囊性纤维化跨膜转导调节器在卵巢过度刺激综合征模型大鼠卵巢中表达的变化

目的建立大鼠卵巢过度刺激综合征(OHSS)模型,研究囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在OHSS大鼠卵巢中表达的变化及意义。方法未成年Wistar雌鼠,随机分为过度刺激组和常规刺激组,建立OHSS模型;比较两组间卵巢重量,血雌二醇水平;并分别通过免疫组织化学和免疫印迹法比较两组间卵巢组织中CFTR蛋白表达量的变化。结果过度刺激组大鼠卵巢重量、血雌二醇水平显著高于常规刺激组;免疫组化方法检测到CFTR呈棕黄色颗粒表达于大鼠卵巢黄体细胞以及未排卵泡的黄素化颗粒细胞和卵泡膜细胞胞质,免疫组化和免疫印迹定量分析均显示过度刺激组卵巢CFTR蛋白表达量显著高于常规刺激组。结论注射过量促性腺激素致大鼠血雌二醇水平异常升高,使卵巢内CFTR表达量显著增加,卵巢形成多发性滤泡囊肿和黄体囊肿,间质水肿,体积和重量增加,参与诱发OHSS。     

护卵汤对GnRHa超排卵大鼠卵巢FSHR和LHR蛋白表达的影响

目的观察护卵汤对超排卵大鼠卵巢促性腺激素受体———卵泡刺激素受体(FSHR)和黄体生成素受体(LHR)蛋白表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法模仿人类超排卵长方案,对大鼠使用促性腺激素释放激素(GnRHa)降调节及尿促性腺激素(HMG)等药物超排卵(模型组),同时给予部分大鼠不同剂量的中药护卵汤(护卵汤低、中、高剂量组),以及未使用药物的自然周期大鼠为正常对照(正常组)。在注射绒毛膜促性腺激素(HCG)当天摘取卵巢组织,用免疫组化法检测FSHR和LHR的蛋白表达。结果 1、与正常组比较,模型组卵巢FSHR蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05);两组大鼠卵巢LHR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。2、与模型组比较,护卵汤高剂量组卵巢FSHR和LHR蛋白表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05);3、与模型组比较,护卵汤中剂量组卵巢LHR蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.01),两组间卵巢FSHR蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);4、护卵汤低剂量组与模型组比较,卵巢FSHR和LHR蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论护卵汤能改善GnRHa超排卵大鼠卵巢FSHR和LHR的蛋白表达,从而改善卵泡发育及卵巢反应性。     

护卵汤对慢性应激超排卵小鼠卵巢TGF-β1,P-Smad3及FSHR mRNA表达的影响

目的 观察护卵汤对慢性应激超排卵小鼠卵巢转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、信号蛋白P-Smad3及卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)mRNA表达的影响.方法 建立慢性应激小鼠模型,造模成功后,随机分为模型组、护卵汤组和生长激素组,另设正常组.在超排卵第3天和注射绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)24 h后,检测各组卵巢TGF-β1、P-Smad3及FSHR mRNA表达.结果 与模型组比较,在超排卵第3天,护卵汤组和生长激素组TGF-β1、P-Smad3及FSHR mRNA表达均显著升高(P<0.01或P<0.05);注射HCG 24 h后生长激素组表达升高更明显(P<0.01).结论 护卵汤可能通过激活TGF-β/Smads信号通路,发挥促进卵泡发育和改善卵巢功能的作用.     

血管生成素1在小鼠卵巢组织中的表达及其意义

目的：观察血管生成素1(Ang-1)在小鼠卵巢组织中的表达,探讨其对小鼠卵泡发育、排卵以及黄体形成与退化的影响。方法：建立小鼠性成熟模型、马绒毛膜促性腺激素(eCG)诱导的卵泡发育模型、人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的排卵模型以及黄体形成和退化模型,RT-PCR法检测不同时间Ang-1在不同模型的小鼠卵巢组织中的表达。结果：Ang-1 mRNA在小鼠出生后第10和20天表达较低;在出生后第25天,Ang-1 mRNA的表达量升高,与第10天比较差异有统计学意义(P<0.01);之后Ang-1表达逐渐降低。在注射eCG后,Ang-1 mRNA的表达量均高于0 h组,在48 h表达量达到最高值(P<0.01)。注射hCG后3、5和9 h,Ang-1 mRNA表达量降低;而在hCG注射后0.5和7.0 h,Ang-1的表达量较高;各组与0.5 h组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Ang-1 mRNA在hCG注射后1~15 d均有表达,且在注射后5~15 d,Ang-1的表达逐渐升高,与1 d组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);在注射hCG后第15天,Ang-1的表达水平最高。结论：Ang-1可能参与了小鼠卵泡发育、排卵和黄
体形成与退化的过程。     

