云芝糖肽慢性毒性的实验研究

大鼠和猴口服云芝糖肽(Fs-P)每天一次连续6个月。结果各剂量组对生长发育、血常规及血液生化、心电图均无明显影响,组织病理学检查未出现明显的异常。     

人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的采用人肺腺癌SPC—A-1细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,为体内研究肺腺癌发病机制及靶向治疗提供工具。方法通过直接皮下注射细胞悬液法建立裸鼠皮下移植瘤模型,以每只2×10^6SPC-A-1细胞数接种于5只裸鼠右前肢腋窝皮下,观察成瘤时间、移植瘤长径、短径、重量、体积及病理形态等情况。结果5只裸鼠均成瘤,平均成瘤时间为7d,28d后瘤体平均长径为（19．20±3．85）mm,平均短径为（14．94±2．78）mm,平均瘤体体积为（2144．10±1237．72）mm^3,平均瘤重为（1．37±0．60）g。镜下见大多数移植瘤包膜完整,瘤细胞腺样排列,呈腺癌形态,部分瘤块中央还可见局灶性坏死。结论成功建立裸鼠皮下人SPC-A-1肺腺癌模型,有利于后续体内实验。     

云芝糖肽对大鼠下丘脑内侧基底部电活动和免疫功能的影响

目的：探讨云芝糖肽（ＰＳＰ）免疫增强的作用物神经机制。方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠细胞外记录下丘脑内侧基底部（ＭＢＨ）神经元的单位放电，并检测淋巴细胞的增殖作用，结果：给大鼠灌骨ＰＳＰ１ｇ．ｋｇ＾－１，连续５天，使脾脏Ｔ淋巴细胞增加，并引起脾脏和外周血中Ｔ淋巴细胞的明显增殖，损毁ＭＢＨ能阻断这种增殖作用，ＰＳＰ使ＭＢＨ神经元的放电频率增加，加免疫抑制剂环孢菌素Ａ能去除这种作用，结论：神经系统（主要是Ｍ     

云芝糖肽发酵液提取工艺的优化

目的:对云芝糖肽发酵液提取的方法进行优化,提高成品的质量和收率。方法:以质量和收率为指标,通过对云芝糖肽发酵液进行纳滤处理,并进行醇沉工艺的优化,得到了符合质量要求的云芝糖肽成品。结论:通过对云芝糖肽发酵液进行纳滤处理和二次醇沉,可以大幅降低成品的酸不溶性灰分,避免了返工的损失,使云芝糖肽成品的质量和收率得到大幅的提高。     

文蛤糖肽(MGP0501)体外抗癌活性研究

文蛤糖肽MGP0501（Meretr ixmeretrix GlycoPeptide）是从海洋软体动物文蛤中分离的一种低分子糖肽。该文以溴化二苯偶氮盐（MTT）法检测MGPo0501对体外培养的癌细胞的抑制作用和稳定性。MGP0501对体外培养的人肺癌细胞株（A549），卵巢癌细胞株（HO8910），宫颈癌细胞株（Hela），鼻咽癌细胞株（KB），肝癌细胞株（SMMC-7721）生长均有很强的抑制作用，并且对鼠源性癌细胞株（B16）有更强的抑制作用，并呈量效关系。MGP0501有很好的温度稳定性，中性条件下抗肿瘤活性最强。证明MGP0501具有稳定的、广谱的抗癌活性。     

云芝糖肽中内毒素的同体系模型法定量

目的建立一种云芝糖肽（PSP）的细菌内毒素检查方法。方法应用同体系模型法与鲎实验法相结合，定量检测云芝糖肽中的细菌内毒素。结果把待测样品稀释300倍后，有效地排除了PSP中B-（1，3）D-glucan对鲎试验产品的干扰，结果准确可靠。结论此种方法适用于云芝糖肽中细菌内毒素的检测。     

