西嗪伪麻缓释片人体药动学研究

目的 建立人血浆中西替利嗪和伪麻黄碱的LC-ESI-MS测定法,以研究健康志愿者口服西嗪伪麻缓释片后西替利嗪和伪麻黄碱的药动学过程.方法 采用随机双交叉实验设计,12名健康志愿者分别空腹服用和进食后服用西嗪伪麻缓释片1片(每片含盐酸西替利嗪5 mg、盐酸伪麻黄碱120 mg);连续口服西嗪伪麻缓释片7 d,每日2片,采用LC-ESI-MS测定西替利嗪和伪麻黄碱的血药浓度,估算药动学参数.结果 空腹服用和进食后服用西嗪伪麻缓释片1片后西替利嗪的t1/2为(7.6±1.0)和(7.4±0.7)h,tmax为(0.9±0.5)和(2.6±1.2)h,ρmax为(196.3±30.1)和(154.4±28.2)μg·L-1,AUC0-36为(1.51±0.25)和(1.52±0.28)mg·h·L-1;连续口服西嗪伪麻缓释片后西替利嗪的t1/2为(7.5±0.8)h,tmax为(1.0±0.6)h,ρss-max为(246.1±38.2)μg·L-1,ρss-min为(81.3±26.1)μg·L-1,ρss-av为(126.0±24.0)μg·L-1,DF为(1.34±0.31),R为(1.39±0.18),AUCss为(1.51±0.29)mg·h·L-1.空腹服用和进食后服用西嗪伪麻缓释片1片后伪麻黄碱的t1/2为(5.2±0.4)和(5.3±0.4)h,tmax为(4.4±0.9)和(4.6±0.9)h,ρmax为(330.2±68.3)和(341.8±61.6)μg·L-1,AUC0-36为(3.60±0.89)和(3.61±0.98)mg·h·L-1;连续口服西嗪伪麻缓释片后伪麻黄碱的t1/2为(5.3±0.6)h,tmax为(4.3±0.4)h,ρss-max为(456.2±142.6)μg·L-1,ρss-min为(207.8±99.4)μg·L-1,ρss-av为(341.1±118.9)μg·L-1,DF为(0.76±0.17),R为(1.60±0.40),AUCss为(4.09±1.42)mg·h·L-1.结论 所建立的人血浆中西替利嗪和伪麻黄碱的LC-ESI-MS测定方法灵敏、准确、简便.和空腹服药相比较,饮食影响西嗪伪麻缓释片中的西替利嗪的达峰浓度和达峰时间,对伪麻黄碱的药动学基本无影响.西替利嗪和伪麻黄碱在健康受试者体内不存在蓄积现象.伪麻黄碱具有缓释特征.     

LC-MS/MS测定人血浆中依折麦布和总的依折麦布含量及其药动学研究

目的 建立测定人血浆中依折麦布和总的依折麦布浓度的LC-MS/MS方法,进行依折麦布片po给药的药动学研究.方法 22名志愿者血样经叔丁基甲醚萃取吹干重组后进样测定依折麦布浓度,另取血样经β-葡萄糖苷酸酶水解后叔丁基醚萃取吹干重组后进样测定总的依折麦布浓度.分析柱:Capcell C18柱(2 mm×50 mm,5μm),内标(IS)13 C6-依折麦布.流动相:5mmol·L-1醋酸铵水溶液(A泵)和乙腈(B泵)组成,梯度洗脱.采用电喷雾去质子化三重四极杆二级串联质谱,多反应监测方式(MRM)测定样品浓度,依折麦布的监测离子对为m/z 408.5→m/z 270.8,内标为m/z 414.5→m/z 276.8.结果 依折麦布在0.020～20μg·L-1内线性关系良好,相关系数r=0.999 4(n=9).总的依折麦布在0.25～250μg·L-1内线性关系良好,相关系数r=0.999 8(n=9).最低定量线(LLOQ)、低、中、高浓度的依折麦布和总的依折麦布质控样品的日内、日间精密度均小于12%,方法回收率在97%～104%内.志愿者口服10 mg依折麦布后采血72 h,依折麦布和总的依折麦布的药动学参数分别为AUC0-inf(121.9±41.7)和(536.8±182.7)μg·h·L-1;AUC0-t(102.1±31.4)和(478.8 4±170.0)μg·h·L-1;ρmax (4.9±1.6)和(48.46±17.3)μg·L-1;tmax(5.2±6.4)和(1.5±0.9)h;t1/2(26.4±28.8)和(22.5±11.0)h;MRT(23.6±3.8)和(19.7±3.8)h.结论 该方法符合生物样品分析要求,可用于依折麦布血浆浓度的测定,依折麦布和总的依折麦布的药动学参数与文献相近.     

