玻璃化冷冻保存羊卵巢组织异种移植的实验研究

目的:探讨羊卵巢组织玻璃化冷冻复苏后异种移植的卵泡生长发育情况。方法:取绵羊的卵巢,将卵巢皮质切块,应用玻璃化快速冷冻法保存。羊卵巢组织片复苏后在裸鼠的颈部皮下移植,每只裸鼠移植2块组织,于移植1个月后获取移植物,HE染色观察存活卵泡的情况。结果:共移植组织16块,取材时肉眼可见其中一块组织纤维化萎缩,镜下见此块组织纤维化,移植组织存活率87.5%(14/16)。HE染色观察每只移植小鼠的2块移植物中基本只有1块有可视卵泡。1只鼠未见可视卵泡;1只鼠见1个不典型原始卵泡;1只鼠有2个不典型原始卵泡;余下5只鼠的移植卵巢组织中均可见多个典型的存活卵泡。结论:羊卵巢组织经冷冻复苏后能够成功移植于裸鼠的颈部皮下,大部分卵泡处于良好的存活状态。     

兔卵巢组织玻璃化冷冻的实验研究

目的:探讨玻璃化冷冻法保存兔卵巢组织的效果。方法:随机将25只新西兰雌兔分为对照组(5只)、慢速冷冻组(10只)和玻璃化冷冻组(10只),比较各组冻融前后卵巢组织学、超微结构、卵泡凋亡(原位末端标记法,TUNEL)和子宫系膜内移植后卵巢功能的恢复情况。结果:新鲜组织、慢速冷冻复苏组织和玻璃化冷冻复苏组织中正常形态卵泡比例分别为87.36%、81.96%和82.72%,两冷冻组正常卵泡比例均低于对照组,差异有统计学意义?P(0.05),但玻璃化冷冻组与慢速冷冻组差异无统计学意义(P>0.05)。3组间卵泡凋亡比率分别为21.4%、13.5%和17.1%,差异无统计学意义(P>0.05);3组移植后兔动情周期出现率均为100%,动情周期出现天数差异无统计学意义?P>0.05);移植存活的卵巢组织内可见各级形态正常的卵泡发育。结论:玻璃化冷冻可有效保存卵巢组织的结构和功能,是一种简单、可行的兔卵巢组织冷冻保存法。     

两种冷冻保护剂玻璃化冷冻小鼠卵巢的比较研究

目的:探讨两种玻璃化冷冻保护剂对小鼠卵巢组织学和功能的影响。方法:将23只4周龄ICR雌鼠随机分为新鲜卵巢移植组(6只)、去势组(5只)、EG40组(6只)和ED20组(6只)。EG40组和ED20组分别应用乙二醇(EG)和联合应用EG与二甲基亚砜(DMSO)玻璃化冷冻小鼠卵巢组织,一周后解冻,将一部分复苏卵巢组织自体移植入小鼠肾被膜下,另一部分组织行组织学观察。移植术后5d开始观察所有小鼠的动情周期,一个月后处死小鼠,对存活的卵巢组织行组织学观察。结果:EG40组、ED20组和新鲜卵巢移植组小鼠动情周期出现率均为100%,出现动情周期的天数分别为10.2±1.2d、8.0±0.9d和6.8±1.0d,EG40组动情周期出现天数明显多于新鲜卵巢移植组(P<0.01);ED20组与新鲜卵巢移植组差异无显著性(P>0.05)。移植存活的卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡,形态正常,但冻融卵巢组织内卵泡数量比新鲜组织少。结论:联合应用玻璃化冷冻保护剂EG和DMSO对小鼠卵巢组织学和功能的影响较小。     

冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应

目的 探讨冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应.方法 将36只性成熟雌性小白鼠随机分为新鲜移植组、冻融移植组和对照组,每组12只.新鲜移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,立即移植人双侧肾被膜下;冻融移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,采用玻璃化冷冻方法冷冻保存,2周后将冷冻卵巢组织复苏,移植入小鼠双侧肾被膜下.卵巢组织移植2周后,新鲜移植组和冻融移植组每组随机取6只小鼠应用7.5 IU人绝经期促性腺激素及10 IU绒毛膜促性腺激素,观察移植后的卵巢组织对促性腺激素的反应.同时应用免疫组化染色方法观察各组卵泡中卵泡刺激素受体的表达情况.结果 新鲜移植组、冻融移植组和对照组未应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为2.3%、2.3%和2.6%,应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为4.2%、4.0%和5.8%,各组内分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);新鲜移植组和冻融移植组与对照组比较,差异均元统计学意义(P＞0.05).新鲜移植组、冻融移植组和对照组卵泡刺激素受体表达积分吸光度值在窦状卵泡中分别为9408±2777、9175±3093和8838±2064,在窦前卵泡中分别为4531±1903、4808±1386和5516±1136,各组间分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 卵巢组织冷冻保存、复苏及移植过程未影响卵巢卵泡刺激素受体的表达,冻融后移植的小鼠卵巢组织对外源性促性腺激素的反应未受冷冻、复苏及移植等过程影响.     

两种冷冻方法对人类卵巢组织卵泡形态和组织增殖活性的影响

目的:探讨玻璃化冷冻和慢速冷冻何者更适于冻存人卵巢组织。方法:将10例因卵巢良性囊肿剔除术获取的人卵巢皮质组织切成薄片后随机分配到新鲜卵巢组(A组)、玻璃化冷冻组(B组)和慢速冷冻组(C组),通过光学显微镜和透射电子显微镜观察比较卵泡形态变化,免疫组织化学检测组织细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化。结果:A、B、C组中形态正常的原始卵泡比例分别占71.4%、70.1%、52.3%;形态正常的初级卵泡比例分别占76.0%、43.5%、31.8%;C组中形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例均明显低于A、B组(P<0.05);B组形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例与A组相比无统计学差异(P>0.05)。A、B组中形态正常的原始卵泡超微结构无明显改变,但B组中初级卵泡和C组中原始卵泡和初级卵泡的超微结构存在一定程度的改变。PCNA阳性表达主要见于卵母细胞、颗粒细胞和卵巢组织间质细胞,3组中均有PCNA表达,且表达无统计学差异。结论:玻璃化冷冻较慢速冷冻对人卵巢组织影响小,是一种较适宜的人卵巢组织冷冻保存方法。     

经阴道超声检测卵巢性不孕症的相关研究

目的:研究卵巢形态、生理、功能变化对不孕症的影响。方法:选择正常组与不孕症组,测量卵巢体积、卵泡数量、优势卵泡直径、卵巢动脉血流指数进行比较。结果:卵巢体积、卵泡数量、优势卵泡直径与年龄增长成反比,卵巢动脉血流指数与年龄增长成正比,不孕症患者卵巢体积小于正常同龄组,优势卵泡直径明显小于正常同龄组,动脉血流阻力指数高于正常同龄组。差异均有显著性(P<0.05)。卵泡数量与正常同龄组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:年龄是影响生育的独立因素,卵巢体积小、卵泡生长迟缓、排卵率降低、动脉血流灌注量低所导致的卵巢功能不全,是不孕症的主要原因。     

3种玻璃化液对新生鼠卵巢的渗透反应及冻存效果的比较

目的:探索适宜新生鼠卵巢保存的玻璃化液和冷冻方案。方法:观察新生SD大鼠卵巢在预平衡液及3种玻璃化液中不同时间段的表面积变化,冻融后进行组织学观察和成年SD大鼠肾被膜下异体移植后在体活力分析。结果:新生鼠卵巢在预平衡液中出现渗透性脱水变化,移入EFS40(A组)、EG5.5(B组)、EG5.5/30(C组)3种玻璃化液中,再次剧烈皱缩。3min后,卵巢表面积分别为等渗液对照组表面积的63.2%、82.4%、70.8%。此脱水状态的卵巢玻璃化冻融后形态完整的卵泡百分率均与新鲜移植组(D组)无显著性差异(P>0.05);异体移植后,动情周期出现率和动情周期出现时间均与D组无显著性差异(P>0.05)。各冷冻移植组存活移植物均可见不同发育阶段的各级卵泡,但卵泡数目少于D组,移植20d时A组与D组间有显著性差异(P<0.05);移植60d时B组卵泡数少于D组,组间有差异(P<0.05);C组在各时间点上取材的卵泡数与D组均无差异(P>0.05)。结论:在预平衡液中15min、改良的EG5.5/30液中3min的二步渗透平衡法适宜新生鼠卵巢的玻璃化冷冻。     

