使用PCR-SSP方法检测HLA-DR抗原

目的采用顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)建立人类白细胞抗原DR位点的DNA分型方法.方法合成29个特异性引物和1对阳性对照引物,组成20个PCR反应用于DR位点,建立一步法PCR-SSP.结果所有样本PCR-SSP基因分型获得成功,分型结果经标准DNA,限制性核酸内切酶分析证实符合,特异性和重复性100%.结论 PCR-SSP检测HLA-DR的方法具有快速、准确、特异性高等优点,适合临床应用.     

HLA—B27的分型方法

本文综述了ＨＬＡ－Ｂ２７的分开型方法以及各种方法的优缺点。至今建立的ＨＬＡ－Ｂ２７分型方法有补体依赖性微量淋巴细胞毒法、流式细胞术法、玫瑰花法、等电聚焦法、酶陪免疫法和聚合酶链反应（ＰＣＲ）法。这些方法虽各有其特点，但ＰＣＲ法分型ＨＬＡ－Ｂ２７亚型将是未来的发展方向。     

PCR检测HCMV与HLA的相关性研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法和微量淋巴细胞毒的ＨＩＮ法分别进行了１５７例骨髓移植供受体的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）和ＨＬＡ－Ａ，Ｂ位点抗原特异性进行了检测，探讨了ＨＣＭＶ感染和ＨＬＡ之间的相关关系，结果显示，在１５７例被测对象中，８５例ＨＣＭＶ感染阳性，７２例阴性，分别统计ＨＣＭＶ阳性组和阴性组的ＨＬＡ－Ａ，Ｂ位点抗原频率，发现ＨＬＡ－Ｂ５在ＨＣＭＶ阳性组中频率较高，而在阴性组中抗原频率较市制是是Ｈ     

HLA—DR位点的PCR—SSP基因分型

目的：探讨适用于肾移植供体HLA-DR的快速基因分型方法。方法：自行设计合成引物建立顺序特异性引物聚合酶链反应技术,并对110例肾移植供体作HLA-DR基因分型。结果：DNA提取方法可以满足PCR-SSP分型方法对DNA模板的要求。全部操作耗时120min,110例标本均分型成功。基因频率范畴在0.0045-0.1227之间,以DR4、DR15和DR9占多数。结论：PCR-SSP法作HLA-DR分型具有准确,简便,快速等优点。适合在临床进行推广应用。     

HLA—DR抗原多态性的双相凝胶电泳分析法

本文利用免疫沉淀、双相凝胶电泳技术分析了某些DR位点纯合子细胞DR抗原电泳图谱。待检细胞用~3H-亮氨酸生物合成性标记,提取膜蛋白,对抗DR单态型抗血清做免疫沉淀,沉淀物用双相凝胶电泳进行分析。结果表明,DR抗原α肽链电泳图单一,各DR型间无差异:β肽链电泳图谱因DR型别而异,是区分DR型别的主要依据。此外,2例DR2纯合子细胞图谱明显不同,提示为两个不同的亚型。     

PCR／SSCP技术在检测HLA基因点突变中的应用

聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）是根据核苷酸序列不同的单链ＤＮＡ，可形成不同构象，从而在不含变性剂的聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同的原理，分离鉴定等长ＤＮＡ单链的方法，本文应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ方法检测了６０例无亲属关系个体白细胞抗原Ⅱ类基因（ＨＬＡ－ＤＱＡ１）５－上游调控区的等位基因多态性，并以ＰＣＲ直接测序证明每种ＳＳＣＰ带型都与不同位置单个碱基取代相关联。     

用地高辛标记的PCR／SSO方法进行HLA—B27等位基因 …

建立检测ＨＬＡ－Ｂ２７等位基因的聚合酶链反应／顺序特异的寡核苷酸探针方法，并分析其实用性。方法 采用４对引物Ｅｒ０ｓ，Ｅ９０ａｓ；Ｅ９１ａｓ，Ｅ１３６ａｓ；Ｅ９１ｂｓ，Ｅ１８１ａｓ；Ｅ４０ｓ，Ｅ１３０ａｓ，分别扩增靶ＤＮＡ，用１０个探针ＣＬ－１－９和ＰＡＮ－Ｂ２７分别进行杂交，探针用地高辛系统标记和检测，可检定Ｂ２７０１－２７０８共８个等位基因。     

