广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫的调查及豚鼠模型的构建北大核心CSCD

目的了解广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫状况,观察豚鼠感染华支睾吸虫后肝组织病理变化。方法解剖当地家猫,取肝脏,检查华支睾吸虫感染情况,阳性肝脏收集成虫,并取肝组织制作切片;采集阳性鱼,分离华支睾吸虫囊蚴,经口感染豚鼠,60个囊蚴/只,60d后解剖豚鼠,检查肝脏,收集成虫,取病变肝组织制作切片,作病理检查。实验设未感染对照组。结果当地猫华支睾吸虫自然感染率为41.47%(214/516);感染豚鼠华支睾吸虫成虫回收率50.83%(305/600)。与对照组比较,实验组豚鼠肝脏肿大,边缘呈球状隆起,部分肝叶表面可见水泡状凸起病变,水泡内液清亮;病变组织横切面可见胆管管壁增厚,管腔内有华支睾吸虫成虫寄生;镜下可见华支睾吸虫虫卵切面,周围大量炎症细胞浸润,胆管管壁增厚,管周纤维组织增生伴胆管扩张,肝小叶结构破坏。结论广州珠三角地区家猫华支睾吸虫感染率较高。豚鼠是华支睾吸虫合适的终末宿主,且肝脏病变明显。     

广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫的调查及豚鼠模型的构建

目的了解广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫状况,观察豚鼠感染华支睾吸虫后肝组织病理变化。方法解剖当地家猫,取肝脏,检查华支睾吸虫感染情况,阳性肝脏收集成虫,并取肝组织制作切片;采集阳性鱼,分离华支睾吸虫囊蚴,经口感染豚鼠,60个囊蚴／只,60d后解剖豚鼠,检查肝脏,收集成虫,取病变肝组织制作切片,作病理检查。实验设未感染对照组。结果当地猫华支睾吸虫自然感染率为41．47％（214／516）;感染豚鼠华支睾吸虫成虫网收率50．83％（305／600）。与对照组比较,实验组豚鼠肝脏肿大,边缘呈球状隆起,部分肝叶表面可见水泡状凸起病变,水泡内液清亮;病变组织横切面可见胆管管壁增厚,管腔内有华支睾吸虫成虫寄生;镜下可见华支睾吸虫虫卯切面,周围大量炎症细胞浸润,胆管管壁增厚,管周纤维组织增生伴胆管扩张,肝小叶结构破坏。结论广州珠三角地区家猫华支睾吸虫感染率较高。豚鼠是华支睾吸虫合适的终末宿主,且肝脏病变明显。     

华支睾吸虫感染FVB小鼠不同组织CD4~+T细胞TLR4表达变化

目的观察华支睾吸虫感染小鼠不同组织CD4~+T细胞TLR4的表达变化。方法建立华支睾吸虫感染小鼠模型,分别在感染2、4、8周剖杀小鼠,收集外周血、肝脏和脾脏组织并分离其单核细胞,运用流式细胞术检测CD4~+T细胞TLR4表达水平变化。结果小鼠感染华支睾吸虫2周后,外周血、肝脏、脾脏CD4~+T细胞TLR4表达水平显著高于正常对照组(t值分别为5.87,6.59,4.46,P0.05),感染4周时肝脏和外周血TLR4表达量达到了峰值,随后下降,但到8周时其表达量仍高于正常对照组(t值分别为8.93,17.17,P0.05);脾脏细胞TLR4表达量随着感染时间的延长其表达量逐渐升高,到8周时TLR4表达量高于4周TLR4表达量(t=5.83,P0.05)。结论 FVB小鼠感染华支睾吸虫后CD4~+T细胞TLR4表达水平升高,且随着感染的持续,不同组织TLR4表达水平不同,提示高表达的TLR4在宿主抵抗华支睾吸虫感染及致病中发挥一定作用。     

华支睾吸虫病实验病理学研究

本文观察了长扑沙鼠感染华支睾吸虫后肝胆及胰、脾病理改变。结果发现，感染后２ｄ肝脏瘀血、出血、肝脏、胰腺轻度间质性炎症反应。１０ｄ后肝脏出现嗜酸性脓肿，小胆管增生。３０ｄ后肝脏有纤维组织增生，上皮乳头状增生，胰腺导管扩张及慢性炎症，脾脏呈瘀轿性改变。２４０ｄ后形成胆汁瘀积性肝硬化，胰腺出现胰管炎及胰管周围炎，脾脏轻度瘀血性肿大。３００ｄ，４００ｄ后肝硬化程序有所减轻，肝胆管上皮增生加剧，呈腺瘤样增生     

