化痰通络法对急性脑梗死大鼠神经细胞凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨化痰通络方对重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后的急性脑梗死大鼠内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)后期神经细胞凋亡途径中Caspase-3蛋白以及Caspase-9蛋白表达的影响。方法:将健康160只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、rt-PA组和实验组,每组各40只。采用自身栓子法以制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),rt-PA组与中药组分别给予SD大鼠尾静脉注入rt-PA(浓度:5.67 mg·kg-1)及联合化痰通络中药(浓度:7.2 g·kg-1)干预,,每日2次。每组分为6 h、1 d、3 d和7 d四个时相,并分别采用蛋白印迹法观察脑组织神经细胞中Caspase-9与Caspase-3蛋白的表达,采用TUNEL法观察各组大鼠脑神经元细胞的凋亡情况。结果:凋亡信号途径中Caspase-9蛋白以及Caspase-3蛋白的表达:与假手术组比较,模型组在4个时相中Caspase-9蛋白与Caspase-3蛋白表达量增加明显,差异具有统计学意义(P0.05);而与模型组比较,rt-PA组和实验组在4个时相中Caspase-9蛋白与Caspase-3蛋白的表达量均降低差异具有统计学意义(P0.05),与rt-PA组比较,实验组Caspase-9蛋白在1 d和7 d时表达量明显下低,Caspase-3蛋白在6 h、1 d、7 d时降低显著差异具有统计学意义(P0.05)。结论:化痰通络法可以通过降低内质网应激后期神经细胞凋亡途径中Caspase-9与Caspase-3蛋白的表达,并且部分抑制神经细胞的凋亡,从而防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注的发生与发展。     

大蒜素对脑出血大鼠细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨脑出血大鼠血肿周边组织细胞凋亡的变化规律;观察大蒜素治疗对血肿周边组织细胞凋亡的影响及可能机制。方法将90只 Wistar 大鼠随机分成对照组、脑出血组及大蒜素组;脑出血组和大蒜素组又分为6h 及1、3、7天几个时相点。脑出血动物模型采用立体定位技术及“二次注血,二次退针”方法,将50μl 自体血注入大鼠尾状核;对照组只进针不注血。大蒜素组给予大蒜素注射液0.2mg/100g 体重,股静脉注射,于造型成功即刻及每日1次;TdT 介导的 dUTP 缺口末端标记法检测 TUNEL 阳性细胞的表达;免疫组化二步法测 Caspase-3 IR 细胞。结果 (1)脑出血组血肿周边 TUNEL 阳性细胞表达显著高于对照组,于3天时达高峰(P<0.01);Caspase-3IR 细胞出现较早,于造模后6h 即显著增高,1天达高峰(P<0.01);(2)大蒜素组治疗后 TUNEL 阳性细胞、Caspase-3IR 细胞表达显著降低(P<0.05)。结论脑出血后血肿周边组织出现凋亡性损伤,大蒜素治疗可减轻出血性细胞凋亡,其机制可能与大蒜素抑制 Caspase-3蛋白表达有关。     

氨基胍对CTGF在大鼠纤维化肺成纤维细胞中表达的影响及其作用机制探讨

目的探讨氨基胍对结缔组织生长因子（CTGF）在大鼠纤维化肺成纤维细胞中表达的影响及其作用机制。方法采用细胞培养、免疫组化、流式细胞术等方法,检测氨基胍对CTGF在大鼠纤维化肺成纤维细胞中表达的影响。结果TGF—β可诱导肺成纤维细胞分化为肌成纤维细胞,并使CTGF的表达增强（P〈0．05）,氨基胍可以抑制TGF—β的诱导作用（P〈0．05）,单独应用氨基胍对CTGF在大鼠纤维化肺成纤维细胞中的表达无影响。结论氨基胍可能是通过与TGF-β发生作用,从而抑制CTGF在大鼠纤维化肺成纤维细胞中的表达。     

黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质神经细胞凋亡和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响

目的观察黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与Caspase-3mRNA及蛋白表达的影响。方法用线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型。采用PCR和Western blot技术分别对缺血区皮质Caspase-3 mRNA及蛋白表达情况进行测定。TUNEL染色检测神经元的凋亡情况。结果与脑缺血再灌注组和溶剂对照组相比,黄体酮治疗组大鼠脑部Caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平明显减少(P均0.05),神经元的凋亡数量显著下降(P均0.05)。结论黄体酮能显著减少Caspase-3 mRNA及蛋白表达,抑制神经细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡Caspase-3影响的研究

目的：采用大鼠急性脊髓损伤模型,观察电针对脊髓损伤后神经细胞凋亡与其相关基因Caspase-3表达及变化规律。试图从线粒体启动凋亡途径相关主要因素的研究角度进一步揭示电针治疗脊髓损伤作用机制。方法：采用A llen＇s法制备急性脊髓损伤模型。动物分为电针组、药物组（Caspase-3抑制剂组）、模型组、假手术组。应用Tunel法对细胞凋亡进行标记。结果：药物组治疗结果表明,Caspase-3在3天,药物组表达量低于模型组（P〈0.05）;电针组治疗结果表明,Caspase-3在14天,电针组表达量低于模型组（P〈0.05）。结论：大鼠急性脊髓损伤后存在细胞凋亡现象,是脊髓继发性损伤主要病理机制。Caspase-3在大鼠脊髓损伤后神经元中表达量随着时间推移逐渐增加,提示上述相关基因可能促进神经元的凋亡,参与了脊髓继发性损伤。电针通过抑制Caspase-3在大鼠脊髓损伤神经元中表达,抑制神经细胞凋亡,减轻了脊髓继发性损伤,促进神经功能恢复。     

氨基胍对糖尿病大鼠肾脏中AGEs和LPO的影响

目的探讨氨基胍(AG)对糖尿病大鼠肾脏中糖基化终末产物(AGEs)和脂质过氧化物(LPO)的影响。方法将36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组)、模型组(DM组)和AG组,用链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型。AG组给予AG治疗8周。测定各组大鼠肾质量/体质量、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)2、4 h尿蛋白定量、肾小球AGEs(GTE-AGEs)、血清和尿中抗CML-AGEs及LMN-AGEs、肾小球和血清LPO含量,观察肾脏病理改变。结果DM组大鼠血清BUN、SCr、血清AGEs、血清LPO、GTE-AGEs、GTE-LPO、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量均显著高于N组,AG组血清BUN、血清SCr、血清CML-AGEs、血清LPO、GTE-AGEs、GTE-LPO、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量均显著低于N组,尿中AGEs、血清CML-AGE含量显著高于DM组和N组;AG可显著减轻肾脏病理学改变。结论氨基胍可通过减少AGEs在糖尿病大鼠肾脏的蓄积,降低尿蛋白排泄,减少氧化应激水平及其他间接作用,发挥其对糖尿病肾病的防治作用。     

葛根素对大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关蛋白的影响

目的：探讨葛根素对脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法：构建动物模型，采用SP法测定葛根素对大鼠脑缺血干预后bcl-2蛋白、c-fos蛋白、caspase-3蛋白表达的变化。结果：葛根素能下调c-fos蛋白、caspase-3蛋白和上调bcl-2蛋白表达。结论：葛根素有神经保护作用。     

