以丈夫外周血淋巴细胞为靶抗原筛选HLA抗血清的初步报道

本文采取补体依赖微量细胞毒方法筛选HLA抗血清。一般以产妇血为筛选对象,20～100个随机个体淋巴细胞为靶细胞进行筛选。由于通常产妇血中含有的HLA抗体总是针对其丈夫白细胞HLA抗原,这是因为夫妇间HLA差异通过胎母免疫而产生的抗体。故本文可以丈夫外周血T、B淋巴细胞取代随机个体细胞作靶抗原来检测。共筛选了312例妊娠妇女,检出阳性血清44例(14.10％),其中强阳性20例(6.41％),较—般随机细胞为靶抗原阳性检出率为高。由于检测时作了T、B细胞分离,故结果显示了含HLA-A、B、C抗血清34份,可能含DR抗血清19份。在此同时对其中30例产妇同时用36随机个体细胞为靶抗原,4例产妇用其胎儿脐带血T、B淋巴细胞为靶抗原进行检测以作对照,三组结果显示非常相关,无显著差异。这表明了以丈夫血细胞为靶抗原筛选HLA抗血清方法简单,不需要大量随机个体细胞,灵敏度高,因此宜在常规筛选HLA抗血清的实验室,特别是在产科医院中推广施行。     

微量免疫法制备小鼠抗人补体C9抗血清

目的　建立一种简便有效的免疫方法 ,制备抗人补体C9抗血清。方法　将鉴定好纯度的免疫原稀释至恰当浓度 ,以硝酸纤维素膜吸附抗原 ,将之埋入小鼠背部皮下 ,并再次免疫 1～ 2次。间接ELISA法鉴定抗血清效价 ,免疫印迹实验鉴定抗血清的免疫反应特异性。结果　间接酶联免疫吸附实验滴定抗血清的效价约为 1× 10 -5,抗血清对正常人血清成分进行的免疫杂交实验得到特异性的C9蛋白条带。结论　以硝酸纤维素膜吸附抗原的微量免疫方案获得特异性和效价均佳的免疫效果。     

兔抗MAGE-n血清的制备、纯化及鉴定

目的: 制备高效价、特异性的兔抗人MAGE-n血清。方法: 对原核表达的MAGE-n蛋白进行纯化, 与弗氏佐剂混合免疫新西兰兔制备抗血清, 用硫酸铵盐析法及溴化氰活化的Sephrose4B(CNBr-ActivatedSephrose4B)亲和层析柱纯化抗血清, 以双向免疫扩散实验、ELISA、Westernblot和免疫组化对兔抗人MAGE-n血清进行鉴定。结果: 经免疫得到高效价的兔抗人MAGE-n血清, 抗血清能够与MAGE-n特异性结合, 免疫组化结果表明MAGE-n是一种胞质蛋白。结论: 用MAGE-n蛋白与弗氏佐剂混合免疫兔, 制备得到高效价的抗血清, 纯化后的特异性兔抗人MAGE-n血清, 为进一步研究MAGE-n在各种组织中的表达奠定了基础。     

