌的评价

本文应用ＰＣＲ联合ＤＮＡ探针快速检测临床标本中结核杆菌ＤＮＡ。对临床３０７例标本同时进行ＰＣＲ和Ｓｏｕｅｈｅｒｎ杂交。其中临床确诊为结核病的１０９例，二者的阳性率分别为４９．６％、６０．６％。未确诊结核病的１９８例，二者均为阳性２例、单纯ＰＣＨ阳性３例。结果表明ＤＮＡ探针检测的灵敏性和特异性高于ＰＣＲ。二者联合使用，有助于对疑难电泳图谱的分析和判断，降低假阴性和假阳性率。     

结核病与恶性肿瘤的关系探讨

目的探讨结核病与恶性肿瘤的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测恶性肿瘤组织中结核杆菌DNA(TB-DNA)。结果23例恶性肿瘤组织中检出TB-DNA阳性患者5例,占总数的21.7%,且TB-DNA阳性患者肿瘤发病部位与结核病的好发部位基本一致。结论结核杆菌感染与一些恶性肿瘤之间可能存在着相关性。     

结核菌L型感染诱导小鼠生精细胞凋亡的实验研究

目的 探讨结核菌L型感染能否引起生精细胞凋亡,从而推测结核菌L型感染与男性不育的关系。方法 用牛型结核分支杆菌L型反复直接注入成年雄鼠睾丸内,40天后取睾丸组织分别作HE染色及凋亡细胞的原位末端标记显示（ISEL）。结果 实验组20列雄性小鼠有15例曲细精管的生殖细胞有凋亡;对照组20例无一例有生精细胞凋亡;两者生精细胞凋亡有显著性差异（P＜0．005）。结论 结核菌L型感染可引起小鼠生精细胞凋亡;结核菌L型感染与男性不育可能有一定关系。     

pncA gene mutations in clinical isolates of tubercle bacillus by polymerase chain reaction-direct sequencing method: in relationship to pyrazinamide resistance]

We screened clinical isolates of tubercle bacillus for mutations in the pncA gene, which encodes pyrazinamidase (PZase), by polymerase chain reaction (PCR)-direct sequencing method. Sixty-eight strains of tubercle bacillus were isolated from 32 patients with pulmonary tuberculosis. The patients were treated with antituberculous agents including pyrazinamide (PZA) for 2 months. Thirty-two of the 68 strains were isolated from sputum samples collected from the patients before treatment; 29 strains and 7 strains were collected after 1 month and 2 months of treatment, respectively. The pncA genes in these strains, were assessed for mutations by direct sequencing of PCR products using an automated sequencer. Similarly, we examined two clinical isolates (ka567 and minami22) of tubercle bacillus, determined to be deficient in PZase activity by the Wayne method. A PZA-sensitive strain (H37Rv, ATCC27294), and a PZA-resistant strain (H37Rv-PZA-R, ATCC35828) were used as negative and positive controls for mutations in the pncA gene, respectively. None of the 68 strains demonstrated any mutations in the pncA gene; however, the 2 PZase-deficient strains had missense mutations in the pncA gene resulting in an amino acid substitution from His82 to Arg in clone ka567, and from Ala171 to Val in clone minami22.     

噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值比较

目的比较噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值。方法对168份临床诊断为肺结核患者的痰标本同时应用噬菌体裂解法和涂片法检测,对照分析结果。结果168份痰标本,噬菌体裂解法检出阳性率58.9%(99/168),显著高于涂片法萋-奈氏染色的38.1%(64/168)及金胺0染色的41.1%(69/168),(P<0.01),噬菌体裂解法对涂片阴性的标本的检出率高达39.4%(39/99)。结论噬菌体裂解法与涂片法相比,具有较高的敏感性和特异性,是一种崭新的结核分支杆菌快速快速检测方法。     

结核分枝杆菌耐利福平药物机理的初步研究

目的通过诱导试验观察结核菌产生耐利福平药物的全过程,初步分析结核菌耐该药的机理。方法采用诱导试验、聚合酶链反应—单链构象多态性(PCR-SSCP)和序列分析,对经不同药物浓度传代培养后的结核菌强毒株（H₃₇Rv）和36株临床耐药分离株进行分析。结果在诱导到第7代时,H₃₇Rv的PCR-SSCP电泳出现异常,经测序证实在513位点发生基因突变。36株临床耐药分离株中有23株发生突变,为63.9% (23/36);其中有5株与诱导株基因突变位点相同。结论用药物不间断的刺激结核菌,是产生结核菌耐利福平药物的重要原因。     

Detection of cytomegalovirus in urine from newborns by using polymerase chain reaction DNA amplification

Polymerase chain reaction (PCR) amplification was used to detect cytomegalovirus (CMV) in tissue culture and in urine specimens from newborns. Synthetic oligonucleotide primer pairs were used to amplify DNA from the major immediate-early and the late antigen genes of CMV. Amplified products were detected by gel electrophoresis and by dot-blot hybridization with oligonucleotide probes. Using one or both of the primer pairs and associated probes, we found 46 different tissue culture isolates of CMV that were positive; no reaction products were detected when the same primers and probes were used to amplify other herpes family viruses or human genomic DNA. Urine samples from 44 congenitally infected infants were positive when tested with one or both primer pairs and probes. When compared with tissue culture, detection by gel electrophoresis provided a sensitivity of 93%, a specificity of 100%, and a predictive value of a positive result of 100%. Dot-blot analysis raised the sensitivity to 100%. We conclude that PCR amplification may be a valuable tool for diagnosing congenital CMV infection.