微透析结合HPLC-ECD测定头孢他啶在大鼠血中含量及其药动学研究

 目的研究头孢他啶在大鼠血中的药动学。方法采用血液微透析技术结合高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD),以甲醇-0.25mol·L^-1Na₂HPO₄(10:90)(pH7.0)为流动相,检测电压为800mV,在线分析静脉注射头孢他啶(90mg·kg^-1)后大鼠的血药浓度,经过体内回收率校正后,用3P87程序拟合药动学参数。结果头孢他啶在0.1～100.0μg·mL^-1内线性关系良好(r=0.9998),所测血药浓度经3P87程序拟合后药-时曲线符合一室模型,t_1/2为27.82min,c_max为189.40μg·mL^-1,AUC为7603.00μg·min·mL^-1。结论本方法操作简便,结果准确,能满足头孢他啶药动学分析的需要,为药动学研究提供了新的方法学上的参考。     

左旋多巴在大鼠血液和纹状体细胞外液中的药动学行为

 目的 探讨左旋多巴在大鼠血液和纹状体细胞外液药物浓度随时间变化规律。方法 大鼠单次灌胃给予左旋多巴48 mg·kg-1和苄丝肼12 mg·kg-1后,采用脑微透析活体取样和高效液相色谱技术,测定给药后6 h内不同时间点大鼠血浆和纹状体细胞外液左旋多巴浓度,应用3P87药动学程序拟合药动学参数。结果 左旋多巴在血浆及纹状体细胞外液药-时曲线均符合一室模型,左旋多巴在纹状体细胞外液半衰期（t_1/2）、达峰时间（t_max）、达峰浓度（ρ_max）,药-时曲线下面积（AUC_0→∞）分别为（63.25±25.80） min, （34.21±8.70）min,（112.98±76.85）μg·L-1,（14 443±8 744）μg·min·L-1（n=7）,血浆t_1/2,t_max,ρ_max,AUC_0→∞分别为（78.94±7.95） min, （6.763±3.579) min, （4 373±1 815）μg·L-1,（509 940±134 619）μg·min·L-1（n=7）,其中左旋多巴在纹状体细胞外液和外周血t_1/2相近（P>0.05）,而纹状体t_max远大于外周血（P<0.01）。结论 左旋多巴在血液和作用靶部位纹状体药物浓度随时间变化不完全一致,血药浓度变化规律不能完全反映药物在脑内变化情况。     

自由活动大鼠颈静脉微透析法研究丹参素的药动学参数

目的:应用自由活动大鼠颈静脉微透析实验技术研究丹参素在大鼠体内的药代动力学参数.方法:10只SD大鼠随机分为2组,每组5只,在右颈外静脉植人微透析导管,术后恢复3 d.从导管将微透析探针插入上腔静脉并平衡30 min后,按40mg·kg~(-1)单剂量静脉注射或灌胃丹参素后采集透析液,用HPLC紫外检测器分析透析液中丹参素的含量,换算成血药浓度,并计算药动学参数.结果:静脉注射组丹参的药动学参数:终末段消除半衰期t_(1/2zeta)为(69.62±33.42) min,药-时曲线下面积AUC_(0-∞)(3416.24±779.80)mg·min~(-1)·L~(-1),平均滞留时间MRT_(0-∞)为(38.15±8.61) min.灌胃组相应的药动学参数:C_(max)为(7.42±3.08) mg·L~(-1),t_(max)为(31.50±8.57) min,t_(1/2zeta)为(83.25±37.35) min,AUC_(0-∞)(793.19±101.32) mg·min_(-1)·L_(-1),MRT_(0-∞)为(125.89±58.270)min;生物利用度F为22.56%.结论:自由活动大鼠颈静脉微透析技术结合高效液相色谱分析可有效分析丹参素血药浓度,获得药-时曲线,提示该技术较适合于采用小动物对长时程连续用药中药活性成分进行药动学研究.     

