羧甲基茯苓多糖对人外周血淋巴细胞分泌IFN-α和IFN-γ的调节作用及中间体制备

用羧甲基茯苓多糖（CMP）预处理人外周血淋巴细胞（HPBL），经200IU／mlIFN－α启动后，加NDV的促诱生组的α-干扰素（IFN－α）效价比无CMP的常规诱生组高1．2倍；经PHA和／或ConA促诱生组的γ-干扰素（IFN－γ）效价比无CMP的PHA和／或ConA刺激常规诱生组高0．5倍（P＜0.01），尤以CMP＋PHA＋ConA促诱生的IFN－γ效果最佳。说明CMP具有IFN－α和IFN－γ促诱生效应（P＜0．01）。用CMP促诱生的IFN－α和IFN－γ中间体经各项指标检测不仅IFN－α和IFN－γ效价高，而且可达到生物制剂药用标准，经临床试验证明安全有效。     

茯苓及羧甲基茯苓多糖的研究概况

茯苓为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核.中医认为茯苓具有利水渗湿、健脾宁心功能;临床用于治疗水肿尿少、痰饮眩悸、脾虚食少、心神不宁、惊悸失眠等症.现代药理学研究表明,茯苓及羧甲基茯苓多糖具有提高机体免疫力、抗菌、降糖、抗肿瘤等作用,现就1997～2003年有关茯苓的研究资料作一概述.     

羧甲基茯苓多糖和PHA诱导人外周血淋巴细胞产生GM-CSF的研究

健康人外周血淋巴细胞在羧甲基茯苓多糖与PHA等的刺激诱导下共同培养7d后可获高效价粒-巨噬细胞集落刺激因子。该制剂经特殊处理后可达到临床药用标准。     

羧甲基茯苓多糖的研究进展

羧甲基茯苓多糖是从中药茯苓中提取的β-茯苓聚糖经羧甲基化而生成，显示有免疫调节、抗肿瘤等多种生理活性，具有广阔的药物开发及应用前景。现对羧甲基茯苓多糖的提取工艺、含量测定、药理活性等方面的研究进展进行综述。     

香菇多糖增强肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性及TNF—α,IFN—γ？…

目的：研究香菇多糖对肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）杀伤活性及细胞因子分泌的影响。方法：将从肺癌中分离的ＴＩＬ分别于含ＩＬ－２或ＩＬ－２加香菇多糖培养液中培养３０天,观察ＴＩＬ的杀伤活性和ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ的分泌作用。结果：用两种方法分别培养２５天时,ＩＬ－２加香菇多糖培养的ＴＩＬ杀伤活笥及ＴＮＦ－α、ＩＮＦ－γ的分泌作用均明显高于ＩＬ－２培养的ＴＩＬ（Ｐ〈０．０５）。结论：香菇多糖具有增强ＴＩＬ杀     

羧甲基茯苓多糖的制备及抗肿瘤活性研究

目的 提取茯苓药材中的多糖,测定其总糖含量,并进行羧甲基化改性,考察茯苓多糖与修饰后的羧甲基茯苓多糖的抗肿瘤活性。方法 采用稀碱浸提法提取茯苓多糖,苯酚-硫酸显色法测定茯苓多糖中总糖含量,通过羧甲基化反应得到羧甲基茯苓多糖。并采用MTT法检测茯苓多糖与羧甲基茯苓多糖对人肝癌细胞HepG-2的毒性反应。结果 苯酚-硫酸法测得茯苓多糖中总糖含量为95.96%,羧甲基茯苓多糖与茯苓多糖对HepG-2细胞的增殖均具有一定的抑制作用,其中羧甲基茯苓多糖活性更强。结论 经过修饰后的羧甲基茯苓多糖具有更好的抗肿瘤活性。     

