基于压电石英晶体传感器质量效应研制的肌钙蛋白I检测压电免疫芯片

以AT切犁、基频13 MHz的石英晶体为材料,设计阴通道芯片微阵列.采用双功能基团交联剂Sulfo-LC-SPDP将肌钙蛋白I单克隆抗体巯基化,固定于石英晶体的金膜电极表面制备生物敏感膜,构建一种新型、快速的检测肌钙蛋白I的压电免疫芯片.结果显示该芯片用于检测肌钙蛋白I的线性范围为1～20 μ g/L,与酶联荧光分析法具有较好的相关性.其灵敏度高、特异性好,可用于定性检测肌钙蛋白I,具有一定的临床应用价值.     

压电免疫芯片检测禽流感病毒H9亚型抗原的方法研究

目的 为用压电免疫芯片检测禽流感病毒抗原寻找一种可行的抗体固定方法.方法 以AT切型、基频10 mHz的石英晶体为材料,分别采用聚乙烯亚胺-戊二醛交联法、葡萄球菌A蛋白法将禽流感病毒H9亚型单克隆抗体固定在石英晶体的金膜电极表面构建禽流感压电免疫芯片,用于检测禽流感病毒H9抗原.结果 ①聚乙烯亚胺-戊二醛交联法构建的压电免疫芯片检测禽流感病毒H9抗原的线性范围为稀释度1∶10～1∶160,Y=-8.868X+73.514,r2=0.966 6,与H5抗原不存在交叉反应,与鸡胚分离法的符合率达到91.7%.②葡萄球菌A蛋白法若先固定抗体,则无法检测到抗原;如先进行抗原抗体反应再与葡萄球菌A蛋白结合,可以达到定性检测的效果.结论 聚乙烯亚胺-戊二醛交联法适合于构建禽流感病毒H9亚型抗原压电免疫芯片,其检测特异度、重复性和线性均满足检测要求;葡萄球菌A蛋白法在检测抗原时存在局限性,尚不能直接检测抗原.     

检测禽流感病毒的压电免疫芯片两种抗体固定方法的研究

目的探讨构建检测禽流感病毒压电免疫芯片的2种抗体固定方法。方法以AT切型、基频10 MHz的石英晶体为材料,分别采用聚乙烯亚胺-戊二醛交联法（简称戊二醛法）、葡萄球菌A蛋白（SPA）法将禽流感病毒H5亚型单克隆抗体固定在石英晶体的金膜电极表面,构建检测禽流感病毒压电免疫芯片。结果戊二醛法构建的压电免疫芯片检测H5抗原的线性范围为稀释度1∶2~1∶40,Y=75.814-13.748X,r2=0.978 9,与H9抗原不存在交叉反应,与鸡胚分离法的符合率达到91.7%。SPA法若先固定抗体,则无法检测到抗原;如先进行抗原抗体反应再与SPA结合,可以达到定性检测的效果。结论戊二醛法适合于构建禽流感病毒压电免疫芯片,其检测线性满足检测要求;SPA法在检测抗原时存在局限性,尚不能直接检测病毒抗原。     

检测禽流感病毒的压电免疫芯片两种抗体固定方法的研究

目的探讨构建检测禽流感病毒压电免疫芯片的2种抗体固定方法。方法以AT切型、基频10 MHz的石英晶体为材料,分别采用聚乙烯亚胺-戊二醛交联法(简称戊二醛法)、葡萄球菌A蛋白(SPA)法将禽流感病毒H5亚型单克隆抗体固定在石英晶体的金膜电极表面,构建检测禽流感病毒压电免疫芯片。结果戊二醛法构建的压电免疫芯片检测H5抗原的线性范围为稀释度1∶2~1∶40,Y=75.814-13.748X,r2=0.978 9,与H9抗原不存在交叉反应,与鸡胚分离法的符合率达到91.7%。SPA法若先固定抗体,则无法检测到抗原;如先进行抗原抗体反应再与SPA结合,可以达到定性检测的效果。结论戊二醛法适合于构建禽流感病毒压电免疫芯片,其检测线性满足检测要求;SPA法在检测抗原时存在局限性,尚不能直接检测病毒抗原。     