盐酸左氧氟沙星眼用即形凝胶在兔眼房水内的药动学

目的 研究盐酸左氧氟沙星即形凝胶在兔眼内的药动学行为,考察该制剂的释药特征.方法 以高效液相色谱法测定盐酸左氧氟沙星即形凝胶给药后不同时间兔眼房水中的药物浓度,绘制药-时曲线,计算药动学参数.结果 盐酸左氧氟沙星即形凝胶在兔眼内的吸收和消除过程呈线性动力学特征,其t1/2(ke),MRT,tmax,ρmax,AUC0-T和AUC0-∞分别为(118.76±7.21)min,(208.40±13.46)min,(34.07±5.02)min,(2.56±0.14)mg·L-1,(432.05±13.55)mg·min·L-1及(501.52±25.24)mg·min·L-1.结论 盐酸左氧氟沙星眼用即形凝胶显著延长药物在眼部的滞留时间,可用之实现长效治疗的目的.     

烯丙雌醇片在健康人体的药代动力学研究

目的：建立准确、灵敏的液相色谱-串联质谱法（LC-MS／MS）测定人血浆中烯丙雌醇的浓度,并评价中国健康女性受试者单剂量口服烯丙雌醇片后的药动学特征。方法：20例女性健康受试者单剂量口服20mg炳丙雌醇片后按时采集血样,以米非司酮为内标,采用APCI正离子选择性反应监测测定烯丙雌醇血浆浓度,计算药动学参数。结果：单剂量口服20mg烯丙磷雌醇后,烯丙雌酵的主要药动学参数Cmax为（12．48±4．18）ng·ml^-1,Tmax为（1．9±0．8）h,t1／2为（8．4±3．2）h,MRT0-∞为（6.7±2.6）h,AUC0—36为（41.29±14．83）h·ng·ml^-1,AUC0-∞为（42．72±15．33）h·ng·ml^-1。结论：建立的LC-MS/MS测定法结果准确可靠,灵敏度高。     

盐酸青藤碱缓释胶囊的家犬体内药动学和相对生物利用度研究

目的 研究口服盐酸青藤碱缓释胶囊在家犬体内药动学和相对生物利用度.方法 以随机分组自身对照、间隔1周交叉试验设计法,用高效液相色谱法测定盐酸青藤碱的浓度,在6条健康家犬身上比较单剂量po 120 mg盐酸青藤碱缓释胶囊和正清风痛宁缓释片后的药动学参数和相对生物利用度.结果 盐酸青藤碱缓释胶囊和正清风痛宁缓释片的药-时曲线相似,其t1/2分别为(25.19±10.94)和(20.48±6.55)h,tmax分别为(8.67±1.63)和(5.7±1.51)h,ρmax分别为(1 012.23±510.82)和(1 031.66±546.15)μg·L-1,AUC0-30分别为(13 797.04±4 915.68)和(15 507.17±6 263.07)μg·h·L-1.结论 盐酸青藤碱缓释胶囊和正清风痛宁缓释片具有等效性,盐酸青藤碱缓释胶囊tmax明显延后,t1/2明显延长.     