HLA—DR抗原在肝细胞癌中的表达及意义

HL A- DR通过 MHC 类分子限制的 T细胞对外来抗原的识别 ,在机体免疫应答和免疫调节过程中发挥重要的作用。许多肿瘤细胞表面常出现 HL A - DR的异常表达 [1 ,2 ] ,这种现象在肿瘤发生、发展及自身免疫调节过程中具有一定的生物学意义 ,而成为肿瘤免疫学研究的热点之一。本研究采用免疫组化技术对 HCC肝组织中 HL A- DR抗原的表达进行了检测 ,并探讨其意义。1　材料与方法2 0例正常肝组织取自肝部分切除术患者 ,男 13例 ,女7例 ,平均年龄 (41.8± 6 .2 )岁。 44例 HCC和癌旁组织取自1997～ 1999年本院肝胆外科手术切除标本 ,全部…     

乙型肝炎病毒基因聚合酶链反应分型方法的建立

根据乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的Ｓ区序列设计了３条引物：ＨＢＳ１、ＨＢＳ２和ＨＢＳ３，与ＨＢＳ１和ＨＢＳ２配对，经２次聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。即可在检测有无ＨＢＶ－ＤＮＡ存在的同时对其基因型分类，可检出１０ａｇ的ＨＢＶ－ＤＮＡ，比免疫学方法更灵敏和特异。２５份不同亚型的标准血清中的绝大多数用Ｓ－ＰＣＲ和ＡＧＩＤ／ＲＰＨＡ的分型结果一致，Ｓ－ＰＣＲ的另一突出优越性的于能够对ＨＢｓＡｇ低滴度和阴性标本     

用热启动聚合酶链反应检测血清中乙型肝炎病毒DNA技术的建立和应用

建立了热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的技术。ＰＣＲ所有反应成分被２次加样。先加Ａ液（含ｄＮＴＰｓ、一对引物和ＭｇＣｌ＿２）与一粒石蜡珠。７０℃加热后冷却至室温，使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住Ａ液，然后在向其上加入Ｂ液（含耐热性ＤＮＡ聚合酶、ＨＢＶＤＮＡ模板和ＫＣｌ）并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至６０℃以上时，中隔蜡层融化，蜡上浮形成防蒸发屏障，Ａ、Ｂ两液则由于热分子运动而混匀，从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了ＰＣＲ的特异性和灵敏性，应用这种技术对７６例肝炎血清进行了检测，结果ＨＢＶＤＮＡ检出率为６８％，其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为１００％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢｅ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为７０％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢＣ（＋）血清检出率为８９％；抗ＨＢＣ（＋）血清检出率为对％；标记全阴性血清检出率为３３％。     

用通用引物聚合酶链反应对宫颈刮片中人乳头瘤病毒感染的快速筛检

用通用引物聚合酶链反应（ＧＰ－ＰＣＲ）可同时对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６、１８、３１、３３等型进行检测。该方法成功地用于临床宫颈刮片样品广谱ＨＰＶ感染的筛检。结果，宫颈癌组ＨＰＶ检出率（８５．５％）明显高于非癌组（１３．９％）（Ｐ＜０．０１）；对宫颈癌放疗前后ＨＰＶ阳性率比较，二者亦有明显差异（８５．５％，４３．７％，Ｐ＜０．０１）。证明ＧＰ－ＰＣＲ是一种在大规模人群中快速筛检多型ＨＰＶ感染的有效方法。     

应用通用引物聚合酶链反应技术检测结肠癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）通用引物介导的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例结肠癌石蜡包埋病理组织切片中ＨＰＶＤＮＡ，其中１０例呈阳性扩增（阳性率为６６．７％）。１２例正常结肠组织经上述ＰＣＲ检测均呈阴性反应。阳性扩增产物经核酸斑点杂交进行ＨＰＶ型别分析，ＨＰＶ１６型占４例（４０．０％），１８型１例（１０．０％），１６／１８型５例（５０．０％），未检出其他ＨＰＶ型别。表明ＨＰＶ可能对结肠癌的发生具有病原相关性。     

Detection of Human Papiliomavirus DNA in lnvasive Cervical Cancers by the Polymerase Chain Reaction and Its Clinical Significance

In order to detect human papillomavirus (HPV) DNA in invasive cervical cancers, three different polymerase chain reactions to amplify different subgenomic fragments of HPV DNA were carried out on DNA extracted from 93 formalin fixed and paraffin-embedded tumor tissues. This study detected HPV DNA in 54 cases (58.1%), which broke down to HPV 16 in 39 (41.9%) cases, HPV 18 in six (6.4%), HPV 52 in three, HPV 33 in one and unclassified HPV type in the remainder. Histopathologically, squamous cell carcinomas frequently contained HPV 16, whereas, HPV 18 was present in adenocarcinoma, adenos-quamous cell carcinoma and small cell carcinoma of the cervix. Clinicopathological study revealed that HPV 16 and 18 DNA found were more frequently than other HPV subtypes in premenopausal patients. Moreover, HPV 18 DNA positive cancers had a relatively high recurrence rate. These results indicate that cervical cancers might be clinically influenced by the difference in subtypes of the infecting HPV. Acta Pathol Jpn 42: 876–883, 1992.     

