Wnt/β-catenin信号通路介导糖基化终未产物对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增生及成骨分化的影响及可能机制.方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs.将BMSCs随机分为成骨诱导液、BSA组、AGEs3组,Western blot法检测AGEs对BMSCs成骨分化过程中β-catenin、OSX、RUNX2、RAGE(AGE受体)蛋白表达量的影响,茜素红染色观察AGEs对BMSCs成骨分化过程中矿化的影响.抑制RAGE后实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluo-rescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot法再次测定上述指标水平.结果0.2 g/L AGEs作用于体外培养SD大鼠BMSCs,上调RAGE蛋白表达(0.88±0.04),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达降低(分别为0.21±0.02,0.25±0.03和0.21±0.01,P<0.05).RAGE中和抗体阻断RAGE作用后,AGE+RAGE中和抗体组RAGE蛋白表达下调(0.30±0.03),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达增高(0.90±0.02,0.84±0.03和0.88±0.02,P<0.05).结论AGEs通过Wnt/β-catenin信号通路抑制BMSCs成骨分化.     

Toll样受体4激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖

目的探讨Toll样受体(TLR)4激活后调控Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖及其相关机制。方法体外培养BMSCs,应用流式细胞术鉴定BMSCs,用脂多糖(LPS)剌激BMSCs,应用CCK-8法检测BMSCs的增殖能力;采用Western印迹检测大鼠BMSCs中TLR4蛋白表达;实验分为对照组、LPS组、TLR4阻断剂+LPS组、Wnt通路经典抑制剂(DKK-1)+LPS组。应用实时荧光定量PCR法检测BMSCs中β-catenin、c-myc及细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA表达,应用Western印迹检测蛋白表达。结果与对照组相比,LPS组BMSCs的细胞增殖能力明显增强,TLR4呈高表达(均P<0.01);LPS组β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著增加(P<0.01)。与LPS组相比,加入TLR4阻断剂后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著下调(P<0.05,P<0.01),加入DDK-1后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著降低(均P<0.01)。结论 TLR4促进BMSCs的增殖,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。     

骨髓间充质干细胞通过激活Wnt通路防治阿尔茨海默病

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆的影响,检测Wnt通路相关蛋白β-catenin及细胞周期蛋白(Cyclin)D1的表达。方法模型组双侧海马区注射β-淀粉样蛋白(Aβ)_(23-35);模型对照组进行生理盐水注射;建立AD模型后,移植组进行BMSCs移植治疗;西药组造模后氢溴酸加兰他敏灌胃治疗;正常组常规鼠粮饲养。治疗30 d后Morris水迷宫测试大鼠逃避潜伏期;通过苏木素-伊红(HE)染色观察海马的神经元形态变化;免疫组化检测蛋白β-cateni及Cyclin D1的表达。结果模型组胞质游离的β-catenin表达有所降低,Wnt信号通路受到抑制,Cyclin D1的表达减少。BMSCs移植后缩短了AD模型大鼠的逃避潜伏期,其学习记忆能力有所增强;同时胞质内游离β-catenin表达增多,Wnt信号通路被激活,Cyclin D1的表达增强。结论 BMSCs移植治疗AD可能是通过激活了Wnt信号通路,从而调控细胞周期,发挥了对神经元的保护作用。     