LC-MS/MS测定人血浆中盐酸舍曲林的浓度

目的 建立LC-MS/MS测定人血浆中盐酸舍曲林浓度的方法.方法 以盐酸帕罗西汀为内标,采用乙腈-0.1%甲酸溶液(50∶50)为流动相,以Discovery C18色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测.用于定量分析的离子反应分别为m/z 306.0→274.9(盐酸舍曲林)和m/z 330.1→191.9(盐酸帕罗西汀).结果 盐酸舍曲林线性范围0.332～66.400 μg·L-1,定量下限为(0.334±0.002)μg·L-1(n=5).日内、日间精密度(RSD)小于9%,平均回收率大于95%.结论 本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于盐酸舍曲林临床药动学研究.     

氯雷他定口腔崩解片人体生物等效性研究

目的 对国产氯雷他定口腔崩解片和进口普通片进行生物等效性研究.方法 20名健康男性志愿者按2×2交叉试验方案设计,分别口服受试制剂和参比制剂各20 mg,并采集36 h内动态血标本;采用HPLC/MS测定血浆中氯雷他定浓度,计算药动学参数,并判定两种制剂是否生物等效.结果 受试制剂和参比制剂的主要药动学参数ρmax分别为(19.57±11.09)和(18.97±10.76)μg·L-1,tmax分别为(0.8±0.2)和(0.8±0.2)h,AUC0-36分别为(44.9±17.6)和(42.9±14.6)μg·h·L-1,AUC0-∞分别为(52.6±24.2)和(50.2±19.6)μg·h·L-1,t1/2(ke)分别为(13.1±6.3)和(13.9±6.8)h,两制剂主要药动学参数经对数转换后进行方差分析及双单侧t检验,并计算90%置信区间,表明两种制剂生物等效,受试制剂的人体生物利用度为(103.2±9.0)%.结论 两种制剂生物等效.     

HPLC测定血浆中黄豆苷元浓度及其人体药动学研究

目的 建立HPLC测定人血浆中黄豆苷元浓度的方法,进行其人体药动学研究.方法 以氟康唑为内标.血浆样品经预处理后,选用HypersilODS2色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),甲醇-水(49:51)为流动相,流速1.0 mL·min-1,室温260 nm处测定.结果 黄豆苷元血浓度线性范围为5～640μg·L-1,最低定量浓度为5μg·L-1;相对回收率为89.53%～110.35%,绝对回收率为61.24%～85.04%,日内、日间变异系数均＜12%.黄豆苷元药动学参数t1/2为(3.863±0.983)h,ρmax (192.261±115.077)μg·L-1,tmax(0.900±0.409)h,AUC0～12(490.839±162.855)μg·h·L-1,AUC0～∞(535.279±163.190)μg·h·L-1.结论 本法分离效果良好,灵敏度高,重现性好,回收率高,日内、日间误差小,适用于黄豆苷元人体药动学及生物利用度研究.     

两种法罗培南制剂的人体药动学及生物等效性研究

目的研究法罗培南胶囊剂和片剂在健康受试者体内的药动学并评价两制剂的生物等效性。方法采用随机自身交叉双周期设计方法,将21例健康男性受试者随机分为2组,分别单次交叉口服法罗培南片剂和胶囊剂200 mg,采用高效液相色谱测定血浆中法罗培南的浓度,计算其药动学参数和相对生物利用度,经统计学分析,评价两制剂的生物等效性。结果法罗培南胶囊剂和片剂的药动学参数：Cmax分别为（2.14±0.94）和（1.92±0.72）μg.mL-1,tmax分别为（0.95±0.44）和（1.21±0.54）h,t1/2分别为（1.00±0.20）和（0.90±0.10）h,AUC0~t分别为（4.02±2.08）和（3.73±1.35）μg.h.mL-1。法罗培南胶囊的相对生物利用度为（112.9±58.9）%。结论法罗培南胶囊剂和片剂具有生物等效性。     

