木瓜凝乳蛋白酶的分离纯化及其杀伤鼠肝癌细胞的作用

目的研究木瓜凝乳蛋白酶的分离纯化工艺及其对鼠肝癌细胞hepa 6的杀伤作用。方法采用羧甲基纤维素离子交换色谱分离纯化木瓜凝乳蛋白酶 ,超滤浓缩后冷冻干燥。溴化四唑蓝 (MTT)法检测酶对鼠肝癌细胞的活性。结果分离纯化得到的木瓜凝乳蛋白酶比活为 5 5 4 2 .2IU/mg ,具有显著的抑瘤作用 ,呈浓度依赖性。结论该法分离纯化的木瓜凝乳蛋白酶比活高 ,体外杀伤鼠肝癌细胞作用显著。     

分离猪糜、胰蛋白酶

<正> 江苏省卫生厅委托苏州地区行政公署卫生局、第一工业局主持,于1981年12月27～28日在苏州召开了“分离猪糜、胰蛋白酶鉴定会”,到会代表包括有关领导机构、大专院校、医院、     

分离猪糜、胰蛋白酶

<正> 从牛胰中提取制得的糜蛋白酶和胰蛋白酶,1980年已被收载入美、英药典中,在医药上用于治疗各种炎症,炎性水肿,血肿,炎性粘连,血栓,溃疡,祛痰等疾病,其应用日益广泛。从猪胰中提取糜蛋白酶和胰蛋白酶的制备方法,在实验室曾有报导,但还未在生产上得到应用。去年,我们试用 CM 纤维素从猪胰中直接提取分离出糜蛋白酶和胰蛋白酶,操作     

胰酶中多种蛋白水解酶的分离和纯化

报道了一条综合利用胰酶的有效途径。对其中的羧肽酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶等六种蛋白酶同时进行了分离和纯化。还对羧肽酶 A 和 B 的固定化条件及稳定性进行了探讨。     

胰激肽释放酶的分离纯化

探讨了利用离子交换纤维素(DEAE-cellulose)从分离弹性酶后的母液中吸附分离胰激肽释放酶的较优化工艺。平均得量1.832 g/kg 胰脏,比活12.34 u/mg,回收率为65.4%。它还能提高粗品胰激肽释放酶的比活,回收率为81.0%。     

绿豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化

目的研究1种高效分离纯化绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)的方法。方法采用硫酸抽提,硫酸铵分级沉淀,缓冲液溶解沉淀,用相对分子质量(Mr)为30 000的超滤膜去除大分子蛋白质,Mr为5 000的超滤膜除盐及小分子蛋白质,亲和色谱纯化,得MBTI,高效液相色谱法(HPLC)和SDS-PAGE电泳法分别测定其纯度和Mr,以酪蛋白为底物测其活性。结果纯化的MBTI经HPLC和SDS-PAGE鉴定为2条蛋白质带,其Mr分别为12 000和8 000,其活性约为大豆蛋白酶抑制剂的3倍。结论超滤法与亲和色谱结合能快速高效地分离纯化MBTI。     

胰弹性蛋白酶的纯化

<正> 弹性蛋白酶(Elastase,EC3,4,4,7),又称胰肽酶 E(PancreatopeptidaseE),是一种广泛存于哺乳动物胰脏的肽键内断酶[Endopeptidase]。常见的分离纯化方法有硫酸铵分级盐折——结晶法、吸附法、离交法等。我们将经 Amberlite C G—50离子交换树脂初步分离的药用猪胰弹性蛋白酶用 DEAE——SephadexA——50及 CM——纤维素柱一次层析便获得了聚丙烯酰胺凝胶电泳纯弹性蛋白酶。方法简单,效果较为满意。     

