mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨mecA、femA基因PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及mecA、femA基因PCR联合扩增检测178株葡萄球菌中的MRSA，并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检MRSA(耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌，MRCNS)的敏感性、特异性分别为94．4％(89．5％)、92．4％(73．7％)。在金黄色葡萄球菌中若以mecA基因阳性为判定MRSA的指标，则敏感性、特异性分别为91．7％、95.5％。在178株葡萄球菌中若以mecA、femA基因阳性作为判定MRSA的指标，特异性提高到97．9％．结论 PCR mecA、femA基因联合扩增既可用于筛检MRSA，又可免去常规生化鉴定，具快速、特异性强的优点。     

压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究

目的：探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。方法：收集临床64株葡萄球菌标本，对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA增后应用压电传感器阵列进行检测，并以PCR电泳检测作参照，与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。结果：传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致，而此两种方法与常规培养加药敏法比较。结果略有差异。所有64株葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA为阴性，2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA)的mecA为阳性，1株耐甲氧西林凝固酶性葡萄球菌（MRCNS）的mecA为阴性；2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）的mecA为阳性。结论：以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因，既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌，又可判断其耐药类型，能为危重病人感染MRSA时的诊断和治疗提供依据。     

耐甲氧西林葡萄球菌的多重PCR快速检测

目的 采用多重聚合酶链反应（PCR）检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）,并对我院葡萄球菌的耐药率进行调查。方法 对262株葡萄球菌（金黄色葡萄球菌86株,凝固酶阴性葡萄球菌176株）进行多重PCR扩增,并与琼脂稀释法作比较。对我院葡萄球菌的耐药率进行统计分析。结果 以mecA基因阳性判断MRS,灵敏度为100％,特异度为96．6％,阴性预测值为1.0％,阳性预测值为99．0％;以mecA基因和femA基因阳性判断耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,灵敏度为100％,特异度为99．5％,阴性预测值为100％,阳性预测值为98．5％。我院葡萄球菌耐药率为78．6％,其中凝固酶阴性葡萄球菌耐药率为79．0％,金黄色葡萄球菌耐药率为78．0％。结论 多重PCR技术检测mecA基因能快速、敏感、准确地检测MRS,与femA基因联合检测能有效检测MRSA。MRS已成为日益严重的葡萄球菌感染问题。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因

[摘要] 目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法 对临床分离的84株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法和头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果 84株金黄色葡萄球菌中, 41株金黄色葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,其中有1株表现为对苯唑西林敏感;苯唑西林纸片扩散法检出42株阳性,其中有2株mecA基因呈阴性. 头孢西丁纸片扩散法与PCR扩增法的试验结果完全符合。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA。     

Vitek-2药敏卡片检测MRSA的准确性评价

目的:评价Vitek 2 AST P535药敏卡片测定金黄色葡萄球菌对苯唑西林敏感性的准确性.方法:对临床分离的菌株采用AST P535药敏卡片和头孢西丁纸片测定对苯唑西林的耐药性,以PCR测定MecA基因为金标准,评价两种方法的准确性.结果:采用PCR共检测125株金黄色葡萄球菌,其中MecA基因阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin resistant Staphy lococcus aureus,MRSA)89株,mecA基因阴性的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methicillin susceptive Staphylococcus aureus,MSSA)36株,以此为标准,在89株MRSA中用Vitek-2 AST P535药敏卡片检测出81株,敏感度为91%,在36株MSSA中采用Vitek-2 AST P535药敏卡片检测出35株,特异性为97.2%;而采用头孢西丁纸片法检测出MRSA 87株,敏感度为97.8%,检出MSSA 36株,特异性为100%.结论:AST P535药敏卡片测定金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性具有良好的灵敏度和特异性,准确性能满足临床需要,同时采用头孢西丁纸片法检测可进一步提高检测的准确性.     

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的 建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法，用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性，同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法 对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株。表皮葡萄球菌70株，其余凝固酶阴性葡萄球菌60株，提取其基因组DNA，针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因，表皮葡萄球菌的种特异性序列，决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因，和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物。同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果 在210株葡萄球菌中，mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96．2％。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株，通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后。均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株，经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后，被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论 此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断。同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定，是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

327株葡萄球菌的耐药性分析

目的：研究葡萄球菌的感染及耐药性状况，指导临床用药。方法：用VITEK～AMS全自动微生物分析仪分离鉴定菌株及药敏实验。结果：327株葡萄球菌中，金黄色葡萄球菌占12．8％(42／327)，凝固酶阴性葡萄球菌占87．2％(285／327)，金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)占7．1％(3／42)，凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCoN)占89．8％(256／285)；MRS对头孢唑啉等15种抗生素的耐药率均高于MSS(甲氧西林敏感葡萄球菌)。结论：MRS感染较为严重，需加强其对抗生素的耐药性监测；耐万古霉素菌株的出现，应引起临床重视。     

替考拉宁对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和敏感菌药敏实验的研究

目的 探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA )和敏感葡萄球菌(MSSA)临床分离株对替考拉宁药物的敏感性.方法 金黄色葡萄球菌临床分离株18株,采用PCR检测耐药 mecA基因,琼脂稀释法测定替考拉宁对金黄色葡萄球菌体外MIC值.结果 9/18株为MRSA,9/18株为MSSA对替考拉宁均为敏感.替考拉宁对MRSA和...     

