标本处理对聚合酶链反应测定乙肝病毒核酸的影响

目的 研究对血清标本进行乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ聚合酶链反应（ＰＣＲ）测定前的最佳标本处理方法。方法 使用煮沸裂解方法和核酸纯化方法同时处理２份ＨＢＶ ＤＮＡ含量不同血清标本及３份溶血和正常血清标本,比较荧光定量ＰＣＲ测定的重复性及测定值的差异。结果 煮沸裂解法处理２份标本所得结果的重复性（变异系数ＣＶ分别为０．２１６５和０．３２６２）明显差于对样本进行核酯纯化后的测定重复性（ＣＶ分别为０．０６９９和０．１０９２）;并且,当标本中血红蛋白含量大于５．８９ｕｇ／Ｌ时（肉眼未见有明显溶血）,采用煮沸裂解法处理标本所得ＨＢＶ ＤＮＡ量较核酸纯化方法所得值低约２个数量级（Ｐ〈０．０５）。结论 在ＨＢＶ ＤＮＡ ＰＣＲ检测时,煮沸裂解法不适合用来处理血清标本,而应使用核酸纯化方法。     

聚合酶链反应扩增结核杆菌的临床应用

采用PCR技术扩增人型结核分枝杆菌特异的158 bp DNA片段靶基因,检测60例肺结核病人痰标本,结果表明,阳性率达58.3%,对照的常规培养法阳性率为11.7%。20例非结核病患者痰标本两种检测结果均为阴性.研究结果表明,PCR 扩增检测结核杆菌技术比常规检验方法快速敏感,且有较高的特异性。     

聚合酶链反应快速检测结核杆菌的临床应用

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)又称体外 DNA 扩增技术或体外核酸克隆技术,自1985年初 Saiki 建立以来,在短短的几年内获得了很大发展。Hance 最先把 PCR 技术应用到结核杆菌的诊断后,国内外相继研究应用。参考国外文献,我们设计合成了一对引物。特异性地扩增结核菌 B 蛋白基     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速，准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法，根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率，快速，简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌，应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪例标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致。     

荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA标本处理过程中的影响因素分析

乙型肝炎病毒（HBV）DNA定量能客观反映HBV感染复制情况,在临床用药、治疗监测及预后判断方面具有较高的临床参考价值。目前国内用于HBVDNA定量检测的方法基本上是荧光定量聚合酶链反应（PCR）,该方法具有实时测定,操作简便,定量范围宽,结果重复性好,且不易引起污染等优点。标本处理（包括标本采集,存放。DNA提取等）过程是整个实验中最费时的环节。     

荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA标本处理过程中的影响因素分析

乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量能客观反映HBV感染复制情况,在临床用药、治疗监测及预后判断方面具有较高的临床参考价值[1]。目前国内用于HBV DNA定量检测的方法基本上是荧光定量聚合酶链反应(PCR),该方法具有实时测定,操作简便,定量范围宽,结果重复性好,且不易引起污染等优点[2]。标本处理(包括标本采集,存放,DNA提取等)过程是整个实验中最费时的环节,为了解该过程中可能存在的干扰因素,我们就标本溶血、抗凝剂的选用、标本保存、裂解温度4个方面对HBV DNA定量的影响作一些探讨,旨在为提高HBV DNA定量准确性提供参考依据。一、材…     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速、准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率、快速、简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪便标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致，粪便标本阳性率为４．２％（３８／９０９）；水样标本为２２．２％（４／１８），其中１份粪便标本和１份水样标本，是经过第２次增菌培养后，检出用性，而ＰＣＲ方法未见假阳性及假阴性结果。表明ＰＣＲ方法准确、快速、灵敏，并可在２、３小时内检测出含３个菌细胞的标本。因此，该方法可广泛应用于检测各种临床、环境标本中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。     