谷胱甘肽对糖基化终产物诱导平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨糖基化终产物(AGEs)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖作用和还原型谷胱甘肽(GSH)对AGE介导的动脉平滑肌细胞增殖作用的抑制机制。方法以体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞为实验模型,分为8组,每组12孔,每孔细胞密度1×10~5/mL,与不同浓度的糖基化终产物共同培养,并用不同浓度的谷胱苷肽干预。分别用噻唑蓝(MTT)比色法测定血管平滑肌细胞增殖和用夹心ELISA方法测定细胞的磷酸化P38丝裂素蛋白激酶(P-P38 MAPK)的浓度来探讨平滑肌增殖的机制和干预因素。结果 (1)AGEs对血管平滑肌细胞MTT吸光度的影响:经过AGEs干预,与对照组比较,血管平滑肌细胞MTT的吸光度(OD)值增高(P<0.01),分别为:B组0.43±0.146,C组0.49±0.16,D组0.48±0.185。但随着AGEs浓度增加,B、C、D组间MTT OD值无统计学上差异(P>0.05)。(2)GSH对AGEs干预的血管平滑肌细胞MTT吸光度的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组与AGEs(25 mg/L)对照组比较,MTT吸光度下降(P<0.01),分别是F组0.347±0.102,G组0.333±0.108,H组0.285±0.08。但随着GSH浓度增加,F、G、H组组间无统计学差异(P>0.05)。(3)AGEs对血管平滑肌细胞内P-P38 MAPK的影响:经过AGEs干预后,p-p38MAPK吸光度增加(P<0.01),B组0.65±0.17,C组0.85±0.26,D组0.94±0.17,分别为对照组0.26±0.06的2.5、3.2和3.6倍(P<0.01)。随AGEs浓度增加,C、D组与B组相比,P-P38有显著增加(P<0.01)。(4)GSH对AGEs干预的血管平滑肌细胞内P-P38的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组与B组即AGEs对照组比较,p-p38 MAPK吸光度降低(P<0.01),分别是F组0.356±0.09 G组0.281±0.07 H组0.256±0.072,与对照组相比分别下降45%,56%,60%(P<0.01)。随着GSH浓度增加,G、H组与F组相比,p-p38MAPK逐渐降低(P<0.01)。结论 (1)AGEs具有促进血管平滑肌细胞增值的作用,其作用机理可能与激活了P-P38MAPK信号传导通路有关。(2)GSH对AGEs介导的血管平滑肌细胞增值     

共培养大鼠内皮祖细胞对自体骨髓基质干细胞成骨作用的影响

目的探讨体外培养大鼠外周血内皮前体细胞(EPCs)与自体骨髓基质细胞(BMSCs)共培养时对BMSCs成骨作用的影响。方法采用密度梯度离心法分离、培养大鼠BMSCs和EPCs,培养细胞分为四组:A组(BMSCs组)、B组(EPCs组)、C组(BMSCs成骨诱导组)及D组(BMSCs和EPCs联合培养组)。通过观察细胞克隆形态、免疫细胞化学、细胞增殖、碱性磷酸酶活性,从酶学、组织学及生化等不同方面观察:EPCs对BMSCs成骨活性及生长情况的影响。结果免疫细胞化学染色证实C组培养的细胞具有晚期EPCs的特性。倒置相差显微镜、HE染色均证实共培养的BMSCs和EPCs生长良好,并能够形成与单纯成骨诱导培养的BMSCs相似的钙结节。MTT检测结果:各组细胞增殖差异无统计学意义(P>0.05)。碱性磷酸酶活性检测结果:C、D组显著高于A、B组(P<0.05)。结论 EPCs和BMSCs联合培养具有良好的细胞相容性,EPCs能够增强成骨细胞的ALP活性,提高成骨细胞的增殖能力。     

替米沙坦对人血管内皮细胞炎性反应的影响及其相关机制

目的探讨替米沙坦对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎性反应的影响及与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的关系。方法酶消化法获取HUVECs。实验分8组:BSA组;AGEs组;以不同浓度替米沙坦刺激细胞30 min,再加AGEs,依次为TM 1组(1 nmol/L)、TM 2组(10 nmol/L)、TM 3组(100 nmol/L)、TM 4组(1000 nmol/L);GW9662组:GW9662预先刺激细胞30 min后,加替米沙坦和AGEs;15d-PGJ_2组:15d-PGJ_2预先刺激细胞30 min后,加AGEs。各组均刺激细胞24 h。采用RT-PCR法检测PPARγ、AGEs受体(RAGE)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA的表达;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸检测细胞内活性氧的变化。结果替米沙坦呈浓度依赖性抑制AGEs诱导的MCP-1 mRNA表达。与AGEs组比较,TM 4组和15d-PGJ_2组PPARγ mRNA水平明显升高,RAGE mRNA和MCP-1 mRNA水平明显下降,活性氧荧光信号强度明显减弱。与TM 4组比较,GW9662组PPARγ mRNA的表达水平明显下降,RAGE mRNA和MCP-1 mRNA的表达水平明显升高,活性氧荧光信号强度明显增强。结论替米沙坦可抑制AGEs诱导的HUVECs炎性反应;替米沙坦可能通过激活PPARγ抑制HUVECs炎性反应。     

