NGF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的：了解神经生长因子（NGF）在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法：采用成年SD大鼠（T13－L1）脊髓挤压伤模型并设正常对照组，分别于术后24小时、7天、21天处死动物。取L3节段脊髓制作20μm厚冰冻连续切片，用抗NGF抗体按ABC法行免疫组织化学染色，观察NGF阳性反应物在正常及挤压伤位点尾侧端（L3）背角的分布，记录其免疫反应强度，计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数。结果：NGF阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞。挤压伤后24小时至21天，背角中NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性升高（P＜0．01）。结论：脊髓挤压伤后早期，背角NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性增加，提示NGF可能在脊髓挤压伤的早期修复中发挥作用。     

BDNF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的:了解BDNF在挤压伤脊髓背角的表达变化.方法:用本室建立的成年SD大鼠(T13-L1)脊髓挤压伤模型,分别于术后24h,7h,21h处死动物并设正常对照组,取L3节段脊髓制作20μm厚冰冻连续切片,用抗BDNF抗体按ABC法行免疫组织化学染色.观察挤压伤位点尾侧端(L3)背角BDNF免疫反应物的分布,记录其免疫反应强度,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数.结果:BDNF的阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞.术后24h,BDNF的免疫反应强度较正常者明显增强并维持至7h(P<0.05),术后21h又进一步增强并高过术后24h者水平(P<0.01).BDNF的免疫阳性细胞数则从术后24h至21h进行性增加(P<0.01).结论:脊髓挤压伤后早期,BDNF在损伤位点尾侧端背角的表达明显增加,提示BDNF在脊髓挤压伤的早期反应中可能起作用.     

NT-4在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的:了解NT-4在挤压伤脊髓背角表达的变化.方法:采用本室建立的成年SD大鼠(T13-L1)脊髓挤压伤模型,分别于术后24h,7h,21h处死动物并设正常对照组,取L3节段脊髓制作20μm厚冰冻连续切片,用抗NT-4抗体按ABC法行免疫组织化学染色.观察NT-4在挤压伤位点尾侧端(L3)背角的表达,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数.结果:NT-4的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞.挤压伤后24h,背角NT-4的免疫阳性神经元和胶质细胞数及反应强度与正常者比较无明显变化(P>0.05),但从术后第7h至术后第21h则逐渐增加且高过正常者水平(P<0.01).结论:脊髓挤压伤位点尾侧端背角NT-4的表达从术后第7h开始明显增加,术后第21h时又进一步增多.提示NT-4可能在脊髓挤压伤的早期修复过程中发挥作用.     

NT-3在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的 :了解ＮＴ - 3在挤压伤脊髓背角表达的变化 .方法 :采用本室建立的成年ＳＤ大鼠 (Ｔ13 -Ｌ1)脊髓挤压伤模型 ,分别于术后 2 4ｈ ,7ｈ ,2 1ｈ处死动物并设正常对照组 ,取Ｌ3 节段脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻连续切片 ,用抗ＮＴ - 3抗体按ＡＢＣ法行免疫组织化学染色 .观察ＮＴ - 3在挤压伤位点尾侧端 (Ｌ3 )背角的表达 ,记录其免疫反应强度 ,计数其免疫阳性神经元数和胶质细胞数 .结果 :ＮＴ - 3的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞 .挤压伤后 2 4ｈ ,背角ＮＴ - 3的免疫阳性神经元和胶质细胞数及其反应强度均较正常者明显降低 (Ｐ <0 0 5 ) ,术后 7ｈ者又较术后 2 4ｈ者明显降低 (Ｐ <0 0 1) ,而术后 2 1ｈ时又显著升高且高过正常者水平 (Ｐ <0 0 1) .结论 :ＮＴ - 3在挤压伤位点尾侧端背角的表达从术后 2 4ｈ至术后 7ｈ进行性减少 ,而术后 2 1ｈ时则增加并高过正常者水平 .提示ＮＴ - 3可能与脊髓挤压伤的早期修复有关并具有双向效应     