马来酸依那普利片的人体生物等效性研究

目的 用HPLC-MS测定健康受试者口服马来酸依那普利制剂后的血药浓度,估算受试制剂和参比制剂的药动学参数,评价两种制剂的生物等效性和相对生物利用度.方法 采用随机二交叉设计试验,20例男性健康志愿受试者,单剂量口服受试制剂和参比制剂的马来酸依那普利片.以高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中依那普利和依那普利拉的浓度.采用SPSS及BAPP2.2软件处理计算主要药动学参数.结果 受试制剂和参比制剂血浆中马来酸依那普利的t1/2分别为(1.33±0.22)和(1.25±0.37)h;ρmax分别为(238.59±55.40)和(230.61±78.29) μg·L-1,tmax分别为(0.70±0.20)和(0.80±0.20)h,AUC0-8h分别为(339.03±70.66)和(373.23±108.83) μg·h·L-1,AUC0-∞分别为(343.51±71.15)和(378.36±107.35)μg·h·L-1.依那普利拉的t1/2分别为(6.26±0.63)和(5.72±0.54)h;ρmax分别为(83.75±25.91)和(99.13±29.61)μg·L-1,tmax分别为(3.80±0.60)和(3.40±0.70)h,AUC0-36h分别为(812.02±181.88)和(803.35±199.50)μg·h·L-1,AUC0-∞分别为(832.99±180.85)和(817.36±201.78)μg·h·L-1,以依那普利和依那普利拉计算的人体相对生物利用度分别为(90.84±39.6)%和(102.8±31.3)%.结论 两种制剂在健康人体内具有生物等效性.     

LC/MS/MS测定大鼠尿液中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法学研究

目的:建立一种快速测定大鼠尿液中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的定量方法。方法:用三重四级杆串联质谱(MS/MS)作为HPLC的检测器,其中MS/MS使用了多反应检测(MRM)扫描方式。分别选择304.2→134.2和288.2→244.2离子对m/z作为MRM检测的离子对;流动相:甲醇-水(85∶15),内含5mol/L甲酸铵;色谱柱:Agilent Zorbax XDB-C18,以测定大鼠尿液中吴茱萸碱和吴茱萸次碱为例,对此方法进行了应用。结果:方法的线性范围为吴茱萸碱=5.615-1437.5ng/ml(r=0.999),检测限1.87ng/ml,吴茱萸次碱=10.26-1314.25ng/ml(r=0.998),检测限5.13ng/ml。结论:此法灵敏、准确,可用于含茱萸碱和吴茱萸次碱的药物代谢研究。     

高效液相色谱-质谱-质谱联用法测定Beagle狗血浆中石杉碱甲

目的:建立狗血浆中石杉碱甲的液质联用测定法.方法:血浆样品经液液萃取,用高效液相色谱-质谱-质谱联用法检测.色谱柱为Nucleocil ODS柱,50×2.0 mm I.D.,5 μm,流动相为乙腈-甲醇-水-甲酸(20∶40∶40∶0.1,v/v).采用多反应监测,用于定量的离子为m/z 243→210(石杉碱甲)和m/z 257→226(内标N-甲基石杉碱甲).结果:线性范围为0.1～12 ng/ml,最低定量浓度为0.1 ng/ml,可以检测到Beagle狗静注和口服100 μg石杉碱甲后12 h的血药浓度.结论:该方法灵敏度高,简便快速,可用于药代动力学研究.     

LC／MS／MS测定犬血浆中氯米帕明浓度及体内药动学

目的：建立液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中氯米帕明（Clomipramine）。方法：色谱柱为ZorbaxExtend—C18柱（150mm×4．6mm,5μm,美国Agilent公司）;C18保护柱（4．0mm×3．0mm,5μm,迪马公司）;流动相为乙腈-10mmol／L醋酸铵-甲酸（60：40：0．1,V／V／V）;流速为0．5ml／min;进样量为20μl;柱温为20℃;采用三重四极杆串联质谱仪,ESI电离源,以选择反应监测方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m／z315．2,86．1（氯米帕明）和m／z285．1～86．2（内标异丙嗪）。500μl血浆样品经正己烷液提取后蒸干,流动相复溶,进行分析。结果：测定血浆中氯米帕明的线性范围为1～500ng／ml,定量下限为1ng／ml;日内、日间精密度RSD均小于15％,准确度在85％。115％范围内．符合《中国药典》2010年版二部的规定．结论：本方法可用干氯米帕明的女体内药代动力学研究。     