骨髓间充质干细胞体外对1型糖尿病大鼠淋巴细胞增殖能力的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外对1型糖尿病(T1DM)大鼠淋巴细胞增殖能力的影响。方法选取清洁级SD大鼠12只,取6只分离、培养BMSCs,另外6只建立T1DM模型后制备其淋巴细胞,实验分为A组(1 ml淋巴细胞)、B组〔1 ml淋巴细胞+100μl植物血凝素(PHA)〕、C组(1 ml淋巴细胞+1×106BMSCs+100μl PHA)、D组(1 ml淋巴细胞+1×105BMSCs+100μl PHA)、E组(1 ml淋巴细胞+1×104BMSCs+100μl PHA),每组5孔,培养3 d后通过噻唑蓝比色法观察BMSCs对淋巴细胞增殖能力的影响。结果五组样本的吸光值由大到小分别为:B组>A组>E组>D组>C组,A组的吸光度低于B组(P<0.05);随着BMSCs数目的增加,样本吸光度逐渐降低(P<0.05);A、B组的吸光度均高于E、D、C组;A、B、C、D、E组的淋巴细胞处于G0/G1期的百分比分别为:98.2%、89.5%、97.2%、97.1%、97.0%,仅B组淋巴细胞有10.5%处于S期;五组淋巴细胞凋亡水平从小到大依次为:B组相似文献   

骨髓源性间充质干细胞联合来氟米特对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨骨髓源性间充质干细胞(BMSCs)在体外联合来氟米特(LEF)对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 直接贴壁筛选法分离培养小鼠BMSCs,流式细胞分析(FCM)鉴定BMSCs的纯度.用EZ-SepTMm Mouse 1X分离异体BALB/c小鼠的脾淋巴细胞,在刀豆球蛋白A(ConA)诱导的同时,先经LEF处理,洗去LEF后,脾淋巴细胞再和BMSCs共培养.分组:A组:脾淋巴细胞;B组:脾淋巴细胞+BMSCs;C组:LEF处理的脾淋巴细胞;D组:LEF处理的脾淋巴细胞+BMSCs.用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测各组T淋巴细胞的增殖情况,流式细胞术分析各组T淋巴细胞的活化及凋亡情况,定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组T淋巴细胞的白细胞介素(IL)-2、IL-10基因水平.结果 在体外,BM-SCs处理组(B组)T淋巴细胞的A570 nm值为0.578±0.042,LEF处理组(C组)A570 nm值为0.5024±0.040,两组A570 nm值均显著低于对照组(A组)A570 nm值为0.778±0.035(P<0.01).BMSCs联合LEF组(D组)A570 nm值为0.218±0.033,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01). BMSCs联合LEF对CD3+CD69+、CD3+CD28+表达、IL-2基因表达均无明显影响.BMSCs单独或联合LEF组T淋巴细胞凋亡率分别为(2.29±0.32)%、(4.22±0.98)%,较A组T淋巴细胞凋亡率(8.08±1.20)%均明显下降.BMSCs处理组和LEF处理组T淋巴细胞IL-10基因相对表达分别为:0.098±0.039、0.054±0.022明显低于A组(IL-10基因相对表达为1.000)(P<0.01),MSCs联合LEF组IL-10基因相对表达为:0.023±0.015,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01).结论 BMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞有一定程度的协同免疫调节作用.     