四通道骨唾液蛋白压电免疫传感器阵列的研制

背景:骨唾液蛋白是细胞外基质中的一种高度磷酸化和糖基化的分泌性蛋白,其血清表达水平的检测在评估骨代谢水平方面具有重要的临床检测价值.目的:以AT切型、10Hz双面镀金的石英晶体为换能器,拟制作一种4通道压电蛋白芯片阵列,用于检验临床血清中骨唾液蛋白的表达水平.设计、时间及地点:观察实验,于2008-12/2009-07在解放军广州军区广州总医院医学实验科生物传感器实验室完成.材料:实验所用压电免疫传感器包括包被过的石英晶体、振荡器和频率计等.骨质疏松症患者血清(n=10)、正常人血清(n=9),参考标准血清由解放军广州军区广州总医院检验科、血液中心提供.小牛血清、胎牛血清为Hydone公司产品.方法:石英晶体的厚度切片模式采用AT切割,10MHz,大小为8.00mmx8.00mmx0.15mm,在石英晶片的双面采用真空镀膜的方法形成金电极,该阵列由弹簧支架以及4个石英晶体组成.采用双功能试剂Sulfo-LC-SPDP将鼠抗人骨唾液蛋白单克隆抗体巯基化,固定于石英晶体的金电极表面,通过免疫反应检测血清中骨唾液蛋白的表达.主要观察指标:不同抗体浓度与抗体固定量之间的关系,临床患者血清与正常人血清之间骨唾液蛋白表达的差异.结果:①随着抗体浓度的增加,石英晶体频率响应值也随之增大.实验以80mg/L为抗体固定浓度,检测稀释度为1:4的参考标准血清,结果显示传感器阵列检测的最佳pH值条件在7.4左右.对稀释度分别为1:9, 1:8,1:7,1:6,1:5,1:4,1:3,1:2的参考标准血清进行检测,结果显示在血清稀释度1:9-1:2的范围内,构建的骨唾液蛋白传感器阵列对血清检测的响应呈较好的线性关系,线性方程为△F =521.54c-46.548,相关系数为0.9703.②骨质疏松症患者血清中骨唾液蛋白的表达水平明显高于正常人血清(1=5.702,P<0.05).结论:实验研制的骨唾液蛋白压电免疫传感器阵列具有结构简单、稳定性好、灵敏度高、特异性好等优点,可用于骨唾液蛋白的定量检测.     

Logistic回归和ROC曲线综合评价可溶性Lox-1等生化标志物联合检测对急性冠脉综合征的诊断价值

目的应用Logistic回归和ROC曲线探讨可溶性Lox-1、肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶、肌红蛋白及超敏C反应蛋白单独或联合检测对急性冠脉综合征的诊断价值。方法收集经冠状动脉造影确诊的冠心病患者119例,其中急性冠脉综合征组78例、稳定型心绞痛组41例;另收集经冠状动脉造影证实冠脉无狭窄者41例为非冠心病组。分别检测可溶性Lox-1、肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶、肌红蛋白及超敏C反应蛋白浓度。应用Logistic回归模型,绘制ROC曲线,获得单独或联合检测时的曲线下面积等诊断效能参数,进而评价各指标用于急性冠脉综合征的诊断价值。结果 sLox-1诊断ACS时的曲线下面积为0.934,95%CI(0.894～0.975)。上述5种生化标志物水平与诊断ACS的相关程度为sLox-1>Myo>cTnI>CK-MB>hs-CRP;"sLox-1+肌钙蛋白I+肌红蛋白"联合检测的曲线下面积为0.987[95%CI(0.974～1.000)],敏感度为93.9%,特异度为96.2%,高于上述生化标志物单独检测及"肌钙蛋白I+肌红蛋白+CK-MB"联合检测。结论 sLox-1用于ACS的诊断具有一定临床意义,与肌钙蛋白I和肌红蛋白进行联合检测时可以发挥较好的互补作用,与单独检测相比诊断效能大大提高,且高于"肌钙蛋白I+肌红蛋白+CK-MB"联合检测。     