华支睾吸虫病实验病理学研究

本文观察了长爪沙鼠感染华支睾吸虫后肝胆及胰、脾病理改变。结果发现，感染后２ｄ肝脏瘀血、出血，肝脏、胰腺轻度间质性炎症反应。１０ｄ后肝脏出现嗜酸性脓肿，小胆管增生，３０ｄ后肝脏有纤维组织增生，上皮乳头状增生，胰腺导管扩张及慢性炎症，脾脏呈瘀血性改变。２４０ｄ后形成胆汁瘀积性肝硬化，胰腺出现胰管炎及胰管周围炎，脾脏轻度瘀血性肿大。３００ｄ、４００ｄ后肝硬化程度有所减轻，肝胆管上皮增生加剧，呈腺瘤样增生，部分区域上皮鳞状化生，胰腺导管周围组织纤维化，导管上皮乳头状增生并有粘液腺增生。     

华支睾吸虫致肝胆管纤维化的免疫学机制研究进展

华支睾吸虫主要寄生于人的肝胆管内,虫体在胆管内的长期寄生会导致肝胆管慢性炎症,引起胆管上皮增生,进而导致胆管周围纤维化。本文通过从虫体的固有免疫、适应性免疫对华支睾吸虫感染所致纤维化在免疫学方面的研究进展进行阐述。     

大片形吸虫感染及其分泌排泄产物对小鼠Toll样受体mRNA表达量的影响

目的研究大片形吸虫感染及其分泌排泄产物对小鼠Toll样受体(TLRs) m RNA表达量的影响。方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为感染组和未感染组,每组20只。感染组每鼠经口灌喂大片形吸虫嚢蚴20个,未感染组经口灌喂等体积PBS,分别于感染后1、 4、 7、 14和28 d,每组各取4只小鼠进行剖杀。取小鼠肝脏组织,提取总RNA,逆转录为cDNA, qRT-PCR检测TLR1～9 mRNA的相对表达量。于感染的水牛肝脏中收集大片形吸虫虫体, PBS培养6 h,收集自然活性的大片形吸虫分泌排泄产物(n Fg ESP)。18只雌性BALB/c小鼠随机分为n Fg ESP组和PBS组,每组9只。n Fg ESP组每鼠经腹腔注射1 mg/ml n Fg ESP,对照组注射等量PBS,分别于注射后1、 4、 7 d,每组各取3只小鼠进行剖杀。取小鼠肝脏组织,提取总RNA,逆转录为cDNA, qRT-PCR检测TLR1～9 m RNA的相对表达量。将n Fg ESP溶液95℃热处理15 min,制备热灭活的大片形吸虫分泌排泄产物(hi Fg ESP);分别用含25、50、 100和200μg/ml n Fg ESP或hi Fg ESP的PBS体外刺激小鼠RAW264.7细胞24 h (细胞浓度为2×106个细胞/孔),设2个重复孔, 3次重复实验,以等体积PBS为空白对照;收集各组细胞,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA, q RTPCR检测TLR1～9 mRNA的相对表达量。结果大片形吸虫感染小鼠实验结果显示,感染组小鼠7 d后肝脏组织中TLR6和TLR7的mRNA相对表达量分别为2.9±0.3和2.5±0.5,均高于未感染组(1.0±0.2和1.3±0.5)(P 0.01); 14 d后TLR1和TLR9的mRNA相对表达量分别为3.4±0.8和2.8±0.9,均高于未感染组(1.1±0.2和1.1±0.3)(P 0.05或P 0.01); 28 d后TLR1、 TLR8和TLR9的mRNA相对表达量分别为3.8±1.3、 4.2±1.5和3.1±0.9,均高于未感染组(1.0±0.2、 1.2±0.4和1.1±0.3)(P 0.01或P 0.05)。Fg ESP体内免疫小鼠实验结果显示, n Fg ESP注射1 d后,小鼠肝脏组织中TLR1和TLR2的mRNA相对表达量分别为2.5±0.4和1.9±0.4,均高于PBS组(1.0±0.1)(P 0.05或P 0.01)。Fg ESP体外刺激RAW264.7细胞实验结果显示, 100μg/ml n Fg ESP刺激下的TLR1、 TLR3、 TLR7和TLR8的mRNA相对表达量分别为1.6±0.0、 1.4±0.0、 1.6±0.0和1.9±0.0,均高于PBS组(1.0±0.0)(P 0.05或P 0.01); 200μg/ml n Fg ESP和hi Fg ESP刺激下的TLR8 mRNA相对表达量分别为3.4±0.0和4.0±0.5,均高于PBS组(1.0±0.0)(P 0.01); 100μg/ml hi Fg ESP刺激下的TLR2和TLR8的mRNA相对表达量分别为1.5±0.1和2.0±0.0,均高于PBS组(1.0±0.0)(P 0.01); 25μg/ml hi Fg ESP刺激下的TLR3m RNA相对表达量为0.6±0.0,低于PBS组(1.0±0.0)(P 0.01)。结论大片形吸虫可能通过其分泌排泄产物影响小鼠TLR1、 TLR7和TLR8的转录,对宿主免疫应答进行调控。     