骨髓间充质干细胞移植修复化疗所致卵巢损伤的实验研究

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对化疗所致卵巢损伤的影响。方法:采用腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立化疗所致大鼠卵巢损伤模型,并随机分为模型组、实验对照组及移植组。同龄正常大鼠作为空白对照组。移植组在建模结束后每侧卵巢注射绿色荧光标记约1×106个MSCs。于移植后1、15、30、45天及60天,留取各组血标本,并于后4个时间点分批处死大鼠,留取卵巢标本。荧光显微镜下观察绿色荧光及其分布情况。阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期的变化;以化学发光法检测雌二醇(E2)浓度,放射免疫法检测卵泡刺激素(FSH)浓度;计数各级卵泡数。结果:移植MSCs后15天,移植组卵巢组织内可见到明亮的绿色荧光,持续至移植后2月。绿色荧光分布在卵巢间质组织。移植组30%(6/20)的大鼠在移植后15~30天内恢复正常的动情周期,在移植后30~60天内又有4只大鼠恢复正常的动情周期。移植后15、30、45天和60天时,移植组E2浓度高于实验对照组相应时间点E2浓度,而FSH浓度则低于实验对照组相应时间点FSH浓度,差异有显著性。移植45、60天时,移植组各级卵泡数目均高于模型组和实验对照组,低于空白对照组。结论:骨髓间充质干细胞可以在环磷酰胺损伤的大鼠卵巢组织中存活、迁移,但其分化为卵泡组分的可能性小。骨髓间充质干细胞移植可修复环磷酰胺损伤的卵巢组织,部分改善卵巢内分泌功能。     

人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3-luc裸鼠皮下及原位移植瘤模型的建立与研究

目的:建立整体可视化人卵巢癌皮下和原位移植瘤模型,用于实时观察和分析人卵巢癌移植瘤发展和转移的规律,并比较两者的成瘤情况及生物学特性。方法:使用带有荧光素酶报告基因(Luciferase)的人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3-luc分别接种于裸鼠右侧腋窝皮下和左侧卵巢内,建立人上皮性卵巢癌裸鼠皮下和原位移植瘤模型。实时观察卵巢癌细胞SKOV3-luc在裸鼠皮下和原位的生长情况,并切取肿瘤组织,应用病理组织学方法对裸鼠皮下移植瘤和原位移植瘤进行检测和评价。结果:人卵巢癌细胞系SKOV3-luc裸鼠皮下和原位移植瘤模型建立的成功率均较高。裸鼠皮下和左侧卵巢接种肿瘤细胞后,可通过活体成像实时观察肿瘤的生长情况,并且行定量分析肿瘤形成时间等。皮下移植瘤(皮下组)成瘤率为100%,左侧卵巢原位移植瘤(原位组)成功率为100%。注射后第7天,皮下组的肿瘤总荧光强度比值为(3.38±2.50)(Fold),原位组为(1.43±1.32)(Fold);第14天,皮下组为(15.73±11.70)(Fold),原位组为(6.44±7.26)(Fold),皮下组第7天和第14天的肿瘤总荧光强度比值均大于原位组(P<0.05)。结论:人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤和卵巢原位移植瘤建模成功率高,并能很好地反应肿瘤的生物学行为,实时荧光成像便于观察肿瘤体内生长情况,为研究卵巢癌发展和转移提供了可靠的观察模型。     

4种冷冻-解冻方法对家兔卵巢组织形态学的影响

目的:探讨适宜的卵巢组织冻存方案。方法:采用PROH(A2组)及DMSO(B2组)慢速程序化冷冻和DMSO+PROH(C2组)及DMSO+EG(D2组)玻璃化冷冻方法,冻存家兔卵巢组织,解冻复苏后,以相应的4组新鲜组织为对照(A1-D1组),做HE染色,行组织形态学分析。结果:A1-D1组始基卵泡的形态正常率分别为90.1%、91.5%、91.8%、92.2%,其相对应的A2-D2组分别下降为67.6%、69.7%、70.5%、80.1%,差异均有统计学意义(P均<0.05)。冷冻组中A2组始基卵泡形态正常率最高,与B2、C2、D2组比,差异有显著性(P<0.05)。C2、D2组间比,差异无显著性(P>0.05)。各冷冻组合并后形态正常率始基卵泡为72.7%,初级卵泡为55.7%,两者比较有统计学差异(P<0.05)。4个冷冻组中均可见卵巢组织结构受损的表现。结论:4种冷冻解冻方法对卵巢皮质中各级卵泡及卵巢组织结构均造成一定程度的损害,使各级卵泡的形态正常率明显下降,卵巢间质细胞连接变得疏松;PROH慢速程序化冷冻法明显优于DMSO法及玻璃化法,较适合卵巢组织中始基卵泡的保存;冻存卵巢组织对初级卵泡的影响大于始基卵泡。     

