脑胶质瘤的基因治疗

1992年 ,美国ＮＩＨ批准了第 1个运用腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 /丙氧鸟苷 (ＨＳＶ -ｔｋ/ＧＣＶ)系统治疗脑胶质瘤的临床方案 ,随后在全球掀起了肿瘤基因治疗的热潮。到目前为止 ,世界上已有 2 3 2项基因治疗临床试验方案获批准 ,其中 1 0 5项为肿瘤基因治疗 ,而脑肿瘤基因治疗又是肿瘤基因治疗中的热点 ,占 1 6项 (包括我国 1项 ) ,其中 1 4项针对恶性脑胶质瘤 ,另两项针对脑膜肉瘤和颅内转移癌。目前 ,脑肿瘤的基因治疗在全世界已进行了 2 0 0 0多例的临床试验。虽然其效果还不尽人意 ,然而 ,随着研究的进展 ,方法的逐渐…     

p16基因在脑胶质瘤中的变异与基因治疗的研究进展

p16基因是继p53抑癌基因之后又一个引人注目的新型抑癌基因,也是人们发现的第一个直接作用于细胞周期,抑制细胞分裂的抑癌基因,它与肿瘤的形成关系已在许多研究中得到证实。目前,有关p16基因的研究主要集中在3个方面：p16基因对细胞周期的调控作用,p16基因在肿瘤中的变异研究,p16基因在肿瘤基因治疗中的作用。本文重点对p16基因在肿瘤基因治疗中的作用。本文重点对p16基因在脑胶质瘤中的变异与基因治疗的研究进展作一综述。     

神经胶质瘤基因治疗的研究进展

胶质瘤(glioma)是中枢神经系统中最常见的一种恶性肿瘤,发病率高,呈浸润性生长,治疗效果差,复发率高,患者平均存活时间为10个月。常规的肿瘤临床治疗方法如手术、化疗、放疗等疗效甚微。随着对基因技术研究的不断加深,如何将基因治疗应用于神经胶质瘤,也成为近年来研究的热点。本文将从自杀基因、免疫基因以及多药耐药基因方面等讨论胶质瘤的基因治疗进展。     

自杀基因疗法治疗黑色素瘤的研究进展

综述了自杀基因疗法的种类及作用机制,以及自杀基因联合疗法治疗黑色素瘤的研究现状.目前治疗黑色素瘤的自杀基因疗法主要有双自杀基因治疗、自杀基因疗法联合免疫治疗、自杀基因联合细胞因子治疗以及中药联合自杀基因治疗,中药联合自杀基因疗法治疗黑色素瘤展示着较好的应用前景.     

肿瘤的“自杀基因”疗法研究进展

肿瘤是基因发生变化的疾病,是累积性基因损伤在转化表型方面达到顶点的结果。在有关肿瘤基因治疗方面,将“自杀基因”（ｓｕｉｃｉｄｅｇｅｎｅ）导入肿瘤细胞,而将无毒性前体药物在肿瘤细胞内代谢为毒性产物,进而杀伤肿瘤细胞的“自杀基因”疗法占有重要地位并显示出良好的应用前景,本文对该方面的研究进展作一综述。１　“自杀基因”的种类及作用原理人们早就发现,一些来自病毒或细菌的基因具有一些特殊的功能,其表达产物可将原先对哺乳动物细胞无毒的或极低毒性的药物转换成毒性产物,导致这些细胞的死亡。人们将这些基因转入靶细…     

神经胶质瘤基因治疗的研究进展

脑胶质瘤基因治疗按所用的基因可分为细胞因子基因治疗、抑癌基因治疗、反义核酸治疗、自杀基因治疗、抗肿瘤血管生成治疗及联合基因治疗,本文就其研究进展做以综述。     

自杀基因疗法在胰腺癌的研究

<正>胰腺癌起病隐匿,一旦发现,多数已是晚期,手术切除困难,而放射治疗和全身化学疗法效果也不理想,基因治疗的问世给胰腺癌的治疗提供了一条新的途径。自杀基因治疗作为一种重要的基因治疗方法,已显示了广阔的前景,胰腺癌的自杀基因治疗研究虽然起步较晚,但取得了令人鼓舞的结果。     

CD-TK融合自杀基因对前列腺癌细胞的杀伤作用

目的：探讨CD-TK融合自杀基因体系对前列腺癌PC-3m细胞的杀伤作用。方法：应用逆转录病毒载体将CD-TK融合基因转染PC-3m细胞，经RT-PCR鉴定后，用MTT法检测丙氧鸟苷(GCV)、5-胞嘧啶(5-FC)前体药物单一或联合应用对转染PC-3m细胞的杀伤作用，以未转染PC-3m细胞为对照。同时应用流式细胞仪、电镜等检测药物作用前后的变化。结果：GCV对转染PC-3m细胞有较强的直接细胞毒作用，而5-FC治疗有显著旁观者效应；联合用药具有协同作用。结论：CD-TK融合基因治疗对前列腺癌细胞具有显著杀伤作用，明显优于单一自杀基因治疗，深入研究意义较大。     