华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型的建立

目的 建立华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型。方法 将BALB/c小鼠随机分为4组,分别以50个、100个和150个囊蚴采用胃饲感染,同时设胃饲生理盐水组为对照。感染后20 d开始采用加藤卡茨法检测小鼠粪便;感染后8周,取小鼠肝脏右外叶组织进行HE和Masson染色,取小鼠肝脏左叶组织进行总蛋白提取,分析肝脏α-SMA的表达情况。结果 感染后31 d小鼠粪便开始检测到华支睾吸虫卵,39 d所有感染组小组均检测到感染。HE及Masson结果显示,与对照组相比,感染组小鼠汇管区出现明显的纤维化改变,且随着胃饲囊蚴数量的增加纤维化越明显,差异具有统计学意义(F=86,P<0.01)。蛋白质免疫印迹试验发现感染小鼠肝脏α-SMA蛋白表达明显高于对照组,且随着胃饲囊蚴数量增加而递增,差异有统计学意义(F=86.5,P<0.05)。结论 成功建立了华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型,为后续研究华支睾吸虫致肝胆管纤维化机制奠定了基础。     

肝吸虫病

0996 中华分支睾吸虫病与其共存病(附2,241例临床分析) 朱师晦等广东医学2(1):1,1981该文分析了中山医学院1960～1979年收治的2,241例华支睾吸虫病的临床资料,结果发现华支睾吸虫感染与21种病病有关,其中以急、慢性胆囊炎、胆石症为乡见,共占21.4%,胆道疾病是华支睾吸虫病最重要的并发症之一。共存有肝癌者72例(3.25%),病理学显示华支睾吸虫可引起胆管上皮     

华支睾吸虫病肝脏病理组织学和组织化学的实验观察

动态观察实验性感染华支睾吸虫豚鼠肝脏病理变化的结果表明,光镜下,感染后2周始,汇管部胆管上皮脱落,渐呈乳头状增生,管壁周围纤维组织增殖且不断向小叶内伸展和大量炎性细胞浸润。肝细胞呈水样变性和局灶性坏死。7周后,胆管上皮腺瘤样组织和小胆管增生明显,胆管多显著扩张。肝细胞索解离,有空泡变性和溶解坏死。透射电镜下发现,感染早期,肝细胞核和一些膜性细胞器出现轻度病变,6周后,粗面内质网扩张成池,线粒体基质透明、空泡化。组织化学观察结果,示肝细胞内糖原、蛋白质、RNA减少或消失,胞质内出现脂肪滴,SDH、MAO活性呈渐进性减少。7周后,不断增殖的胆管和增生的小胆管处,糖原、RNA、粘蛋白含量明显增加,AKP、ACP有处呈强阳性。     

Differential liver sensitization to toll-like receptor pathways in mice with alcoholic fatty liver