压电石英晶体凝血传感器检测血浆凝血因子Ⅷ的实验研究

目的 建立一种压电石英晶体传感器检测血浆凝血因子Ⅷ的方法.方法 采用AT切向、基频10MHz的银膜石英晶体作为压电元件;观察血浆凝集过程中晶体振荡频率的变化,确定血浆凝集反应的起点和终点.结果 ①将乏Ⅷ因子血浆、活化部分凝血活酶时间试剂与待测血浆混匀,加入检测池;待频率稳定后,加入CaCl2于检测池,观察反应频率,在凝集反应结束时的频率变化由黏度、密度、质量、晶体表面及凝块的厚度、凝块性质的变化而决定,加样后频率下降的起点为血浆凝集反应的起点T1,频率上升、下降,稳定的起始点为反应的终点T2,计算两点的时间即为反应时间Tc=T2-T1,查标准曲线得血浆凝血因子Ⅷ的活性.②用该方法检测50例临床标本所得平均血浆凝血因子Ⅷ活性为107.4%,STAGO磁珠检测法检测50例临床标本所得平均血浆凝血因子Ⅷ活性为102.0%,该方法的检测结果与STAGO磁珠检测法的相关性好(r＝0.948).结论 压电石英晶体传感器检测血浆凝血因子Ⅷ是一种实时在线检测的方法,在线观测凝集反应的终点,反应的起点和终点的判别方便、可靠、准确,且操作简单、快速、成本低廉,是一种敏感度高、重复性好的方法,并可用于临床检测.     

心肌三合一快速诊断试剂盒在手足口病患儿中的临床应用

目的评价肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶联合检测试剂盒在筛查手足口病患儿中的临床应用价值。方法收集临床确诊为手足口病（HFMD）和非HFMD患儿60例,应用肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶联合检测试剂盒进行检测。结果肌钙蛋白I诊断HFMD的敏感性、特异性、诊断正确率分别为96%、95%、94%;肌红蛋白分别为100%、91%、96%;肌酸激酶同工酶分别为98%、95%、97%。结论由于肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶联合检测试剂盒用于临床对早期诊断手足口病心肌损害和心肌炎有重要意义。     

肌钙蛋白I与肌钙蛋白T敏感性的比较和分析

目的 评价和分析心肌肌钙蛋白I（cTnI）和肌钙蛋白T（cTnT）在临床实验诊断中的敏感性差异.方法 对109例患者的同一血清标本用全自动化学发光免疫分析仪和全自动电化学发光分析仪两种不同的设备及方法来分别检测肌钙蛋白I和肌钙蛋白T,对肌钙蛋白T阴性的患者4小时～3天内进行肌钙蛋白T跟踪检测,再把其结果进行统计、对比与分析.结果 对定量检测109例肌钙蛋白I的阳性血清样本中,肌钙蛋白T只有57例显示为阳性 52例肌钙蛋白T阴性的患者跟踪检测中,有17例为阳性.结论 肌钙蛋白I比肌钙蛋白T的敏感度要高,肌钙蛋白I能更早地反映心肌组织损害.     

梅毒快速检测压电免疫传感阵列的研制

目的研究压电免疫传感器阵列用于梅毒快速检测的可行性。方法采用吸附-交联法将梅毒基因工程重组抗原固定在镀金石英晶体表面,以5%聚乙二醇6000作为反应加速剂,运用以高效空气过滤器、空气干燥器和流量控制电路组成的洁净空气条件下的动态检测技术,检测90份临床血液样本,并与ELISA法检测结果比较。结果压电免疫传感阵列快速检测与ELISA检测比较,梅毒抗体的阳性、阴性血清的检出符合率分别为90%(27/30)和100%(60/60),压电免疫传感阵列在4℃空气密封袋中至少可保存3周性能不变。结论免疫传感阵列检测梅毒螺旋体抗体,具有灵敏度高、特异性好,检测速度快等特点,为野外作业下的献血者血液快速筛查分析提供了一种新的选择。     

急性心肌梗死超敏肌钙蛋白I的检测意义与结果分析

随机选取2015年3月~2017年2月我院收治的64例急性心肌梗死患者作为观察组,再选取同期64例非心肌梗死住院患者作为对照组,全部患者都给予超敏肌钙蛋白I检测。结果对2组人员不同时间段的超敏肌钙蛋白I临床检测结果进行统计分析,其中观察组在1h、4h、8h与12h的超敏肌钙蛋白I临床检测结果明显的高于对照组,差异具备统计学意义(P0.05)。超敏肌钙蛋白I应用在急性心肌梗死患者诊断中具有着较高的灵敏度与特异性,对于提升急性心肌梗死的临床诊断准确率具有着非常关键的意义,在临床中值得广泛推广应用。     