HPLC-ECD法测定大鼠血浆中同型半胱氨酸的含量

目的:建立检测大鼠血浆中同型半胱氨酸(Hcy)含量的HPLC-ECD测定方法。方法:大鼠血浆中的Hcy经二硫苏糖醇还原,色谱系统采用ODS2反相柱,10%甲醇流动相分离,用电化学检测器测定其浓度。结果:Hcy浓度在0.1~100μmol.L-1范围内线性关系良好,相关系数为0.999 3(n=7);样品加样回收率为100.73%,RSD=2.628%;精密度RSD=2.3%,日内稳定性RSD=2.61%,日间稳定性RSD=5.62%。结论:HPLC-ECD法测定血浆中Hcy的含量,操作简便,灵敏度高,稳定性及重复性好,可用于大鼠血浆中Hcy含量的研究。     

高效液相色谱-电化学检测法测定金荞麦饮片中表儿茶素的含量

目的:建立可测定金荞麦饮片中表儿茶素含量的高效液相色谱-电化学检测法。方法:采用DiamonsilC₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,流动相甲醇-0.1 mol.L^-1磷酸盐缓冲液(1∶3,pH 2.5),流速1.0 mL.min^-1,柱温35℃,参比电极ISAAC(in-situ silver/silver chloride),工作电极玻碳电极,检测电位+600 mV。结果:表儿茶素的线性范围为0.004 875～1.56μg,r=0.999 9;平均回收率为100.7%,RSD 1.9%(n=5)。9批不同市售来源的金荞麦饮片中表儿茶素的含量存在差异。结论:该方法重复性好,可以用来测定金荞麦饮片中表儿茶素的含量。     

原代培养大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞分泌儿茶酚胺的高效液相色谱-电化学检测

 目的:检测培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞分泌的儿茶酚胺。方法:用原代培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞,建立了培养细胞分泌的儿荼酚胺(去甲肾上腺素,肾上腺素和多巴胺)的高效液相色谱-电化学检测法。结果:在静息状态下,细胞在20min内分泌的儿茶酚胺为每10⁶个细胞(73.29±15.32)ng,用乙酰胆碱等药物刺激后分泌明显增加?结论:用该方法可以灵敏地检出培养的肾上腺髓质嗜铬细胞分泌的儿茶酚胺,细胞基础分泌稳定,对药物刺激反应良好>目的:检测培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞分泌的儿茶酚胺?方法:用原代培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞,建立了培养细胞分泌的儿荼酚胺(去甲肾上腺素,肾上腺素和多巴胺)的高效液相色谱-电化学检测法。结果:在静息状态下,细胞在20min内分泌的儿茶酚胺为每106个细胞(73.29±15.32)ng,用乙酰胆碱等药物刺激后分泌明显增加?结论:用该方法可以灵敏地检出培养的肾上腺髓质嗜铬细胞分泌的儿茶酚胺,细胞基础分泌稳定,对药物刺激反应良好。     

原代培养大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞分泌儿茶酚胺的高效液相色谱-电化学检测

目的：检测培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞分泌的儿茶酚胺。方法：用原代培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞,建立了培养细胞分泌的儿荼酚胺（去甲肾上腺素,肾上腺素和多巴胺）的高效液相色谱电化学检测法。结果：在静息状态下,细胞在２０ｍｉｎ内分泌的儿茶酚胺为每１０６个细胞（７３．２９±１５．３２）ｎｇ,用乙酰胆碱等药物刺激后分泌明显增加。结论：用该方法可以灵敏地检出培养的肾上腺髓质嗜铬细胞分泌的儿茶酚胺,细胞基础分泌稳定,对药物刺激反应良好     

电针对左旋多巴诱发的膀胱机能亢进大鼠脑桥蓝斑酪氨酸羟化酶的影响

目的通过观察电针对排尿频率、脑桥蓝斑酪氨酸羟化酶（TH）表达的影响,探讨针刺抑制左旋多巴诱发的大鼠膀胱机能亢进的神经生物学机制。方法动物随机分成对照组、模型组、针刺组,其中模型组和针刺组动物腹腔内先后注射卡比多巴和左旋多巴引起大鼠膀胱机能亢进;在动物清醒和自由活动状态下,应用连续膀胱测压技术动态观察电针中膂俞穴对排尿频率的影响。应用免疫组织化学的方法,观察电针后脑桥排尿中枢蓝斑TH的动态变化,并用图像分析技术进行定量分析。结果模型组在腹腔注射左旋多巴后排尿频率迅速增加（P〈0.05）,针刺组在腹腔注射左旋多巴后15～75min时段排尿频率较处理前增加（P〈0.05）,75～105min时段排尿频率接近处理前水平（P〉0.05）。针刺组腹腔注射左旋多巴后3h时TH在脑桥蓝斑核内的表达较对照组显著减少（P〈0.05）。模型组腹腔注射左旋多巴后8h时TH在脑桥蓝斑核内的表达较对照组显著增加（P〈0.05）;针刺组腹腔注射左旋多巴后8h时TH在脑桥蓝斑核内的表达较对照组减少（P〈0.05）。结论电针可降低左旋多巴引起的膀胱机能亢进大鼠的排尿频率;电针可抑制其脑桥排尿中枢TH的表达。     