6种虫媒病毒蛋白芯片检测方法的建立

目的 建立针对6种虫媒病毒的蛋白芯片检测方法,用以检测流行性乙型脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、登革病毒(1～4型)、西尼罗病毒、西部马脑炎病毒和东部马脑炎病毒的特异性抗体.方法 将病毒特异性抗原作为捕获抗原点样制备蛋白芯片,利用双抗夹心ELISA原理检测血清中的病毒特异性抗体.首先利用免疫兔血清进行特异性诊断抗原的筛选,并对抗体芯片检测条件进行优化,然后采用56份临床疑似的阳性血清标本及阴性对照标本对该方法进行验证,并与常规ELISA方法进行比对.结果 共筛选出11个特异性较好的重组诊断抗原.抗原点样浓度在0.125 ～0.900mg/ml时可获得良好的检测效果,血清检测范围为1:100～1:1000.对26份临床疑似的蜱传脑炎病毒血清标本,22份登革病毒血清标本及8份流行性乙型脑炎病毒临床血清标本的检测结果为:共检测出蜱传脑炎病毒IgG阳性血清标本20份,阳性检出率为76.9％,IgM阳性血清标本17份,阳性检出率65.3％,与ELISA检测符合率分别为96.1％和84.6％.乙型脑炎病毒IgG阳性血清4份,阳性检出率50.0％,IgM阳性血清5份,阳性检测率62.0％,与ELISA检测符合率分别为87.5％和100％.登革病毒IgG阳性血清标本13份,阳性检出率63.6％,IgM阳性血清标本14份,阳性检测率68.1％,与ELISA检测符合率分别为86.3％和90.1％,结果经一致性Kappa检验后,与ELISA检测结果一致性良好.阴性对照血清结果显示检测特异性为100％.结论 本研究建立的虫媒病毒抗体芯片检测方法具有较高的特异性和可靠性,可用于6种虫媒病毒抗体的临床检测.     

免疫程序对抗猪血浆纤维连接蛋白抗血清效价的影响

目的 制备兔抗猪FN抗血清,并探讨不同免疫途径、免疫次数及兔品种对抗血清效价水平的影响。方法 用猪血浆纤维连接蛋白（FN）分别免疫纯种新西兰兔和杂种兔,将兔分别随机分成4组,即皮下注射1次及另加淋巴结注射5次组和3次组、肌肉注射接种1次及另加静脉注射5次组和3次组,用免疫双扩散法测定FN抗血清效价。结果 两种免疫途径都可产生特异性抗血清。皮下+淋巴结途径抗血清效价明显高于肌肉+静脉注射（p<0.05）,5次接种血清效价较3次高（p<0.05）,新西兰兔血清效价高于杂种兔（p<0.05）。结论 制备兔抗猪血浆FN血清,皮下+淋巴结注射和多次加强免疫是较好的免疫方法,纯种新西兰兔较杂种兔更易产生兔抗猪FN抗血清。     

BPI N端优势抗原表位的模拟合成及其抗血清的制备

目的通过生物信息学模拟合成杀菌/渗透增强蛋白氨基端(BPIN端)优势抗原表位肽,免疫动物获得相应抗血清。方法利用生物信息学分析BPIN端(1-199)氨基酸序列的抗原性、亲水性、可塑性、表面可及性和二级结构等理化特性,据此设计合成TA/IK两条多肽,将其与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联后,免疫家兔获得相应抗血清;采用间接ELISA法鉴定多肽的抗原性、测定血清抗体效价,Westernblot鉴定抗血清特异性。结果人工合成BPIN端TA/IK两个B细胞表位肽;ELISA检测证实TA/IK抗原肽能与商品化兔抗人BPI55多克隆抗体结合;所获TA/IK抗血清效价分别为1∶51200和1∶25600;Westernblot证实TA/IK抗血清能与BPI55标准品特异性结合。结论模拟合成的TA/IK抗原肽确为BPIN端优势抗原表位,相应抗血清可用于BPIN端功能性片段的检测鉴定。     

罗汉果甜苷V人工抗原免疫原性检测法的建立与评价

目的制备罗汉果甜苷V(mogroside V,MogV)-载体蛋白复合物人工抗原及抗血清,建立抗血清与MogV特异性反应的检测方法,为进一步制备MogV的单克隆抗体、建立快速检测MogV的ELISA法提供技术基础。方法将MogV与丁二酸酐、载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HSA)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,通过紫外扫描光谱计算出结合的半抗原数目;以此抗原免疫Balb/c小鼠,制备抗血清,并通过ELISA法检测效价和特异性。结果合成的人工抗原MogV-HS-BSA结合比约为44∶1,MogV-HS-HSA结合比约为64∶1;通过免疫小鼠得到特异性针对MogV的抗血清,血清效价较高。结论 MogV人工抗原有较好的免疫原性,建立的免疫原性检测方法简便可行。     