骨髓间充质干细胞移植对环磷酰胺诱导卵巢损伤大鼠Bax及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对环磷酰胺(CTX)所致卵巢损伤的保护作用。方法 30只Sprague Dawley大鼠随机分为空白对照组、模型组及细胞移植组,每组10只,空白对照组大鼠腹腔注射生理盐水,模型组及细胞移植组大鼠腹腔注射CTX制备卵巢早衰模型,细胞移植组于第1天注射CTX后24 h经尾静脉移植BMSCs。停药1周后处死所有大鼠,剖腹取卵巢测质量,观察卵泡数量变化,用免疫组织化学法及Western blot法测定卵巢组织中Bax、Bcl-2蛋白表达。结果模型组、细胞移植组大鼠总卵泡数、中大卵泡数及卵巢湿质量低于空白对照组(P<0.05),但细胞移植组大鼠总卵泡数、中大卵泡数及卵巢湿质量高于模型组(P<0.05)。空白对照组Bax主要表达于黄体细胞,卵泡颗粒细胞仅见散在Bax表达;模型组Bax主要表达于颗粒细胞的细胞质,尤其在闭锁卵泡、生长卵泡及窦状卵泡中表达明显;细胞移植组卵泡颗粒细胞中Bax表达范围明显小于模型组。空白对照组Bcl-2在各级卵泡颗粒细胞及黄体细胞中表达量均多,模型组Bcl-2在卵泡颗粒细胞仅散在表达,细胞移植组Bcl-2表达范围明显大于模型组。与空白对照组比较,模型组、细胞移植组大鼠卵巢组织中Bax蛋白表达量明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量明显下降(P<0.05);但与模型组比较,细胞移植组大鼠卵巢组织中Bax表达量明显下降(P<0.05),Bcl-2表达量明显升高(P<0.05)。结论 BMSCs移植能通过调整卵巢组织中Bax、Bcl-2表达水平减少CTX对卵巢功能的损伤。     

助孕胶囊对多囊卵巢大鼠血清性激素及卵巢肿瘤坏死因子α表达的影响

目的观察助孕胶囊对多囊卵巢(PCO)大鼠生殖内分泌激素、卵巢组织肿瘤坏死因子α表达的影响,探讨其对PCO模型大鼠可能的作用机制。方法采用孕激素联合人绒毛膜促性腺激素(HCG)造模法制备PCO模型大鼠。随机分为对照组、PCO模型组(模型组)、PCO模型组 助孕胶囊组(中药组)、PCO模型组 克罗米酚组(西药组),运用放免法测定血清性激素水平的变化;光镜观察卵巢、卵泡发育的影响,免疫组化学法检测卵巢组织肿瘤坏死因子α表达水平。结果助孕胶囊可使PCO大鼠的颗粒细胞层增厚,卵泡膜细胞层变薄,血清T、LH水平均明显下降,并下调卵巢组织肿瘤坏死因子α的表达。结论助孕胶囊能够通过调整内分泌及影响卵巢肿瘤坏死因子α的表达,在中枢及卵巢局部协调发挥作用,从而调整性腺功能,促进卵泡的发育成熟及排卵。     

卵巢子宫内膜异位囊肿患者的黄体功能

目的研究卵巢子宫内膜异位囊肿患者黄体功能状态。方法选择38例卵巢子宫内膜异位囊肿患者,通过超声观察卵巢内卵泡生长、发育、排卵的状况,确定黄体中期;测定此时血清雌二醇、孕酮的水平,与26例正常生育期妇女作对照。结果卵巢子宫内膜异位囊肿患者血清雌二醇低于正常组,但无统计学意义。38例中32％（12／38）卵泡发育,血清孕酮水平略低于正常妇女,彩色多普勒卵泡期无血流信号,黄体期可见较弱的血流信号;68％（26／38）卵泡发育明显不良,血清孕酮水平显著低于正常妇女,彩色多普勒卵泡期及黄体期均未见血流信号。结论提示卵巢子宫内膜异位囊肿患者的黄体功能不全与卵巢血供障碍致卵泡发育不良和无排卵有关。     

