大肠埃希菌O157：H7特异基因检测与毒力基因分析

目的：对江苏省2000和2001年分离的经血清玻片凝集试验初筛为大肠埃希菌O157：H7（E.coliO157:H7)的菌株进行O157O抗原及H7抗原特异性基因检测，了解2000年监测点宿主动物分离O157菌株毒力基因携带率及毒力基因图谱。方法：用聚合酶链反应法检测O157特异基因，H7特异基因，多重引物聚合酶链反应法检测VT1，VT2，eaeA,hly等毒力基因并进行分析。结果：134株血清玻片凝集试验初筛为E.coliO157:H7的菌株经特异基因检测确定为E.coliO157的占72.4%(97/134),E.coliO157:H7的仅为29.1%(39/134)；非O157菌株占26.9%(36/134)，有44.3%(58/134)的O157菌株鞭毛抗原不是H7。2000年宿主动物分离菌株，经特异基因检测为非O157的不携带毒力基因（0/18）；为E.coliO157:H?的菌株，毒力基因携带率为10.7%(3/28)；确定为E.coliO157:H7的菌株，毒力基因携带率高达93.1%(27/29)。且毒力基因型以VT2 eaeA hly为主。结论：特异性基因检测鉴定E.coliO157:H7，可大大减少血清玻片凝集试验的误判，结合毒力基因检测，可分析E.coliO157:H7菌株毒力基因型的变化，对制定切实有效的防制对策控制E.coliO157:H7流行具有重要意义。     

食品中大肠埃希菌O157的检验及方法探讨

自从1982年在美国发生了首次由大肠埃希菌O157：H7引起的出血性肠炎暴发以来，该菌在世界范围内曾有过多次食源性暴发。1996年在日本发生的人类历史上规模最大的一次暴发，引起了全世界的关注。目前大肠埃希菌O157：H7感染呈全球流行，已被认定是20世纪70年代以来新发现的8种传染病病原体之一。我国亦加强了大肠埃希菌O157：H7的监测，将该项指标列入国家食源性疾病监测网重点监测项目之一。为了解唐山市食品被本菌的污染现状，我们于2007年8月采集了40份熟肉制品进行食源性致病菌检测，分离出了1株大肠埃希菌O157：H7。     

大肠埃希菌O157∶H7特异基因检测与毒力基因分析

目的 :对江苏省 2 0 0 0和 2 0 0 1年分离的经血清玻片凝集试验初筛为大肠埃希菌O15 7∶H7(E .coliO15 7∶H7)的菌株进行O15 7O抗原及H 7抗原特异性基因检测 ,了解 2 0 0 0年监测点宿主动物分离O15 7菌株毒力基因携带率及毒力基因图谱。方法 :用聚合酶链反应法检测O15 7特异基因、H 7特异基因 ,多重引物聚合酶链反应法检测VT1、VT2、eaeA、hly等毒力基因并进行分析。结果 :13 4株血清玻片凝集试验初筛为E .coliO15 7∶H7的菌株经特异基因检测确定为E .coliO15 7的占 72 .4% (97 13 4) ,E .coliO15 7∶H 7的仅为 2 9.1% (3 9 13 4) ;非O15 7菌株占 2 6.9% (3 6 13 4) ,有44 .3 % (5 8 13 4)的O15 7菌株鞭毛抗原不是H7。 2 0 0 0年宿主动物分离菌株 ,经特异基因检测为非O15 7的不携带毒力基因 (0 18) ;为E .coliO15 7∶H ?的菌株 ,毒力基因携带率为 10 .7% (3 2 8) ;确定为E .coliO15 7∶H 7的菌株 ,毒力基因携带率高达 93 .1% (2 7 2 9) ,且毒力基因型以VT2 eaeA hly为主。 结论 :特异性基因检测鉴定E .coliO15 7∶H7,可大大减少血清玻片凝集试验的误判 ,结合毒力基因检测 ,可分析E .coliO15 7∶H 7菌株毒力基因型的变化 ,对制定切实有效的防制对策控制E .coliO15 7∶H7流行具有重要意义     