从生产胰岛素的胰渣中制备胰酶、胰蛋白酶及糜蛋白酶

目的 从中性乙醇提取胰岛素后的残渣中提取制备高活性的胰酶,并从中分离纯化出胰蛋白酶(T)、糜蛋白酶(CT).方法 在胰渣中加入活化剂活化后,用PEG-6000沉淀、丙酮脱脂干燥得到胰酶;胰酶经CM-纤维素纯化得到胰糜蛋白酶混合制剂,再经CM-sepharose FF层析分离得胰蛋白酶和糜蛋白酶.结果 胰酶回收率为12.1％,胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶的活性分别为5.40、39.72、76.72 U·mg-1,3种酶的活性比例达1∶7.4∶14.2.胰蛋白酶、糜蛋白酶的效价分别为2505、1003 U·mg-1;相对于胰酶,二者的活性回收分别为48.93％、61.73％.结论 从胰渣中制得的胰酶活性较高(约9倍于《中国药典》2010年版中的标准);制得的T及CT的活力也达到《中国药典》2010年版中的标准.     

胰高血糖素和胰岛素分离纯化的研究

<正> 胰高血糖素和胰岛素同是胰脏的内分泌产物,均作为重要的生化药物用于临床。在我国胰岛素的生产已有二十多年的历史,而胰高血糖素尚属空白。我国生产胰岛素的方法,多以猪胰脏为原料,采用酸醇抽提,调节pH以除酸、碱蛋白而后进行盐析,再由盐析物进行结晶纯化。在这种繁杂的制备过程中,胰高血糖素大量流失,难以获得。而已经报导过的胰高血糖素制备方法,往往只是着眼于分离纯化胰高血糖素本身,而未能兼顾回收胰岛素。我们以同时在胰脏中制取胰高血糖素和胰岛素为宗旨,研究了三种     

酶的分离纯化

酶的分离纯化是酶学研究的基础,也是酶学研究工作者的一项基本功。酶广泛存在于机体的各组织。有的分布于细胞外液,有的分布于细胞内液,有的存在于某一亚细胞器内有的结合于质膜之上。这些酶在理化性质和结构分布上的不同特点,决定了其分离纯化方法也应不同。本文仅就酶分离纯化的一般原则做一概要介绍。然后,结合笔者的科研实践作进一步说明。酶分离纯化的一般原则不同酶的分离纯化方法千差万别。迄今为止,还找不到一个两酶纯化方法完全相同的例子。然而,酶的分离纯化却有一些共同原则可循。这些原则主要包括五个方面的内容。一、确定酶活力测定的方法酶的提纯和酶的活力测定是分不开的。在整个提纯过程中,必须通过测定活力来监测酶的去向。因此,在分离纯化前,首先必须确立一个最佳的活力测定方法,这将因酶而异,也受条件的限制。一般应遵循下列原则。1.能较快取得结果的方法。2.宁愿选择一个准确性稍差,但比较方便快速的方法,而不要选择一个准确性较高,但操作麻烦费时的方法。这是因为酶在长时间操作过程中极易丧失活力的缘故。     

胰高血糖素分离纯化的研究

作者研究了自胰岛素生产过程中分离纯化胰高血糖素的方法。以胰岛素盐析物为起始物,经大孔强酸离子交换树脂柱层析,胰岛素不被吸附,随流出液流出(A),以NH₄OH稀溶液洗脱获得含有胰高血糖素的蛋白质溶液(B)。B液经凝胶过滤法分离,峰Ⅲ为富含胰高血糖素部分(C)。C液经DEAE—纤维素柱层析分离,其峰Ⅱ为电泳纯胰高血糖素(D)。标准品与D样品电泳行为相一致。兔血糖检查证明D保留有全部活性。以D浓缩物在pH 8.5下结晶,获得菱形十二面体结晶。以A制备胰岛素也同时获得胰岛素结晶。以上经离子交换树脂、凝胶过滤及DEAE—纤维素柱层析所得样品均经一种新型吸附树脂脱盐、浓缩。胰高血糖素收率为1 mg/kg猪胰。为自胰岛素生产过程中同时获得胰岛素及胰高血糖素提供了新的方法。     