转录因子Ets-1在大鼠动情周期卵巢中的表达

目的检测转录因子Ets-1在大鼠动情周期卵巢组织中的表达规律,探讨其在卵泡发育、黄体形成及退化中的作用。方法分别在动情周期的不同时期收集大鼠卵巢标本,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组化的方法观察Ets-1 mRNA在大鼠动情周期各不同时期表达水平的差异,以及Ets-1蛋白在大鼠动情周期卵巢组织中的表达分布情况。结果RT—PCR结果显示,Ets-1 mRNA在大鼠动情周期各不同时期均有表达,卵泡发育过程中Ets-1 mRNA表达逐渐增强,在动情前期表达最强,动情后期最弱;免疫组化结果显示,Ets-1蛋白在卵巢各级卵泡和黄体中表达,主要表达于卵母细胞、颗粒细胞和黄体细胞。结论Ets-1可能在大鼠动情周期中的卵泡发育、黄体生成及退化过程中起着重要的调节作用。     

护卵汤对GnRHa超排卵大鼠卵巢形态的影响

目的观察护卵汤对GnRHa超排卵大鼠卵巢形态的影响,为护卵汤辅治ART提供相关理论依据。方法模仿人类辅助生殖中的长周期,对大鼠进行GnRHa垂体降调节后再用HMG等药物超排卵(模型组),同时随机给予不同剂量的护卵汤辅助治疗(分别为护卵汤低、中、高剂量组),以自然周期未使用任何药物的大鼠为正常对照(正常组)。在HCG日称体质量并计算各大鼠卵巢指数,光镜观察排卵前卵泡并计算优质卵泡率,电镜观察卵母细胞的超微结构。结果护卵汤中剂量组的卵巢指数明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);模型组和护卵汤各剂量组的卵巢指数均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01);模型组的优质卵泡率明显低于正常组和护卵汤中、高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01);模型组较正常组卵母细胞凋亡及胞浆水肿明显,而护卵汤中剂量组较模型组卵母细胞超微结构改善,胞内脂滴明显增多,细胞凋亡减少。结论 1、GnRHa超排卵对大鼠的卵泡发育及卵子质量可能有不利影响;2、护卵汤能改善GnRHa超排卵大鼠的卵泡发育及卵子质量。     

卵泡液NO、VEGF、ET-1水平与IVF-ET妊娠结局关系探讨

目的 探讨卵泡液NO、VEGF、ET-1水平对IVF-ET妊娠结局的预测价值。方法 对131例接受IVF-ET的不孕症患者,采用比色法测定其卵泡液内NO水平,ELISA检测其卵泡液内VEGF、ET-1水平。应用经阴道超声于控制性超排卵（COH）周期人绒毛膜促性腺激素（HCG）注射日进行卵巢体积、窦状卵泡数检测。结果 131例患者中临床妊娠49例,妊娠率为37.40%。妊娠组卵泡液内NO、VEGF水平均高于未妊娠组,ET-1水平则低于未妊娠组（P<0.05）。HCG注射日,妊娠组总卵巢体积、窦状卵泡数均大于未妊娠组（P<0.05）。卵泡液内NO、VEGF水平与总卵巢体积、窦状卵泡数呈正相关。而卵泡液内ET-1水平与总卵巢体积、窦状卵泡数则呈负相关。结论 卵泡液内NO、VEGF水平增高,ET-1水平降低,可能促进卵巢局部血流丰富,提高卵巢反应性,利于IVF-ET中妊娠成功。     

Expression of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator in Rat Ovary

The protein expression of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator （CFTR）, a cAMP-activated Cl- channel, in ovarian stimulated premature female rat ovary during a cycle of follicle development and corpus luteum formation was investigated. Animals were injected with 10 U pregnant Mare＇s serum gonadotropin （PMSG） and subsequently 10 U hCG 48 h later. Time-dependent immunohistochemistry and Western blotting experiments were performed before and 24, 48, 72 h after hCG treatment. The immunohistochemistry revealed that administration of PMSG stimulated the CFTR expression in thecal cell layer and granulosa cell layer of mature follicles 48 h post injection, coincident with the PMSG-induced peak in follicular estradiol. However, the expression of CFTR in the granulose lutein cell layer and thecal lutein cell layer was time-dependently reduced following hCG injection, in accordance with the gradually increased progestogen level during luteum corpus formation. Western blotting analysis demonstrated that rat ovarian tissue expressed the special CFTR band at 170 kD. It is concluded that cAMP-dependent Cl- channels are involved in regulation of follicle development and luteum formation.     