比色法测定血浆中羧甲基茯苓多糖的含量

目的:建立羧甲基茯苓多糖血药浓度测定方法。方法:对血浆样品进行预处理,并用比色法测定羧甲基茯苓多糖的含量。结果:血药浓度线性范围为2~64mg.L-1,回归方程为:C=76.667 6A 0.850 8,r=0.999 8;回收率≥96.54%,日内精密度≤1.56%,日间精密度为≤2.53%。结论:本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于羧甲基茯苓多糖的血药浓度测定。     

羧甲基茯苓多糖抗乙型肝炎病毒的体内与体外研究

目的探讨羧甲基茯苓多糖(carboxymethyl-pachymaran,CMP)抗HBV、调节免疫、抗肝纤维化的作用及其机制。方法体外实验:人肝癌Hep G 2.2.15细胞株作为细胞模型,分为阴性对照组、CMP(1.5、3.0、6.0、12.0 mg/m L)组和阳性对照阿昔洛韦(aciclovir,ACV,浓度分别为0.5、1.0、1.5 mg/m L)组,MTT法观察CMP的细胞毒作用,ELISA法测定2.2.15细胞上清中HBs Ag和HBe Ag的含量。体内实验:采用四氯化碳复合因素法制作SD大鼠肝纤维化模型,分为正常对照组、模型组、CMP组,香菇多糖组及秋水仙碱组,每组10只,免疫组织化学法观察CMP对转化生长因子β(TGF-β)、细胞凋亡相关因子caspase-3、Ⅲ型胶原(collagen-III)、层粘蛋白(laminin)的影响,Western blot检测Smad3、Smad7的表达。结果体外实验:CMP对Hep G2.2.15细胞株的半数毒性浓度(TC50)为13.61 mg/m L,对Hep G2.2.15细胞株HBs Ag、HBe Ag分泌的半数有效浓度(IC50)分别为4.38 mg/m L、5.78 mg/m L,治疗指数(TI)值分别为3.15和2.45,CMP对HBs Ag和HBe Ag有抑制作用,并且抑制HBs Ag和HBe Ag分泌的作用优于ACV。模型组与TGF-β、caspase-3、Ⅲ型胶原、层粘蛋白的表达高于正常对照组(P<0.01);CMP,香菇多糖,秋水仙碱能够降低肝纤维化大鼠肝脏中TGF-β、caspase-3、Ⅲ型胶原、层粘蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。模型组Smad-3的表达高于对照组、Smad-7的表达低于对照组(均P<0.01);CMP,香菇多糖,秋水仙碱能够降低肝纤维化大鼠Smad-3的表达、升高Smad-7的表达(均P<0.01)。CMP显示了较好的抗纤维化作用,与香菇多糖组比较无统计学差异。结论通过体内和体外实验,证明CMP具有抑制HBV,调节TGF-β/Smad信号转导通路等作用,本研究为CMP在慢性乙型肝炎临床的应用提供了重要的理论和实验依据。     

羧甲基茯苓多糖对氟尿嘧啶致肠炎小鼠的保护作用

目的探讨羧甲基茯苓多糖(carboxymethylpachymaran,CMP)对氟尿嘧啶(fluorouracil,5-Fu)所致小鼠肠黏膜炎的改善、肠道保护作用及可能作用机制。方法建立5-Fu小鼠肠黏膜炎模型,随机分组、给药。炭末推进法测定小鼠肠推进率,并测量小鼠结肠长度;生物化学方法检测派氏集合淋巴结(PPs)匀浆上清液中活性氧类(ROS)和谷胱甘肽(GSH)的含量、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力;ELISA法检测PPs匀浆上清中IL-1β的含量;小鼠结肠做病理组织切片观察,免疫组化法检测结肠组织中NF-κB和p-p38的表达。结果与5-Fu模型组比较,CMP能明显延长5-Fu所致的结肠缩短(P<0.01);明显促进肠推进功能(P<0.05);结肠病理学切片显示,CMP能明显减轻5-Fu所致的结肠黏膜上皮杯状细胞丢失、隐窝深度变浅及炎症细胞浸润;并且明显升高PPs匀浆上清中GSH含量、CAT和GSH-Px的活性(P<0.01或P<0.05),降低ROS(P<0.05)和IL-1β的含量(P<0.01);免疫组化结果显示,相比5-Fu组,CMP明显降低结肠组织NF-κB和p-p38的表达。结论 CMP能够减轻5-Fu所致小鼠结肠黏膜炎,改善5-Fu所致的肠道传输功能失调,并保护5-Fu对肠道的氧化损伤和细胞凋亡,其机制可能与增强机体抗氧化、抑制炎症及抗凋亡作用有关。     