紫草素对裸鼠皮下绒癌移植瘤的抗癌作用及机制的研究

为探讨紫草素在裸鼠体内抗滋养细胞肿瘤的机制，应用电化学发光法，计算瘤重抑制率，检测紫草素对绒癌的抑制作用；同时应用HE染色及免疫组化法检测用药组及溶媒对照组肿瘤组织的病理改变及抑制凋亡基因bcl．2蛋白的表达。结果：①紫草素组的平均瘤重明显低于溶媒对照组(P&;lt;0．05)，对肿瘤的抑制率大于30％；②紫草素组从停药第l天开始人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)急剧下降，至第3天最低降至2000 IU／L左右，显著低于溶媒对照组，差异有非常显著意义(P&;lt;0．01)；③紫草素能够使肿瘤组织细胞发生大面积坏死，坏死组织内可见细胞核凝固或碎裂，最后细胞核溶解消失；④紫草素组肿瘤组织细胞bcl-2蛋白表达明显减少。结论：紫草素能够有效地诱导绒癌裸鼠移植肿瘤细胞凋亡和坏死，明显抑制β-HCG的分泌；Bcl-2蛋白的表达下调是紫草素抗绒癌作用的重要机制。     

云芝糖肽通过调控p-糖蛋白 提高多柔比星胃癌细胞毒性的作用和机制研究

目的：探讨云芝糖肽辅助化疗药多柔比星协同增效的机制。方法：CCK-8检测云芝糖肽影响多柔比星在AGS胃癌细胞中细胞毒性的作用;LC-MS/MS法检测云芝糖肽对多柔比星在AGS细胞内累积的影响;RT-PCR检测云芝糖肽对AGS细胞P-gp的mRNA表达的影响;流式细胞术检测云芝糖肽对AGS细胞表面P-gp蛋白表达的影响。结果：云芝糖肽能显著增加多柔比星对AGS胃癌细胞的毒性;中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著增加多柔比星在AGS胃癌细胞内的累积;中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著减少AGS胃癌细胞p-gp mRNA的表达,显著减少AGS胃癌细胞表面P-gp蛋白的表达。结论：云芝糖肽能提高多柔比星在AGS细胞上的药效,其机制可能与减少细胞P-gp表达有关,减少了多柔比星在肿瘤细胞的外排,增加胞内浓度,从而提高药效。     

云芝糖肽通过调控p-糖蛋白 提高多柔比星胃癌细胞毒性的作用和机制研究

目的：探讨云芝糖肽辅助化疗药多柔比星协同增效的机制。方法：CCK-8检测云芝糖肽影响多柔比星在AGS胃癌细胞中细胞毒性的作用;LC-MS/MS法检测云芝糖肽对多柔比星在AGS细胞内累积的影响;RT-PCR检测云芝糖肽对AGS细胞P-gp的mRNA表达的影响;流式细胞术检测云芝糖肽对AGS细胞表面P-gp蛋白表达的影响。结果：云芝糖肽能显著增加多柔比星对AGS胃癌细胞的毒性;中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著增加多柔比星在AGS胃癌细胞内的累积;中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著减少AGS胃癌细胞p-gp mRNA的表达,显著减少AGS胃癌细胞表面P-gp蛋白的表达。结论：云芝糖肽能提高多柔比星在AGS细胞上的药效,其机制可能与减少细胞P-gp表达有关,减少了多柔比星在肿瘤细胞的外排,增加胞内浓度,从而提高药效。     

提高人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤成瘤率的方法学研究

目的：提高人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤的成瘤率。方法：人肺腺癌SPC-A-1、GLC-82培养细胞或相应的瘤组织匀浆接种于裸鼠皮下之前,先用富含生长因子的小鼠肉瘤S180腹水上清液按比例稀释,然后在裸鼠背部或腋窝皮下接种。观察人肿瘤细胞或肿瘤组织在加入小鼠肉瘤S180腹水上清液后,对移植瘤生长速度及成瘤率的影响。结果：加入小鼠肉瘤S180腹水上清液后,人肺腺癌SPC-A-1和GLC-82成瘤率明显提高,而且移植后的人肿瘤生长速度较未加小鼠肉瘤S180腹水上清液的人肺腺癌细胞明显加快。结论：小鼠肉瘤S180腹水上清液能明显提高人肺腺癌SPC-A-1和GLC-82裸鼠皮下移植瘤的成瘤率,促进肿瘤生长。     