Gut-derived, endotoxin-mediated hepatocellular damage has been postulated to play a crucial role in the pathogenesis of alcohol-induced liver injury in rodents. Endotoxins induce production of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) by Kupffer cells via Toll-like receptor (TLR) 4 and contribute to liver injury. This study addressed the contribution of other TLRs and ligands to alcoholic fatty liver. C57Bl6/J mice were fed a modified Lieber-DeCarli diet. Serum aminotransferase measurements, histological analysis, and quantification of liver TNF-alpha and TLR1-9 messenger RNA (mRNA) were performed. The effect of TLR ligands on liver injury was assessed in vivo. Neomycin and metronidazole or diphenyleneiodonium sulfate (DPI) were administered to evaluate the role of gut bacteria and NADPH oxidase activity, respectively, in hepatic TLR expression. Enteral ethanol (EtOH) exposure induced steatosis and increased liver weight, aminotransferase levels, and expression of TLR1, 2, 4, 6, 7, 8, and 9 liver mRNA. Injection of lipoteichoic acid, peptidoglycan (PGN), lipopolysaccharide (LPS), loxoribine, and oligonudeotide containing CpG (ISS-ODN) increased TNF-alpha mRNA expression more in the livers of EtOH-fed mice than in control mice. PGN, LPS, flagellin, and ISS-ODN induced liver inflammatory infiltrate in EtOH-fed mice but not control mice. Addition of antibiotics reduced the severity of alcoholic fatty liver without affecting TLR expression, whereas daily DPI injections reduced the EtOH-mediated upregulation of TLR2, 4, 6, and 9 mRNA. In conclusion, EtOH-fed mice exhibited an oxidative stress dependent on upregulation of multiple TLRs in the liver and are sensitive to liver inflammation induced by multiple bacterial products recognized by TLRs.     

暴发性肝衰竭中Toll样受体2表达的实验研究

目的 分析D-氨基半乳糖(D-Gal)/脂多糖(LPS)诱导的暴发性肝衰竭模型中肝组织Toll样受体2(TLR2)的表达变化及与细胞因子白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)表达的关系,探讨TLR2在启动炎性应答而致肝损伤中的作用。 方法 BALB/C小鼠腹内联合注射D-Gal 900 mg/kg与LPS 10μg/kg后观察其存活率,并检测不同时间点血清转氨酶和血浆IL-18、TNF-α和IFN-γ含量。用半定量逆转录-聚合酶链反应和Tanon Gis2.0软件分析各时间点肝组织中TLR2 mRNA表达,并与血浆IL-18、TNF-α、IFN-γ含量进行相关分析;免疫组织化学观察肝组织TLR2蛋白的表达。 结果 给药后4 h,血清转氨酶明显升高(与0 h比较,P<0.05);10 h小鼠死亡率达80％。血浆IL-1 8、TNF一α和IFN-γ含量逐步上升,IL-18在1 h即显著升高,之后持续高表达;TNF-α在2 h、5 h有两个分泌高峰;IFN-γ在2 h前增加不明显(F=2.5 7,P=0.1 3),但3 h及以后则显著升高(与0 h比较,P<0.01)。正常小鼠肝组织少量表达TLR2 mRNA,给药后1 h表达即显著增强(与0 h比较,P<0.05);免疫组织化学也显示TLR2蛋白有类似的变化,尤其肝窦内皮细胞、库普弗细胞表达更为显著;且部分肝细胞凋亡、坏死后,残存肝组织仍有较高TLR2表达。相关分析表明,肝组织TLR2 mRNA表达与     

华支睾吸虫富甘氨酸2a类抗原Cs4重组蛋白的免疫学特性与定位

目的 对华支睾吸虫富甘氨酸2a(glycine rich antigen 2a,GRA2a)类抗原Cs4重组蛋白(rCs4)进行免疫学特性分析,并对GKA2a类抗原进行组织定位.方法 使用蛋白质印迹(Western印迹)分析rCs4与华支睾吸虫病患者混合血清的免疫反应性,并分析GRA2a类抗原的分泌性.应用ELISA法检测rCs4免疫小鼠血清中抗rCs4特异性IgG水平,并动态检测华支睾吸虫感染兔0～44周的血清中抗rCs4特异性IgG水平.通过免疫荧光实验(immunofluorescence assay,IFA)对华支睾吸虫GRA2a类抗原进行组织定位.结果 纯化的rCsd可被华支睾吸虫病患者混合血清识别.rCs4单抗(mAb Cs4-31)与华支睾吸虫排泄分泌抗原和可溶性抗原在相对分子质量(Mr)26 000与55 000之间分别有13、15个反应条带,均呈阶梯状分布.ELISA检测rCs4免疫小鼠抗rCs4和ESA的IgG效价均达1:64 000,感染兔的抗rCs4特异性抗体平均水平自感染第4周开始上升,于第6周达到高峰,此后逐步递减,至第20周已呈较低水平.IFA检测发现GRA2a类抗原定位于华支睾吸虫成虫的表皮.结论 Cs4蛋白是华支睾吸虫在感染早期的分泌型蛋白,具较好的抗原性.GRA2a类抗原定位于华支睾吸虫成虫表皮.