高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠脑脊液中的石杉碱甲

 目的建立大鼠脑脊液中石杉碱甲的高效液相色谱-荧光测定方法。方法采用ODS-C₁₈柱(4.6mm×250mm,10μm),以甲醇-水-三乙醇胺(60:40:0.1)为流动相,流速1mL·min^-1,荧光检测器于激发波长310nm,发射波长370nm处检测,同时紫外检测器于波长310nm处检测作为对照。结果石杉碱甲质量浓度在0.5～200μg·L^-1内线性关系良好(r=0.9999),最低定量限为0.5μg·L^-1,比紫外法降低了10倍。结论该方法准确,可靠,比高效液相-紫外法灵敏度更高。     

微透析法研究活体大鼠脑内左旋奥硝唑药动学

 目的 建立高效液相色谱法（HPLC）检测微透析样本中左旋奥硝唑方法,并应用该方法进行左旋奥硝唑大鼠灌胃给药后脑内药动学研究,为该药的临床研究提供数据支持。方法 在活体大鼠脑内置入探针,利用脑微透析在线取样技术,连续收集第三脑室透析液, 并用HPLC进行左旋奥硝唑浓度测定。应用DAS2.0软件拟合药动学参数。结果 左旋奥硝唑可迅速透过血脑屏障,脑内未发生消旋体转化,50、100、200 mg·kg-1 3个剂量组的主要药动学参数： ρ_max分别为(0.999±0.28)、(2.624±1.493)、（6.207±3.84) mg·L-1 ; t_max分别为(1.333±0.289)、(1.375±0.25)、(1.5±0) h; t1/2分别为（5.972±2.594), (1.594±0.264)、(1.115±0.564) h; AUC_0-t分别为（2.304±0.132）、（5.068±1.388）、（8.898±3.333）mg·h·L-1。结论 本实验评价了左旋奥硝唑血脑屏障的通透性及脑内药动学行为,为单一对映体用于脑内厌氧菌感染的治疗和分析中枢神经系统的不良反应提供依据。     

细辛散剂对大鼠下丘脑乙酰胆碱酯酶和酪氨酸羟化酶的影响

目的:探讨细辛对大鼠呼吸抑制的中枢机制.方法:将20只大鼠随机分为细辛散剂给药组和空白对照组各10只,禁食12小时后分别灌服细辛散剂药液和等体积的蒸馏水,每日2次,连续用药3天.末次给药2小时后处死,即时取其脑组织,甲醛固定,恒冷箱冰冻切片机连续冠状切片,分别采用免疫细胞化学法(ABC法)和组织细胞化学法染色,观察细辛根散剂对大鼠下丘脑神经元乙酰胆碱酯酶(AChE)、酪氨酸羟化酶(TH)含量的影响.结果:给药组大鼠AChE和TH免疫反应阳性细胞数目较空白组明显减少,差异有极显著性意义(P《0.01).结论:细辛对呼吸中枢有抑制作用.     

激活素A对新生大鼠缺血缺氧后脑组织巢蛋白表达的影响

目的探讨激活素A对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）脑组织巢蛋白的表达变化。方法将7日龄Wistar大鼠120只随机分为3组,假手术组、缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型组和激活素A治疗组,每组各40只。每组根据处死的时间不同又分为5个亚组：6h组、24h组、3d组、7d组、14d组,每亚组各8只。HE染色观察神经细胞形态变化,采用免疫组化的方法测定巢蛋白的表达。结果HIBD组缺氧缺血侧大脑组织巢蛋白活性逐渐增高,3d显著增高,7d达高蜂,然后逐渐下降,14d仍有少量表达;与HIBD模型组各时间点相比,激活素A治疗组各时间点脑组织巢蛋白表达明显增高（P〈0.01）。结论激活素A治疗增高缺氧缺血后巢蛋白的表达,对缺氧缺血性脑损伤有保护作用。     

针康法对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠细胞凋亡相关因子表达的影响

目的 观察针康法对缺氧缺血性新生大鼠大脑皮质内细胞凋亡诱导因子及死亡基因受体mRNA表达及细胞凋亡的影响.方法 随机将实验用Wistar大鼠分为假手术组、模型组、针刺组、康复组及针康组,又将各组于12、24、48、72 h分为4个亚组(n=8).后应用Rice-Vannucci法建立缺氧缺血性脑损伤模型.其中假手术组不...     