通心络对大脑中动脉闭塞模型大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的影响

目的 探讨通心络胶囊在缺血脑保护方面的作用机制.方法 SD大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、MK-801组、通心络大剂量组（简称TXLL）、通心络小剂量组（简称TXLS）.制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型后,MK-801组腹腔注射MK-801 0.5 mg/（kg·d）,1次/天;TXLL、TXLS组分别给予1.0 g/（kg·d）和0.5 g/（kg·d）通心络原粉灌胃,2次/天.采用流式细胞、Western blot及RT-PCR技术,观察通心络对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡、Caspase-3、p53和HSP70蛋白及mRNA表达的影响.结果 通心络与MK-801均可明显降低模型大鼠缺血后各时间点脑部神经细胞凋亡百分率（P＜0.05,P＜0.01）,以TXLL组效果最显著;模型组Caspase-3、p53蛋白及mRNA表达较假手术组明显增高,通心络和MK-801均可使其表达减低,TXLL组最显著（P＜0.01）;与模型组比较,各治疗组HSP70蛋白及mRNA表达明显增高（P＜0.05,P＜0.01）.结论 通心络通过减少MCAO模型大鼠神经细胞凋亡率进而发挥脑保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡相关因子Caspase-3、p53表达、促进应激保护性HSP70表达有关.     

川芎嗪对急性脊髓损伤大鼠神经细胞早期凋亡和Caspase-3mRNA表达的影响

目的:观察川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞的早期凋亡及其对Caspase-3mRNA表达的影响,进一步认识Caspase-3在脊髓损伤后细胞凋亡中的作用机制。方法:采用改良Allen’s重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型,120只成年SD大鼠,随机分成4组:正常组、模型组、甲强龙及川芎嗪组,每组各30只,造模后模型组、甲强龙组和川芎嗪组分别按时注射同体积的生理盐水,甲强龙及川芎嗪注射液。损伤后各时间采用BBB法行神经功能评分,流式细胞术观察细胞凋亡情况,透射电镜观察细胞形态学变化,并应用RT-PCR技术检测Caspase-3mRNA表达的情况。结果:模型组伤后6h出现了神经细胞的早期凋亡,至伤后24h达到高峰,伤后48h比24h略有下降,但仍持续在较高的水平,差异无统计学意义(P>0.05);川芎嗪治疗组伤后各时间点细胞凋亡与甲强龙组伤后各时间点细胞凋亡比较差异无统计学意义(P>0.05),但川芎嗪组和甲强龙组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。伤后各时间点Caspase-3mRNA表达的趋势相近,都具有"量———时间"的依赖关系,川芎嗪治疗组与甲强龙组伤后各时间点Caspase-3mRNA比较差异无统计学意义(P>0.05),但川芎嗪组和甲强龙组分别与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究发现大鼠SCI后神经细胞6h内的即出现早期凋亡,比电子显微镜下判断凋亡出现的时间要明显提早;SCI后,损伤区脊髓组织Caspase-3mRNA水平明显升高,与细胞凋亡的比例和细胞超微结构的变化具有明显的相关性;早期使用川芎嗪能减轻大鼠急性脊髓损伤后的神经细胞凋亡,对大鼠急性脊髓损伤有一定神经保护作用,主要机制可能和抑制细胞凋亡的"级联反应"有关。     

乌鸡白凤丸对早期动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞凋亡的影响

目的：研究乌鸡白凤丸对动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞凋亡的影响。方法：采用高脂饲料喂养法建立大鼠早期动脉粥样硬化模型,同时灌胃给予乌鸡白凤丸提取物,连续10周,末次给药后取血、分离血清全自动生化分析仪检测TC、TG、LDL、HDL水平,流式细胞仪检测主动脉内皮细胞的凋亡率、增殖指数及Caspase-3的蛋白表达。结果：模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL水平均较正常对照组大鼠升高,主动脉内皮细胞的凋亡率、Caspase-3的蛋白表达均较正常对照组大鼠升高,增殖指数较正常对照组大鼠降低;乌鸡白凤丸大鼠血清TC、TG、LDL水平均较模型对照组大鼠降低,主动脉内皮细胞的凋亡率、Caspase-3的蛋白表达均较模型对照组大鼠升高降低,而增殖指数较正常对照组大鼠升高。结论：乌鸡白凤丸有效成分对早期动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞凋亡与增殖有调节作用,其机制可能通过下调Caspase-3的蛋白表达有关。     

