小鼠睾丸中神经激肽B受体(NK3r)的免疫组织化学

1　材料和方法1.1　材料　雄性成年 BAL B/ c小鼠 6只 ,体质量 2 5～ 2 8g.以颈椎脱臼法处死后立即取材 ,用 9g· L- 1 生理盐水迅速冲洗干净置入 40 g· L- 1 多聚甲醛固定 2 4h,再浸入含 30 0 g·L- 1蔗糖的缓冲液中浸泡 4℃过夜 ,包埋剂包埋后恒冷箱切片 ,分两套收集 ,片厚 4μm,贴于涂明胶载玻片上室温晾干 .1.2　方法　经 30 m L· L- 1 的甲醇双氧水封闭 30 min后 ,第一套切片按照 ABC法进行染色 :1进兔抗神经激肽 B受体 [1 ](1∶ 5 0 )染色 12～ 2 4h;2 Biotin标记的山羊抗兔 Ig G抗体(DAKO 1∶ 40 0 )染色 6～ 8h;3 Avidin…     

低温冷冻标本制备透射电镜样品

1　材料和方法　标本取材于 - 70℃冰箱保存 3a,手术完整切除的先天性胫骨假关节 .将冷冻的胫骨周围病变软组织修切 1 mm× 1 mm× 1 mm小块数粒 ,投入 40 g· L-1戊二醛 ,0 .1 mol· L-1磷酸缓冲液 (p H7.4)前固定 4h,磷酸缓冲液漂洗 ;1 0 g· L-1四氧化锇 ,0 .1 mol· L-1磷酸缓冲液后固定 2 h,磷酸缓冲液漂洗 .常规丙酮脱水 ,Epon81 2包埋 ,LKB NOVA型超薄切片机切片 ,电子染色 ,JEM- 2 0 0 0 EX电镜观察并拍照 .2　结果　先天性胫骨假关节为一种起源于骨膜的纤维瘤病(CPT) .电镜下细胞呈梭形、星形或不规则形 ,散布于胶原纤维…     

日本脑炎病毒血球凝集和凝集抑制试验的条件

1　材料和方法1.1　材料　血凝板为 2 0孔 U型底塑料硬板 .0 .12 mol·L- 1 HCl浸泡过夜 ,自来水 ,单蒸馏水 (DW)冲洗干净 ,晾干备用 .血凝素制备是用出生 3～ 6 d昆明种乳鼠 ,脑内接种 JEVSA14株 0 .0 2 m L,3d后发病处死 ,取脑加入少许 p H9.0硼酸盐水 (BBS:0 .5 mol· L- 1硼酸 10 0 m L,1.5 m ol· L- 1 Na Cl80 m L ,1mol· L- 1 Na OH 2 4 m L ,DW至 10 0 0 m L ) ,研磨后配成 10 0 g· L- 1脑悬液 ,5 0 0 0 r· min- 1离心 2 0 min,吸取上清分装小塑料管 - 2 0℃保存 .其中少量上清经紫外灯照射 2h灭活后 - 2 0℃保存 .…     

DNA聚合酶-I Klenow片段原位检测缺血性神经元的DNA早期断裂

1　材料和方法 1.1　材料　雄性4 mo龄左右SD大鼠36只,体质量250～350 g, 本校实验动物中心提 供 ;DNA聚合酶-I Klenow大片段、biotin-dATP, dGTP, dCTP, dTTP购自美国Gibco公司. 1.2　脑缺血模型　按文献［1］方法建立前脑缺血模型. 1.3　动物分组及组织切片制备　36只大鼠随机分组,实验组每组4只,假 手术对照组每组2 只,分缺血再灌注1, 2, 3, 6, 24和72 h 6个时间点,各组于相应时间点取脑,将其快速包 埋于干冰中,选择视交叉部位切片,片厚10 μm,储存于-70℃冰箱备用. 1.4　方法　玻片晾干,在40 g.L-1多聚甲醛固定30 min, 0.01 mol.L-1 PB S漂洗5 min×3次;在37℃湿温箱中,用含有10 μmol.L-1的dGTP, dCTP, dTTP标记 的dATP和40 U.mL-1的E.coli Klenow片段及50 mmol.L-1 Tris-HCl, 1 0 mmol.L-1 MgCl2, 50 mmol.L-1 NaCl的混合液(pH 8.0)孵育1 h, 0.01 mol.L-1的PBS液终止反应,然后在PBS/小牛血清白蛋白(0.5 g.L-1)中洗5 m in,再将生物素-卵白素-辣根过氧化物酶复合物(ABC 1∶300, Sigma)在PBS/小牛血清白 蛋白中孵育1 h,最后用0.5 g.L-1 DAB在PBS (0.01 mol.L-1 pH 7.4)和0.5 g.L-1 H2O2中显色.     