用噬菌体多肽库筛选日本血吸虫表膜抗原的模拟表位

为探索可用于诊断的模拟表膜抗原。采用纯化的兔抗表膜抗原IgG作探针 ,免疫筛选噬菌体随机十二肽库 ,经 3轮生物淘洗后 ,随机挑选 30个噬菌体克隆 ,用ELISA检测其与筛选抗体的特异性结合 ,选择两个阳性克隆进行DNA序列测定 ,并用斑点ELISA比较检测正常人和日本血吸虫病患者血清各 10份。结果显示 ,随机挑选的 30个克隆中有 9个噬菌体克隆与筛选的抗体有特异性的结合反应。DNA测序结果显示 ,两个阳性噬菌体克隆 (携带的抗原表位 )所演绎的氨基酸序列与GenBank已知的氨基酸序列无同源性。斑点ELISA结果显示两个抗原表位可被血吸虫病患者血清呈特异性识别     

IgE的纯化、抗IgE血清的制备及血清中IgE测定的临床应用

<正> 测定血清中 IgE 含量用的 IgE 抗血清,国外基本上是用 IgE 骨髓瘤患者血清中提取的 IgE 免疫动物而成。极少利用小儿高IgE 血清提取抗原。我们从1例皮肤瘙痒症高 IgE 患者血清中提取纯化了 IgE 抗原,并制成特异性兔抗 IgE 血清,建立测定血清中 IgE 方法,并初步应用于临床。     

发现一例检出HLA—A11.1的抗体

采用第11届国际组织相容性讨论会血清,检出 HLA-A11 的两个新分解物 A11.1和 A11.2.又用这些新指定的特异鉴定了20份抗 A11血清,发现其中有一份 R125血清为能单独检出 A11.1的抗血清,R 值为0.8006,SI 为90.32%.     

肿瘤睾丸抗原OY-TES-1氨基端截短蛋白及其多克隆抗体的制备

目的获得原核表达的OY-TES-1氨基端截短蛋白(OY-TES-1-N),并制备其多克隆抗体。方法扩增编码OY-TES-1-N 268个氨基酸(A6-R273)的cDNA序列;将PCR产物插入原核表达载体pMAL-C2,构建重组质粒,并转化DH5α菌;通过蓝白斑筛选、DNA测序筛出阳性菌;在优化条件下用IPTG对阳性菌进行诱导表达MBP/OY-TES-1-N融合蛋白;上Amyloseresin亲和层析柱纯化,行Western blot鉴定。以融合蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,经活化琼脂糖微球纯化后,采用ELISA法及Western blot法分别检测抗血清的效价和多克隆抗体的特异性。结果成功诱导表达出MBP/OY-TES-1-N融合蛋白。以该蛋白免疫新西兰兔制备抗血清,抗体效价为1∶1 000,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合。结论成功地表达并纯化了MBP/OY-TES-1-N融合蛋白,并制备了特异性多克隆抗体。     

系统性红斑狼疮患者血清特异性的噬菌体7肽的筛选、鉴定及其意义

目的 筛选和鉴定与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清特异性结合的噬菌体7肽,并分析其实际意义.方法 分别选取正常人及SLE患者血清各30例,先后用正常人混合血清及SLE患者混合血清作为筛选配基,对噬菌体随机7肽库进行亲和筛选、扩增,获得SLE血清特异性结合的噬菌体克隆,并用患者混合血清进行Dot-ELISA实验鉴定获得的噬菌体克隆,进而分别用SLE患者及正常人血清各12例进一步鉴定阳性噬菌体的混合克隆,确定阳性噬菌体克隆与个体血清之间的结合情况;并对最终鉴定的噬菌体克隆进行测序与比对分析.结果 筛选到与SLE患者混合血清特异性结合的阳性克隆12个;阳性噬菌体混合克隆与SLE患者个体血清反应阳性率明显高于其与正常人血清的反应率;序列分析显示阳性噬菌体克隆的抗原表位与大肠杆菌、沙门菌、人类免疫缺陷病毒(HIV)有一定的同源性,但与人类抗原表位无关.结论 噬菌体随机7肽库筛选出的SLE特异性多肽可能用于制备SLE诊断试剂,同时SLE患者血清中存在与病原体抗原表位结合的抗体成分,提示SLE可能与病原体感染有关.     