HPLC/MS/MS同时测定血浆肾上腺素、去甲肾上腺素、可的松和氢化可的松的方法建立

目的 建立高效液相色谱-质谱-质谱联用 （HPLC/MS/MS）同时测定血浆中的肾上腺素、去甲肾上腺素、可的松和氢化可的松的方法。方法 样品经乙腈沉淀蛋白和萃取后,15 000 r/min 离心5 min,取上清液进样分析。电喷雾离子源 (ESI), 正离子检测, 多反应监测 (MRM) 方式定量分析。 结果 肾上腺素、去甲肾上腺素、可的松和氢化可的松在0.02～200.00 ng/mL浓度范围内线性良好 （相关系数均≥0.999）,检出限分别为4.13 pg/mL、4.64 pg/mL、4.29 pg/mL和4.52 pg/mL,日内和日间精密度分别为1.19%~5.42%和2.16%~6.04%;将所建立的方法用于空白人血浆样品分析,加标回收率为80.0%~109.0%,样品测定精密度为3.93%~7.57%。结论 本研究所建立的方法快速灵敏,适合血浆样品的批量分析。     

用高效液相色谱-质谱-质谱法测定小鼠血浆和大脑中的石杉碱甲及药动学

目的建立小鼠血浆和大脑中石杉碱甲的液质联用测定法,测定灌胃给药后小鼠血浆和大脑中石杉碱甲浓度的动态变化以及药动学参数。方法小鼠血浆及大脑样品经液液萃取,用高效液相色谱-质谱-质谱(LC-MS-MS)联用法检测。色谱柱:PHENOMENEX C18柱,100mm×2mm,5micron;流动相为甲醇∶水(1%甲酸溶液)=60∶40;用于定量的离子为m/z243→154(石杉碱甲)和m/z278→203(内标:克仑特罗)。结果所建立的血浆的方法线性范围为1~1 000ng/mL,脑的方法线性范围为1~1 000ng/mL,它们最低检测限为1ng/mL,(r=0.999 0),RSD<7%,可以检测小鼠灌胃后石杉碱甲在血和脑中的浓度;血浆石杉碱甲浓度-时间变化可用一室模型拟合,主要药动学参数分别为Tmax=6min,Cmax=281ng/mL,AUC(0→tn)=35 266ng.L-1.min-1,AUC(0→∞)=38 056ng.L-1.min-1,t1/2=99min;在大脑中的药物浓度-时间变化用非房室模型拟合,主要药动学参数分别为Tmax=60min,Cmax=224ng/mL,AUC(0→tn)=44 344ng.L-1.min-1,AUC(0→∞)=58 571ng.L-1.min-1。结论该方法灵敏度高,简便快速,可用于药代动力学及相关研究;石杉碱甲在小鼠大脑中的消除速度比血浆缓慢。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆中法莫替丁胶囊含量及其生物等效性评价

 目的  建立快速灵敏的液相色谱-质谱联用(LC/MS/MS)法测定人血浆中法莫替丁的含量,并比较两种法莫替丁胶囊在健康人体内的药动学及生物等效性。  方法  血浆样品中的蛋白经甲醇白沉淀处理后,采用LC/MS/MS系统分析,色谱柱为Venusil XBP苯基桩(100 mm×2.1 mm,5 μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇(体积分数为60∶40)为流动相,通过电喷雾离子化四级杆串联质谱,以多反应监测(multiple-reaction monitoring,MRM)方式进行检测;采用DAS 2.1.1软件进行药动学参数的数据处理。  结果  此法在标准曲线范围2.5~250.0 ng/mL(r=0.999 9)内线性良好,最低定量限为2.5 ng/mL;定量限、低、中、高浓度的方法回收率为97.23%~99.64%,批内和批间精密度RSD值为2.30%~4.32%,且提取回收率稳定并均大于80%;基质效应为89.01%~95.73%。两种胶囊的血药浓度-时间曲线基本一致,主要药动学参数c_max、AUC_0-t、AUC_0-∞差异均无统计学意义,tmax经非参数法检验差异无统计学意义。  结论  采用此方法测定血浆药物浓度时,灵敏度高、准确度和精密度好,样品处理简单,分析测试速度快;试验胶囊的相对生物利用度为91.5%±24.5%(n=23,AUC_0~t)或90.7%±24.5%(n=23,AUC_0~∞),统计分析表明两种胶囊生物等效。     