CD/5-FC自杀基因治疗系统体外杀伤恶性人脑胶质瘤细胞作用的研究

目的：探讨胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶（CD/5-FC）自杀基因治疗系统对恶性人脑胶质瘤细胞的杀伤作用。方法：采用Lipofectamine2000脂质体介导法将CD基因转染U251恶性人脑胶质瘤细胞,G418筛选获得抗性克隆（取名为U251/CD细胞）,使用不同浓度的5-FC作用于U251/CD细胞,MTT法测定活性细胞比率。采用高效液相色谱法（HPLC）检测5-FC培养液内5-FU的浓度。结果：U251细胞获得了质粒的成功转染。基因转染使G418抗性细胞（U251/CD细胞）对5-FC高度敏感。未转染的U251细胞对5-FC不敏感,IC50 约为6 500 μmol/L,而转染基因后 IC50 约为10 μmol/L。并且加入不同浓度的5-FC后,U251/CD细胞培养液内均能检测到5-FU。结论：5-FC对CD基因修饰U251细胞具有杀伤作用;为胶质瘤基因治疗的在体研究提供依据。     

胶质瘤基因治疗的研究进展

随着分子生物学等学科的发展,胶质瘤发生、发展的遗传机制正在不断被阐明,这使基因治疗有望成为改变胶质瘤临床疗效的新方法.本文对与细胞增殖有关的基因治疗、抗血管生成基因治疗、免疫基因治疗、酶-前药基因治疗和溶瘤病毒等胶质瘤基因治疗研究的进展作一综述,并讨论了目前存在的困难和今后的研究发展趋势.     

自杀基因联合细胞因子的癌症治疗

INTRODUCTION The transfer of suicide genes into tumor cells is currently being used in a variety of clinical gene therapy trials for the treatment of cancer, and suicide gene therapy is the transduction of a gene that transforms a non-toxic into a toxic substance[1].     

脑胶质瘤p16基因纯合缺失、点突变及表达的研究

目的：从分子水平上探索胶质瘤的发生机理。方法：应用复合PCR法,单链构象多态性（SSCP）分析及免疫组化的标记抗生蛋白连菌素法(LSAB）对脑胶质瘤p16基因的表达进行了检测。结果：27例胶质瘤中发现14例有p16基因不同程度的表达,但未发现纯合缺失点突变。结论：胶质瘤中未发现p16基因第3外显子的纯合缺失和点突变,说明其在胶质瘤的发病中不是主要因素。胶质瘤中存在p16基因的表达缺失,并且其表达的缺失与胶质瘤的恶性程度相关。     

分化人脑胶质瘤干细胞的放疗耐受性

目的:比较不同剂量的放射治疗对人脑胶质瘤干细胞及其分化的胶质瘤细胞的杀灭作用,探讨胶质瘤干细胞与放疗耐受的相关性.方法:分离、培养并纯化人脑胶质瘤干细胞,并同时诱导纯化的肿瘤干细胞向胶质瘤细胞分化,对人脑胶质瘤干细胞及其分化后的胶质瘤细胞分别以0、2、3、5、8、12 Gy的6MVX线照射后,继续培养72 h,采用MT...     

腺病毒介导融合双自杀基因治疗膀胱癌

目的 探讨腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶（CD）和胸苷激酶（TK）融合双自杀基因系统对膀胱癌治疗作用并与单基因系统作比较。方法 利用含有CD-TK双自杀融合基因及绿色荧光蛋白（GFP）基因的复制缺陷腺病毒作载体,PCR检测CD、TK及E1基因。建立C57BL／6同系膀胱癌Mb49皮下移植瘤模型,观察肿瘤注射腺病毒联合丙氧鸟苷（GCV）或／和5-氟胞嘧啶（5-FC）治疗后肿瘤体积及组织学变化。结果 PCR可检测到腺病毒DNA中含CD及TK基因、无E1基因。腺病毒注射联合GCV、5-FC、GCV＋5-FC治疗后,肿瘤体积与对照组相比明显缩小（P=0.00）,腺病毒注射联合GCV＋5-FC有协同作用（P=0．04）,优于腺病毒注射联合GCV以及腺病毒注射5-FC。基因治疗后肿瘤细胞大片坏死．对照组细胞形态无变化。结论 腺病毒介导CD-TK融合双自杀基因联合GCV或／和5-FC能有效治疗膀胱癌,融合双自杀基因CD-TK／（GCV＋5-FC）系统对膀胱癌治疗有协同作用,其效果优于CD-TK／GCV或CD-TK／5-FC系统。     