糖基化终末产物对冠心病患者支架术后再狭窄的影响

目的探讨糖基化终末产物(AGEs)对经皮冠状动脉介入(PCI)术后1年再狭窄率的影响。方法择期PCI治疗的患者依据AGEs水平的平均值分成低AGEs和高AGEs组,记录介入血管支数,支架数目、再狭窄发生率。结果两组基础状态包括性别、年龄、高血压病史等均无统计学差异(P0.05),两组间介入血管支数,支架数目无统计学差异(P0.05)。两组间PCI术后再狭窄发生率存在明显差异。结论 AGEs增加冠心病患者PCI术后1年再狭窄发生率。     

晚期糖基化终末产物对高血压及其合并早期肾损害相关性分析

目的:通过测定高血压病(EH)患者与正常人血清晚期糖基化终末产物(AGEs)及尿微量白蛋白(mALB)的水平,探讨AGEs与EH及其早期肾功能损害的关系,为高血压发病机制及其早期肾功能损害防治研究提供理论依据。方法:筛选EH患者100例,其中EH mALB正常组42例,EH mALB异常组58例。所有入选者分别用放免法、ELISA法测晨尿微量白蛋白(mALB)、AGEs水平。结果:与对照组比较,EH mALB正常组、EH mALB异常组血清AGEs显著增高(P<0.001);与EHmALB正常组比较,EHmALB异常组血清AGEs显著增高(P<0.001)。相关分析AGEs与SBP、PP、mALB之间有显著的正相关性(r=0.448-0.687,P<0.001);mALB与SBP、PP之间有显著的正相关性(r=0.271-0.354,P<0.001)。结论:AGEs、SBP共同参与高血压病肾脏功能的损害,SBP随AGEs水平升高而增高。     

同种异体骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭HMGB1的影响

目的:探讨同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对急性肝衰竭动物高迁移率族蛋白B1(high mobility group Box1,HMGB1)的影响.方法:D-氨基半乳糖(D-GaIN)和脂多糖(LPS)诱导建立小鼠急性肝衰竭模型;贴壁筛选法培养纯化Balb/c小鼠BMSCs,传至第4代使用.90只健康Balb/c小鼠随机均分为3组:正常组、肝衰竭组、BMSCs治疗组.分别于12、24、48h检测各实验组ALT/AST水平,48h取各组肝脏行病理学检查.Western blot检测动物血清HMGB1含量.结果:急性肝功能衰竭小鼠经BMSCs移植治疗后生存率为83.3%,与肝衰竭组小鼠存活率16.7%相比差异有显著性意义(P<0.05).肝衰竭组与BMSCs治疗组12hALT/AST水平显著上升,24h达到高峰,48h开始下降,肝衰竭组与BMSCs治疗组12、24、48hALT/AST水平显著高于正常组(P<0.01),BMSCs治疗组12、24、48hALT/AST水平明显低于肝衰竭组,差异有显著性意义(P<0.05).肝脏组织病理学结果显示BMSCs治疗组肝细胞变性及坏死程度以及炎症浸润程度轻于肝衰竭组.免疫印迹显示,正常组血清中测不到HMGB1,肝衰竭组血清中HMGB1的含量显著高于BMSCs移植组血清中HMGB1的含量(P<0.01).结论:BMSCs移植能够抑制肝衰竭中HMGB1水平,BMSCs通过抑制HMGB1减轻肝脏炎症反应治疗急性肝衰竭,降低肝衰竭死亡率.     

当归四逆汤对大鼠DPN抑制作用及AGEs/RAGE的调节

目的观察当归四逆汤对糖尿病大鼠坐骨神经传导速度的影响及糖基化终末产物(AGEs)和AGEs受体(RAGE)的调节作用。方法采用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,模型鼠随机分为中药组、西药组、模型组,另设健康鼠为正常组。分别干预8 w后,检测糖尿病大鼠坐骨神经传导速度、坐骨神经病理形态、AGEs含量、RAGE mRNA表达水平。结果与模型组相比,中药能够保护坐骨神经结构,显著降低AGEs含量、下调RAGE mRNA水平(P0. 05)。结论当归四逆汤能够通过下调AGEs/RAGE含量提高坐骨神经传导速度、保护坐骨神经结构,进而抑制大鼠糖尿病周围神经病变(DPN)的发生发展。     