压电石英晶体免疫传感器在前列腺特异抗原检测的实验研究

目的构建一种检测前列腺特异抗原(PSA)的新型压电石英晶体免疫传感器.方法采用AT切型、基频10 MHz的金膜电极石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定形成检测池,抗人PSA单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体识别膜,构成压电PSA免疫传感器,同时对56例临床血清标本进行检测,并与化学发光免疫分析法进行比较.结果构建的压电PSA免疫传感器对PSA的响应特性良好,其线性检测范围为1.25～50 ng/ml,批内、批间变异系数(CV)分别小于4.0%和6.0%,与化学发光免疫分析法具有良好的相关性(r=0.95,P>0.05),癌胚抗原(CEA)、甲种胎儿球蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)等对PSA的检测基本无干扰;传感器可再生后重复使用5次.结论压电PSA免疫传感器具有灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能实时在线检测和重复使用等优点,是一种检测PSA的新方法,适用于临床检测,有推广价值.     

血清肌钙蛋白I在新生儿心肌损伤诊断中的应用

目的 探讨血清心肌肌钙蛋白I在新生儿心肌损伤诊断中的价值.方法 选择儿科2010年1月至2011年4月诊治的窒息新生儿40例为实验组,其中轻度窒息24例,重度窒息16例;对照组选择同期40例的正常足月新生儿,进行血清心肌肌钙蛋白I检测.结果 实验组新生儿轻度、重度窒息患儿的血清肌钙蛋白I检测结果均明显高于对照组,两组比较差异显著(P＜0.05);实验组患儿7天后血清肌钙蛋白I含量明显降低,轻度窒息患儿组7 d后恢复正常,而重度窒息患儿7 d后血清肌钙蛋白I高于对照组(P＜0.05);新生儿窒息患儿中血清心肌肌钙蛋白I阳性率为47.5%,心肌损伤阳性率为75.00%,非心肌损伤阳性率占6.25%.结论 血清心肌肌钙蛋白I是反映心肌损伤的最佳标志物.     

运用压电石英晶体免疫传感器快速同步定量四种尿微量蛋白的研究

第三军医大学西南医院罗阳等设计了一种无需标记的基于压电石英晶体传感器的免疫学检测技术,以同步、快速定量4种尿微昔蛋白.     

心肌肌钙蛋白Ⅰ免疫层析试纸条的研制

目的制备人心肌肌钙蛋白Ⅰ免疫层析试纸条,建立一种快速检测人心肌肌钙蛋白I的检测方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记肌钙蛋白I单克隆抗体,喷于玻璃纤维纸上制成胶体金结合物垫。将另一株肌钙蛋白I单克隆抗体和抗鼠二抗分别喷于试纸条的检测线和质控线处,组装成试纸条并进行灵敏度、特异性及临床样品测定。结果该试纸条检测灵敏度为1μg/L,15min内可判断结果;与C-反应蛋白、人心肌脂肪酸结合蛋白、肌酸激酶、人心肌肌红蛋白无交叉反应;测定健康人血清样本40例,结果均为阴性;测定14例心肌梗死患者血清,结果均为阳性,且T线显色程度与发光法测定值呈正相关。结论该试纸条灵敏度高、特异性强、操作简便,结果判断直观,可用于急性心肌梗死的早期筛查。     

肌钙蛋白Ⅰ与CK-MB联合检测对急性心肌梗死的诊断价值

目的探讨肌钙蛋白I(cTnI)与CK-MB联合检测对急性心肌梗死(AM I)的临床诊断价值。方法采用罗氏电发光2010自动生化分析仪和日立7180生化分析仪,测定62例AM I患者、50例健康体检者血清的cTnI、肌酸激酶(CK)和CK-MB,并对结果进行统计学分析。结果AM I组血清cTnI、CK和CK-MB高于正常对照组(P<0.01)。cTnI与CK-MB联合检测阳性率为96.7%,高于前三者,且动态检测对早期AM I敏感性更高、阳性持续时间更长。结论肌钙蛋白I与CK-MB联合检测能提高早期急性心肌梗死的检出率,具有更宽的诊断时间窗。     