罗格列酮增强顺铂对肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的观察罗格列酮(ROZ)和顺铂(DDP)合用对人肺腺癌A549细胞裸小鼠移植瘤生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法采用A549细胞株建立人肺腺癌裸鼠模型,将28只成瘤雌裸小鼠随机分成7组:①对照组(生理盐水0.2ml);②DDP低剂量组(1mg.kg-1);③DDP高剂量组(4mg.kg-1);④ROZ低剂量组(10mg.kg-1);⑤ROZ高剂量组(30mg.kg-1);⑥DDP低剂量组+ROZ低剂量组;⑦DDP低剂量组+ROZ高剂量组,隔天腹腔注射给药,共8次。于最后一次给药后48h处死各组小鼠,收集瘤标本行光镜观察,免疫组化检测PPARγ、PTEN和pAkt蛋白表达情况。结果①各实验组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤质量明显低于对照组(P<0.01)。低、高剂量ROZ联合用药组较低剂量顺铂组抑瘤作用明显增强(P<0.05),其瘤重抑制率分别为52.11%和83.8%。②免疫组化:低、高剂量罗格列酮组与对照组比较,PPARγ、PTEN的表达上调,而pAkt的表达呈现下调,差异具有显著性(P<0.05),联合用药组该调节作用进一步增强(P=0.00)。③不良反应:高剂量顺铂组出现不良反应,其余各组无明显不良反应。结论罗格列酮能够增强顺铂对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,其作用机制可能与罗格列酮激活PPARγ,上调PTEN的表达和抑制pAkt的表达有关。     

二味康口服液对小鼠Lewis肺癌的抗癌作用

探讨二味康口服液的抗癌作用。方法：用Ｌｅｗｉｓ肺癌小鼠模型,观察二味康抗癌作用。结果：二味康口服液预防和治疗给药均能延长Ｌｅｗｉｓ肺癌小鼠平均生存时间;对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌瘤重增长及自发肺转移有明显抑制作用。结论：二味康口服液有明显的抗癌作用,与环磷酰胺合用作用可见增强。     

nobiliside A隐形纳米脂质体对小鼠RM-1前列腺癌的抑制作用

目的比较nobiliside A隐形纳米脂质体(NASNL)和nobiliside A普通脂质体(NACL)对小鼠RM-1前列腺癌的抑制作用。方法 RM-1前列腺癌荷瘤小鼠随机分为6组(均n=10):阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(环磷酰胺20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、NACL低、高剂量组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1)、2 mg·kg~(-1)·d~(-1))和NASNL低、高剂量组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1)、2 mg·kg~(-1)·d~(-1)),均尾静脉注射给予相应药物,连续7 d。通过比较各组小鼠的肿瘤生长曲线、抑瘤率、肿瘤组织的病理变化等考察2种脂质体的抑瘤效果。结果 NASNL两剂量组的肿瘤生长速度均低于相应剂量的NACL组(P<0.05)。NASNL两剂量组的抑瘤率均高于相应的NACL组,其中NASNL高剂量组的抑瘤率是NACL高剂量组的2倍。NASNL各组肿瘤细胞坏死程度高于NACL各组。结论 NASNL的肿瘤抑制作用明显优于NACL。     