高效液相色谱一质谱联用法测定人血浆中非索非那定的浓度

目的：建立以高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中非索非那定浓度的方法。方法：以苯乙双胍为内标物,采用C18柱,流动相由乙腈及30 mmol/ml NH4Ac（含0.1%甲酸,0.01%三氟乙酸）组成,采用梯度洗脱程序,测定血浆中非索非那定浓度。结果：非索非那定在2.26～676.46 ng/ml线性关系良好（r=0.999 6,n=7）,定量下限浓度为2.26 ng/ml,RSD为0.7%,高、中、低浓度测定的相对回收率分别为（109.9±1.7）%、（103.1±7.2）%和（101.5±13.4）%,日内RSD分别为2.1%、2.5%和9.8%,日间RSD分别为1.3%、5.7%和7.1%。结论：所建方法预处理简单﹑专属性强、灵敏度高,适合测定非索非那定的血药浓度。     

高效液相色谱-质谱法在筛选胆管癌肿瘤标志物中的应用

目的应用蛋白质组学技术筛选人胆汁中与胆管癌相关的蛋白质分子。方法收集2008年3月至2009年10月重庆医科大学附属第一医院肝胆外科经明确病理诊断的胆管癌住院患者的胆汁共15例,正常人胆汁5例。应用非离子型脱脂剂结合分子筛超滤方法制备纯化胆汁样本,通过高效液相色谱-质谱法(HPLC-CHIP-MS/MS)鉴定差异表达的蛋白质,并用Spectrum Mill software对检测结果进行分析。结果与正常人胆汁比较,在胆管癌患者胆汁中,检测到109个高可信蛋白,其中12个为新增蛋白质,其功能主要涉及癌细胞的发生、增殖、分化、转移等。结论高效液相色谱-质谱法鉴定的12个差异表达蛋白质可能成为研究胆管癌的生物学分子标志物。     

LC-MS/MS测定人血浆中替米沙坦的浓度

目的:建立测定人血浆中替米沙坦浓度的LC-MS/MS方法,并用该法研究替米沙坦片在健康人体内的药代动力学。 方法:采用LC-MS/MS测定人血浆中不同时间点替米沙坦的浓度,以地西泮为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18 (100 mm×2.1 mm,3.5 μm),流动相为乙腈-0.3%甲酸水溶液(55∶45),流速0.3 ml/min,柱温30℃。 结果:替米沙坦的线性范围为2.5～500 ng/ml (r=0.995 7),最低定量限为2.5 ng/ml(S/N>10),日内和日间RSD<8%。 结论:本法操作简单,选择性好,灵敏度高,适用于替米沙坦的人体药代动力学研究。     

中毒动物生物检材中乌头类生物碱的LC/MS/MS分析

目的:建立乌头中毒致死的动物检材中乌头类生物碱的LC/MS/MS分析方法。方法:将生物检材用氨水调pH值为8~9,用氯仿/乙醚(1:4)萃取生物检材样品,采用电喷雾离子源,正离子模式检测。结果:在中毒致死的动物检材中发现了乌头碱、中乌头碱和次乌头碱。结论:LC/MS/MS法灵敏可靠,样品处理快速简便,适用于生物检材中乌头类生物碱的检测。