金丝桃苷改善吡咯里西啶生物碱诱导小鼠急性肝损伤的作用及机制研究

目的 明确金丝桃苷对吡咯里西啶生物碱（PAs）诱导小鼠急性肝损伤的作用及机制。方法 40只C57BL/6雄性小鼠随机分成5组,即空白对照组、模型组以及金丝桃苷低、中、高剂量组,每组8只。除空白对照组外,其余小鼠采用PAs建立急性肝损伤模型,造模6 h、30 h后金丝桃苷低、中、高剂量组小鼠分别灌胃给予20、40、80 mg/kg金丝桃苷各1次,造模48 h后,收集血清、肝脏、回肠、粪便。检测小鼠血清生化指标丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和总胆汁酸（TBA）水平;苏木精-伊红（HE）染色法观察小鼠肝脏组织病理学形态变化;测定小鼠血清、肝脏、回肠、粪便中胆汁酸含量;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）法及Western blot法检测小鼠肝脏组织中法尼酯X受体（Fxr）、小异源二聚体伴侣（Shp）、胆盐输出泵（Bsep）、胆固醇-7α-羟化酶（Cyp7a1）、甾醇-12α-羟化酶（Cyp8b1）mRNA与蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组血清生化指标ALT、AST、TBA水平显著升高（P<0.05）,肝细胞大面积坏死,同时伴有肝窦淤血;与模型...     

单麻叶千里光中肝毒吡咯里西啶生物碱的分离与鉴定

目的:研究菊科千里光属植物单麻叶千里光Senecio cannabifolius var.integrilifolius的肝毒性吡咯里西啶生物碱.方法:运用多种色谱方法进行分离纯化,应用现代波谱学分析方法进行结构鉴定.结果:从单麻叶千里光的总碱部位中分离得到4个吡咯里西啶生物碱,分别鉴定为:jacobine(1),jacoline(2),jaconine(3),senecicannabine(4).结论:化合物1～4均为首次从该植物中分离得到.     

千里光的安全性研究现状及其对策探讨

千里光(英文名:Climbing Groundsel Herb)系多年生草本植物,为菊科千里光属植物千里光(Senecioscandens Buch.-Ham.)的全草,分布于江苏、浙江、安徽、江西、湖南、四川、贵州、云南、广东、广西等地,各地多自产自销.     

川紫菀水提取物中主要生物碱成分clivorine分析及其对大鼠肝毒性初步研究

目的 考察川紫菀水提取物对大鼠的肝毒性,并探讨其肝毒性与水提取物中吡咯里西啶生物碱成分之间的关系.方法 采用HPLC法分析川紫菀水提取物中主要吡咯里西啶生物碱成分,并结合文献报道设定水提取物的给药剂量.将水提取物ig给予SD大鼠,通过测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性、肝组织中结合吡咯和还原型谷胱甘肽(GSH)水平及观察肝组织病理改变,考察水提取物的肝毒性.结果 川紫菀水提取物中主要吡咯里西啶生物碱成分为clivorine (3.94 mg/g).单次给予水提取物无论剂量高低,ALT和AST均未见明显改变,但肝组织GSH水平显著下降;多次给药时水提取物高剂量组ALT和AST显著升高(P＜0.05).各给药组肝组织中均可检出结合吡咯,其量与给药剂量大小及次数呈正相关.组织病理学观察未见肝组织有明显病变.结论 川紫菀水提取物具有潜在的肝毒性,大剂量的毒性尤为明显.Clivorine是水提取物中的主要生物碱成分,可能是川紫菀肝毒性的主要毒效物质.     

含吡咯里西啶生物碱植物的特殊毒性及致毒机制研究进展

吡咯里西啶类生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PAs)是一类在植物中广泛分布的成分,含有吡咯里西啶类生物碱的植物在民间被作为草药和植物茶饮品应用的现象极为普遍.然而,研究发现吡咯里西啶类生物碱具有明确的毒性作用,其中的肝毒性早已引起人们的关注,而生殖毒性、致突变和致癌性方面的毒性却研究较少.本文主要就PAs的生殖毒性、致突变和致癌方面的特殊毒性进行综述,主要总结了20世纪50年代以来关于PAs特殊毒性的临床报道及动物实验研究,并对现有研究所认为的影响PAs特殊毒性的因素及PAs特殊毒性产生的机制进行了归纳.     

苍耳子对小鼠脾淋巴细胞蛋白质组影响的双向电泳分析

目的观察苍耳子对致敏小鼠脾淋巴细胞蛋白质表达的影响.方法NIH小鼠正常组腹腔注射生理盐水,造模组和治疗组均注射羊红细胞(SRBC)致敏,治疗组经致敏后以苍耳子水煎剂灌胃,处理4 d后,分离小鼠脾淋巴细胞;提取总蛋白,双向凝胶电泳(2-DE)后,以计算机图像分析软件分析电泳图谱.结果致敏会引起多种蛋白质表达发生变化,而苍耳子可逆转其中部分蛋白质的变化.结论苍耳子可改善由致敏引起的小鼠脾淋巴细胞中部分蛋白表达的变化.     

自消容子水提取物对大鼠的毒性作用及肝损伤机制的初步研究

目的:研究含吡咯里西啶生物碱中草药自消容子的水提取物对大鼠的急性毒性、主要毒性靶器官及其肝损伤作用的初步机制,探讨该药材临床用药的安全性.方法:按传统水提醇沉法制备自消容子水提取物,进行急性毒性试验,采用寇氏法计算该提取物对大鼠的LD50.设定高、中、低3个剂量组和对照组对大鼠进行灌胃给药,单次给药后观察7d,7d末进行生化指标测定和组织病理学检查.进一步采用体外肝微粒体代谢方法进行实验,结合以上研究探讨其肝毒性机制.结果:自消容子水提取物灌服Wistar大鼠的LD50为(2.36 ±0.26)g·kg-1.不同剂量给药组大鼠均出现毒性反应,其中,血清转氨酶(ALT和AST)较对照组均有显著升高,组织病理学检查显示大鼠肝、肺脏有明显损伤,其程度亦呈剂量依赖性.研究还发现,肝组织结合吡咯在给药组大鼠均有形成且呈剂量依赖性的增加,同时,体外肝微粒体代谢实验也检测出吡咯代谢物,提示了肝代谢与毒性的发生具有一定的相关性.结论:自消容子具有较强的急性毒性作用;肝、肺是其主要的毒性靶器官;肝损伤作用机制与药材所含吡咯里西啶生物碱的代谢活化及其组织共价结合有关.     

含款冬花和紫草的中成药制剂中吡咯里西啶生物碱的鉴定和含量分析

目的 采用可同时测定32个吡咯里西啶类生物碱（PAs）的液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对紫草药材及含款冬花和紫草的中成药制剂中的PAs成分进行鉴定和含量分析。方法 药材和中成药制剂经提取后用阳离子交换固相萃取小柱净化富集;富集后的样品采用Phenomenex Prodigy 5μ ODS3 100A色谱柱（150 mm×3.2 mm,5 μm）梯度洗脱后,使用电喷雾离子源、正离子多反应监测模式进行检测。结果 14种含款冬花的中成药制剂所含PAs主要为克氏千里光碱,PAs的总检出量为0.059~5.330 μg·g^–1或μg·mL^–1,按药品说明书计算的PAs日摄入量为2.24~95.92 μg;紫草药材主要含有蓝蓟定、石松胺、印美定及其氮氧化物等PAs,8批药材的PAs总检出量为0.60~140.69 μg·g^–1;在10种含紫草的中成药制剂中,PAs日摄入量为0.38~25.20 μg。结论 大多数紫草药材PAs含量相对较低,有望通过控制紫草药材中PAs含量,使含紫草的中成药制剂中PAs含量满足欧盟限量要求;而对于含款冬花的中成药制剂中,大多数（8/14）PAs检出量超过了欧盟限量的10倍,提示含款冬花的中成药制剂有必要开展克氏千里光碱的质量控制及其摄入所致的潜在安全风险评价。     

含吡咯里西啶生物碱的山紫菀类药材的分子鉴别

目的：采用分子生物学的方法对含吡咯里西啶生物碱(HPAs)与不含吡咯里西啶生物碱的山紫菀类药材(橐吾属植物)进行鉴剐。方法：采用CTAB法提取9种不同基源的山紫菀类药材的总DNA，进行PCR扩增和测序，并对序列进行系统分析。结果：通过提取、扩增和测序，得到了9种橐吾属植物的nrDNA ITS区间序列，统计分析结果得到了9种植物的遗传距离和转换、颠换数，分支分类结果得到了系统树。结论：9种橐吾属植物nrDNA ITS区间序列的分析结果表明了两类山紫菀类药材有着明显的区别，是两类药材鉴别的有效方法之一。     

双向电泳在大鼠脊髓的蛋白质组分析中的应用研究

目的 建立大鼠中枢神经系统双向电泳技术平台，从分子水平探索中枢神经系统损伤、修复的机制。方法以固相pH梯度等电聚焦为第一向和SDS均一胶T=12．5％、10％的水平电泳为第二向成功地得到了神经组织双向电泳图谱，并借助图像分析软件研究了双向电泳重复性，另外对胶的银染和脱色作了进一步改进。结果 获得了重复性较好的检测蛋白点的肽质指纹图。结论 本研究为大鼠中枢神经损伤、修复蛋白质组研究工具平台的建立奠定了基础。     

炎症性细胞因子致肝脏缺血再灌注损伤和丹参单体的保护作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素8（IL－8）在肝脏缺血再灌注损伤中的变化以及水溶性丹参单体MP－1（简称MP－1）的作用。方法：建立人肝窦内皮细胞体外低温缺氧再氧化模型和大鼠离体肝脏缺血再灌注损伤模型，以台盼蓝染色观察细胞损伤情况，用放免法分析透明质酸吸收率来反映肝AST、LDH的变化反映肝脏功能。结果：低温缺氧再氧化期间，肝窦内皮细胞的死亡率随着时间的增加而增加，TNF-α和IL－8的释放也随之增加，但肝窦内皮细胞的功能下降；肝窦内皮细胞死亡率分别与TNF-α与IL－8的释放呈正相关（r=0.949,P<0.05和r=0.892,P<0.05)。加入TNF-α抗体低温缺氧再氧化6h的内皮细胞死亡率降低；重组TNF-α处理的肝窦内皮细胞死亡率明显增加；离体大鼠肝脏的功能随低温保存和再灌注时间的增加而降低；MP－1能明显降低人肝窦内皮细胞的死亡率及TNF-α和IL－8的释放，同时可以减轻离体大鼠肝脏的缺血再灌注损伤。结论：TNF-α直接参与肝窦内皮细胞的缺血再灌注损伤，MP－1可能通过抑制TNF-α和IL－8的途径来减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

傣雅解护肝方对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的：研究傣雅解护肝方对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤模型的保护作用。方法：小鼠经傣雅解护肝方预防性灌胃给药7天后,腹腔注射D-氨基半乳糖造模,24小时后检测小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性及显微镜观察小鼠肝组织病理学变化。结果：傣雅解护肝方各剂量组能明显抑制D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤模型ALT、AST的升高（P〈O．05或P〈0．01）;减轻D-氨基半乳糖对肝脏细胞的病理损伤。结论：傣雅解护肝方对D-氨基半乳糖所致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。     

苦参碱微乳对小鼠四氯化碳肝损伤模型的影响

目的 观察苦参碱微乳制剂对小鼠四氯化碳(CCl4)肝损伤模型的保护作用.方法 采用CCl4造成小鼠急性肝损伤模型,预防性经皮肤给苦参碱微乳制剂高、中、低剂量(200,100,50 mg/kg)和灌胃给苦参碱水溶液(200 mg/kg),测定血清丙氨酸转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST).结果 与CCl4组相比,微乳高、中剂量和苦参碱口服水溶液组,ALT均显著降低,微乳高剂量和苦参碱口服水溶液组,AST均显著降低,苦参碱微乳制剂组ALT,AST水平与苦参碱口服水溶液组间无显著差异.结论 苦参碱微乳制剂对小鼠急性CCl4肝损伤有降转氨酶作用,具有一定的新药开发前景.     

小柴胡颗粒激活Nrf2通路抗TAA致大鼠急性肝损伤的机制探讨

目的:观察小柴胡颗粒对硫代乙酰胺(TAA)致大鼠急性肝损伤(ALI)的治疗作用,探讨核转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路在其中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组,模型组,小柴胡颗粒低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg-1),大鼠给予250 mg·kg-1TAA腹腔注射2 d制备肝损伤模型,从第3天各组分别给予等量双蒸水和不同剂量小柴胡颗粒,灌胃2周。末次给药后24 h取材,肝组织行苏木素-伊红(HE)染色;比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2通路相关mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2通路相关蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组ALT,AST,MDA水平显著增高,T-SOD活性明显降低(P 0. 05,P 0. 01),病理学呈现大片炎性浸润表现,肝脏组织Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),醌氧化还原酶1(NQO1),血红素加氧酶-1(HO-1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC),谷氨酸半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM) mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,小柴胡颗粒各剂量组ALT,AST,MDA水平均明显降低,T-SOD活性明显升高(P 0. 05,P 0. 01),病理结果示大鼠肝脏病变范围与严重程度均有不同程度改善,肝脏组织Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC,GCLM的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:小柴胡颗粒可能通过上调Nrf2信号通路上下游分子的表达,对TAA致急性肝损伤大鼠起到治疗作用。     

甘草酸二铵对镉致小鼠急性肝肾毒性影响的实验研究

 目的观察甘草酸二铵(DG)预处理对雄性普通昆明种小鼠急性染镉所致肝肾损伤的影响并初步探讨其机制。方法检测经低、中、高3个剂量DG预处理后急性染镉的雄性小鼠肝肾组织丙二醛(MDA)含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)的活力,并观察病理组织学及细胞超微结构的变化。结果DG可剂量依赖性地增加染镉小鼠肝肾组织中SOD,GSH-Px及CAT的活性,并抑制其MDA的生成,受损的病理组织和细胞超微结构也明显减轻。结论DG预处理雄性普通昆明种小鼠可防护镉所致的急性肝肾损伤,其机制可能与DG能干预镉对小鼠肝肾的氧化损伤有关。     

波棱甲素纳米混悬剂对D-半乳糖胺诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

 目的 研究波棱甲素纳米混悬液（HNS）对D-半乳糖胺（D-GalN）诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用,并与波棱甲素普通混悬剂（HS）进行比较。方法 小鼠每日给药2次,连续给药3.5 d后,一次性腹腔注射D-GalN 800 mg·kg-1造成急性肝损伤模型,20 h后取血清测定丙氨酸基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）值。结果 HNS各个剂量组均能显著降低中毒小鼠ALT、AST含量,HS仅高剂量组ALT、AST值显著降低,且同等剂量下,HNS各组均明显优于HS各组;病理检查结果显示,波棱甲素具有明显的保肝作用。结论 HNS对D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,且作用明显优于普通混悬剂。其机制可能在于将其制成纳米混悬剂之后,粒径减小,表面积增大,体内吸收增加,从而使它的药效作用增强。     

3-乙酰基-4-乙酰氧基苯并NFDE6唑-2-酮对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

 目的 观察3-乙酰基-4-乙酰氧基苯并NFDE6唑-2-酮（3-acetyl-4-acetoxy- 2-benzoxazolone,TC-3）对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其疗效机制。方法 采用腹腔注射体积分数0.15%四氯化碳制备小鼠急性肝损伤模型,3-乙酰基-4-乙酰氧基苯并NFDE6唑-2-酮各剂量组灌胃给药,检测不同剂量的3-乙酰基-4-乙酰氧基苯并NFDE6唑-2-酮对肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶活性以及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶活性、丙二醛和还原型谷胱甘肽含量的影响,同时光镜下观察肝组织的病理变化。结果 3-乙酰基-4-乙酰氧基苯并NFDE6唑-2-酮能明显降低四氯化碳致急性肝损伤小鼠血清血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶的活性,降低肝匀浆丙二醛的含量,同时提高肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽的活性,并能减轻四氯化碳对肝组织的病理损伤。结论 3-乙酰基-4-乙酰氧基苯并NFDE6唑-2-酮对四氯化碳致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,其保护机制可能与清除自由基、抗脂质过氧化作用有关。     

白藜芦醇对急性化学性肝损伤保护机制的实验研究

目的：探讨白藜芦醇对四氯化碳（CCL4）诱导小鼠急性肝损伤保护作用的机制。方法：建立CCL4诱导小鼠急性肝损伤模型,以血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性;白细胞介素-6（IL-6）含量;肝匀浆丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活性为检测指标,观察白藜芦醇对实验性肝损伤保护作用的机制。结果：白藜芦醇呈剂量依赖性降低CCL4小鼠血清中ALT、AST活性,降低肝匀浆MDA含量,提高肝匀浆SOD、GSH-PX、CAT活性,降低血清中IL-6水平。结论：白藜芦醇可通过抗氧化作用及抑制IL-6表达而产生对肝脏的保护作用。     

狗肝菜多糖对D-半乳糖胺所致大鼠急性肝损伤的保护作用

目的 观察狗肝菜多糖对D-半乳糖胺所致大鼠急性肝损伤的影响.方法 建立D-半乳糖胺(D-GalN)诱发的大鼠急性肝损伤模型,不同浓度狗肝菜多糖干预后,测定动物血清ALT、AST.肝组织常规制片及HE染色观察组织病理学改变.结果 狗肝菜多糖能使肝损伤动物血清ALT、AST水平显著降低.组织病理学检测发现狗肝菜多糖处理后肝组织损害程度降低 .结论 狗肝菜多糖对D-半乳糖胺所致大鼠急性肝损伤具有保护作用.     

玉郎伞黄酮对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究玉郎伞黄酮(YLSF)对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及机制.方法:将小鼠分为正常对照组(NC),模型对照组(MC),YLSF高(YLSFH)、YLSF中(YLSFM)、YLSF低(YLSFL)剂量组,及联苯双酯组(BPDC).NC组及MC组以生理盐水ig,各剂量YLSF组和阳性对照组分别给予YLSF(112,56,28 mg·kg-1)和BPDC(150 mg·kg-1) ig,连续给药7d,每天1次.以分光光度法测定各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性、白蛋白(Alb)含量以及总抗氧化能力(T-AOC),以及肝组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,并于光镜观察小鼠肝损伤程度.结果:YLSF高、中剂量YLSF能降低血清AST、ALT、ALP含量(P＜0.01)及肝组织MDA含量(P＜0.01),增加血清Alb含量(P＜0.01),提升血清T-AOC水平(P＜0.01)及肝组织T-SOD活力(P＜0.01);低剂量YLSF能降低血清AST、ALP含量(P＜0.01或P＜0.05)及肝组织MDA含量(P＜0.01),增加血清Alb含量,但对小鼠血清ALT含量、血清T-AOC水平及肝组织T-SOD活力的影响无统计学意义.同时,各剂量YLSF均能减轻肝细胞损伤程度(P＜0.01,P＜0.05).结论:YLSF对CCl4诱导的小鼠急性化学性肝损伤具有显著保护作用,其作用机制可能与其抗氧自由基抑制脂质过氧化作用有关.