慢病毒介导NK4过表达对人肺腺癌移植瘤生长的影响

目的：研究瘤内注射慢病毒介导的NK4过表达对肺腺癌移植瘤生长、转移以及微血管生成的影响。方法：构建人肺腺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型并随机分为3组。通过瘤内注射的方式分别向三组注射过表达慢病毒LV-NK4 (50 μl, 6×108 TU/ml)、空载慢病毒LV-con (50 μl, 6×108 TU/ml)和PBS(50 μl)。观察28天后将裸鼠处死,测量瘤体积及瘤重。HE染色观察瘤组织、肺组织情况。采用TUNEL法检测各组瘤体细胞凋亡情况。免疫组化染色检测c-Met蛋白的表达,微血管密度(MDV)检测评估血管生成。结果：小鼠荷瘤实验显示,LV-NK4组瘤体积(316.166±89.290 mm3)小于LV-con组(812.714±348.967mm3)和PBS组(838.598±390.780mm3),差异具有统计学意义,P＜0.05。LV-NK4组瘤重(0.4344±0.1234g)小于LV-con组(0.7018±0.2227g)和PBS组(0.7829±0.1510g),差异具有统计学意义,P＜0.05。肿瘤组织病理结果显示LV-NK4组凋亡、坏死明显增多;LV-NK4组微血管密度(MDV)为(11.2±2.78),较LV-con组(18.90±3.479)和PBS组(22.00±5.40)明显减少,P＜0.01。LV-con组和PBS组肺部可见明显肿瘤转移灶,LV-NK4组未见明显转移灶,RT-PCR/WB检测证明移植瘤组织中NK4的表达增加。免疫组化染色显示LV-NK4组裸鼠瘤组织c-Met蛋白表达明显减少。结论：慢病毒介导的NK4过表达抑制肺腺癌移植瘤的生长及肺转移。     

虾青素对人肺癌 A549 细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响

目的 探讨虾青素对人肺癌 A549 细胞裸鼠移植瘤放射治疗敏感性的影响。 方法 20 只 BALB/c Nude 裸鼠随机均分为 4 组： 对照组（小鼠灌胃 10%DMSO 的超纯水）, 虾青素组（小鼠灌胃 10%DMSO 的虾青素悬液, 剂量为 50 mg/kg, 每隔 1 d 给药 1 次, 共给药 7 次）, 照射组（小鼠灌胃 10%DMSO 的超纯水, 肿瘤生长部位使用加速器局部照射, 5 Gy/次, 总剂量 15 Gy）及联合组（同时进行虾青素灌胃和局部照射处理）。 肿瘤最短直径达到 5 mm 以上开始实验, 每隔 1 d 测量移植瘤长短直径计算肿瘤体积并绘制移植瘤生长曲线, 末次给药后第 2 天处死小鼠, 取肿瘤块称质量并将其制成石蜡切片。 免疫组化方法检测石蜡切片内肿瘤细胞增殖抗原 Ki-67、磷酸化 STAT3（p-STAT3）表达及细胞凋亡（Tunnel 染色）情况。 结果 与对照组比较, 虾青素组、照射组及联合组瘤体生长速度减慢（P < 0.05）, 以联合组瘤体生长速度最慢。 对照组、虾青素组、照射组和联合组瘤体质量、Ki-67、p-STAT3 表达水平均依次降低, 抑瘤率、细胞凋亡率均依次升高, 组间多重比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 虾青素能够通过抑制 p-STAT3 表达增加肺癌 A549 细胞裸鼠移植瘤的放疗敏感性。     

Therapeutic potential of human serum albumin nanoparticles encapsulated actinonin in murine model of lung adenocarcinoma

Non-small cell lung cancer comprises 85% of the global lung cancer cases. Conventional chemotherapeutics possess certain limitations like systemic toxicity and drug resistance that requires the development of new therapeutic agents for successful treatment of lung cancer. Actinonin, a human peptide deformylase inhibitor, has demonstrated anti-cancerous properties in various leukemias and solid cancer types. However, it has limited therapeutic application because of its low bioavailability and systemic toxicity if administered in free form. This limitation can be overcome by using nano-delivery systems that will increase the therapeutic efficacy of actinonin. In the present study, human serum albumin actinonin nanoparticles were prepared using a desolvation technique and folic acid was conjugated to lysine residues of albumin for effective delivery to the lung. The lung adenocarcinoma model was established 24 weeks after intraperitoneal administration of urethane and chemotherapeutic efficacy of free as well as nanoencapsulated actinonin was evaluated. This study demonstrated anti-proliferative potential of folic acid conjugated human serum albumin nanoparticles encapsulating actinonin. The intraperitoneally administered nanoformulation exhibited sustain release profile of actinonin with longer half-life and mean retention time. The reduced dose frequency resulted in therapeutic efficacy comparable to free drug in vivo in terms of 100% survival and reduced tumor burden along with downregulation of epidermal growth factor receptor, folate receptor α and peptide deformylase expression in lung adenocarcinoma mice model. Therefore, actinonin encapsulated albumin nanoparticles-based therapy holds great potential as an alternative strategy to improve its anti-cancerous activity against lung adenocarcinoma.     