甘氨酸减少糖基化终产物对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤的影响研究

目的探讨甘氨酸对糖尿病大鼠AGEs及肾脏损伤的影响。方法Wistar大鼠随机分为正常对照(Con)组、正常+甘氨酸(CG)组、糖尿病(DM)组、糖尿病+甘氨酸治疗(DG)组,喂养12周后杀检。检测尿微量白蛋白与肌酐比值(UACR)、血清糖化白蛋白(GB/GALB)及AGEs,观察肾脏组织形态,检测肾组织AGEs、AGEs受体(RAGE)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达。结果与Con组比较,DM组UACR、血清GB/GALB和AGEs升高[14.86(6.16,26.75)vs 172。38(38.68,949.42)mg/g,(12.37±0.85)%vs(51.01±14.16)%,(6610.07±996.90)vs(8547.31±875.271),P0.05],肾小球系膜区扩张,基底膜明显增厚,肾组织AGEs、RAGE和TGF-β21表达增加。与DM组比较,DG组UACR、血清GB/GALB和AGEs降低[172.38(38.68,949.42)vs117.63(20.17,294.48)mg/g,(51.01±14.16)%vs(40.38±10.41)%,(8547.31±875.27)vs(6585.19±1406.13),P0.05],肾小球系膜区扩张减轻,基底膜厚度下降,肾组织AGEs、RAGE和TGF-β1表达降低。结论甘氨酸可减少STZ大鼠AGEs的产生,抑制肾组织RAGE及TGF-β1的表达,改善肾脏损伤。     

血清晚期糖基化终末产物与心脏再同步治疗患者的预后相关性研究

目的评估血清晚期糖基化终末产物(advanced glycation end-products, AGEs)水平,对充分药物治疗加心脏再同步化治疗(cardiac resynchronization therapy, CRT或cardiac resynchronization therapy defibrillator, CRT-D)的心力衰竭患者全因死亡风险的相关性。方法回顾分析浙江医院31例符合CRT植入适应证的心力衰竭患者的病例资料,根据患者入院时AGEs水平分为高AGEs水平组(≥2.00μg/mL)和低AGEs水平组(2.00μg/mL)。同时根据随访过程中生存及死亡分为两组。随访终点为全因死亡。采用log-rank检验比较高AGEs组及低AGEs组的临床预后,并绘制Kaplan-Meier生存曲线。采用单因素和多因素Cox比例风险回归模型分析AGEs水平对CRT植入的心力衰竭患者临床终点的预测作用。结果高AGEs组患者较低AGEs组患者的低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin, LDL)水平、左室舒张末内径、扩张性心肌病比例、全因死亡率高,而高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterin,HDL)、QRS时限缩短的比例较低。经过最长129个月随访,死亡14例(45.16%)。2年生存率83.9%,5年生存率67.7%。死亡组较生存组的AGEs水平、左心房内径、左心室舒张末内径高,而血红蛋白(hemoglobin, Hb)水平、QRS时限缩短比例低。Kaplan-Meier生存分析显示,高AGEs组的全因死亡率高于低AGEs组,差异具有统计学意义(χ~2=9.298,P 0.05)。多因素Cox回归分析显示,高AGEs水平是心力衰竭患者CRT术后全因死亡的独立预测因素(HR=0.078,95%CI:0.013～0.462,P 0.01)。结论高AGEs水平的心力衰竭CRT术后患者全因死亡率增加,AGEs水平是心力衰竭患者CRT治疗后全因死亡的独立预测因素。     