耐甲氧西林葡萄球菌检测方法的比较

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为金标准，比较头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的优缺点。方法对临床分离的70株葡萄球菌（其中金黄色葡萄球菌40株，凝固酶阴性的葡萄球菌30株）分别用PCR法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准KB（Kirby Bauer）法进行。结果经PCR法检测mecA基因，耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的发生率分别为75．0％（30／40）和80．0％（24／30）；头孢西丁纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为93．3％、95．9％；90．0％和100％；苯唑西林纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为90．00%、87．5％；90．0％和83．3％；乳胶凝集法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为100．0%、100．0％；100．0％和100．0％。与PCR结果比较，3种方法所获得的结果经统计学分析，差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法是成批检测的理想方法；乳胶凝集法检测快速，结果可靠，但检测成本高；实验室应选择合适的方法，以提高MRS的检出率。     

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌mecA基因检测分析

目的:调查耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)耐药现状,分析其耐药表型与基因型的关系,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集临床分离的86株凝固酶阴性葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法检测耐药表型、聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,并将两种结果进行对比分析。结果:86株凝固酶阴性葡萄球菌中头孢西丁纸片法阳性64株,检出率为74.4%;mecA基因阳性58株,阳性率为67.4%;其中有1株头孢西丁纸片法阴性而mecA基因阳性,7株头孢西丁纸片法阳性而mecA基因阴性。结论:本地区耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药状况严重;头孢西丁纸片法与PCR检测mecA基因一致率90.7%;PCR检测mecA基因可快速准确判定耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌。     

葡萄球菌耐药性分析

目的探讨临床送检标本的葡萄球菌耐药状况,指导临床合理用药.方法采用全自动细菌鉴定仪对临床送检标本进行细菌鉴定同时做K-B法药敏试验.结果 280株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌160株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）100株,占62.5%,凝固酶阳性的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）60株,占37.5%;凝固酶阴性葡萄球菌120株,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）80株,占66.7%,凝固酶阴性的甲氧西林敏感葡萄球菌（MSCNS）40株,占33.3%;280株葡萄球菌对万古霉素耐药率为0,对利福平耐药率为0%～17.0%,对其他12种抗生素耐药性试验都显示出较高的耐药率.结论 MRSA和MRCNS具有多重耐药性,临床对葡萄球菌引发的感染应依据药敏试验结果合理选用抗菌药物,万古霉素是治疗葡萄球菌感染最敏感的抗生素.     

外源性甘氨酸对金黄色葡萄球菌耐药及femA表达水平的影响

目的探讨外源性甘氨酸对金黄色葡萄球菌苯唑西林耐药水平及femA表达的影响。方法用琼脂平皿对倍稀释法检测不同浓度甘氨酸下苯唑西林对30株金黄色葡萄球菌的MIC值,用实时荧光定量PCR方法检测不同浓度甘氨酸下金黄色葡萄球菌femA表达水平。结果30株金黄色葡萄球茵中MSSA4株,低耐MRSA2株,高耐MR-SA24株,在0．2M外源性甘氨酸存在时MIC下降4-256倍,在0．3M外源性甘氨酸存在时MIC均〈0．25μg／ml。在所有金黄色葡萄球菌中均检测到femA表达,在0．2M甘氨酸存在时femA表达下降50％-80％,0．3M甘氨酸存在时femA表达下降75％-90％。结论外源性甘氨酸能降低金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药水平及femA表达水平。     

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。     

外科手术患者切口感染常见病原菌及耐药分析

目的 了解我院外科患者术后切口感染的常见病原菌分布及耐药性,指导医生合理使用抗生素。方法 对136株病原菌进行鉴定和药敏试验。结果 136株病原菌中,革兰氏阴性杆菌占63.7％,革兰氏阳性球菌占31．2％。占革兰氏阴性杆菌前三位的是大肠埃希菌、奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌;占革兰氏阳性球菌前三位是凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)、金黄色葡萄球菌和肠球菌。另外,产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MR-CNS)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)各占大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、CNS、金黄色葡萄球菌的65.2％、62．5％、68．4％、81．3％,细菌多重耐药现象严重。结论 病原菌多重耐药现象严重,临床应加强监测,以减少切口感染的发生。     