复方丹皮酚纳米乳对裸鼠体内人源肺癌A549的影响

目的研究复方丹皮酚纳米乳对裸鼠体内人源肺癌A549的影响及部分机制研究。方法建立裸鼠人源肺癌A₅₄₉移植瘤模型,灌胃给予不同剂量的复方丹皮酚纳米乳(48、96和192 mg·kg^-1),观察其对A₅₄₉移植瘤的治疗作用,每5 d使用游标卡尺测量裸鼠移植瘤的最长径和最短径,动态观察裸鼠移植瘤的生长情况,并计算其体积,以此绘出裸鼠移植瘤生长曲线。通过酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,初步探讨其作用机制。结果所有治疗组均对裸鼠A549移植瘤肿瘤体积、肿瘤体积增长率有一定的抑制作用,且随剂量的增加,抑制作用更强;与荷瘤对照组比较,复方丹皮酚纳米乳高剂量组和康莱特注射液组血清白细胞介素2表达明显升高(P<0.01、P<0.01),复方丹皮酚纳米乳中、高剂量组和康莱特注射液组肿瘤坏死因子α表达水平明显升高(P<0.05、P<0.01、P<0.01)。结论复方丹皮酚纳米乳对人源肺癌A₅₄₉裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用,其作用机制可能与促进细胞因子白细胞介素2和肿瘤坏死因子α的表达有关。     

Ad-ING4抑制人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长

目的 研究腺病毒介导的ING4基因(Ad-ING4)对肺癌体内外的抑制作用及其潜在的分子机制.方法 体外采用50 MOI的Ad-ING4感染A549肺癌细胞,并用MTT法检测Ad-ING4对A549细胞的抑制作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡率.采用A549细胞株建立人肺癌裸鼠模型,瘤体局部注射干预用药,每隔5天测量一次肿瘤体积,并计算瘤重抑瘤率;瘤块免疫组化检测ING4、生存素(survivin)、CD34、HIF-1等基因的表达.结果 Ad-ING4感染A549细胞抑制率可达47.62%;72 h凋亡率为18.5%;荷瘤裸鼠经治疗后,Ad-ING4组和顺铂(DDP)组的肿瘤体积、瘤重均明显缩小,其抑瘤率分别达到42.43%和46.47%,DDP组出现不良反应;免疫组化检测Ad-ING4组和DDP组与对照组比较,生存素、CD34、HIF-1的表达下调(P<0.01).结论 Ad-ING4对人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用.其抑瘤机制可能与下调生存素、CD34、HIF-1的基因表达进而诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成等有关.     

人8羟-基鸟嘌呤DNA糖苷酶1基因低表达增加肺腺癌细胞对博来霉素的敏感性

目的研究DNA碱基切除修复基因人8羟-基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(hOGG1)低表达增加肺腺癌细胞对博来霉素(BLM)的敏感性的作用,为化疗增敏提供更多的实验依据。方法以肺腺癌A549细胞和通过稳定转染hOGG1核酶而获得的hOGG1低表达的A549-R细胞为研究对象,用MTT试验和集落形成抑制试验测定不同浓度BLM处理后两种细胞的存活率和形成集落的能力;体外微核试验及单细胞凝胶电泳检测两种细胞微核率及DNA损伤与修复的差异。结果BLM作用下A549-R细胞的IC50及集落形成率显著低于A549细胞;BLM可诱导两种细胞的微核率增高,而在相同浓度下A549-R细胞微核率较A549细胞更高;单细胞凝胶电泳结果显示,BLM作用下两种细胞均有不同程度DNA损伤,A549-R细胞的拖尾率和DNA迁移长度显著大于A549细胞;损伤后A549细胞修复发生较A549-R早,与A549细胞相比A549-R细胞更不易修复。结论hOGG1低表达使肺腺癌细胞DNA修复能力降低,从而使其对BLM的敏感性增强。