羧甲基茯苓多糖在家兔体内的测定及药物动力学

建立了苯酚-硫酸法测定兔血浆中的羧甲基茯苓多糖,测定波长为488nm。以2g/kg剂量给5只家兔灌胃,计算得各参数Cmax、tmax、t1/2(α)、t1/2(β)、AUC0→10h分别为(33.5±6.8)μg/ml、(17.5±9.7)min、(14.1±4.7)min、(65.6±24.5)min、(1674.5±533.6)μg·min·ml-1,符合二室模型。     

灵芝多糖和当归多糖促进人外周血T淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ

目的探讨中药灵芝多糖和当归多糖对人外周血活化T淋巴细胞的免疫调节作用。方法分离健康人外周血T淋巴细胞并分为空白对照组、灵芝多糖组和当归多糖组,免疫荧光观察各组T细胞PI3K和Caspase-3蛋白的表达;MTT法检测培养72 h后各组T细胞的增殖水平;流式细胞术分析各组T细胞凋亡率和细胞周期变化;ELISA检测各组T细胞培养上清液的IFN-γ含量。结果灵芝多糖组和当归多糖组T细胞均表达PI3K,细胞增殖OD值均明显高于空白对照组(P<0.01,P<0.05);灵芝多糖组T细胞Caspase-3蛋白表达的平均光密度值明显低于空白对照组(P<0.05),T细胞凋亡率也低于空白对照组,分别为18.23%和29.74%;灵芝多糖组和当归多糖组T细胞培养上清液IFN-γ的含量明显高于空白对照组(P<0.05,P<0.05)。结论灵芝多糖和当归多糖均明显促进外周血T淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ,灵芝多糖还能下调Caspase-3蛋白表达并抑制T淋巴细胞凋亡。     

裙带菜多糖对人外周血淋巴细胞因子分泌的影响

目的分析裙带菜多糖对人外周血淋巴细胞亚群、细胞因子分泌的影响,探讨裙带菜多糖的免疫调节机制。方法用流式细胞术检测淋巴细胞亚群的变化,用酶联免疫方法测定裙带菜多糖作用后淋巴细胞培养上清中细胞因子的浓度。结果不同浓度的裙带菜多糖可使CD+8T细胞比例明显增加(P<0.01);并可使CD+4T细胞比率增加,但与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);裙带菜多糖对B细胞增殖反应无明显影响(P>0.05)。不同浓度的裙带菜多糖作用后,NK细胞比例明显增高(P<0.01),并呈浓度依赖性,可明显刺激外周血淋巴细胞产生白细胞介素-2(IL-2)(P<0.01),但对IL-6及IL-10的产生作用无明显影响(P>0.05)。结论裙带菜多糖可促进CD+8、NK细胞增殖,产生Th1类细胞因子发挥免疫调节作用。     

羧甲基茯苓多糖对溃疡性结肠炎大鼠的研究

目的 研究羧甲基茯苓多糖通过调控Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB（TLR4/MyD88/NF-κB）信号通路对溃疡性结肠炎大鼠的改善作用。方法 从40只SPF级大鼠中随机分出8只大鼠作为正常组,其余大鼠用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）联合乙醇造模法建立大鼠溃疡性结肠炎模型,造模成功后大鼠随机分为模型组、对照组和低、高剂量实验组。低、高剂量实验组分别给予0.5%羧甲基茯苓多糖混悬液2 mL和1.5%CMP混悬液2 mL,灌胃;对照组给予0.5 g·kg^-1柳氮磺吡啶灌胃;正常组和模型组每日灌胃给予等量的生理盐水,连续给药14 d。末次给药结束后,测定大鼠体质量、脾质量、结肠长度和质量,用自动化血液学分析仪分析血液参数,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-12（IL-12）水平;用蛋白质印迹法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达水平。结果 正常组、模型组、对照组和低、高剂量实验组的肠质量分别为（1....     