骨髓间充质干细胞共培养对肝星状细胞增殖、凋亡和RohA表达的调控

目的:观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养对肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡和RohA表达的影响,探讨BMSCs旁分泌HGF在其中的作用机制.方法:贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠BMSCs,传代至第4代使用;大鼠肝星状细胞(HSC-T6)系及纤维原细胞系冻融后传代使用.应用6孔塑料细胞培养盒,每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下双层细胞共培养体系,常规培养.实验分4组:空白对照组、阴性对照组、BMSCs实验组、预处理实验组(c-met多克隆抗体预处理).用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HSCs细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PGR、Western blot检测BMSCs与HSCs共培养后HSCs内RohA mRNA和蛋白的表达.酶联免疫吸附法(ELISA)检测BMSCs与HSCs共培养上清液中肝细胞生长因子(HGF)浓度.结果:BMSCs对HSCs增殖具有抑制作用,BMSCs与HSCs共培养后24 h、48 h的增殖抑制率分别为12.21%,35.43%,与空白对照组、实验对照组和C-met抗体预处理组比较有显著性差异(P<0.01).Annexin-V-FITC/PI双染法检测BMSCs与HSCs共培养48 h后HSCs的凋亡率为25.80%,与空白对照组、实验对照组与c-met抗体预处理组比较有显著性差异(P<0.01).BMSCs与HSCs共培养48 h,BMSGs组RohA mRNA的表达抑制明显,且显著低于空白对照组、实验对照组与C-met抗体预处理组,有显著性差异(P<0.01).BMSCs与HSCs共培养48 h RohA蛋白的表达明显抑制,且显著低于空白对照组、实验对照组与C-met抗体预处理组,有显著性差异(P<0.01).ELISA检测BMSCs与HSCs共培养24 h、48 h上清液中HGF浓度分别为250 ng/L与570 ng/L,明显高于单独BMSCs培养和单独HSCs培养,有显著性差异(P<0.01).结论:BMSCs与HSCs共培养能抑制HSCs的增殖,促进凋亡,抑制RohA表达,其机制可能是通过BMSCs旁分泌HGF发挥抑制大鼠HSCs增殖,促进凋亡的作用.     

Wnt信号系统对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的作用

骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病、慢性心力衰竭等已经成为心脏病治疗学的热门课题,但细胞疗法依赖于干细胞向心肌细胞的定向分化,目前对BMSCs分化为心肌细胞的分子机制了解不多。Wnt信号系统与器官的分化和形成密切相关,大量研究表明,Wnt信号系统对干细胞向心肌细胞的定向分化有重要作用,对该信号系统的控制,在心脏病的细胞疗法中显得尤其重要。本文将就Wnt信号系统在BMSCs的增殖、迁移及心肌定向分化中的调控作用展开论述。     

晚期糖基化终产物对结肠癌干细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对结肠癌干细胞AGEs受体(RAGE)表达及增殖和凋亡的影响。方法以人SW480结肠癌干细胞为研究对象,不同浓度AGEs及50μmol/L PD98059、40mmol/L二甲双胍(MET)干预结肠癌干细胞后,分别应用RT-PCR和Western blot检测24h细胞RAGE mRNA和RAGE、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达;CCK-8检测24h细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果应用不同浓度(100、200、300μg/ml)AGEs干预后,与Con组(未加AGEs)比较,200μg/ml AGEs组RAGE mRNA和蛋白表达均增加,(p-ERK1/2)/(ERK1/2)也升高(P0.05)。PD98059干预后,RAGE蛋白表达及(p-ERK1/2)/(ERK1/2)均降低。与不同浓度(100、200、300、500μg/ml)BSA组比较,相应浓度(100、200、300、500μg/ml)AGEs组细胞吸光度(OD)升高(P0.05),细胞活力分别增加11.6%、16.3%、13.8%、13.9%。200μg/ml AGEs组PD98059干预,细胞OD值下降(P0.05)。24h后,200μg/ml AGEs组细胞凋亡率与Con组比较,差异无统计学意义(P0.05),MET组细胞凋亡率升高(P0.05);与MET组比较,MET+AGEs组凋亡率降低(P0.05);与MET+AGEs组比较,MET+AGEs+PD组凋亡率升高(P0.05)。结论 AGEs可促进结肠癌干细胞增殖,抑制其凋亡,作用机制可能是通过作用于RAGE,上调其表达量,激活ERK1/2通路来实现。     