人脑胶质瘤组织内微血管定量和nm23基因表达

目的：探讨人脑胶质瘤组织内微血管数量（ＭＶＣ）和ｎｍ２３基因表达的临床意义。方法：对５４例人脑质瘤组织内的ＭＶＣ和ｎ２３基因表达采用免疫组化染色进行回顾性研究。结果：ＭＶＣ随胶质瘤的恶性程度及瘤周水肿的严重程度增加而增多,复发组ＭＶＣ明显高于未复发组（Ｐ〈０．０１）。同时发现ｎｍ２３表达生强度与人脑胶质瘤的恶性程度及瘤周水肿呈负相关（ｒ分别为－０．４８和－０．５１,Ｐ〈０．０１）,复发组ｎｍ２３阳     

神经胶质瘤基因治疗中旁观者效应的动物试验

目的：探讨单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）Ｉ型胸苷激酶（ＴＫ）基因逆转录病毒载体生长细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统杀伤大鼠脑内神经胶质瘤细胞的旁观者效应。方法：用Ｃ６，Ｃ６ＸＳＮ，Ｃ６ＴＫ及不同比例的ＴＫ（＋）和ＴＫ（－）混合细胞接种于大鼠右侧额叶脑内，５ｄ后动物腹腔内注射ＧＣＶ溶液，剂量为１５ｍｇ／ｋｇ，每日２次，共１０ｄ。细胞接种后３周，所有动物处死，测量肿瘤大小，计算各组动物的     

人端粒酶启动子调控双自杀基因治疗肝癌的实验观察

目的 探讨人端粒酶逆转录酶的核心启动序列(hTERT)启动子驱动的双自杀基因系统CDglyTK真核质粒对肝癌细胞的特异性杀伤作用.方法 利用PCR扩增hTERT启动子、SV40、yCD及TKgly基因片段,单独或共同连至pEGFP-C1质粒载体,分别构建pEGFP-hTERT-CD、pEGFP-hTERT-TK及pEGFP-hTERT-CDglyTK质粒,并转染SMMC7721肝癌细胞和HL7702正常人肝细胞,观察其转染效率并以RT-PCR、QPCR、Western印迹方法检测目的基因的表达,给予不同浓度的5-FC及更昔洛韦(GCV)处理,在用MTT法评估杀伤效应和旁观者效应,TRAP-银染法检测杀伤前后细胞端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较和分析联合基因与单基因疗效的差异.结果 最终质粒的酶切产物所得片段与预期一致,RT-PCR、QPCR及Western印迹结果显示目的基因CD、TK及CDglyTK高表达;pEGFP-hTERT-CD、pEGFP- hTERT-TK及pEGFP- hTERT-CDglyTK转染效率分别为74.5％、76.3％、76.9％.转染pEGFP-hTERT-CDglyTK的细胞较单基因转染对前药具有更高的敏感性(P =0.020,P=0.015)、促细胞凋亡作用(P =0.023,P=0.017)及旁观者效应(P =0.012,P=0.001),可更大程度降低端粒酶活性(P =0.045,P=0.038).HL7702细胞的转染及生长未受自杀基因系统的影响.结论 本研究构建的hTERT启动子驱动的双自杀基因(CDglyTK)系统质粒,在体外实验中对人肝癌细胞具有特异性的高杀伤作用.     

Experimental studies on PNP suicide gene therapy of hepatoma

Summary To investigate the killing effect ofPNP/MeP-dR suicide gene system on hepatoma cells, pcDNA3. 0/PNP, an eukaryotic expression vector harboringE. coli PNP gene, was transfected into human hepatoma HepG2 cells by liposome-mediated method. A HepG2 cell line with stablePNP gene expression, HepG2/PNP, was established with presence of G418 selection. The cell growth curves were determined with trypan blue staining. The sensitivity of HepG2/PNP to MeP-dR and bystander effects were assayed by MTT and FCM methods. The enzymatic activity of the product ofPNP gene was determined by HPLC method. The cytotoxic effects of MeP-dR on HepG2/PNP cells were obvious (IC₅₀=4.5 μmol/L) and all HepG2/PNP cells were killed 4 days after the treatment with 100 μmol/L MeP-dR. In mixed cultures containing increasing percentages of HepG2/PNP cells, total population killing was demonstrated when HepG2/PNP cells accounted for as few as 5% of all HepG2 cells 8 days after the treatment with 100μmol MeP-dR. High-pressure liquid chromatography (HPLC) demonstrated that thePNP enzyme could convert MeP-dR into 6-MP.PNP/MeP-dR suicide gene system had an advantage over traditional suicide gene systems for hepatoma gene therapy. Our e results suggest that high-level bystander effects of this system result in significant anti-tumor responses to hepatoma gene therapy, especiallyin vivo. CAI Xiaokun, male, born in 1972, M.D., Ph.D. This project was supported by a grant from the National Natural Science Foundation of China (No. 30330680).