可见-紫外分光光度法测定器械消毒液中甲醛、苯酚的含量

目的:用可见-紫外分光光度法测定甲醛、苯酚的含量.甲醛与乙酸铵-乙酰丙酮混合液混合后在热水浴中加热10分钟呈黄色溶液,在可见波长414nm处有最大吸收.苯酚水溶液在紫外波长270 nm处有最大吸收.结果:甲醛反应液在0.4～4.0μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9999,n=6),平均回收率为97.55%,RSD=0.81%.稳定性实验表明甲醛反应液在2小时内稳定.苯酚溶液在10～16μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9999,n=6),平均回收率99.27%,RSD=1.05%,苯酚溶液在24小时内稳定.结论:本方法可快速测定甲醛、苯酚含量,方法准确、灵敏.     

快速溶剂萃取—气相色谱法测定鱼肉中的甲基汞

目的探讨用快速溶剂萃取仪萃取鱼肉中甲基汞的方法方法用快速溶剂萃取仪萃取鱼肉中甲基汞,用安捷伦GC—6890N气相色谱仪测定。结果浓度在0.010~3.0μg·mL-1之间具有良好的线性关系r=0.9995;RSD在0.3%~1.2%之间,回收率在92.6%~98.5%之间,最低检出限为0.0091μg·mL-1,定量下线为0.010μg·mL-1。结论该方法的精密度、回收率、检出线、定量下线等各项方法指标均符合痕量分析的要求,简化了萃取过程,防止了污染,减少了潜在的损失。     

超高效液相色谱法测定水产品中的酚类物质

采用超高效液相色谱法(UPLC)测定水产品中的酚类物质,以吉尔森GX-271 ASPEC固相萃取系统萃取小柱预分离和富集,甲醇-1%乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱.柱温30℃,进样量5μL,流速0.6 ml/min,190-400 nm波长紫外检测.经测定,水产品中含有儿茶酚、2,4,6-三氯苯酚、4-硝基苯酚、2-氯苯酚、苯酚和五氯苯酚等酚类物质,其中苯酚占检测到的酚类物质总量的60%以上.该方法用于水产品中的酚类物质测定,结果令人满意.     

反相离子对梯度洗脱色谱法测定甲麻芩苷那敏片中3组分含量

目的:建立测定甲麻芩苷那敏片中3组分(盐酸甲基麻黄碱、黄芩苷和马来酸氯苯那敏)含量的反相离子对HPLC法。方法:采用色谱柱Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm,5μm,柱温30℃),以[0.2%辛烷磺酸钠溶液-三乙胺(100∶0.2,磷酸调节pH至4.3)]-甲醇(50∶50)为流动相A,以甲醇为流动相B,流动相B的比例由1%~98%匀速递增进行洗脱;检测波长为215nm;流速为1.0mL/min。结果:盐酸甲基麻黄碱、黄芩苷及马来酸氯苯那敏的线性范围分别为0.5~25μg(r=0.9998),0.3~17μg(r=1.000)和0.01~0.5μg(r=1.000),平均回收率分别为100.3%(RSD=1.3%)、99.9%(RSD=1.1%)和99.6%(RSD=1.2%)。结论:本文建立的方法简单、迅速,可用于甲麻芩苷那敏片中3组分的含量测定。     

苯酚-硫酸法测定河南丝瓜络多糖的含量

目的测定河南产丝瓜络多糖的含量,探讨其药用价值和开发前景。方法采用苯酚-硫酸法,以葡萄糖(105℃干燥至恒重)为对照品测定河南丝瓜络中多糖的含量。结果在6~91μg.mL-1的范围内,样品的浓度与吸光度有良好的线性关系,线性回归方程A=8.995 8 c-0.007 8(r=0.999 7),加标回收率101.8%(n=5,相对标准偏差=1.59%),河南丝瓜络多糖的平均含量为7.66%。结论河南产丝瓜络的多糖含量高于广东、山西和浙江等产地,具有较高的药用价值和开发前景。     

荧光增敏法测定咽炎片中丹皮酚的含量

目的 建立测定咽炎片中丹皮酚含量的荧光分析法.方法 基于AlC13试剂对于丹皮酚具有荧光增敏作用,在pH7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲体系中,于最大发射波长λem=455 nm处（最大激发波长λex=295nm）下检测丹皮酚的含量.结果 丹皮酚的浓度在1.3 ×10-4～7.3 ×10-4μg/ml内与荧光强度增大值△F呈线性关系良好（r=0.999）,回归方程为△F=89.45p（×10-3 μg/ml）-0.2777,检出限为0.8×10-4μg/nl,回收率为95.4％～97.8％,相对标准偏差小于2.53％.结论 该方法准确可靠,可应用于咽炎片中丹皮酚含量的测定.     