BDNF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化（摘要）

目的 :了解ＢＤＮＦ在挤压伤脊髓背角的表达变化 .方法 :用本室建立的成年ＳＤ大鼠 (Ｔ13 -Ｌ1)脊髓挤压伤模型 ,分别于术后 2 4ｈ ,7ｈ ,2 1ｈ处死动物并设正常对照组 ,取Ｌ3 节段脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻连续切片 ,用抗ＢＤＮＦ抗体按ＡＢＣ法行免疫组织化学染色 .观察挤压伤位点尾侧端 (Ｌ3 )背角ＢＤＮＦ免疫反应物的分布 ,记录其免疫反应强度 ,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数 .结果 :ＢＤＮＦ的阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞 .术后 2 4ｈ ,ＢＤＮＦ的免疫反应强度较正常者明显增强并维持至 7ｈ (Ｐ <0 0 5 ) ,术后 2 1ｈ又进一步增强并高过术后 2 4ｈ者水平 (Ｐ<0 0 1) .ＢＤＮＦ的免疫阳性细胞数则从术后 2 4ｈ至 2 1ｈ进行性增加 (Ｐ <0 0 1) .结论 :脊髓挤压伤后早期 ,ＢＤＮＦ在损伤位点尾侧端背角的表达明显增加 ,提示ＢＤＮＦ在脊髓挤压伤的早期反应中可能起作用     

NT-3在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的：了解NT-3在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法：制作成年SD大鼠T13-L1节段脊髓挤压伤模型并设正常对照组。分别于术后24h，7d，21d处死动物。取L3节段脊髓制作20胛厚冰冻连续切片，用抗NT-3抗体行免疫组织化学ABC法染色，观察NT-3在背角的表达，记录其免疫反应强度，计数其免疫阳性神经元数和胶质细胞数。结果：NT-3的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞，挤压伤后NT-3的表达从术后24h至术后7d进行性减少，而术后21d时则增加并高过正常者水平。结论：NT-3不仅参与脊髓的正常生理活动，而且可能与脊髓挤压伤的早期修复有关并具有双向效应。     

NT—4在挤压伤脊髓背角表达的时相变化（摘要）

目的 :了解ＮＴ - 4在挤压伤脊髓背角表达的变化 .方法 :采用本室建立的成年ＳＤ大鼠 (Ｔ13 -Ｌ1)脊髓挤压伤模型 ,分别于术后 2 4ｈ ,7ｈ ,2 1ｈ处死动物并设正常对照组 ,取Ｌ3 节段脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻连续切片 ,用抗ＮＴ - 4抗体按ＡＢＣ法行免疫组织化学染色 .观察ＮＴ - 4在挤压伤位点尾侧端 (Ｌ3 )背角的表达 ,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数 .结果 :ＮＴ - 4的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞 .挤压伤后 2 4ｈ ,背角ＮＴ - 4的免疫阳性神经元和胶质细胞数及反应强度与正常者比较无明显变化 (Ｐ >0 0 5 ) ,但从术后第 7ｈ至术后第 2 1ｈ则逐渐增加且高过正常者水平 (Ｐ <0 0 1) .结论 :脊髓挤压伤位点尾侧端背角ＮＴ - 4的表达从术后第 7ｈ开始明显增加 ,术后第 2 1ｈ时又进一步增多 .提示ＮＴ - 4可能在脊髓挤压伤的早期修复过程中发挥作用     