沙鼠IgG兔抗血清的制备及其在IgG抗体检测中的应用

目的用纯化的蒙古沙鼠血清IgG制备相应兔抗血清，并用于幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）疫苗免疫后沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。方法采用饱和硫酸铵沉淀法和Q sepharose high performance阴离子交换层析法纯化蒙古沙鼠血清IgG，免疫日本大白耳兔制备兔抗沙鼠IgG抗血清并进行rProtein A亲和纯化，建立间接ELISA方法用于检测Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠后血清抗原特异性IgG水平。结果以纯化的蒙古沙鼠血清IgG（纯度大于98％）免疫日本大白耳兔获得相应兔抗血清，经亲和层析后其纯度大于90％，回收率约为85％，双扩效价为1：16，ELISA效价为1：320000；ELISA检测结果显示Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠于第2次免疫后产生高水平IgG，第4次免疫后第7天IgG水平达到高峰，随后几周仍然保持高水平。结论所制备的兔抗沙鼠IgG抗体可以用于蒙古沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。     

抗A和抗B单克隆抗体的制备及其在血型检定中的初步应用

本试验用A和B型人红细胞混合悬液免疫BALB/c小鼠,取免疫脾细胞与同系鼠Sp 2/0骨髓瘤细胞融合,建立了5株分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株。3次克隆化后,细胞株稳定分泌单克隆抗体已10个月。经A、B、O各型红细胞鉴定及凝集抑制试验、吸收释放试验证明:H_2、H_5、B_7株是特异性抗A,D_5株是特异性抗B。本试验制备的单克隆抗体亲和力高于人抗血清,用保护剂稀释后稳定性良好。用单克隆抗体和人抗血清对献血员血液标本1782份,脐带血58份进行血型检定,所得结果完全一致。     

抗A型和抗B型血型单克隆抗体的制备及其在血型鉴定中的初步应用

本试验用A型和B型人红细胞混合悬液免疫BALB/c小鼠,取免疫脾细胞与同系鼠Sp2/0骨髓瘤细胞融合,建立了5株分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株。3次克隆化后,细胞株稳定分泌McAb已6个月。经A、B、O各型红细胞鉴定及阻断试验、吸收释放试验结果证明:H_2、H_5、B_7株是特异性抗A型抗原的,D_5株是特异性抗B型抗原的。本试验制备的McAb亲合力高于人抗血清,用保护剂稀释后稳定性良好。用McAb和人抗血清对献血员血液标本692份,脐带血58份做血型鉴定所得结果完全一致。     

大肠杆菌核心型血清学检测方法的建立

目的 制备大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）核心型单一特异性抗血清,建立Ｅ．ｃｏｌｉ核心型血清学检测法,检测致泻性Ｅ．ｃｏｌｉ核心型。方法 ＥＬＩＳＡ间接法,用吸收后单一核心型特异性抗血清检测鉴定Ｅ．ｃｏｌｉ核心型。结果 （１）吸收后获得单一核心型特异性抗血清,对Ｅ．ｃｏｌｉ核心型的检测结果与相应单克隆抗体检测结果完全相同;（２）经鉴定表明,吸收后单一核心型特异性抗血清识别结合的抗原万分既非Ｅ．ｃｏｌｉ核酸     