骨髓间充质干细胞条件培养液对急性百草枯中毒肺损伤的影响

目的通过将骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养液注入到急性百草枯中毒大鼠体内,观察其对急性百草枯中毒肺损伤的影响。方法选4周龄SPF级雄性SD大鼠,原代培养BMSCs,传至第3代的BMSCs无血清培养24 h,收集的培养基即为BMSCs条件培养液。将30只SPF级雄性大鼠随机分为3组:百草枯组、BMSCs条件培养液治疗组(治疗组)、正常对照组。将BMSCs条件培养液通过尾静脉注入各组大鼠体内,观察各组大鼠肺组织肺泡炎评分、肺组织α-SMA表达水平和各组大鼠血浆中TNF-α、IL-1β的水平变化。结果与百草枯组相比,治疗组肺泡炎症反应较轻,肺组织α-SMA表达水平较低(P0.05),血浆中TNF-α、IL-1β的含量较低(P0.05)。结论 BMSCs条件培养液可减缓急性百草枯中毒引起的肺损伤。     

CXCR4基因修饰骨髓间充质干细胞移植对损伤血管内皮化的影响

目的:探讨基质细胞衍生因子受体4(CXCR4)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠颈动脉球囊成形术后内皮修复的影响。方法:运用密度梯度离心法、贴壁培养并扩增BMSCs,用携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒转染BMSCs,获得CXCR4修饰的BMSCs(EGFP-CXCR4-BMSCs)。建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,随机分成PBS移植对照组(对照组)、空病毒转染BMSCs组(EGFP-BMSCs组)及CXCR4转染BMSCs移植组(CXCR4-BMSCs组)。MTT分别检测慢病毒转染细胞后第1、2、3、4、5d的细胞活力,计算细胞增殖率;细胞移植后14d取血管组织行免疫荧光检测GFP表达,28d行免疫组织化学染色检测血管内膜血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达;苏木精-伊红(HE)染色检测血管形态学变化;Western blot检测血管局部内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果:BMSCs转染EGFP空病毒载体及CXCR4后,与对照组相比,各时间点细胞增殖率无统计学差异。CXCR4-BMSCs组损伤血管处有较多的阳性GFP表达。CXCR4-BMSCs与EGFP-BMSCs组血管新生内膜面积、新生内膜/中膜面积均较对照组减轻(均P0.05),CXCR4-BMSCs组尤为明显(P0.05)。CXCR4-BMSCs与EGFP-BMSCs组血管内膜较对照组相比均有CD31及VEGF的表达(均P0.05),损伤血管eNOS表达量较对照组均明显增高(均P0.05),以CXCR4-BMSCs组较为明显。结论:CXCR4基因修饰不影响BMSCs的增殖,CXCR4-BMSCs较单纯EGFP-BMSCs移植更能促进动脉损伤后早期再内皮化,降低血管成形术后再狭窄。     

晚期糖基化终末产物对糖尿病大鼠主动脉结构和功能的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对主动脉血管结构和功能影响及氨基胍的保护作用。方法将80只雄性SD大鼠随机分为4组:空白对照组(A组),糖尿病组(B组),糖尿病氨基胍干预组(C组)和空白氨基胍干预组(D组),每组20只。药物应用12周观察主动脉功能和结构变化。结果与A组和D组比较,B组、C组主动脉环对去甲肾上腺素引起的收缩反应明显增强,对乙酰胆碱引起的舒张反应则均明显减弱,C组反应强度较B组明显减轻(P0.05,P0.01)。主动脉壁均有AGEs沉积,B组、C组较明显,C组较B组明显减轻(P0.01);超微结构观察显示,A组、D组主动脉内膜大致正常,B组、C组内膜破坏明显,与动脉环结果呈一致性趋势。结论糖尿病大鼠主动脉AGEs含量增多,损伤了主动脉的结构和功能,氨基胍能够减少AGEs的沉积,并对主动脉结构和功能有保护作用。