电针对戊四唑点燃型癫痫大鼠脑内氨基酸含量的影响

目的 :探讨戊四唑 (PTZ)点燃型癫痫大鼠脑内氨基酸的变化及电针对其影响。方法 :成年SD大鼠 3 0只随机分为三组 (每组 1 0只 ) :癫痫模型组、电针组、正常对照组。采用氨基酸自动分析仪测定脑内氨基酸含量。结果 :癫痫模型组脑内兴奋性氨基酸谷氨酸 (Glu)及抑制性氨基酸甘氨酸 (Gly)升高明显 (P <0 .0 5) ;而抑制性氨基酸γ 氨基丁酸 (GABA)降低明显 (P <0 .0 1 )。经电针治疗后γ 氨基丁酸 (GABA)、丙氨酸 (Ala)含量明显升高 (P <0 .0 1、P <0 .0 5) ,而Glu降低明显 (P <0 .0 5)。结论 :电针抗癫痫的作用可能与脑内Glu、GABA及Ala的变化有关     

通腑醒神液灌肠对脑出血大鼠脑水肿及脑血管通透性的影响

目的观察通腑醒神液灌肠与灌胃对脑出血大鼠脑水肿及脑血管通透性的影响.方法采用大鼠脑尾状核注射VII型胶原酶合肝素的脑出血模型,分为假手术组、模型对照组、通腑醒神液灌肠组、通腑醒神胶囊灌胃组,观察治疗3、5、7d后各组大鼠脑系数、脑含水量、脑组织EB含量的变化.结果通腑醒神液灌肠与灌胃治疗3、5、7d后,均可显著降低大鼠脑系数、脑含水量、脑组织EB含量,而以通腑醒神液灌肠组疗效尤为显著.结论直肠给药是抢救脑出血新的有效给药途径.     

补阳还五汤对实验性脑缺血大鼠水通道蛋白-4表达的影响

目的：观察补阳还五汤对大鼠脑缺血后AQP-4表达和患肢恢复功能的影响。方法：100只SD大鼠分为损伤组和中药组,均手术致脑缺血。中药组术后即给予补阳还五汤口服液灌胃;损伤组给予等量蒸馏水灌胃。术后1、3、7、14及21天分别对大鼠进行BBB评分和斜板实验检查患肢功能,然后处死,应用免疫组织化学技术检测脑组织AQP-4的表达。结果：脑缺血后第1天,两组受损伤脑灰质、白质中可见到AQP-4的表达明显增加;第3天时达到高峰,损伤组更明显（P〈0.05）;第7、14及21天,中药组AQP-4表达的减少几乎与神经功能的改善平行,与损伤组比较差异有非常显著性（P〈0.01）。结论：补阳还五汤可能通过抑制脑缺血后AQP-4表达,消除脑水肿,减轻脑损伤,从而使残存脑组织保存并促进肢体功能恢复。     

HPLC法测定蛹虫草子实体及其培养基的虫草素含量

目的:建立蛹虫草子实体及其培养基中虫草素(Cordycepin)含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,选用YMC-PackC18色谱柱(250×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(20:80),流速为1mL/min,检测波长为260nm,柱温为30℃,分析时间为20min。结果:蛹虫草子实体中虫草素含量为0.503mg/g,平均加样回收率(n=9)为100.8%(RSD=1.33%);蛹虫草培养基中虫草素含量为0.118mg/g,平均加样回收率(n=9)为101.7%(RSD=1.82%)。结论:本方法分离度好、精密度高、专属性强、灵敏度高,可用于蛹虫草子实体及其培养基的质量评价。     