心肌肌钙蛋白I测定对心肌损伤判断的临床意义

心肌肌钙蛋白I是心肌肌钙蛋白的一种,分子量小,在心肌中它与肌钙蛋白T和肌钙蛋白C形成蛋白复合物。在心肌没有受损时,血清中肌钙蛋白浓度很低,检测不到,而肌酸激酶同工酶和肌红蛋白浓度虽低但可检测,因此没有特异性。而心肌肌钙蛋白I的微量改变更能反映心肌受损。     

心肌肌钙蛋白I磷酸化及降解与肥厚型心肌病

目的:观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。方法:实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,正常对照组6只,适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因。饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚,断颈处死两组小鼠后,称取小鼠心脏质量(湿),心尖部心肌组织光镜病理学检查,小鼠心肌组织进行WesternBlotting检测重组蛋白、肌钙蛋白I的磷酸化及降解表达,GAPDH作为内参半定量。结果:12只小鼠进入结果分析。①模型组小鼠心脏明显增大,心脏质量(湿)/体质量比显著高于正常对照组(P<0.01);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润;两组血清肌钙蛋白I水平均正常(P>0.05)。②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在Mr55000,24000检测到突变CTnI-EGFP及其降解片断表达。③模型组在Mr55000,30000,28000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000见磷酸化肌钙蛋白I表达,模型组内源性磷酸化肌钙蛋白I表达明显高于对照组(1.18±0.15,0.97±0.15,P<0.05)。④去磷酸化抗肌钙蛋白I单克隆抗体在Mr55000,28000,检测到去磷酸化突变肌钙蛋白I-EGFP、内源性肌钙蛋白I降解片断表达,正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白I表达;用针对不同位点的抗肌钙蛋白I单克隆抗体3E3,2I-14,8I-7,MF4分别在Mr55000,30000,28000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000,见肌钙蛋白I表达,未见降解片断。结论:AdcCTnIArg146Trp-EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现,小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚;小鼠内源性肌钙蛋白I磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关,但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究。     

急性冠状动脉综合征患者血栓前体蛋白和心肌肌钙蛋白Ⅰ联合检测的意义

目的:了解血浆血栓前体蛋白和心肌肌钙蛋白I联合检测对急性冠状动脉综合征的临床价值。方法:利用酶联免疫分析法测定58例急性冠状动脉综合征患者,根据临床症状分为不稳定型心绞痛组(UAP组)和急性心肌梗死组(AM I组),并测定胸痛发作6 h内和24 h血浆血栓前体蛋白含量,免疫化学发光法测定其心肌肌钙蛋白I含量,同时检测相关指标CK-M B含量。结果:胸痛发作6 h内血栓前体蛋白AM I组为(11.73±4.38)μg/mL,UAP组为(3.20±2.10)μg/mL,AM I组明显高于UAP组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);心肌肌钙蛋白I:AM I组为(32.7±5.74)μg/L,UAP组为(24.8±2.72)μg/L,AM I组高于UAP组(P<0.05)。24 h时两组心肌肌钙蛋白I含量均持续升高,而血栓前体蛋白已基本趋于正常。结论:血栓前体蛋白可提示急性心肌梗死患者血栓形成于早期阶段,而心肌肌钙蛋白I对急性心肌梗死的诊断具有显著的特异性。两者联合检测可提高早期鉴别诊断的价值。     

家用便携式凝血检测仪的一致性分析

目的对派瑞林修饰石英晶体微天平(P-QCM)芯片的家用便携式凝血检测仪(简称P-QCM凝血仪)的一致性进行分析。方法以活化部分凝血活酶时间(APTT)为检测指标,采用相同的血液样本,利用PQCM凝血仪进行全血和血浆检测,并与国际公认的光学凝血检测仪进行比对分析。结果独立10次实验检验同一离心血浆样本,P-QCM凝血仪的吸收频率波动变异系数(CV%)为2.58%,同一芯片APTT检测CV%为1.24%。与全自动凝血检测仪Sysmex CS 2000i临床实测结果比较,10例健康血液临床实测结果决定系数(R2)达0.983。7次全血检测,P-QCM凝血仪的检测CV%为1.15%。结论 P-QCM凝血仪的实验结果重复性良好,具备临床检测能力,能适应于全血检测,可用于床旁检测。