聚合酶链反应在前列腺癌诊断中的应用

着重介绍反转录PCR(RT-PCR)检测前列腺肿瘤标志物如前列腺特异抗原(PSA)和α-甲酰基辅酶A消旋酶(AMARC)诊断前列腺癌的意义及进一步研究的方向。还介绍了利用甲基化特异性PCR技术检测π类谷胱苷肽-S-转移酶I(GSTP1)CpP岛甲基化程度在诊断前列腺癌中的意义。     

由特异基因扩增产物制备丙型肝炎病毒cDNA探针

应用逆转录聚合酶链反应技术自丙型肝炎病毒感染血浆中扩增ＨＣＶ－ｃＤＮＡ，经寡聚核苷酸探针杂交鉴定后以低熔点琼脂糖凝胶电泳分离，微柱亲和层析纯化，用于缺口平移制备＾３２Ｐ标记的ＨＣＶ基因探针，这种探针用于斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测非甲非乙型肝炎血产乐的ＨＣＶ基因扩增产物，能鉴定ＨＣＶ序列的特异性，且分别达到０．１ｐｇ和１ｐｇ的敏感性。     

Assessment of Efficacy of Palm Polymerase Chain Reaction with Microscopy,Rapid Diagnostic Test and Conventional Polymerase Chain Reaction for Diagnosis of Malaria

Purpose: Sensitive, specific, rapid and cost-effective technique for malaria diagnosis is need of the hour. Microscopy has been the gold standard for malaria diagnosis, but its interpersonnel variability and lack of sensitivity make it subjective test. Conventional polymerase chain reaction (cPCR) has proven to be sensitive technique, but costly and time-consuming. Considering these factors, we have compared microscopy and cPCR with newly derives ultra-fast, portable PCR machine called Palm PCR. Materials and Methods: Palm PCR is arranged with three heat blocks precisely made for three stages of PCR cycles with 34 min for 1100 bp Plasmodium genus outer primer to amplify and 10 min each for Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax inner primers of 120 bp and 205 bp, respectively. A total of 191 suspected samples were processed and evaluated using receiver operating characteristic (ROC) curve analysis. Results: The area under ROC curve analysis for Palm PCR with reference standard microscopy for P. falciparum, P. vivax and Plasmodium was 0.8969, 0.9121 and 0.9116, respectively, and with reference standard cPCR was 1.0 for all of them. ROC curve area close of suggests that Palm PCR can be as significant as cPCR in malaria diagnosis. In fact, ultra-rapid amplification with same precision makes Palm PCR better technique than cPCR. Conclusion: Palm PCR is sensitive, rapid and works on battery with simple laboratory facility requirements. Portable electrophoresis and transilluminator combined with Palm PCR could be implemented as an important diagnostic tool in resource-limited and rural areas. Similar studies with wider parameters in rural areas will help us evaluate and maybe establish Palm PCR as PCR platform of choice for such specific set-ups.     

用聚合酶链反应和放射免疫法检测肾移植术后人巨细胞病毒感染

将５０例肾移植术后发热病人的尿标本接种细胞，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测第１代细胞培养上清中的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。结果１９例为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率为３８．００％，用固相放射免疫法（ＲＩＡ）检测ＨＣＭＶ抗原，阳性的有１５例，阳性率为２７．７７％。将５４倒尿标本接种人胎肺二倍体单层细胞，分离到６株ＨＣＭＶ。用ＥＬＩＳＡ检测６５例病人单份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体，阳性的有１７例，检测４５例病人双份血清ＩｇＧ抗体，１１例的第２份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＧ抗体滴度比第１份有４倍以上升高。上述结果表明，ＰＣＲ检测结果与ＲＩＡ的检测结果基本符合；病人血清抗体的阳性率与ＰＣＲ检测的阳性率基本符合。