卵巢过度刺激综合征大鼠模型建立

为建立卵巢过度刺激综合征大鼠模型 ,将 2 2日龄大鼠 1 8只随机分成卵巢过度刺激组、超排卵组和生理盐水对照组 ,每组 6只。按照改良的 Ujioka方法 ,卵巢过度刺激组从第2 2日龄起皮下注射 PMSG1 0 IU连续 4d,第 2 6日龄注射 HCG1 0 0 IU;超排卵组从第 2 4日龄皮下注射 PMSG 1 0 IU,第 2 6日龄注射 HCG 1 0 IU,其余时间同上注射生理盐水 ;生理盐水对照组经皮下注射生理盐水 0 .1 ml连续 5d即从第 2 2～ 2 6日龄。在 HCG注射 72h后 ,尾静脉注射 1 % Evans blue( EB) 0 .1 ml以评价腹腔毛细血管通透性。EB注射 3 0 min后 ,观察卵巢重量、腹腔 EB含量及有无腹水出现。结果表明 :卵巢过度刺激组卵巢重量 ( 0 .3 53± 0 .0 2 2 8g)显著高于超排卵组和对照组卵巢重量 ( 0 .1 3 5± 0 .0 2 8g,0 .0 57± 0 .0 1 0 ;分别 P<0 .0 0 1 ) ;卵巢过度刺激组腹腔 EB含量 ( 2 .3 3± 1 .0 6μg)显著高于超排卵组和对照组卵巢重量 ( 0 .79± 0 .1 8μg,0 .68± 0 .1 9μg;分别 P<0 .0 0 1 )。卵巢过度刺激组出现腹水 ,而超排卵组和生理盐水对照组无腹水出现。这提示 :卵巢过度刺激综合征大鼠模型建立是成功的 ,该模型为系统性探讨卵巢过度刺激综合征的确切发病机理奠定了一定的基础。     

GnRH-a和HCG在诱发排卵中的作用比较研究

目的比较促性腺激素释放激素激动剂（gonadotropic releasing hormone agonist,GnRH-a）和人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin,HCG）在不孕症患者诱发排卵治疗中模拟黄体生成素（luteinizing hormone,LH）峰的作用。方法在广西人口和计划生育研究中心就医的66例排卵障碍行促排卵治疗的患者,选取80个在优势卵泡成熟时未能出现预期LH峰的促排卵周期,随机分为两组,一组注射HCG6000~10000IU,共40个周期,另一组注射GnRH-a（醋酸曲谱瑞林）0.1mg,共40个周期,以模拟LH峰诱发排卵。比较注射GnRH-a和HCG两组患者间的排卵率、妊娠率、未破卵泡黄素化、黄体不足、卵巢过度刺激综合征（ovarian hyper stimulation syndrome,OHSS）、多胎妊娠和下周期囊肿发生率等指标。结果两组患者的排卵率、妊娠率、未破卵泡黄素化、黄体不足发生率、多胎发生率、差异均无统计学意义,但注射GnRH-a组的OHSS发生率、下周期囊肿发生率显著低于注射HCG组。结论在诱发排卵模拟LH峰时,使用GnRH-a比HCG更接近自然周期。     

C57BL/6J小鼠超数排卵的研究

为冻伤治疗提供参考而建立了兔冻伤模型。方法是将银圆在液氮中冷却至-196℃后紧贴兔皮肤3、5、10s，分别观察其致伤结果，致冻3s可使兔皮肤发生Ⅱ度冻伤的病理改变；致冻5s则可使兔皮肤发生Ⅱ度-深Ⅱ度冻伤；而致冻10s可造成深Ⅱ度以上病理改变。结果表明，致冻5s所造成的Ⅱ度-深Ⅱ冻伤可作为标准建立动物模型。     

RLF mRNA在不同阶段大鼠卵巢中的表达

目的 探讨松弛素样因子(RLF)在啮齿类动物的正常卵巢中有无表达以及与卵巢功能的关系，对RLF在大鼠卵巢动情周期、假孕模型中的表达进行研究。方法 采用RT-PCR方法。结果 在成年大鼠整个动情周期中都有RLF的表达，RLF的表达强度在动情前期、动情期卵巢较强，动情间期和动情后期卵巢较弱；未成年大鼠，激素处理使卵泡发育至窦前期、排卵前期时，RLF呈现持续的强表达，在黄体早期RLF的表达明显升高，而黄体中期、黄体晚期中RLF表达下降。结论 RLF与卵泡发育、排卵、黄体形成和退化密切相关。     