RP-HPLC法同时测定清开灵注射液、板蓝根药材中尿苷、鸟苷、（R,S）-告依春和腺苷的含量

目的：建立RP-HPLC法同时测定清开灵注射液、板蓝根药材中尿苷、鸟苷、告依春、腺苷的含量。方法：采用Phenomenex C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,以甲醇（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,流速1.0mL·min-1,检测波长254nm,进样量1μL。结果：尿苷、鸟苷、（R,S）-告依春和腺苷4个成分质量浓度分别在6.54~261.6μg·mL-1（r=0.9999）、9.42~376.8μg·mL-1（r=0.9999）、7.9~316.0μg·mL-1（r=0.9999）、8.74~349.6μg·mL-1（r=0.9999）的范围内与峰面积呈良好的线性关系;方法的平均回收率（n=6）分别为102.9%、97.2%、103.1%、98.2%。结论：所建立的高效液相色谱测定法简便、准确、重复性好、专属性强,可用于清开灵注射液和板蓝根药材含量测定质量控制。     

气相色谱法测定作业场所空气中1，1-二氯-1-氟乙烷

目的建立工作场所中1，1-二氯-1-氟乙烷的分析方法。方法用活性炭管采样，二硫化碳解吸，HP—FFAP，25m×0．2mm×0．33μm石英弹性毛细管柱分离，火焰离子化检测器检测空气中的1，1-二氯-1-氟乙烷，标准曲线法定量。结果1，1-二氯-1-氟乙烷浓度在61．8—3090μg／ml范围内呈线性关系，回归方程为A=0．227089C＋0．781703，相关系数r=0．99999；方法检出限为1．4μg/ml。以750ml的采样量计算对应于空气中的浓度为1.9mg／m^3。溶液和空气中的定量检出限分别为4．8μg／ml和6．4mg／m^3。碳管的解吸效率范围为98．7％～102．3％，重复测定和平行测定的相对标准偏差（P,SD）均小于2．0％。结论建立的方法灵敏、准确，可以应用于工作场所空气中1，1-二氯-1-氟乙烷的测定。     

反相色谱法测定葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的含量

目的 建立用外标法测定葡萄糖注射液含量的简单高效液相色谱方法.方法 采用PurospherStar C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为:甲醇-水(10:40)检测波长:284nm;进样量:10μL,流量:0.6mL·min -1;温度35℃.结果 5-羟甲基糠醛在1.02～20.40μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.99997);平均回收率为98.4%,回收率的RSD为0.5%.结论 本测定方法简便快速,灵敏度高,准确度好,可用于葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的含量测定.     

普乐士泰胶囊中总多糖的含量测定

[目的]建立普乐士泰胶囊中总多糖的含量测定方法。[方法]采用苯酚-硫酸法。[结果]对照品浓度在10~70μg/ml之间线性关系良好(r=0.9982),平均回收率为99.16%(RSD=1.88%)。[结论]苯酚-硫酸法简便、快速、准确,可作为该制剂的质量控制手段。     

N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶基因的克隆、表达及产物纯化

目的：从猪肾中提取RNA,从中克隆出N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶（GNE）基因,并在大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中表达。方法：从猪肾中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出GNE基因,经测序,感受态大肠杆菌E.coli DH5a转化,质粒抽提,鉴定以及大肠杆菌BL21（DE3）转化表达,通过His-tag亲和纯化（Ni Sepharose 6 Fast Flow）,G-25柱脱盐,SDS-PAGE电泳检测。结果：RNA提取物经紫外分光光度计检测OD260/OD280=1.77,说明无明显的蛋白质和酚污染。RT-PCR扩增目的片段,测序证明该基因的ORF为1 206 bp,编码402个氨基酸组成的酶蛋白（GNE）。SDS-PAGE显示,纯化蛋白为45 kD的单一条带,与基因序列推测值一致。结论：GNE基因已被成功地克隆和表达。     

H2O2供氧条件下Burkholderia cepacia好氧降解三氯乙烯和苯酚的共代谢机理

氯代有机溶剂与酚类化合物复合污染地下水的现象较为普遍,但地下水环境中溶解氧缺乏,好氧微生物降解作用难以发挥。本文驯化好氧微生物Burkholderia cepacia耐受高浓度H2O2,并利用H2O2作为供氧源降解地下水环境中的三氯乙烯（TCE）和苯酚。结果表明,对于Burkholderia cepacia的生长过程,H2O2的最佳投加量为4 mmol/L,加入H2O2后,会短暂抑制TCE降解,但最终大幅提高了TCE的降解率,达到79.80%。动力学分析表明,在H2O2供氧条件下,共代谢苯酚与TCE的比降解速率可以由Monod模型和Haldane模型分别进行描述,且显著相关。研究结果为好氧微生物控制地下水环境中的TCE和苯酚复合污染提供了科学依据。     

大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取方法的比较

目的 比较两种肠内容物前处理和两种提取方法对清洁级SD大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取效率.方法 分别选用PBS多次离心漂洗、液氮破细胞两种前处理方法和酚/氯仿抽提、试剂盒过柱法两种提取方法进行组合分析,对4份肠内容物和16份含金黄色葡萄球菌肠内容物进行随机提取.结果 大鼠肠内容物细菌基因组DNA含量和纯度测定结果显示,与PBS反复离心相比,液氮研磨前处理能显著提高大鼠肠内容物基因组DNA.荧光定量PCR表明,液氮研磨前处理较PBS反复离心能更好地收集细菌基因组DNA,其Ct值最低.结论 研究结果表明,采用液氮研磨试剂盒法在大鼠肠内容物DNA提取中是较为优良的方法,该方法为建立实验动物中微生物的定量PCR检测方法打下了基础.     