环丙沙星特异性抗体的研制

目的:制备抗环丙沙星(CIP)的特异性抗体,以ELISA方法对其进行评价,为进一步研制CIP快速检测试剂盒打基础。方法:以阳离子化牛血清白蛋白(cBSA)为载体合成免疫原CIP-cBSA,免疫新西兰长耳白兔和BALB/c小鼠,同时以天然、阳离子化鸡卵清白蛋白(nOVA、cOVA)为载体合成包被原CIP-nOVA、CIP-cOVA进行抗血清的筛选,以间接(竞争)ELISA法测定抗血清的效价及特异性。结果:本试验获得7种抗血清,其中2种高特异性CIP抗血清,IC50达1μg/L,效价分别为4000和2000(以A450值为1.0时的抗血清稀释倍数表示),两种抗血清与恩诺沙星(ENR)、诺氟沙星(NOR)、氧氟沙星(OFL)存在不同程度的交叉反应,与青霉素(PEN)、卡那霉素(KAN)和庆大霉素(QEN)无交叉。结论:可满足目前中国动物性食品安全检测的需要,为研究组织中CIP残留及开发CIP快速检测试剂盒奠定了基础。     

HER2/neu抗体对SKBR3乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响

目的研究抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ胞外区的特异性抗体对ＳＫＢＲ３乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响。方法Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法及抗体介导的特异性细胞增殖试验；筛选乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ的ＥＬＩＳＡ方法。结果试验发现单抗ｃ－ｎｅｕ－５对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化有明显促进作用，但对细胞增殖的影响不明显；而单抗ｃ－ｎｅｕ－２对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化及细胞增殖均有明显作用。在此基础上，收集乳腺癌病人血清１４份，分离纯化其血清ＩｇＧ，并经ＥＬＩＳＡ方法筛选出５份乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ。细胞增殖试验发现该５份标本中有３份对ＳＫＢＲ３细胞增殖有明显抑制作用。选其中１份抑制增殖的阳性血清ＩｇＧ进一步研究其对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化的影响，结果发现该病人血清ＩｇＧ对细胞酪氨酸磷酸化也有抑制作用。结论抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ的特异性抗体可能通过抑制细胞的信号传递系统而抑制肿瘤生长。     

肠出血型大肠埃希菌O157：H7 EspF蛋白多克隆抗体的制备和初步纯化

目的制备肠出血型大肠埃希菌（EHEC）O157：H7EspF蛋白多克隆抗体并初步纯化。方法生物信息学方法分析EHECO157：H7EspF蛋白的柔韧性、亲水性、表面可能性及抗原表位,选取1条由15个氨基酸残基组成的多肽为半抗原,在其C端偶联钥孔血蓝蛋白（KLH）,免疫新西兰大白兔制备抗血清。ELISA测定抗血清效价,免疫印迹法鉴定其特异性,辛酸-硫酸铵法初步纯化抗血清,SDS-PAGE检测抗体纯度。结果选择EspF蛋白抗原指数最高的肽段72-TPSRPAPPPPTSGQA-86（0.506）为半抗原,合成抗原多肽经高效液相色谱鉴定,纯度为95.78%,经质谱分析其分子量为1563.76Mr,与目的多肽分子量一致;加强免疫3次后,EHECO157：H7EspF蛋白的抗血清效价达1：2048000;该血清对EHECO157：H7野生株和espF突变株（△espF）的EspF蛋白均有特异性,并经辛酸-硫酸铵法获得一定纯度的抗体。结论成功地制备了效价高、特异性强的EHECO157：H7EspF蛋白多克隆抗体。     

HLA-B27抗血清筛选

<正>HLA-B27是人类白细胞B位点上的一个抗原,它与强直性脊柱炎（anky losing spondy litis,AS）的发病密切相关。国内外许多研究表明AS患者中95％以上为HLA-B27阳性,而正常人群中仅4％～6％左右为阳性。HLA-B27抗原检测现已作为临床诊断强直性脊柱炎的重要标志之一。目前国内大多数实验室仍采用血清学方法来检测B27抗原,因而制备一套特异性好,效价高的HLA-B27抗血清是至关重要的。我们在三年时间内收集了 3 000份产后血,进行筛选。