糖络宁对糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的影响

目的:观察糖络宁(TLN)对糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的影响。方法:用链脲佐菌素注射建立大鼠糖尿病模型,造模成功的大鼠分为模型和TLN组,另设正常对照组。TLN干预32周,检测背根神经节细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果:模型组与正常对照组相比细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.05)。TLN组与模型组相比细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:TLN能够下调caspase-3蛋白表达,抑制细胞凋亡,从而发挥其神经保护作用。     

瘦素预处理对兔急性肺栓塞血清炎性因子表达的影响

目的通过观察外源性瘦素对兔急性肺栓塞(APE)后IL-6及IL-8水平的影响,探讨其在肺损伤时的保护机制。方法选取健康新西兰兔24只,随机分为模型组与瘦素预处理组,每组12只。2组分别采血离心后取上清液,用ELISA方法检测血清炎性因子。结果瘦素预处理组IL-6及IL-8水平较模型组明显下降(P均<0.05);瘦素预处理组所见症状明显轻于模型组。结论外源性瘦素通过对急性肺血栓栓塞症后血清IL-6及IL-8的水平下调,从而对损伤的肺组织起到了保护作用。     

葛根素通过线粒体途径诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨线粒体途径在葛根素(PUE)诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用.方法:葛根素高、中、低剂量(1.5×104,1.5×10-4,1.5×10-5 mol·L-1)干预体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),观察线粒体膜电位的变化,Western Blot检测凋亡相关基因Caspase-9,Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:葛根素加药组与正常组相比线粒体膜电位明显降低,葛根素可使Caspase-9的蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下降而Bax蛋白表达升高,葛根素对PASMC的诱导作用还具有浓度依赖性.结论:葛根素可通过线粒体途径诱导PASMC凋亡.     

小檗碱对波动性高糖诱导的人冠状动脉内皮细胞凋亡的影响

目的研究小檗碱对波动性高糖所致人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)凋亡的影响。方法分离、鉴定并培养HCAECs,将HCAECs分为5组:正常葡萄糖组(5.5 mmol/L葡萄糖)、持续性高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、波动性高糖组(5.5、25 mmol/L葡萄糖每24小时波动1次)、波动性高渗环境(不加入葡萄糖,加入与波动性高糖组相同浓度的甘露醇,保持与波动性高糖组相同的波动性高渗环境)、波动性高糖+小檗碱干预组(5.5、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L小檗碱每24小时波动1次),各组细胞每24小时换液1次,共培养7 d后进行后期实验。检测各组HCAECs的细胞活力及凋亡情况,利用实时荧光定量(q RT-PCR)及Western blotting技术检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达量。结果与持续性高糖组相比,波动性高糖组HCAECs凋亡更显著(P0.05),波动性高糖组Caspase-3蛋白及m RNA表达水平明显增加(P0.05);但波动性高糖+小檗碱干预组较波动性高糖组HCAECs凋亡明显减弱(P0.05),小檗碱可以明显下调波动性高糖诱导的Caspase-3表达(P0.05)。结论波动性高糖较持续性高糖更易降低HCAECs活力,促进HCAECs凋亡,但小檗碱显著减弱波动性高糖环境下HCAECs凋亡,对HCAECs具有明显的保护作用。     

肾炎灵诱导大鼠肾系膜细胞凋亡的研究

目的研究肾炎灵对大鼠系膜细胞凋亡的影响。方法取SD大鼠肾脏进行肾系膜细胞体外培养,用肾炎灵喂服系膜增生性肾炎大鼠,以含药大鼠血清加入到体外培养的大鼠系膜细胞中,应用倒置显微镜、光镜、流式细胞仪等观察、检测肾炎灵对系膜细胞凋亡的影响。结果喂服肾炎灵大鼠的血清可诱导部分系膜细胞发生凋亡。结论肾炎灵的作用机制可能与其诱导肾系膜细胞发生凋亡有关。     