RAPD在大肠埃希菌O157同源性分析中的应用

目的:研究腹泻病人和食品中分离出的大肠埃希菌O157的分子特征,为O157菌株的流行病学溯源和疫情控制提供有效手段。方法:采用随机引物扩增多态性DNA分析(randomly amplified polymorphic DNA analysis,RAPD)对10株O157菌株进行基因分型。结果:10株菌聚类为3个类群,分属于三个不同的克隆。结论:RAPD技术可用于O157菌株的流行病学调查和溯源。     

宝鸡市食品中O157：H7大肠埃希菌调查

目的对宝鸡市食品中O157：H7大肠埃希菌的污染状况进行监测并分析。方法按照《食源性致病菌监测工作手册》的要求,用改良EC肉汤增菌,接种改良CHROMagar O157显色琼脂平板,血清和生化系列证实。结果在十二类689份食品中分离到O157：H7大肠埃希菌2株,分别为采自超市的鸡翅和农贸市场的羊肉,检出率为0．29％。结论宝鸡市食品中存在O157：H7大肠埃希菌的污染,虽然检出率较低,这可能与宝鸡市不是O157：H7大肠埃希菌的流行地区有关,但监测是一项长期的工作,应引起有关部门的高度重视,防患于未然。     

94株O157大肠埃希菌的鉴定及结果分析

肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O1 57:H7是一种新发现的病原菌,所引起的腹泻病爆发流行的发生与携带病原菌的家畜、家禽粪便污染食品、蔬菜等有关,其主要的毒力因子为志贺毒素、质粒编码的溶血素和位于染色体上的LEE毒力岛,已经成为世界性的公共卫生问题[1 ] 。我省于1994年从腹泻病人及牛粪中检出该病原菌[2 ] 。近几年江苏、安徽、河南等地相继报道了EHEC感染者。为了解山东省家禽、家畜携带O1 57大肠埃希菌的情况,控制食源性腹泻,我们于2 0 0 0年5～10月选择山东省三个市县设点,对10 5 5份动物粪便标本进行了检测,检出94株O1 57大肠埃希…     

从农村耕牛粪便中检出产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7

目的：调查东阳市家畜、家禽中O157：H7的携带状况,并进一步了解分离到的1株STEC O157：H7的分子生物学特性。方法：随机采集全市各乡镇的家畜、家禽粪便及其生鲜肉样品,进行大肠埃希菌O157：H7的检测,应用O157和H7特异性抗血清凝集试验进行菌株血清型的鉴定;选用ATB全自动微生物鉴定仪和VITEK 2-COMPACT进行常规生化及药敏试验;使用PCR检测O、H抗原编码基因和SLTl、SLT2、hly、eaeA 4种毒力基因。结果：在109份样品中,分离出1株经细菌生化鉴定为大肠埃希菌O157,血清型为O157：H7的菌株;使用PCR检测到O157：H7的O、H抗原编码基因和毒力基因SLT2、hly、eaeA,但未检测到毒力基因SLTl。结论：从东阳市的一头农村耕牛粪便中分离到1株STEC O157：H7,提示疾控中心要加强主动监测,及时发现可能发生的疫情,通过有效干预,防范肠出血性大肠杆菌O157：H7所致食源性疾病的发生。     

食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的PCR检测

目的建立快速准确检测食品中肠出血性大肠埃希菌O157：H7的方法。方法采用多重聚合酶链式反应技术（MPCR）特异性扩增肠出血性大肠埃希菌O157：H7的STX、rfbE、fliC基因。结果分别在228，378，709bp处扩增出3个目的基因片段，且只有肠出血性大肠埃希菌O157：H7获得扩增，其他菌种扩增均呈阴性。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便，为食品中肠出血性大肠埃希菌O157：H7的快速检测提供了新的手段。     