酚红在神经细胞中的弱雌激素样作用研究

目的 研究酚红在神经细胞培养中的弱雌激素样作用.方法 使用不同培养基（其一含酚红、另一无酚红）培养MN9D细胞,并分别于培养基中加入胶质源性神经营养因子（GDNF）,然后加入相同浓度6-羟多巴胺（6-OHDA）进行损伤,最后四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的存活状况;提取不同培养基中的正常细胞,Western blot法检测雌激素α受体（ERα）在细胞内的移位.结果 培养基中没有酚红时的细胞存活率较有酚红时低,且当GDNF与酚红同时存在时,细胞的存活率比只有GDNF或酚红存在时高;酚红能够促使ERα从胞质转移至细胞膜.结论 酚红能够激活ERα,并具有一定的神经保护作用.     

Automated Identification of Diabetic Type 2 Subjects with and without Neuropathy Using Wavelet Transform on Pedobarograph

Diabetes is a disorder of metabolism—the way our bodies use digested food for growth and energy. The most common form of diabetes is Type 2 diabetes. Abnormal plantar pressures are considered to play a major role in the pathologies of neuropathic ulcers in the diabetic foot. The purpose of this study was to examine the plantar pressure distribution in normal, diabetic Type 2 with and without neuropathy subjects. Foot scans were obtained using the F-scan (Tekscan USA) pressure measurement system. Various discrete wavelet coefficients were evaluated from the foot images. These extracted parameters were extracted using the discrete wavelet transform (DWT) and presented to the Gaussian mixture model (GMM) and a four-layer feed forward neural network for classification. We demonstrated a sensitivity of 100% and a specificity of more than 85% for the classifiers.     

泰泽病原体基因组DNA提取方法的建立

为研究基因重组乙肝疫苗对HBV转基因小鼠的免疫调节作用,取经HBsAg免疫的小鼠脾淋巴细胞,制成5×106细胞悬液,分两份,一份经无佐剂HBsAg体外刺激48h后,取上清检测细胞因子;另一份细胞于培养56h后加入3H-TdR,继续培养16h,测定cpm值。结果表明,转基因鼠经多次免疫8个月后,其脾细胞产生的Th1类细胞因子(IL-2、IFN-γ)及T细胞增殖水平均较单次免疫一周后有显著性提高。而采用不同剂量HBsAg按常规免疫时并不能提高IL-2的水平。结果提示,反复大剂量的HBsAg可以打破HBV转基因小鼠的免疫耐受,上调其细胞免疫功能,这为慢性乙肝的临床治疗提供了实验根据。     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

磷酸三丁酯萃取酚类的机理性研究

测得磷酸三丁脂萃取苯酚和间甲酚的平衡等温线，表明ＴＢＰ具有很高的萃取分配比，探讨了盐析效应，采用双对数斜率法和连续变量法分别测得ＴＢＰ与苯酚，间甲酚的萃合物的组成比。     

Study of total phenol,flavonoids contents and phytochemical screening of various leaves crude extracts of locally grown Thymus vulgaris

Objective

To prepare various crude extracts using different polarities of solvent and to quantitatively evaluate their total phenol, flavonoids contents and phytochemical screening of Thymus vulgaris collected from Al Jabal Al Akhdar, Nizwa, Sultanate of Oman.

Methods

The leave sample was extracted with methanol and evaporated. Then it was defatted with water and extracted with different polarities organic solvents with increasing polarities. The prepare hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol and methanol crude extracts were used for their evaluation of total phenol, flavonoids contents and phytochemical screening study. The established conventional methods were used for quantitative determination of total phenol, flavonoids contents and phytochemical screening.

Results

Phytochemical screening for various crude extracts were tested and shown positive result for flavonoids, saponins and steroids compounds. The result for total phenol content was the highest in butanol and the lowest in methanol crude extract whereas the total flavonoids contents was the highest in methanol and the lowest hexane crude extract.

Conclusions

The crude extracts from locally grown Thymus vulgaris showed high concentration of flavonoids and it could be used as antibiotics for different curable and uncurable diseases.     

有机酚法和Chelex-100法提取不同组织微量DNA效果比较

目的：比较有机酚法和Chelex-100法提取不同组织微量DNA的效果。方法：分别用有机酚法和chelex-100法从外周血、脐带血、绒毛、羊水、胎盘、血斑、口腔分泌物、发根毛囊中提取微量基因组DNA，进行D12S391、D5S818基因座扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析。结果：外周血、脐带血、绒毛、胎盘、口腔分泌物、发根毛囊均适于用Chelex-100法提取DNA，效果与有机酚法相似。结论：Chelex法是一种高效而快速的微量DNA提取方法，适用于产前诊断和法医鉴定微量组织的检测。