青霉素酰化酶的分离和纯化

采用渗透法冲击法提取大肠杆菌E.coli108青霉素酰化酶，得到了高比活的粗酶液，收率为93．3％，经硫酸铵分级沉淀、DEAE－Cellulose－52离子交换柱层析不得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条单带的酶，酶液比活为28．09u/mg，提纯了5．32倍，纯酶总收率为36．5％。     

猪血清白蛋白的分离和纯化

<正> 我国猪血资源十分丰富,我们在从猪血红细胞中提取超氧物歧化酶(亦称SOD)的同时,又在血浆中分离得到了猪血清白蛋白、丙种球蛋白和凝血酶等重要生化物质。本文主要介绍以猪血为原料,采用硫酸铵、辛酸钠法提取白蛋白制备工艺。本工艺操作方便,产品纯度高,适用于工业生产。一、试剂和原料1.猪血:上海市梅陇镇屠宰场2.醋酸纤维素薄膜:浙江黄岩曙光化工厂3.进口牛血清白蛋白(BSA):西德4.国产牛血清白蛋白(BSA):上海化学     

关于胰酶中的胰蛋白酶效价测定的探讨

目的:改进、提高《中国药典》标准,提高胰酶标准的科学性和可操作性。方法:对《中国药典》与BP、USP、EP收载的胰酶中胰蛋白酶效价测定标准的差异作比较。结果:《中国药典》标准的叙述太简单,不便于操作,BP、USP、EP标准的描述详细、清晰,EP最为严谨。结论:应修订完善《中国药典》。     

神秘酶的分离纯化

华盛顿大学的研究者们已经纯化了一种到目前有人还对其存在持怀疑态度的酶，一些初步事实证明这种酶在肿瘤形成过程中起关键的作用。第一个蛋白质棕榈酰转移酶已分离纯化。该酶催化棕榈酰基与Ｒａｓ蛋白质（如Ｈ－Ｒａｓ，Ｎ－Ｒａｓ）靠近羧基端的半胱氨酸的连接。Ｒａｓ蛋白质在细胞信号传导中起着关键的作用。由于人类肿瘤的大部分与Ｒａｓ蛋白质的突变模板有关，因此，它成了科学家们研究和药物开发的题目。目前，大多数人的注意力集中在Ｒａｓ法呢基转移酶上，因为它催化法呢基（１５Ｃ的类异戊二烯基）与位于Ｒａｓ蛋白质羧基末端半胱…     

猪降钙素的分离纯化

介绍一种简易可行的工艺路线生产猪降钙素,以猪甲状腺中制备所得的降钙素纯度高,收率高,生物活性达168 MRC/mg·pr。     

胰酶和激肽释放酶分离的初步研究

<正> 胰酶应基本上含有动物胰脏中存在的各种酶类,如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和核酸酶等。胰酶中的蛋白酶类属内肽酶的包括胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶和激肽释放酶等。这些内肽酶皆系丝氨酸蛋白酶。属外肽酶的主要是羧肽酶A和B。猪胰激肽释放酶在日本脏器生化药物中其年产值居于首位,临床已用于治疗初老期循环     

猪凝血酶原的分离、纯化及生化鉴定

<正> 一、前言血浆与组织中直接参与凝血的物质,统称为凝血因子。凝血过程基本上是一系列蛋白质有限水解的过程,大体可分为三个阶段,即因子X激活成Xa,因子Ⅱ(凝血酶原)激活成Ⅱa(凝血酶),因子J(纤维蛋白原)转变成Ⅰ_a(纤维蛋白)。     

胰高血糖素分离纯化研究获得新进展

<正> 胰高血糖素存在于胰脏兰氏小岛的α—细胞中,是由二十九个氨基酸残基组成的多肽激素。它受低血糖刺激而释放,其作用与胰岛素相拮抗;有升高血糖,增强心肌收缩等作用,临床上用于抢救心肌梗死,心源性休克等。由于分离纯化较为困难,在胰岛素生产过程中胰高血糖素随之流失,多数国家尚不能自胰岛素生产工艺中分离纯化胰高血