Abstract：

Objective To study immunological characteristics of Cs4 recombinant protein(rCs4)of Clonorchis sinensis,one of the glycine rich antigen 2a(GRA2a)gene family member,and the histolocalization of GRA2a antigens. Methods The immunological reactivity of Clonorcihs sinensis Cs4 protein to pooled sera from clonorchiasis patients was investigated by using purified rCs4 in Western blotting.The secretory property of GRA2a antigens was also analyzed by Western blotting.The level of specific antibodies against rCs4 in the sera from mice immunized with rCs4,and the dynamic change of antibodies against rCs4 in the sera of C. sinensisinfected New Zealand rabbits(O-44 w post infection)were examined by ELISA.Immunofluorescence assay (IFA)was performed using the anti-rCs4 monoclonal antibody Cs4-31(mAb Cs4-31)to determine the localization of GRA2a antigens in C. sinensis adult worm.Results The purified rCs4 was recognized by pooled sera from clonorchiasis patients.13 and 15 bands appeared at the sites between M,26 000 and 55 000 after mAb Cs4-31 reacting with excretory-secretory antigen(ESA)and soluble adult worm antigen(AWA),respectively.The anti-rCs4 and anti-ESA serum antibody titers in mice immunized with rCs4 were 1:64 000.In C. sinensis infected rabbits,antibody level began to elevate at 4 w after infection,peaked at 6 w,and declined rapidly to a lower level at 20 w.IFA revealed that GRA2a antigens were localized in the tegument of C.sinensis adult worm.Conclusion The Cs4 protein was a secretory antigen appeared in the early stage of infection,and exhibited high antigenieity.GRA2a antigens were localized in tIle tegument of C. sinensis adult worm.     

TLRs在溃疡性结肠炎小鼠结肠中的表达研究

目的 观察溃疡性结肠炎（UC）小鼠模型结肠组织中TLR2、TLR4和TLR9的表达情况,为UC发病机制的研究提供新思路.方法 将6～8周龄健康雄性BALB/c小鼠随机分为两组：正常对照组（n=10）和UC模型组（n=10）,正常对照组小鼠蒸馏水自由饮用7d.UC模型组小鼠5％ DSS溶液自由饮用7d造模.7d后处死小鼠,采用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠结肠黏膜组织中TLR2、TLR4和TLR9 mRNA的表达情况.结果 正常对照组结肠组织中无TLR2、TLR4和TLR9 mRNA的表达,而UC组结肠组织中TLR2、TLR4和TLR9 mRNA表达明显,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 TLR2、TLR4、TLR9可能参与了UC的发病过程.     

华支睾吸虫病88例流行病学和临床特征分析

目的 研究华支睾吸虫病患者的流行病学和临床特征.方法 对哈尔滨医科大学附属第二医院2002至2004年收治88例华支睾吸虫病患者的流行病学资料、临床表现、实验室检查、治疗情况进行回顾性分析.结果 有进食生的或半生的淡水鱼(虾)史的患者占68.2%,22.6%的患者职业为厨师、喂鱼员、钓鱼爱好者、鱼贩,9.1%的患者传播途径未明.88例患者中,上腹疼痛53例,占60.3%;乏力46例.占52.3%;腹泻29例,占33.0%;食欲减退61例,占69.3%;黄疸21例,占23.9%;肝脏肿大52例,占59.1%;脾脏肿大7例,占8.0%;头晕18例,占20.9%;发热5例.占5.7%;胆绞痛13例,占14.8%;28.4%的患者无症状.嗜酸粒细胞增多61例,占69.3%;肝功能异常62例,占70.4%.吡喹酮、丙硫咪唑治疗组的粪便虫卵阴转率分别为91.9%,86.5%(χ2=0.561,P=0.454).结论 华支睾吸虫病临床表现复杂、多样,常出现肝功能异常,易误诊,值得重视.     