挤压伤后脊髓腹角运动神经元NGF,BDNF表达的变化

为探讨脊髓挤压伤后早期不同时间腹角运动神经元NGF和BDNF的表达变化，建立脊髓挤压伤模型，取挤压伤位点尾侧段T13节段脊髓制作冰冻切片，运用NGF，BDNF兔抗血清以免疫组化ABC法染片，观察并计数腹角NGF和BNDF的阳性神经元数。结果：NGF主要分布于正常大鼠脊髓腹角运动神经元的胞核及胞浆，损伤后21d，NGF的阳性神经元数较对照、损伤1d及7d组均明显增多（P＜0．01），与NGF比较，对照组脊髓腹角亦见BDNF免疫阳性神经元，胞浆染色、胞核不着色，损伤后24h，BDNF阳性神经元数已较正常者有显著增加（P＜0．05），此后维持该水平至21d，结论：脊髓挤压伤后腹角神经元NGF和BDNF的表达明显增加，提示NGF和BDNF可能在脊髓损伤修复的早期反应中发挥作用。     

挤压伤脊髓腹角神经元NT-3表达的变化

运用免疫组化ＡＢＣ法探讨了脊髓挤压伤后不同时间腹角ＮＴ－３的表达变化。结果：对照组可见ＮＴ－３免疫反应阳性细胞分布于腹角的大神经元和少量小神经元,胞核、胞浆均染色。此外,亦见少量阳性胶质细胞。     

不同类型损伤对脊髓背角神经元的影响

为了解不同类型损伤对脊髓背角神经元的影响，采用本室建立的SD成年大鼠脊髓挤压伤、半横断伤和全横断伤模型，分别于术后第24h，7d,21d处死动物并设正常对照组，取L3节段脊髓制作20μm厚连续冰冻切片，间隔取片行苏木精染色，光镜下观察损伤位点尾侧端背角的形态改变,计数背角神经元数，结果：组间比较，挤压伤者较正常者神经元明显萎缩，胞体周围有空隙，神经元数无明显减少（P＞0.05），半横断伤和全横断伤者均出现大量空泡，未见丰满而轮廓清楚的神经元，残存的少数神经元明显萎缩，术后神经元数明显减少且以全横断伤者为甚（P＜0.01），组内比较，3种损伤术后各时相神经元数的变化均无显著性差异（P＞0.05），结果表明：不同类型损伤时对背角神经元存活的影响不同，全横断伤者最重，半横断伤者次之，挤压伤者相对较轻。     

Caveoline-1蛋白在慢性神经痛大鼠背根神经节和脊髓背角表达的变化

目的 观察Caveolin-1蛋白在神经痛大鼠中不同作用时间脊髓背角和背根神经节表达量的变化。方法 实验动物分组和动物模型制作：对照组28只,神经痛模型组（L5脊神经结扎）28只,按处理时间不同又各分为1、3、5、7、10、14、21天共7组,每组各4只,制备动物模型。痛行为学检测：术后1、3、5、7、10、14、21天,测定各组机械撤足阈值和热撤足潜伏期,神经痛模型组和对照组对比,确定疼痛模型制作成功。神经痛模型组和对照组大鼠均在第22天处死,按同侧和对侧分别提取L5脊髓和背根神经节组织总蛋白,利用蛋白印迹法检测Caveolin-1在各实验分组脊髓背角和背根神经节同侧和对侧的表达量。结果 同侧背根神经节Caveolin-1的表达量在L5脊神经结扎后的第5、7、10、14、21天与对照组比较,分别升高了40.4%±3.67%、126.9%±5.46%、159.7%±4.89%、119.1%±5.77%和91.4%±5.31%,其中术后第10天差异有统计学意义（P<0.01）,同侧脊髓背角Caveolin-1的表达量在L5脊神经结扎后的第5、7、10、14、21天与对照组相比分别升高了33.3%±4.89%、152.8%±3.56%、142.1%±5.43%、103.2%±6.21%、175.6%±4.81%,其中第10、14、21天差异有统计学意义（P<0.05）。对照组之间Caveolin-1的表达无明显变化。结论 慢性神经痛可诱导Caveolin-1在同侧脊髓背角和背根神经节表达量的增加。     