大肠埃希菌O157:H7分离鉴定过程中赫尔曼埃希菌的鉴别

目的：鉴别大肠埃希菌O157：H7和赫尔曼埃希菌。方法：观察菌株在山梨醇麦康凯，营养琼脂及Chromagar O157培养基上菌落形态。生化试验检测菌株的生化特性，血清凝集试验检测菌株的O157和H7抗原，聚合酶链反应法检测O157和H7特异性基因。结果：在营养琼脂培养基上，5株赫尔曼埃希菌均产黄色色素，2株O157：H7菌不产色素；在Chromagar O157培养基上，2株O157：H7菌株呈紫红色，2株赫尔曼埃希菌株呈蓝色，其余3株赫尔曼埃希菌株呈黄绿色。O157：H7菌株KCN试验均为阴性，而赫尔曼埃希菌阳性。O157和H7抗血清坡片凝集试验，7析均为强凝集。O157：H7菌株与O157单克隆抗血清玻片凝集试验均为强凝集，而赫尔曼埃希菌均不凝集。O157：H7菌株O157和H7特异性基因均为阳性，赫尔曼埃希菌均为阴性。结论：赫尔曼埃希菌与O157多克隆抗血清有交叉反应，但单克隆抗血清能区分O157：H7和赫尔曼埃希菌。KCN试验和特异性基因检测亦能鉴别这两种菌。在营养琼脂和Chromagar O157培养基上的菌落形成也有助于两菌的区分。     

2000～2005年海盐县肠出血性O157:H7大肠埃希菌监测

目的：了解海盐县肠出血性O157：H7大肠埃希菌的分布及流行情况。方法：采取肠道门诊病人肛拭样和动物宿主粪便，采用免疫磁珠分离和大肠杆菌O157特异性单克隆抗体胶体金快速诊断技术以及特定培养基分离鉴定技术检测O157：H7大肠埃希菌。结果：从1例腹泻患者的大便中检了了1株O157：H7大肠埃希菌，不产生类志贺毒素；从动物粪便中检出7株O157大肠埃希菌。结论：海盐地区人群中感染率较低，且为非产毒株；猪、鸡是我地区O157：H7大肠埃希菌的主要贮存宿主动物。     

2005-2007年中国食品中大肠埃希菌O157亚碲酸钾抗性基因簇的分布和抗性水平的研究

目的了解中国2005-2007年食源性疾病监测网分离的大肠埃希菌O157亚碲酸钾抗性基因簇的分布和抗性水平的关系。方法运用PCR方法进行基因检测,使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平。结果在所检测的89株大肠埃希菌O157中,共51株菌携带亚碲酸钾(ter)基因簇:在42株大肠埃希菌O157∶H7中,41株菌具有ter基因簇;6株携带flicH7基因、无动力O157∶NM(non-mobile)都具有ter基因簇;在41株不携带flicH7基因、无动力O157∶NM和O157∶hund(具有动力,无法判定H型别)中仅有4株菌具有ter基因簇。ter基因簇阳性的51株大肠埃希菌O157,其亚碲酸钾抗性水平为64～512μg/ml。ter基因簇阴性菌株共有38株,亚碲酸钾抗性水平大多数介于2～16μg/ml,仅1株为128μg/ml。29株携带志贺毒素基因的大肠埃希菌,共有28株具有该基因簇和较高水平的亚碲酸钾抗性。结论食品来源的大肠埃希菌O157具有不同亚碲酸钾抗性水平,高水平的亚碲酸钾抗性与携带亚碲酸钾基因簇具有很高的相关性。     

Prevalence, Phenotypes and Virulence Factors Characteristics of Escherichia coli O157 strains in Yuxi City

Objectives To determine and analyze the carrier rate and characteristics of Escherichia coli O157 in milk cattle, pigs, chickens and patients who suffered from diarrhea; and provide scientific information for the prevention and treatment of infections of E. coli： O157 as well as establishing the check techniques O157. Methods Surveillance spots were set up at one biggest milk cattle feedlot, one pigs slaughterhouse, two chickens markets and the laboratory department of Yuxi municipal hospital in Yuxi city, to collect feces of cattle, pigs, chickens, patients with diarrhea, the numbers of specimen were 70, 250, 350 and 400 respectively, to isolate and culture for E. coli O157 with immunomagnetic separation and immunochromatography technology were carried out. The purified strains were cultured and examined by 3 differential media as well as France biomerieux AMS VITEK32GNI ＋ s or identification system for Enterobacteriaceae API 20E strips, serological tests, polymerase chain reactions （PCR）, phage type. Results 11 strains of E.coli O157 were separated from 70 cattle feces, 250 pigs＇ feces and 400 patients＇ feces. Obtained 4 strains of E. coli O157 ： H7, 6 strains E. coli O157： Hund and 1 patient with diarrhea were 1.4 %, 2.0%, 0 and 1.2% respectively. The authors understood the morphologies, biochemistries, serologies, virulence factors, phage types, tellurite resistance of 11 strains of E. coli O157. Conclusions Multiple strains of E. coli O157 exist in a single crowd or a single flock of animals and a single animal or patient shed two strains or more simultaneously. The phenotypes and virulence factors characteristics of E. coli O157 strains exist difference to a certain extent. Genetic finger- printing techniques can define and identify further the differences among the strains.     

MPCR-DHPLC检测大肠杆菌O157研究

目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-PerformanceLiquid Chromatography,DHPLC)检测大肠杆菌O157的方法,并了解食品中分离的O157毒力基因携带情况。方法:针对大肠杆菌O157的rfbE、flicH7、eaeA、stx1、stx2基因设计引物,其单一PCR扩增产物在DHPLC上出现的色谱峰为标准色谱峰,建立MPCR-DHPLC检测方法。结果:MPCR扩增产物在DHPLC上的色谱峰,在位置和峰型上与标准色谱峰有较好的对应性。DHPLC能分离大小4个碱基差异的DNA片段。4株分离株检测结果,O157-1出现rfbE、flicH7、eaeA基因色谱峰,O157-2、O157-3、O157-4只出现rfbE基因色谱峰。结论:建立的MPCR-DHPLC方法可用于大肠杆菌O157及其毒力基因的检测。     

安徽省1999～2003年O157：H7大肠杆菌实验监测及其意义

目的为了解我省肠出血性大肠杆菌O157：H7感染性腹泻的病人（宿主动物）带菌情况及其毒力基因携带情况,探索疾病发生的原因.方法对安徽省1999～2003年病人粪便进行O157：H7大肠杆菌的分离培养、动物宿主O157：H7大肠杆菌带菌状况调查及O157：H7大肠杆菌毒力基因的检测,并用免疫印迹法检测人群血清特异性O157：H7溶血素抗体.结果家禽家畜出血性大肠杆菌O157：H7带菌率为10.45%、2.50%、0.14%、0.72%和0.31%;从腹泻病人粪便中分离出O157：H7大肠杆菌、痢疾杆菌等,分离率分别为0.43%和4.75%;特异性O157：H7溶血素IgG抗体总阳性率为25.87%;志贺样毒素、溶血素毒力基因检测有53.2%的EHEC O157：H7菌株阳性.结论通过血清学、病原学、分子生物学实验监测,可以认为家禽家畜为O157：H7的动物宿主,分离的O157：H7大肠杆菌大部分携带毒力因子,染菌的家禽家畜是引起人群爆发流行的的重要传染源.     

大肠埃希菌O157血清型分离株的脉冲场凝胶电泳分型

目的了解杭州地区分离的产志贺毒素和不产志贺毒素大肠埃希菌O157菌株的分子流行病学特征。方法对杭州地区于1997～2005年间自散发腹泻患者和动物中分离的10株大肠埃希菌O157血清型菌株,PCR检测毒力基因stx1、stx2、eae和ehxA,eae阳性者进行eae基因分型;按标准化的脉冲场凝胶电泳法(pulsefieldgelelectrophoresis,PFGE)进行分子分型,并与国内其他省份分离的产志贺毒素大肠埃希菌(Shigatoxin_producingEscherichiacoli,STEC)O157∶H7菌株进行比较。结果杭州分离菌株HZ1_11携带毒力基因stx2、γ型eae和ehxA,为浙江省检获的首株STECO157∶H7;3株杭州O157∶NM分离菌株(2_1、26_1和SR05株)仅携带β型eae基因;其他6株杭州O157∶H?分离菌株中,均未检出毒力基因。PFGE揭示,在杭州人源O157菌株中,STECO157∶H7HZ1_11株与近年江苏和安徽分离STECO157∶H7菌株密切近缘,且其图谱与江苏菌株几乎完全相同;3株eae阳性的O157∶NM分离菌株聚类成与STECO157∶H7菌株较远的一簇,杭州1株stx阴性的O157∶H?(1_68株)则处于另一独立的一簇。5株杭州O157∶H?动物分离菌株与其他人源菌株图谱差异极大。结论浙江省首株STECO157∶H7可能是源自近年在江苏流行的STECO157∶H7菌株。β型eae阳性的大肠埃希菌O157∶NM菌株可能具有引起散发腹泻的能力。     

我市首次分离到O157:H7大肠杆菌分离株的生化特征、毒力因子与耐药性的探讨

目的：了解金华市外环境中O157：H7大肠杆菌分离株中生化特征、毒力因子的携带与耐药情况。方法：直接分离接种于O157显色培养基。结果：从51份样品中分离出2株O157：H7大肠杆菌,对这2株O157：H7大肠杆菌分离株进行PCR毒力因子的测定,携带eaeA、stx2毒力因子。结论：药敏试验结果显示,这两株O157：H7大肠杆菌分离株对利福平类、四环素耐药。     

PCR-RFLP方法对江苏省110株产志贺毒素大肠埃希菌O157分型研究

摘要:目的 优化PCR-RFLP方法,对不同年份不同来源的志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC）O157进行分子流行病学探索。方法 应用多聚酶链反应(PCR)一限制性片段长度多态性(restriction fragment length Polymorphism,RFLP) 分析技术比较病人来源菌株的EcoRV 和BglI 2种酶酶切图谱,对江苏省110株STEC O157菌株进行分型分析和聚类分析。结果:BglI酶切图谱条带少,图谱清晰明确。110株STEC O157菌株呈现遗传多态性,可分为15个RFLP型别,其中优势型别在不同年份、不同来源标本中都能检出。结论 STEC O157的PCR-RFLP分型推荐用限制性内切酶BglI,江苏省分离的STEC O157菌株具有遗传多样性。     

江苏省肠出血性大肠杆菌O157:H7监测资料分析

目的 :了解江苏省肠出血性大肠杆菌 O15 7:H7在宿主动物与人群中的分布及其毒力基因携带状况 ,调查不同人群中致泻性大肠杆菌的感染率。方法 :用免疫磁珠分离法 (IMS)对江苏省6个监测点的宿主动物和人粪便标本进行 O15 7:H7的分离培养 ,并用多重引物 PCR方法 (MPCR)检测分离菌株的志贺氏样毒素 (SL T1和 SL T2 )、粘附抹平因子 (eae A)及溶血素 (hly) 4种毒力基因。结果 :监测共采集腹泻病人及健康人群粪便标本 130 8份 ,宿主动物粪便标本 130 7份。其中 ,流行前期腹泻病人粪便标本 70 7份中检出肠道致病菌阳性标本 110份 ,阳性率 15 .5 6 %。菌株有 6种肠道致病菌 ,包含 1株 O15 7:H7。流行后期腹泻病人粪便标本 30 2份和健康人群粪便标本 2 99份 ,均未检出肠道致病菌。宿主动物粪便标本 130 7份 ,检出 O15 7:H710株 ,阳性率 0 .76 %。流行后期阳性率2 .2 7% ,非常显著地高于流行前期 (χ2 =16 .94 ,P<0 .0 1)。不同宿主动物中检出存在差异 ,其中牛检出率最高为 1.77%。 11株 O15 7:H7菌株毒力基因测定 ,携带 SL T2 +eae A+hly10株 ,携带 eae A+hly1株。枯水期与丰水期水源水标本 6 9份 ,未检出 O15 7:H7。结论 :江苏省腹泻病人和宿主动物中均能检出肠出血性大肠杆菌 O15 7:H7,且菌株均携带毒力基因。     

Escherichia coli O157 cluster evaluation

We investigated a multistate cluster of Escherichia coli O157:H7 isolates; pulsed-field gel electrophoresis subtyping, using a single enzyme, suggested an epidemiologic association. An investigation and additional subtyping, however, did not support the association. Confirmating E. coli O157 clusters with two or more restriction endonucleases is necessary before public health resources are allocated to follow-up investigations.     

河北省食品中大肠杆菌O157：H7分布及毒力研究

目的:掌握河北省食品中大肠杆菌O157:H7分布状况及菌株的毒力研究。方法:运用免疫磁珠富集进行分离培养,并用PCR进行毒力基因分析。结果:共采集食品530份,检出O157:H7大肠杆菌5株,总检出率为0.9%。其中,以生牛、羊肉检出率较高,分别为6.7%和4.4%。5株O157:H7菌株中,4株带有SLT2、eae和H ly 3种毒力基因,1株带有SLT1、SLT2、eae和H ly 4种毒力基因。结论:掌握食品中O157:H7分布及生物学特性对预防食源性疾病暴发有重要意义。