茯苓总多糖对H1N1流感疫苗和乙肝疫苗抗原的佐剂作用

目的研究茯苓总多糖(PCP)对人用H1N1流感疫苗抗原和乙肝疫苗抗原的佐剂作用。方法在50℃条件下,采用水提、醇沉、透析和冷冻干燥方法制备PCP。苯酚-硫酸法测定总多糖含量,凝胶渗透色谱法测定多糖相对分子质量分布,毛细管电泳法测定单糖组成。H1N1流感病毒裂解液为抗原(每鼠3μg),与PCP(每鼠0.2或1.0 mg)联用,肌内注射免疫小鼠1次,免疫后14 d采用ELISA法测定小鼠血清特异性抗体Ig G滴度。乙肝表面抗原(HBs Ag)蛋白为抗原(每鼠2μg),与PCP(每鼠1.0 mg)联用,肌内注射免疫小鼠2次,于第2次免疫后14,21,28和35 d,采用ELISA法测定小鼠血清特异性抗体Ig G滴度。结果PCP中多糖含量为40.8%,由岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为1.00∶1.36∶0.48∶2.67。PCP与H1N1流感抗原联用免疫小鼠1次,能明显提高小鼠抗原特异性抗体Ig G滴度(P<0.05),效果与铝佐剂相当。与单用HBs Ag抗原组相比,PCP与HBs Ag联用初次免疫即能显著提高小鼠血清抗原特异性抗体滴度(P<0.01),且与铝佐剂组无显著性差异;二次免疫后14~21 d,PCP与HBs Ag联用组小鼠抗体水平进一步升高,且高于铝佐剂组(P<0.05),28~35 d PCP与HBs Ag联用组小鼠抗体滴度与铝佐剂组相当。结论PCP对人用H1N1流感疫苗和HBs Ag疫苗具有良好的佐剂活性,该多糖能显著提高小鼠体液免疫功能。     

香菇多糖增强肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性及TNF-α、IFN-γ的分泌

目的研究香菇多糖对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)杀伤活性及细胞因子分泌的影响。方法将从肺癌中分离的TIL分别置于含IL-2或IL-2加香菇多糖培养液中培养30天,观察TIL的杀伤活性和TNF-α、IFN-γ的分泌作用。结果用两种方法分别培养25天时,IL-2加香菇多糖培养的TIL杀伤活性及TNF-α、INF-γ的分泌作用均明显高于IL-2培养的IIL(P<0．05)。结论香菇多糖具有增强TIL杀伤活性及TNF-α、INF-γ的分泌作用。     

IFNα-1b联合阿昔洛韦治疗对IM患儿EBV-DNA拷贝数转阴率及T淋巴细胞亚群的影响

目的研究干扰素α-1b(Interferonα-1b,IFNα-1b)联合阿昔洛韦治疗对传染性单核细胞增多症(Infectious mononucleosis,IM)患儿EBV-DNA拷贝数转阴率及T淋巴细胞亚群的影响。方法收集2018年5月至2021年5月在本院进行治疗的103例IM患儿的临床资料进行本次研究。按照不同治疗方式列为研究组(n=52,IFNα-1b联合阿昔洛韦治疗)和对照组(n=51,阿昔洛韦治疗)。比较两组EBV-DNA拷贝数转阴率、T淋巴细胞亚群水平及不良反应情况。结果(1)研究组患者EBV-DNA拷贝数转阴率(96.15%)显著高于对照组患者EBV-DNA拷贝数转阴率(78.43%),差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)治疗后,两组CD³⁺、CD⁸⁺较治疗前降低,CD⁴⁺、CD⁴⁺/CD⁸⁺较治疗前升高,且以研究组变化最为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)研究组不良反应率为11.54%,对照组不良反应率为7.84%,两组对比差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论?IFNα-1b联合阿昔洛韦治疗IM患儿的效率高,能够有效改善患者的T淋巴细胞亚群水平,且具有一定安全性,值得推广使用。     