华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆表达和血清学诊断效果

目的克隆、表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶（CSCP）,并评价其免疫学诊断效果。方法根据已知的CSCP（Gen Bank序列号：AF093242）基因序列设计引物,从华支睾吸虫成虫总cDNA中扩增该目的片段,克隆入真核表达载体pPIC9K,转化至巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中,甲醇诱导表达、纯化;采用Westernblot技术鉴定该重组蛋白;用纯化的重组CSCP（rCSCP）免疫小鼠,ELISA法检测抗体效价;应用DotELISA法和Western blot法评估该重组蛋白的诊断效果。结果从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增获得长度为927bp的CSCP基因,并成功进行了真核表达、纯化,纯化的rCSCP免疫小鼠后的血清能被华支睾吸虫成虫可溶性抗原识别,其血清抗体效价达1∶64000;采用该重组蛋白建立的DotELISA法检测华支睾吸虫病人的敏感性为91.7%（55/60）,检测正常人的特异性为97.6%（82/84）;Western blot分析显示,rCSCP与日本血吸虫病人血清无交叉反应,与卫氏并殖吸虫病人交叉反应率为20.0%（2/10）。结论 rCSCP具有较好的诊断效果,是华支睾吸虫重组蛋白中一个有潜在诊断价值的抗原。     

判别分析法在华支睾吸虫病筛查中的应用

目的采用逐步判别分析法建立华支睾吸虫病判别函数,探讨其在华支睾吸虫病筛查中应用的可行性。方法在黑龙江省哈尔滨市木兰县采取整群随机抽样法,抽取10个沿江村屯常住人口作为调查对象,采用改良加藤厚涂片法检测受检者粪便中的华支睾吸虫虫卵。设计华支睾吸虫病调查表,用EpiData 3.1软件建立数据库并录入数据,用SPSS 15.0软件对数据进行判别分析。采用逐步判别分析法筛选变量,然后采用Fisher判别法建立判别函数,通过与改良加藤厚涂片法结果进行对比,评价判别函数的判别能力。结果判别函数中慢性胆囊炎、胆管炎、性别、吃生鱼、腹胀、民族、腹痛、年龄等8个变量有统计学意义,华支睾吸虫病判别正确率为88.75%。结论利用SPSS软件的强大数据处理和分析能力,可以快速简便地建立华支睾吸虫病判别分析函数。该函数具有较高判别分析能力,能够快速筛检本地区华支睾吸虫病患者,同时为其他华支睾吸虫病流行区建立快速筛检模式提供借鉴。     

华支睾吸虫特异性富甘氨酸2a类抗原基因的克隆、表达和免疫学诊断价值评价

目的采取免疫学方法筛选华支睾吸虫成虫cDNA表达文库,寻找新的抗原基因。方法使用华支睾吸虫病人混合血清以及华支睾吸虫排泄分泌抗原的免疫小鼠血清,分别免疫学筛选华支睾吸虫成虫λ ZAP cDNA表达文库;将阳性噬菌体克隆、测序以及核苷酸序列比对分析;将目的基因的编码区克隆至原核表达质粒pET28a(+)中,采用制备不带N端融合标签的天然蛋白的策略表达融合蛋白,使用组氨酸标签亲和纯化柱（Ni NTA树脂）纯化融合蛋白;采用间接ELISA法,检测血清中的特异性抗体,共检测35例华支睾吸虫虫卵粪检阳性血清,36例正常人血清,15例日本血吸虫、15例卫氏并殖吸虫和13例猪囊尾蚴病人血清,评价重组蛋白的免疫学诊断价值。结果发现华支睾吸虫特异性富甘氨酸2a（GRA2a）类抗原基因家族,将其中的Cs4抗原基因植入重组表达质粒pET28a(+)的NcoI位点,成功实现融合蛋白的表达,并进一步纯化得到可溶性重组蛋白。采用间接ELISA法检测血清中的特异性抗体,该ELISA法的敏感性为80.0%,特异性为97.2%,总符合率为88.7%;日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴病人血清的假阳性率分别为6.7%、6.7%和7.7%。经核苷酸序列同源性比较,华支睾吸虫GRA2a类抗原是迄今为止尚未进行功能研究的华支睾吸虫特异性抗原。结论发现华支睾吸虫GRA2a类抗原基因家族;成功构建重组表达质粒,并表达、纯化出可溶性重组蛋白;该抗原具有较高的免疫学诊断价值。     

MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏和慢加急性肝衰竭患者外周血单个核细胞 TLR2表达的变化

目的：研究慢性乙型肝炎患者和慢加急性乙型肝炎肝衰竭（HBV-ACLF）患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll 样受体2（TLR2）表达,以及鼠三型肝炎病毒（MHV-3）诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏 TLR2表达的变化。方法收集慢性乙型肝炎和 HBV-ACLF 患者外周血,分离 PBMC,采用实时定量 PCR 法检测 PBMC 中 TLR2 mRNA;给 Balb/cJ 小鼠腹腔注射MHV-3（100 pfu）,建立小鼠暴发性肝炎模型,观察感染0、24、48和72 h 后肝脏TLR2水平变化。结果 BALB/cJ 小鼠在感染 MHV-3后,与0 h[（0.39±0.06）%]比,肝细胞 TLR2 mRNA 水平在感染48和72 h 均显著升高[分别为（9.06±1.60）%和（6.42±2.42）%,P＜0.05）],并于48 h 达最高水平,且两时间点细胞 TLR2 mRNA 水平均与血清 ALT 和 AST 水平呈正相关（r=0.804,P＜0.01;r=0.797,P＜0.01）;HBV-ACLF患者 PBMC 中 TLR2 mRNA 水平显著高于慢性乙型肝炎患者[（5.92±5.26）%对（1.15±1.59）%,P＜0.05）]。结论 TLR2参与了 MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠以及 HBV-ACLF 患者肝脏损伤的发病过程。     

Clinical and epidemiological features of patients with clonorchiasis

AlM:To study the clinical and epidemiological features of patients with clonorchiasis so as to provide scientific evidences for the diagnosis and prevention of clonorchiasis.METHODS:Stools from 282 subjects suspected of having clonorchiasis were examined for helminth eggs with modified Kato‘s thick smear and sedimentation methods,and their sera were tested for HAV-DNA, HBV-DNA, HCV-RNA, HDV-RNA and HEV-RNA with polymerase chain reaction (PCR).Clinical symptoms of patients with clonorchiasis only were analyzed, and their blood samples were tested for circulating antigen (CAg) with Dot-ELISA, esoinophilic granuloolte count,and alanine aminotransferase (ALT). Meanwhile, they were asked to provide data of occupation, eating habit, hygienic habit and knowledge of donorchiasis. In addition, the ecosystem of the environment in epidemic areas was surveyed.RESULTS:Among the 282 patients,61 (21.43%) were infected with clonorchis sinensisonly,97 (34.64%) were co-infected with clonorchis sinensis and other pathogens,92 (32.86%) were infected with hepatitis virus only and 31 (11.07%) neither with clonorchis sinensis nor hepatitis virus.Among the 61 patients with clonorchiasis only, there were 14 (22.95%) subjects with discomfort over hepatic region or epigasfrium,12 (19.67%) with general malaise or discomfort and inertia in total body, 6 (9.84%) with anorexia, indigestion and nausea,4 (6.56%) with fever, dizziness and headache (6.56%), and 25 (40.98%) without any symptoms, sixty one (100%) with CAg(+), 98.33% (59/60) with eosinophilic granulocytes increased and 65.00% (39/60) with ALT increased. B-mode ultrasonography revealed 61 cases with dilated and thickened walls of intrahepatic bile duct, and blurred patchy echo acoustic image in liver. Twenty-six cases had stones in the bile duct, 39 cases had slightly enlarged liver with diffuse coarse spots in liver parenchyma. Twenty cases had enlarged gallbladder with thickened coarse wall and image of floating plagues, 9 cases had slightly enlarged spleen. By analysis of epidemiological data, we found that the ecologic environment was favorable for the epidemiology of clonorchiasis.Most patients with clonorchiasis were lack of knowledge about the disease.Their living environment,hygienic habits, eating habits and their occupations were the related factors that caused the prevalence of the disease.CONCLUSION:The clinical symptoms of clonorchiasis are non-specific, and the main evidences for diagnosis of clonorchiasis should be provided by etiologic examination,B-mode ultrasonography and clinical history.The infection of clonorchis sinensis is related to occupations, bad eating habits and lack of knowledge about prevention of the disease.