芹菜素对缺血缺氧脑损伤大鼠早期认知功能的影响

目的:探讨芹菜素对新生大鼠缺血缺氧脑损伤后早期认知功能的影响。方法:根据改良Rice模型建立新生大鼠缺血缺氧脑损伤模型,随机分为假手术组(Sham-operated,SH)、模型组(Model,M)、芹菜素干预组(Apigenin,A)和神经节苷脂GM1有效对照组(Ganglioside-GM1,GM1)。各组按后期测试的日龄不同又分为21日龄组和31日龄组,分别在Morris水迷宫中进行测试,测试结束后处死留取脑组织标本观察大鼠脑组织结构改变。结果:1.脑组织病理观察,(1)肉眼观:29只缺血缺氧脑损伤大鼠脑组织呈现明显的脑萎缩改变,约占51.8%(29/56)。假手术组大鼠无脑组织萎缩。(2)光镜观察:SH组的神经元细胞丰富且排列整齐有序,间质均匀;M组可见明显的胶质细胞增生,神经元排列不规则;A组和GM1组神经元细胞排列欠规则,较多见胶质细胞。(3)尼氏小体定量-神经细胞活力分析:M组、A组GM1组较相应SH组活力下降,有显著性差异(P0.01或P0.05);31日龄组较21日龄组升高,各组均有显著性差异(P0.01)。(4)海马组织电镜观察:SH组神经细胞结构正常,突触前膜内少见线粒体,其余各组神经细胞有不同程度核固缩表现及内质网扩张等,海马突触内见较多线粒体。2.Morris水迷宫实验,(1)空间定位(平均逃避潜伏期):M21组潜伏期较SH21组明显延长,空间定位学习能力差(P0.01);A21组潜伏期较M21组缩短(P0.05);GM1组潜伏期与M组比较差异无统计学意义(P0.05);31日龄组潜伏期较相应21日龄组缩短,差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。(2)空间记忆:平均穿台次数:A21组较GM1-21组多,有显著性差异(P0.05);GM1-31组较GM1-21多,有显著性差异(P0.05)。平均台周Ⅰ区时间:A31组较A21组长(P0.05)。平均台周Ⅰ区路程:GM1-31组较GM1-21组长(P0.01)、A31组较A21组长(P0.05)。结论芹菜素可改善新生期缺血缺氧脑损伤后21日龄大鼠的空间定位学习能力。     

实验性脑出血大鼠急性期脑组织含水量与ET、NO含量的关系

目的观察大鼠脑出血后血肿周围脑组织含水量与内皮素（ET）、一氧化氮（NO）含量之间的关系,探讨ET、NO在脑出血后脑水肿形成中的作用,为临床治疗提供新的理论依据和方法。方法选用健康雄性SD大鼠48只,体重250 g~300 g,随机分为脑出血组和假手术对照组,每组24只,两组动物再随机分为术后1 d、3 d、5 d、7 d四个时间点,每个时间点6只。通过脑内注射胶原酶建立大鼠脑出血模型。测定不同时间点脑组织含水量与ET、NO含量。结果脑出血组各时间点脑组织含水量及ET、NO含量均高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）。脑组织含水量与ET、NO含量之间呈正相关关系（P〈0.05或P〈0.01）。结论脑出血后ET、NO过量生成,且与脑水肿程度呈正相关关系。脑出血后脑水肿的发生与ET和NO过量生成有关。     

健脾化湿颗粒对D-IBS大鼠脑中酪氨酸羟化酶、单胺氧化酶及5-羟色胺转运体表达的影响

目的:从脑中酪氨酸羟化酶,单胺氧化酶及5-羟色胺(5-HT)转运体角度探讨健脾化湿颗粒改善腹泻型肠易激综合征(D-IBS)的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、健脾化湿颗粒低、中、高剂量组(6.25,12.5,25 g·kg-1)、阳性药组(匹维溴铵,0.03 g·kg-1),共6组,每组10只,除正常组外,其余各组大鼠均采用灌服番泻叶联合束缚应激的方法复制D-IBS大鼠模型,观察不同时间各组大鼠糖水偏爱度的的变化,应用健脾化湿颗粒进行干预14 d。应用免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑中酪氨酸羟化酶、单胺氧化酶及5-HT转运体的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠糖水偏爱度显著下降(P0.01),脑中酪氨酸羟化酶表达显著升高,单胺氧化酶及5-HT转运体表达显著下降(P0.01)。模型组比较,中、高剂量组及匹维溴铵组大鼠糖水偏爱度显著升高(P0.05,P0.01);除阳性组大鼠单胺氧化酶相对表达量外,各治疗组大鼠脑中酪氨酸羟化酶阳性表达及表达量均显著降低,单胺氧化酶和5-HT转运体阳性表达及表达量均显著升高(P0.05,P0.01)。与匹维溴铵组比较,中、高剂量组大鼠糖水偏爱度均显著升高(P0.05,P0.01);中、高剂量组大鼠脑中酪氨酸羟化酶阳性表达及相对表达量显著降低(P0.05,P0.01);中、高剂量组大鼠脑中单胺氧化酶及高剂量组大鼠脑中5-HT转运体阳性表达显著升高(P0.05,P0.01);低、中、高剂量组大鼠脑中单胺氧化酶及5-HT转运体相对表达量显著升高(P0.05,P0.01)。结论:健脾化湿颗粒降低D-IBS模型大鼠脑内5-HT含量与其下调脑中酪氨酸羟化酶表达,上调单胺氧化酶和5-HT转运体表达密切相关,这可能是其治疗D-IBS的作用机制之一。