临床分离葡萄球菌的耐药性监测

目的了解海南医学院附属医院2001年12月—2003年12月临床分离葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药情况，以供临床治疗选药参考。方法应用Autoecan—4半自动细菌分析系统对临床分离菌株进行细菌鉴定和药敏试验，然后进行分析。结果检出金黄色葡萄球菌120株，其中苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)占40．0％(48／120)；凝固酶阴性葡萄球菌360株，其中苯唑西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)占90．0％(3241360)。无万古霉素耐药的葡萄球菌。结论苯唑西林耐药葡萄球菌(MRS)对临床常用抗菌药物耐药性严重，万古霉素应作为此类细菌感染的首选药物。     

临床葡萄球菌感染及耐药性分析

目的　了解我院葡萄球菌感染状况及药敏情况 ,为医院控制感染提供参考。方法　将医院感染患者标本中分离出的 4 0 8株葡萄球菌进行鉴定 ,并进行耐甲氧西林葡萄球菌 (MRS)检测 ,另用纸片扩散法作 14种抗生素耐药试验等。结果　在 4 0 8株葡萄球菌中 ,共分离出 8种 ,其中凝固酶阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)占 4 5 .1% ,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCNS)占 39.6 % ;从总体上看 ,葡萄球菌的耐药性均比较高 ,但MRSA耐药率高于对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌 (MSSA)和血浆凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)。MRSA对万古霉素有 10 0 %的抗菌活性。结论　葡萄球菌是造成医院感染的重要病原菌 ,特别是对MRSA引起的感染更应该引起足够的重视 ,正确合理使用抗生素对于有效治疗疾病和控制医院感染的发生具有十分重要的意义     

院内外环境分离金黄色葡萄球菌的耐药性及毒素基因检测

目的检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）耐药基因及毒素基因,了解其分布情况。方法采用多重聚合酶链反应（multiplex polymeras chain reaction,PCR）技术分别检测耐药基因mecA、femA与毒素基因TSST、PVL。结果 83株金黄色葡萄球菌,仅3株（3.61%）菌检出mecA基因,22株菌（26.50%）检出femA基因,15株菌（18.07%）同时检出mecA与femA基因。医院样本检出12株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA）,3株甲氧西林耐药凝固酶阴性的金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant and coagulasenegative Staphylococcus aureus,MRCNS）。83株分离自医院及环境样本SA,2株分离自咽拭子的样本检出TSST基因,检出率4.54%（2/44）;1株分离自血液的样本检出PVL基因,检出率2.27%（1/44）,其余菌株未检出毒素基因。结论院内样本中,部分菌株携带mecA基因,环境样本未发现携带mecA菌株,两者存在差异。83株SA菌,毒素基因携带率较低。检测耐药、毒素基因携带率,为临床治疗及院内感染控制,食物中毒溯源提供依据。     

41株金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的：了解从中日友好医院临床分离出的金黄色葡萄球菌的耐药状况。方法：对41株金黄色葡萄球菌进行药敏试验并对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）作β－内酰胺测试，然后进行耐药分析。结果：41株金黄色葡萄球菌中有35株MRSA，占85．4％；有6株对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA），占14．6％。所有样本对呋西地酸、呋喃妥因、原始霉素、替考拉宁和万古霉素耐药率均为0；MRSA对24种抗生素的耐药率均在50％以上，其中耐药率为100％的有16种；而MSSA对抗生素耐药率超过50％的只有7种，耐药率为0的有20种；金黄色葡萄球菌的产β－内酰胺酶的产酶率为63．4％，MRSA和MSSA产酶率分别为60％和83．3％。结论：该院MRSA检出率非常高，其对万古霉素、呋西地酸、呋喃妥因、原始霉素和替考拉宁非常敏感；β－内酰胺酶的产酶率MSSA高于MRSA。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的：分析耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）检测方法及其耐药性。方法：采用头孢西丁纸片法和PCR两种方法检测临床分离的60株金黄色葡萄球菌中MRSA菌株；纸片扩散法测定金黄色葡萄球菌对15种抗菌药物的敏感性。结果：纸片法及PCR法对MRSA检出率分别为15％、13．3％，两种方法对MRSA检出率差异无统计学意义（P〈0．05）。以PCR法检出mecA、femB基因为判断MRSA的金标准。除了替考拉宁、万古霉素以外，其余抗生素的耐药率MRSA组均明显高于MSSA组（P〈0．01）。结论：头孢西丁纸片法是筛选和确认MRSA菌株的一种可靠、简便的方法；MRSA为多重耐药菌株，临床应加强检测。