胰蛋白酶预处理在人角质形成细胞传代培养中的应用

1　材料和方法1.1　材料　 1KC的培养 :无菌条件下手术取人包皮 ,尽量剪除皮下组织 ,置于 1.5 g· L- 1 Dispase液中 4℃ 18～ 2 4h.将真表皮分离 ,取表皮分别置于 2 .5 g· L- 1胰蛋白酶 0 .1g·L- 1二乙胺四乙酸二钠 (EDTA)及含 10 0 m L· L- 1血清的DMEM中吹打成单细胞悬液 ,离心 30 0 g· m in- 1 ,10 min,弃悬液 ,KC无血清培养基 (Gibco BRL )重悬细胞 ,调整细胞数至1× 10 3· L- 1 ,接种至 6孔培养板 ,2 4h后换液 .当细胞生长至 80 %～ 90 %汇合时 1∶ 2传代 .1.2　方法　 1分组 :KC传代时分为两组 ,预处理组 :细胞约80 %…     

Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化和鉴定

1　材料和方法1.1　材料　胃蛋白酶及 型胶原蛋白 (C )标准品购自美国Sigma公司 . Mr14 .4～ 97.4× 10 3低分子标准蛋白购自上海丽珠东风生化技术有限公司 .CS- 90 0 0薄层扫描仪购自日本岛津公司 .1:Protein marker;2 :C (Sigma) 2 g·L- 1 ;3 :C (Sigma) 1g·L- 1 ;4:C 1g· L- 1 ;5 :C 0 .5 g·L- 1 ;6:C 0 .2 5 g·L- 1 ;7:0 .12 5 g· L - 1 .图 1　 SDS- PAGE分析经 DEAE- 5 2纤维素柱层析纯化的 C 1.2　方法　新鲜牛软骨剥去骨膜 ,在液氮冷冻下磨成粉 ,称质量 ,用 10倍体积的 4 mol· L- 1 盐酸胍 - 0 .0 5 mmol· L…     

血浆置换抢救重症血栓性血小板减少性紫癜1例

1　病例报告　女 ,38岁 ,因恶心、呕吐 1 0余d ,意识不清 2d ,于 2 0 0 3 0 8 1 3急诊入院 .查体 :意识障碍 ,脑膜刺激征阳性 ,无局灶性定位体征 ,T 38℃ ,P 1 0 6·min-1 ,R 1 8·min-1 ,BP1 5 /9kPa.心肺 (- ) ,肝脾淋巴结无肿大 .Hb 78g·L-1 ,PLT1 1 6× 1 0 9·L-1 ,WBC 7.4× 1 0 9·L-1 .尿常规 :PRO( ) ,ERY( ) ;总胆红素 2 5 .6 μmol·L-1 ,直接胆红素 1 1 .3μmol·L-1 ,纤维蛋白原 1 .81 g·L-1 ;骨髓穿刺结果报告符合血栓性血小板减少性紫癜 (thromboticthrombocytopenicpurpura ,TTP) .入院后PLT进行性下降 ,全…     

缺铁性贫血患者血清和骨髓IgG,SIgA,铁蛋白和胃动素的变化

1　对象和方法1.1　对象　收集 1996 - 0 1/1999- 12住院的缺铁性贫血 (IDA)患者 2 2 (男 9,女 13)例 ,年龄 (36± 11)岁 ,临床症状和体征包括头昏 ,乏力 ,面色苍白 ,心慌气短 ,消化不良等 ;病因分析包括慢性消化性溃疡 ,慢性萎缩性胃炎 ,胃手术后 ,月经失调 ,长期服用非甾体类药物等 .根据 WHO标准并结合兰州地区状况 ,贫血的定义是 ,Hb在男性 <12 0 g· L- 1 ,女性 <110 g·L- 1 .IDA包括骨髓铁染色阴性或血清铁蛋白 <13μmol·L- 1 (正常 13～ 31μmol· L- 1 )和血清铁 <45μmol· L- 1 (正常45～ 73μmol· L- 1 ) ,转铁蛋白饱…     

菌斑生物膜的透射电镜样品制备

1　材料和方法1 .1　材料　收集拔除的正常第一恒磨牙 ,去除表面的菌斑 ,将其制备成直径为 4mm、厚度为 0 .5mm的牙釉质磨片 ,常规高压消毒 .将直径为 3mm、厚度为 1 mm,孔径为 1 mm的硬塑料环消毒后粘于牙釉质磨片上 (用 3M光固化树脂 ) .将这种装置用光固化树脂粘结于志愿者的同侧第一磨牙上 ,分别于 4,5,6和 7d后取下 .1 .2　方法　将取下的菌斑生物膜装置投入 40 m L· L-1戊二醛 ,0 .1 mol· L-1 磷酸缓冲液 (p H 7.4)前固定 4 h,其间在真空中放置 1 5 min(JY- 71 2 4型真空泵 ,上海微型电机厂 ) ,磷酸缓冲液漂洗 ;1 0 g· L-1 四…     

骨髓活检电镜样品制备方法

0　引言　用电镜观察骨髓活检标本是临床上诊断造血系统恶性疾病的重要手段之一 .为了获得准确而可靠的结果 ,既要求达到良好的固定 ,保存细胞原有的微细结构 ,又要求骨组织能迅速完全脱钙 ,便于切片 .为此我们摸索出一种较好的方法介绍如下 .1　材料和方法1.1　材料　收集西京医院 1997/ 1998送检我室的骨髓环钻活检标本 5例 ,其中白血病 3例 ,再障 2例 .固定脱钙液的配制 :首先量取多聚甲醛 2 g,双蒸水 2 5 m L ,加热溶解 ,待冷却后缓慢加入 10 0 mmol· L- 1 Na OH1～ 2滴至澄清 ,然后加入2 5 0 g· L- 1戊二醛 10 m L,2 0 mmol·L- …     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …