用高效液相色谱电化学检测器测定大小鼠脑内单胺类物质的研究

应用反相高效液相色谱法和电化学检测器对单胺类物质如去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺及酸性代谢产物3,4二羟基苯乙酸、5-羟吲哚醋酸和高香草酸的色谱条件及样品的制备进行了研究.结果表明:降低流动相的pH及甲醇含量或增加离子对B_8的含量可使样品的保留时间延长,而增加二正丁胺的含量可缩短保留时间。当pH=3.7,甲醇10％,二正丁胺1.3mmol,离子对B_81.2 mmol时,分离效果最好,能在25 min内将七种物质完全基线分离.在样品的制备方面,用高氯酸沉淀蛋白提取单胺类物质,45,000g×20 min一次离心取上清液20μl直接进样,所含杂质少且不干扰单胺类物质的测定.本实验方法简单,快速、灵敏,比较实用.     

库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究

目的建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。方法采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）,采用Phenomenex C18反相色谱柱（150mm×4.60mm,5μm）,流动相为缓冲液-乙腈（体积比87∶13）,流速为1mL.min^-1,柱温为35℃。结果 4种单胺类神经递质的最低检测限为0.01515～0.01815ng,回收率为85.3%～100.5%。结论该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点,可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。     

高效液相色谱-电化学检测法测定人血浆中维生素C的浓度

目的 :建立人血浆中维生素C浓度的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法 :用直接萃取的方法 ,除去内源性物质的干扰 ,并对维生素C给以保护 ,应用高效液相色谱仪分离 ,采用电化学检测器检测。流动相为磷酸二氢胺溶液 :甲醇 :磷酸 (v/v/v,3000:50:7 ,pH2.7) ;流速 :1ml/min ;进样量 :20μl。内标为左旋多巴(L -dopa,32μg/ml)。色谱柱为YWG -C18(4.6mm×250mm,10μm)。结果 :1.维生素C血药浓度标准曲线在1.5～40.0ng/ml间呈线性相关,y=2.1023X -0.2366(r=0.9995)。2.最低检出限为1.5ng/ml。3.准确度及精密度测定 :方法的平均回收率为(101.10±4.44) % ;日内及日间相对标准偏差均小于8%。结论 :预处理用直接萃取的方法纯化样品 ,应用电化学检测器建立了血浆中维生素C浓度的测定方法。为该药的药代动力学研究与药物评价提供了一个优良的分析方法     

生物样品中组织胺和去甲肾上腺素的同时测定

目的：建立生物样本中组织胺（Ｈｉｓｔ）和去甲肾上腺素（ＨＡ）的同时测定方法,探讨体内Ｈｉｓｔ和ＮＡ的代谢关系。方法：用高效液相色谱电化学检测器（ＨＰＬＣ／ＥＣＤ）、柱前衍生法定量分析生物样本中Ｈｉｓｔ和ＮＡ。结果：２０ｍｉｎ内可分离检测Ｈｉｓｔ和ＮＡ,线性范围为０．０１５～５０μｇ·Ｌ－１,最低检出限为１５ｎｇ·Ｌ－１,回收率为９５％,精密度为５．８０％～１１．１０％。结论：ＨＰＬＣ／ＥＣＤ法具有灵敏、稳定、特异性高等特点。两种指标在同一标准条件下检测结果显示,Ｈｉｓｔ和ＮＡ在体内的代谢变化关系具有相关性。     

高效液相色谱-电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物

[目的]建立一种简单、快速、灵敏的测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物的高效液相色谱方法。[方法]色谱柱采用WatersC18反相色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为水相(每500mL中含辛烷磺酸钠1.25g,磷酸二氢钾6.8g,乙二胺四乙酸18mg,pH值3.3)∶甲醇∶乙腈=78∶19∶3,流速为0.8mL/min,柱温35℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7V。[结果]5种物质保留时间分别为:去甲肾上腺素3.6min,5-羟吲哚乙酸4.5min,高香草酸5.2min,多巴胺6.2min,5-羟色胺11.9min;线性范围均为20～1000μg/L,最低检测限为4～8μg/L。[结论]此方法测定生物样品中的单胺类神经递质及其代谢产物,简便,快速且灵敏度高。     

高效液相色谱-电化学法测定人血浆中盐酸克仑特罗浓度

目的:应用高效液相色谱法(HPLC)-电化学法检测人血浆中盐酸克仑特罗含量。方法:采用乙醚-乙醇混合液提取,用C18色谱柱,流动相为体积比7:3的0.02mol/L磷酸二氢钾-乙腈混合液,检测器为电化学检测器,电位0.80V,内标法定量。结果:本法的线性范围是1.5~120.0μg/L,回归方程Y=0.753X 0.011,r=0.9993;最低检出限0.015μg/L,RSD为2.6%~4.2%,平均回收率为93.8%。结论:本法具有灵敏、准确、快速、稳定的特点。     

高效液相色谱-电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物*

[目的]建立一种简单、快速、灵敏的测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物的高效液相色谱方法.[方法]色谱柱采用Waters C18反相色谱柱(3.9 mm×150 mm,5 μm),流动相为水相(每500 mL中含辛烷磺酸钠1.25 g,磷酸二氢钾6.8 g,乙二胺四乙酸18 mg,pH值3.3)∶甲醇∶乙腈=78∶19∶3,流速为0.8 mL/min,柱温35 ℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7 V.[结果]5种物质保留时间分别为去甲肾上腺素3.6 min,5-羟吲哚乙酸4.5 min,高香草酸5.2 min,多巴胺6.2 min,5-羟色胺11.9 min;线性范围均为20-1 000 μg/L,最低检测限为4～8 μg/L.[结论]此方法测定生物样品中的单胺类神经递质及其代谢产物,简便,快速且灵敏度高.     

HPLC/ECD 同时测定生物样品中的组织胺和去甲肾上腺素

目的：建立了高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）配合电化学检测器（ＥＣＤ）同时分析组织和体液中的组织胺（Ｈｉｓ）和去甲肾上腺素（ＮＡ）的方法。方法：用邻苯二甲醛（ＯＰＡ）和２ 巯基乙醇（２－ＭＥ）进行柱前衍生，衍生产物在离子对试剂辛基磺酸钠的作用下，采用ＰａｔｉｓｉｌＯＤＳ柱，乙酸等试剂组成缓冲溶液与乙腈按７∶３配成流动相，３ 甲基组织胺（３ Ｍ Ｈｉｓ）为内标，检测器电位０．７Ｖ，结果：用该方法对小鼠心脏组织和血液中的Ｈｉｓ和ＮＡ进行同时测定，得到了满意的分离和检测结果，最低检测量约为１５ｐｇ（Ｓ／Ｎ＝３）。结论：这个研究提示，用一些特殊试剂与样品产生衍生物，是得到满意的分离结果而不影响灵敏度的途径。     

高效液相色谱法测定血清去甲肾上腺素及肾上腺素

本文报道用国产高效液相色谱仪联电化学检测器,反相内标法测定血清去甲肾上腺素(NA)及肾上腺素(AD)。研究了不同流动相条件下对血清NA及AD容量因子(K′)及响应值的影响,从而选择最佳测定条件。血清NA及AD浓度在0.2～10ng/ml内与色谱峰面积比值的线性关系良好(r>0.99);不同浓度的血清NA和AD绝对回收率及方法回收率分别为74.4～89.9％及95.1～107.6％;不同浓度的日内、日间变异系数分别为5.0～9.7％及5.3～11.9％。测定10名正常人及4例嗜铬细胞瘤患者的术前血清NA和AD值,二者有显著差异。提示本法对诊断嗜铬细胞瘤有一定的临床价值。     

FMU100抗体的超高效液相色谱法定量检测方法的建立

目的 建立UPLC-protein A定量检测FMU100单克隆抗体的方法.方法 使用Waters UPLC超高效液相色谱仪,Applied Biosystem的PA ImmunoDetection Sensor Cartridge(2.1×30 mm,20μm)色谱柱,柱温30℃,检测波长280 nm,进样体积10μL,以流动相A(10 mmol/L PBS含0.15 mmol/L NaCl,pH 7.2)-流动相B(0.15 mmol/L NaCl,pH 2.6)进行梯度洗脱,流速0.5 mL/min.结果 在0.034~2.200 mg/mL浓度,线性相关系数r2为0.9999,浓度与峰面积间呈良好的线性关系;检测限为0.01 mg/mL,定量限为0.07 mg/mL;回收率为98.18%~99.16%;重复性RSD为0.1%~1.9%;在8 h内,每个2 h测定发酵液中抗体的含量,FM U100抗体峰面积RSD为1.8%;在流动相A pH变化±0.2、流动相B NaCl比例变化±5%、柱温变化±5℃ 、检测波长变化±5 nm、流速相对值变化±20%时,FM U100抗体峰峰面积RSD为1.7%(n=12);检测方法符合系统适应性要求.     

如意金黄散简化方3种有效成分的超声提取工艺优选

目的 以小檗碱、厚朴酚和大黄素3种有效成分为指标,考察和筛选适于如意金黄散简化方新制剂制备工艺和质量控制研究的提取工艺.方法 用HPLC法同时测定小檗碱、厚朴酚和大黄素,采用ACE.5C18-AR色谱柱,以甲醇-2％三乙胺(磷酸调pH 5.0)为流动相梯度洗脱,流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;双波长检测:λ1=294 nm,λ2=345 nm;进样量:10μL.以3种成分的提取率为指标,采用单因素试验和正交试验对其超声提取工艺进行优选.结果 小檗碱、厚朴酚及大黄素的线性范围分别是:0.292～292 mg/L(r2=0.999 8),0.292～292 mg/L (r2 =0.999 7),0.256～256 mg/L (r2 =0.999 5).精密度RSD(n=6)分别为0.23％、0.17％、0.18％.供试品溶液12 h内稳定性良好.平均回收率分别为98.26％ (RSD 2.53％,n=6)、105.17％(RSD 2.06％,n=6)、100.39％(RSD 2.60％,n=6).单因素试验考察了超声时间和次数、乙醇用量和浓度、酸浓度等因素,结果表明,随着超声时间增加、超声次数增多和乙醇含量提高,三组分的提取率均增加.结论 正交试验结果表明最佳提取工艺为:95％乙醇(含1％盐酸)35mL,超声30 min,提取3次.     

高效液相色谱-紫外检测法同时测定染发剂中的20种染料成分

目的 建立高效液相色谱（HPLC）-二极管阵列检测器（DAD）法测定染发剂中20种染料成分的含量,对《化妆品卫生规范》中的氧化型染料的HPLC检测方法进行改进和补充。 方法 样品经乙醇-水超声提取,过滤后进样检测。色谱柱：Agilent Zorbax Bonus-RP （4.6 mm×250 mm,5 μm）; 流动相：A相为乙腈,B相为4 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.0,含0.1%的辛烷磺酸钠离子对试剂）,梯度洗脱：0～24 min,10% A; 24～26 min,10%~40% A; 26～45 min,40% A; 45～47 min,40%~80% A; 47～52 min,保持80% A不变; 流速1 mL/min; 柱温15℃,使用DAD进行检测,检测波长为280 nm,进样量5 μL。 结果 各染料成分在50 min内基线分离。在10.0～500.0 mg/L浓度范围内,线性关系良好,相关系数均高于0.999。日内及日间精密度均小于4%,加样回收率为81.90%～119.88%。 结论 该方法简便、快速、准确,适于氧化型染发剂中染料成分的检测。     

五味子果实、藤茎及果柄的成分分析

[目的]对五味子果实、藤茎及果柄中的五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素及五味子乙素进行鉴别及含量测定.[方法]采用TLC法及RPHPLC法,在C18柱上,以甲醇水(73∶27)为流动相分别测定各成分的含量.[结果]五味子藤茎中五味子醇甲的含量与五味子果实相近,五味子乙素的含量约占五味子果实的50%,而五味子果柄中上述成分均较少.     

蜜蜂毒中蜂毒素的分离纯化方法及含量测定

目的：从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素（melittin),建立以SDS-聚丙烯酰 胺凝胶电泳(SDS－PAGE）及HPLC进行蜂毒素定性定量分析的方法。方法：用Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75三步层析法从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素,以SDS－PAGE定性,以HPLC进行含量测定。结果：样品经SDS－PAGE测定为单一条带,相对分子质量约3000。HPLC含量测定,平均回收率为95．97％,相对标准差（RSD）为1．07％。结论：以上述分离纯化法可制得高纯度的蜂毒素,检测方法准确、可靠、简单。     

蔬菜中敌敌畏残留量的反相高效液相色谱法测定

目的:建立敌敌畏在蔬菜中的残留量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析方法.方法:用Hypersil C18柱(120A,5 μm,4.6 mm×300 mm)色谱柱,以甲醇-水为流动相,流速1.0 ml/min, 215 nm检测.结果:敌敌畏在0.13～12.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,检出限为0.113 mg/L,添加平均回收率为89.9%,RSD为1.87%.结论:RP-HPLC法简单、可靠,可应用于蔬菜中敌敌畏的残留量的测定.     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定黄芪中单糖和双糖的含量

目的采用高效液相色谱-蒸发光散射法建立黄芪中单糖和双糖含量的测定方法。方法色谱柱为Waters X BridgeTM氨基柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(70∶30),流速为1.0mL/min,柱温为30℃。蒸发光散射检测器参数:雾化器温度为50℃,漂移管温度为90℃,气体流量为1.60L/min,增益值为1.0。结果果糖、蔗糖和麦芽糖分别在0.10~0.90μg(r=0.999 9)、1.00~9.00μg(r=0.999 6)、0.25~2.25μg(r=0.999 4)范围内其对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系;平均回收率分别为97.97%(RSD=1.56%)、97.82%(RSD=1.53%)、97.36%(RSD=1.59%)。结论所建立的高效液相色谱-蒸发光散射法简单、准确、重复性好,可用于黄芪中单糖和双糖的含量测定。