促性腺激素作用下豫医无毛小鼠超排卵效果观察

目的 :探讨近交系豫医无毛小鼠超排卵的最佳条件 ,提高超排卵效果。方法 :30只近交系豫医无毛小鼠随机分为 3组 ,分别用 5IU、8IU、10IU的孕马血清促性腺激素 (PMSG)和人绒毛膜促性腺激素 (HCG) ,间隔 4 8h注射 ,比较排出卵母细胞的数量。结果与结论 :腹腔间隔 4 8h各注射 8IU的PMSG和HCG超排卵效果最好 ;各剂量组右侧卵巢比左侧卵巢超排卵效果好 (P <0 .0 5 )。     

核受体NR4A1蛋白在大鼠卵泡发育中的定位及其表达规律

目的：通过研究核受体NR4A1蛋白在正常雌性SD大鼠不同卵巢功能周期和不同发育阶段卵泡及黄体细胞中的表达，推测其在卵泡发育中的生物学作用。方法：利用阴道涂片的方法，按不同的卵巢功能周期将实验大鼠24只分为四组，采集不同时期卵巢标本，采用免疫组织化学方法观察卵巢中NR4A1蛋白的定位及其表达情况。结果：NR4A1蛋白主要表达于卵巢卵泡膜细胞和黄体细胞胞质中，且在成熟卵泡卵泡膜细胞的表达量显著高于生长卵泡（P〈0．01）；在新鲜黄体细胞中表达量最高，显著高于动情前期和动情期的生长卵泡和成熟卵泡以及陈旧黄体细胞中的表达水平（P〈0．01）。结论：核受体NR4A1蛋白表达与卵泡的发育、成熟、闭锁、黄体萎缩有明显的相关性。     

周龄和激素水平对长爪沙鼠超数排卵效果的影响

目的探讨不同周龄和激素水平对长爪沙鼠超数排卵效果的影响,以期确定长爪沙鼠最佳超排周龄和激素使用剂量。方法腹腔注射10 IU PMSG/HCG对4～18周龄8个年龄段的雌性长爪沙鼠进行超数排卵,末次注射16～17 h内对各组动物卵母细胞计数,确定最佳超排周龄后,对该年龄动物以5、10、15 IU3个剂量水平腹腔注射PMSG/HCG,观察各组动物的卵母细胞计数差异。结果与其它周龄组相比,6周龄组长爪沙鼠超数排卵后的卵母细胞数最多,各组间有统计学意义(P<0.05),而5、10、15IU等3个剂量组的超排效果也有一定的差异,10 IU组数量最高。结论对长爪沙鼠而言,采用10 IU激素注射和6周龄的动物进行超数排卵,获得的卵母细胞数量最多而且超排效果稳定性。     

不同时间注射PMSG和HCG对小鼠超排卵效果的影响

目的探讨不同时间注射孕马血清激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）对小鼠超排卵效果的影响。方法选用40只6周龄F1昆明小鼠,随机分成4组,分别在同一天的11：00,13：00,15：00,17：00注射PMSG5IU,48h后注射HCG5IU,然后与公鼠合笼;次日晨检查阴栓,阳性者于当日10：00处死取卵,计数受精卵的数量。结果11：00,13：00,15：00和17：00组平均每只获取可用受精卵9．8枚、24．8枚、11．5枚、4．7枚。结论在13：00注射PMSG,48h后注射HCG对小鼠超排效果最好。     

小鼠卵巢巨噬细胞的免疫组化研究

目的：探讨卵巢内巨噬细胞在卵巢微细结构中的分布特征。方法：用抗巨噬细胞表面的F4/80抗原的单克隆抗体对小鼠卵巢组织中巨噬细胞进行免疫组化染色后观察。结果：巨噬细胞主要分布在卵巢的卵泡膜层、卵巢皮质和髓质的间质、闭镇卵泡和黄体组织中。排卵前卵巢表面包膜层出现大量的巨噬细胞，而妊娠期黄体中巨噬细胞骤减。结论：巨噬细胞可能在不同的卵巢结构中对卵巢的生殖内分泌起不同的调节作用。