诱生型一氧化氮合酶抑制剂对TNF—α诱导的人成骨细胞凋亡的保护作用

目的：探讨TNF－α对体外培养人成骨细胞的凋亡影响及iNOS抑制剂对其保护作用。方法：对流产胎儿颅骨分离培养人成骨细胞后分3组：对照组：TNF－α组（不同浓度），TNF－α加L－NMMA组。通过细胞计数绘制生长曲线，流氏细胞仪检测，电镜下观察超微结构的变化，三项指标检测成骨细胞凋亡情况。结果：TNF－α可诱导成骨细胞凋亡，并呈时间剂量依赖性，iNOS抑制剂L－NMMA可有效抑制TNF－α对成骨细胞的损伤作用。结论：iNOS抑制剂对TNF－α诱导的成骨细胞凋亡具有一定的保护作用。     

I型糖尿病不同病情血清IL-6、TNF—α、IFN—γ的变化及临床意义

目的探讨TNF-α、IFN-γ和IL-6促进I型糖尿病发生的机制。方法采用酶联免疫吸附法对新发病患者组（A组）19例、I型糖尿病并发酮症酸中毒组（B组）14例、I型糖尿病合并有慢性并发症组（C组）12例和正常对照组22例的血清IL-6、TNF-α和IFN—γ的水平进行测定。结果（1）A组、B组和C组治疗前的TNF—α、IFN-γ水平显著高于正常对照组（P〈0．01）;C组IFN-γ、TNF-α和IL-6水平高于A组、C组,差异有统计学意义（P〈0．05）;（2）A组给予胰岛素治疗血糖稳定3个月后TNF—α、IFN-γ下降,但仍高于对照组（P〈0．05）;C组高于A组、B组;（3）B组给予胰岛素治疗,血糖稳定2周后TNF-α、IFN-叫稍有下降,但较对照组仍高（P〈0．01）,C组给予胰岛素治疗1月后有下降,但仍显著高于正常对照组（P〈0．01）;（4）C组IL-6水平明显升高,在治疗后下降并接近正常对照组（P〈0．05）。结论（1）TNF-α、IFN-γ水平的升高可能是I型糖尿病的发病机制之-;（2）TNF-α、IFN-γ水平与I型糖尿病患者的病程有关,并可作为评价I型糖尿病的疗效指标之-;（3）在TIDM合并有慢性并发症患者中不仅存在TNF—α、IFN-γ水平的异常。同时也存在IL-6水平的异常,IL-6水平的升高有可能是TIDM发生慢性并发症机制之一。     

补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平及TNF-α、IFN-γ蛋白表达的影响

目的 观察补肾调冲方对卵巢早衰模型大鼠血清促卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH）、抗缪勒管激素（AMH）水平及卵巢组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）蛋白表达的影响。方法 60只SD雌性大鼠随机分为6组：对照组,模型组,补肾调冲方低、中、高剂量（以生药计24、12、6 g/kg）组,结合雌激素片（阳性药）组,每组10只。除对照组外,其余各组均ig雷公藤多苷片造模14 d,造模结束24 h后,给予相应药物治疗36 d。给药结束后,酶联免疫吸附（Elisa）法检测大鼠血清FSH、LH、AMH水平,免疫组化法检测卵巢组织TNF-α、IFN-γ蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组血清FSH、LH水平、卵巢TNF-α、IFN-γ蛋白表达均显著升高,AMH水平显著降低（P<0.05）;与模型组比较,各给药组FSH、LH水平、卵巢TNF-α、IFN-γ蛋白表达均显著降低,AMH水平显著升高（P<0.01）。结论 补肾调冲方可提高卵巢早衰大鼠卵巢储备能力,抑制卵泡封闭及黄体细胞凋亡,对卵巢早衰可能有治疗作用。