大鼠脊髓半切损伤后突触分化诱导基因产物SynDIG1的表达增强

目的 探讨大鼠脊髓半切损伤后(spinal cord injury, SCI) 突触分化诱导基因产物(synapse differentiation induced gene 1,SynDIG1)的表达变化及意义.方法 SD大鼠随机分成对照组和脊髓损伤组(n=75),切断大鼠脊髓一半作为实验模型,只咬除椎板而不损伤大鼠脊髓作为对照模型.在手术后7、14、21、28、35天采集损伤区域的脊髓组织,用免疫荧光和免疫印迹技术检测各组各时间点SynDIG1的蛋白表达,并且与半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、神经生长蛋白43(GAP-43)等神经元特异性标志物做免疫荧光双标技术检测.结果 在脊髓损伤后第7天就发现神经元有SynDIG1表达,在第28天达到高峰,随后维持在较高水平.通过免疫荧光双标技术发现脊髓损伤后SynDIG1与GAP-43存在共表达.结论 脊髓损伤后中期神经元大量表达SynDIG1,激活了神经生长因子,促进神经元再生,有利于神经系统的修复.     

挤压性脊髓损伤模型的制备

为建立一种简易实用,稳定可靠的脊髓损伤动物模型。挤压Ｔ１３脊髓动段至其直径的１／２,术后不同时间观察损伤脊髓的组织学变化并记录损脊髓神经功能的综合评分。结果：光镜下,挤压相临节段脊骨侧索和灰质神经组织部分变形坏死。本模型所致的脊髓损伤结果稳定可靠,操作简便,作为一种损伤模型对研究脊髓损伤有一定的价值。     

挤压、半切及全切脊髓腹角形态学变化的比较

为了解不同类型ＳＣＩ所致脊髓腹形态学变化的差异,６０只成年ＳＤ大鼠被随机分为４组：正常组,挤压组、半切组和全切组各１５只,制作ＳＣＩ模型,术后２４ｈ,７ｄ取损伤尾侧脊髓制作冰冻切片,苏木精染色后观察组织形态变化并计数腹角神经元数。结果提示,ｃＳＣＩ,ｈＳＣＩ,ｔＳＣＩ后果明显不同。     

高压氧预处理对脊髓损伤后后角神经元的保护作用

 目的 探讨高压氧预处理是否可以通过抑制早期的细胞凋亡来保护脊髓后角神经元。方法 随机将24只雄性Wistar大鼠分成对照组与高压氧预处理组。高压氧预处理组在给予高压氧5 d后与对照组同时制作脊髓（T8~T10）全横断模型。术后8 h、1 d和3 d取脊髓做冠状冰冻切片,行Nissl及TUNEL染色,光镜下观察。结果 Nissl染色显示,术后8 h及1 d时脊髓后角内浓染的细胞多见,高压氧预处理组与对照组比较浓染的细胞较少,3 d后两组无明显差异;TUNEL染色显示,术后8 h及1 d时阳性细胞多见, 8 h时两组差异明显（P<0.05）,1 d时差异最显著（P<0.01）。结论 高压氧预处理对脊髓损伤术后后角神经元起保护作用,术后1 d内保护效果明显。     

神经生长因子对脊髓损伤后脊髓组织c—fos蛋白表达的影响

为探讨神经生长因子（ＮＧＦ）对脊髓损伤后脊髓组织ｃ－ｆｏｓ基因的影响。Ｗｉｓｔａｒ大鼠分成三组：正常对照组、生理盐水组、ＮＧＦ组；用ＡｌｌｅｎＷＤ法以１０ｇ×２．５致伤力损伤Ｔ８脊髓。ＮＧＦ组经蛛网膜下腔导管分别于术后即刻、１０、３０分、１、２、３、４小时注入ＮＧＦ溶液２０μｌ，生理盐水组经导管于同时间内注入等量的生理盐水。用免疫组化法检测ｃ－ｆｏｓ蛋白在脊髓组织中的表达。结果示生理盐水组在术后１