银杏提取物EGB761对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用研究

目的探讨银杏提取物EGB761对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及发生机制。方法采用500μmol/L浓度的过氧化氢(H2O2)作用于对数生长期的肾小管上皮细胞(NRK52E),建立细胞氧化损伤模型。银杏提取物EGB761分为高中低3个浓度组进行干预,应用细胞生长曲线检测细胞生长情况,用流式细胞术检测肾小管上皮细胞的凋亡率,RT-PCR检测Caspase-3基因的表达差异。结果与过氧化氢组比较,高、中浓度组银杏提取物EGB761的凋亡阳性率均明显降低,而低浓度组虽有减少趋势但无显著性差异;高、中浓度组银杏提取物EGB761的Caspase-3表达阳性率较过氧化氢组明显降低,且随着浓度的增加而表达逐渐减少(P0.05)。结论银杏提取物EGB761可以拮抗过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的效应,其机制估计与下调Caspase-3的表达有关。     

深静脉血栓住院患者肺栓塞危险因素相关研究

目的探讨急性期和亚急性期深静脉血栓形成(DVT)住院患者发生肺栓塞(PE)的危险因素。方法对153例深静脉血栓形成患者空腹抽血,进行凝血时间、活化的部分凝血活酶时间、纤维蛋白原、C反应蛋白、血沉、D-二聚体、抗心磷脂抗体等检测,同时进行顺行静脉造影或静脉血管超声检查确诊,并通过Logistic回归分析寻找深静脉血栓形成住院患者发生肺栓塞的危险因素。结果 153例深静脉血栓形成患者中,32例发生PE,发生率为20.9%。PE组活化的部分凝血活酶时间、纤维蛋白原、C反应蛋白、D-二聚体水平均高于非PE组,二者比较有显著性差异(P均0.05);2组凝血时间、血沉、抗心磷脂抗体比较均无显著性差异。经Logistic回归分析示C反应蛋白和D-二聚体是造成DVT住院患者发生PE的独立危险因素。结论 C反应蛋白和D-二聚体可能是造成DVT住院患者发生PE的独立危险因素。     

番酯素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的实验研究

目的研究番酯素抑制人肺腺癌细胞A549增殖和诱导凋亡的作用及其机制。方法①MTT法观察番酯素对人肺腺癌A549细胞株、人肺腺癌NCI-H460细胞株体外增殖的影响;②流式细胞仪检测番酯素对细胞凋亡的影响。结果番酯素在体外对人肺腺癌细胞A549有一定的抑制作用,且这种抑制作用具有量-效关系,剂量越大,抑制作用越强;细胞经过番酯素处理72 h后,与对照组比较,番酯素各剂量线细胞均出现不同程度的凋亡,且总凋亡随着剂量的增加而增加。结论番酯素具有抑制人肺腺癌细胞A549增殖的作用,可以诱导其凋亡。     

姜黄素对急性肺栓塞大鼠的保护作用

目的观察姜黄素对急性肺栓塞大鼠的保护作用。方法将32只雄性清洁级SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、姜黄素低剂量组及姜黄素高剂量组,每组8只。模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组均采用颈总静脉注射自体血栓的方法制备肺栓塞模型,假手术组则注射0.9%氯化钠注射液。姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组腹腔注射姜黄素进行干预。取动脉血进行血气分析;测定肺系数、湿质量干质量(W/D);检测肺组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性;放射免疫法检测血液中内皮素-1(ET-1)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)的含量。结果姜黄素高、低剂量组较模型组氧分压[p(O2)]、二氧化碳分压[p(CO2)]水平均升高(P0.01,P0.05),姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组肺系数、W/D、MDA含量、ET-1含量、TXB2/6-K-PGF1α(T/K)较模型组均降低(P0.01,P0.05),SOD活性较模型组升高(P0.01)。结论姜黄素对急性肺栓塞大鼠有保护作用。