聚合酶链反应检测真菌感染的临床评价

用聚合酶链反应 (PCR)检测真菌 ,已有较多报道[1 2 ] ,我们也曾报道过初步研究[3 ] 。为给临床提供快速、灵敏、非创伤的真菌感染诊断方法 ,本文就采用真菌通用引物PCR检测真菌DNA的灵敏度、特异性、可检测真菌范围及临床适用性作进一步评价。1　材料和方法1 1　引物　真菌 18S亚基rRNA多拷贝基因的保守序列通用引物序列为 5′ ATTGGAGGGCAAGTCTGGTG 3′和 5′ CCGATCCCTAGTCGGCATAG 3′ ,扩增产物大小因真菌病原体而异 ,为 4 82～ 5 0 3bp[4] ,白色念珠菌为 4 90bp。由北京赛百盛生物工程公司合成。1 2　临床无菌性…     

长聚合酶链反应（LPCR）的进展

聚合酶键反应（PCR）是一种体外扩增DNA的有效技术。目前该技术主要用于扩增数百个到上千个碱基对（kb）的DNA片段。但是在许多分子遗传学研究中，如基因图谱分析，则需扩增更长的DNA片段才有价值。长片段DNA的PCR扩增近年已有报道[1]，例如选择不同的耐热DNA聚合酶、改过缓冲浪成份及循环条件等，可以扩增出10～15kb的片段，但产量低，多数实际应用仍限制于5kb以内。直到1994年，Barnes［2］和Cheng［3］等对DNA合成中碱基错配现象和模板DNA的损伤两个问题进行了研究并探讨了解决办法，其结果使PCR扩增）噬菌体DNA达42kb，扩…     

聚合酶链反应检测淋球菌的临床应用

报告应用聚合酶链反应(Polymorase chain reaction PCR)方法对89名性罪错青年女性采取宫颈分泌物进行淋球菌检测,同时用直接涂片和分离培养淋球菌,阳性率分别为51.69％、7.87％和16.85％。PCR法对淋球菌的检出率均较直接涂片法和分离培养法为高,其中15名分离培养阳性者,其PCR法也为阳性。笔者认为PCR法直接检测临床标本淋球菌具有特异、敏感、快速和简便的优点,该法无论对淋球菌检出率的提高和控制淋病的社会传播都有重要的意义。     

聚合酶链反应检出痰中结核杆菌

结核杆菌的快速检出与鉴定是结核病防治工作中的重要课题。最近发展的聚合酶链反应(PCR)可将结核菌基因组的一个片段在体外进行几何级数量扩增,从而使检出快速、灵敏。本文用PCR进行101例结核病人痰中结核杆菌检出,并与传统的浓缩、培     

荧光定量聚合酶链反应检测临床痰液标本中军团菌

目的建立快速、特异、敏感的TaqMan探针荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法,用于检测军团菌16SRNA基因。方法军团菌标准菌株购自美国标准菌种收藏所,临床痰标本取自南方医科大学南方医院257例病原不明肺炎住院患者。提取菌种DNA及临床痰标本DNA,通过对标准菌株及临床痰液标本DNA分别进行待考核试剂与16SrRNAPCR检测及测序,验证待考核试剂方法的敏感性、特异性。结果荧光定量PCR检测灵敏度为10cfu/mL,比16SrRNA定性PCR检测灵敏度381cfu/mL高38倍。257例病原不明肺炎患者的临床痰标本细菌培养检出嗜肺军团菌血清型1型1例。待考核试剂和16SrRNAPCR方法检测阳性率分别为8.95(23/257)和8.95(23/257),其中2例不符合,1例待考核试剂阳性16SrRNAPCR方法阴性,另一例16SrRNAPCR方法阳性,待考核试剂阴性。二者总符合率为99.22(255/257),其中阳性符合率为95.65(22/23),阴性符合率为99.57(233/234)。结论待考核试剂荧光定量PCR检测军团菌标准菌种敏感性强,特异性好,用于临床痰标本军团菌检测时假阳性率为4.35,与16SrRNAPCR方法及测序比较具有较好的符合性和等效性。     

定量聚合酶链反应的研究进展与临床应用

随着热稳定ＤＮＡ多聚酶的发现,聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术发生了革命性的飞跃,使得其应用于临床成为可能,为医学检验及其研究提供了新的手段。已用于临床的ＰＣＲ方法至今大都为定性分析,既无标准对照,也无质控,其最终产物用电泳法鉴定容易产生非特异性条带,结果重复性差,可靠性低,因而给临床诊断带来混乱。由于定性没有量化指标,所以无法用于疾病随访和疗效观察。如何提高灵敏度和稳定性,并能对样品中的ＤＮＡ和ＲＮＡ进行定量分析是迫切需要解决的课题。一、目前临床采用的几种ＰＣＲ定量测定方法1固体捕获技术的运用。(1)ＰＣＲ酶联化学…     

实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒聚合酶基因变异

目的　建立一种在拉米夫啶治疗过程中的聚合酶酪氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸(YMDD)基序变异的检测方法。方法　根据寡核苷酸探针与模板结合时 ,不匹配碱基显著影响熔解温度的原理 ,设计合成 2条荧光标记的特异性探针 ,用实时荧光聚合酶链反应 (PCR)方法对 2 97例患者的 35 4份标本进行YMDD变异检测。结果　 35 4份标本中 ,检出YMDD变异株 15 6份 ( 44 1% ) ,其中混合株占 34% ( 5 3/15 6 ) ;有 9份血清标本同时进行了DNA序列分析 ,测序结果同本试验检测的结果完全一致 ;同时发现YMDD变异与血清谷丙氨酸转氨酶异常相关 (P <0 0 1)。结论　本研究建立的实时荧光PCR方法简便、快速、灵敏、经济 ,可用于临床拉米夫啶治疗中YMDD变异的检测。     

聚合酶链反应的质量控制

聚合酶链反应用于临床病原微生物检测的质量控制包括室内质量控制和室间质量评价，室内质控的核心问题就是要避免交叉污染，这首先要求有严格的实验室管理和训练有素的操作人员，此外设立阴、阳性对照以及ＰＣＲ结果的准确判读都是有效的必不可少的室内质控措施，室间质量评介国外只是近几年才开始的一项工作，本文亦对其作了简略的介绍。     

聚合酶链反应在肺结核诊断中的临床价值

１９９３年１月～１９９８年１２月应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术与痰直接涂片进行对比检测４３８例肺结核患者痰中结核杆菌,现将其结果分析如下。１资料与方法１１病例选择４３８例中,男３６６例,女７２例,年龄２０～７９岁,平均５６±３７岁。浸润型肺结核３６...     

逆转录聚合酶链反应检测风疹病毒

为了早期诊断风疹感染，应用逆转录。聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对８０例临床怀疑风疹感染患者的咽拭物检测风疹病毒。ＰＣＲ阳性者４３例，占５３％；同时用酶联免疫吸附法对每份血清作了ＩｇＭ检测，阳性者１２例，占１５％。统计学处理（Ｐ＜０．０１），表明两种检测方法差异有显著性。扩增产物的特异性通过地高辛标记探针的点杂交分析得到证实。该ＲＴ－ＰＣＲ方法具有快速、早期、灵敏度高和特异性强的特点，有希望发展成为临床诊断胎儿风疹感染的一种重要手段，并为产前咨询提供可靠的依据。     

聚合酶链反应检测结核杆菌的临床应用价值

５８例结核病患者与２８例非结核病呼吸系统疾病患者的痰中胸水标本，分别进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测结核杆菌及直接涂片找抗酸杆菌，同时用酶联法（ＥＬＩＳＡ）查血清结核抗体。对照研究表达ＰＣＲ检测结核杆菌特异性好，敏感性强，临床应用前景好。