人脐血单个核细胞移植治疗放射性裸鼠卵巢早衰

目的:探讨人脐血单个核细胞(HCMNCs)移植治疗卵巢早衰(POF)的可行性及疗效。方法 :雌性BALB/C裸鼠105只,随机分为空白对照组、POF对照组、POF+人脐血单个核细胞移植组。钴60γ射线照射建立POF模型,聚蔗糖(Ficoll)密度梯度离心法制备HCMNCs悬液,并以5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)标记。POF造模成功后,移植组双侧卵巢内注入标记的HCMNCs悬液,POF对照组双侧卵巢内注入同等量的达尔伯克改良伊格尔氏低培养基(L-DMEM)培养液,空白对照组未行任何处理。移植后4周,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)水平变化,并取卵巢组织行苏木素-伊红(HE)染色、BrdU组化染色,观察卵巢卵泡数目变化及移植细胞成活情况。结果:在移植组发现移植的脐血单个核细胞可在早衰的卵巢内存活并参与卵巢功能的修复;血清E2、FSH、LH与POF对照组相比,E2明显升高(P<0.05),FSH和LH明显降低(均P<0.05);卵巢切片HE染色示未闭锁卵泡数目有所增加,并可见各个发育阶段卵泡;免疫组化示移植的人脐血单个核细胞可在裸鼠卵巢内定居并存活。结论:HCMNCs可成功植入裸鼠放射性早衰卵巢内,并能改善其功能。     

促性腺激素释放激素类似物抑制裸鼠卵巢癌移植瘤生长同时保护化疗后卵巢功能的研究

目的 研究促性腺激素释放激素( GnRH)类似物抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长,同时保护化疗裸鼠卵巢功能的双重作用.方法 构建卵巢癌ES-2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为6组(每组6只):(1)生理盐水(NS)组:皮下注射NS 0.1ml/d,1周后腹腔注射NS 0.2ml/周;(2)顺铂(DDP)组:皮下注射NS 0.1ml/d,1周后每周腹腔注射5 mg/kg DDP;(3)戈舍瑞林(goserelin)组:皮下注射goserelin 100 μg/d,1周后腹腔注射NS0.2 ml/周;(4) goserelin+ DDP组:皮下注射goserelin 100 μg/d,1周后每周腹腔注射5 mg/kg DDP;(5)西曲瑞克(cetrorelix)组:皮下注射cetrorelix 100 μg/d,1周后腹腔注射NS0.2 ml/周;(6) cetrorelix+ DDP组:皮下注射cetrorelix 100 μg/d,1周后每周腹腔注射5 mg/kg DDP.用药21 d,观察29 d.比较各组裸鼠体质量、移植瘤体积、移植瘤组织中细胞增殖相关核抗原Ki-67的阳性率、动情周期、卵巢各级卵泡比例、血清抗苗勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇、孕酮水平的差异.结果 各组裸鼠体质量无明显差异(P＞0.05),用药第29天NS组为(19.8 ±2.2)g,DDP组(20.5±1.4)g,gosereline组(19.6±0.9)g,goserelin+DDP组(19.7±1.6)g,cetrorelix组(20.7±2.2)g,cetrorelix+ DDP组(19.0±1.7)g,分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).用药第12天裸鼠移植瘤体积:NS组为(241±179) mm3,DDP组(78±20) mm3,gosereline组(78±55) mm3,goserelin+ DDP组(64±48) mm3,cetrorelix组(78±64) mm3,cetrorelix+ DDP组(70±19) mm3,用药组均明显小于NS组,差异有统计学意义(P＜0.05);第15、19、22、26、29天各用药组移植瘤体积也均明显小于NS组(P＜0.05).NS组Ki-67阳性率为(33± 10)％,DDP组为3.5％,goserelin组8.8％,goserelin+ DDP组1.5％,cetrorelix组(23±11)％,cetrorelix+ DDP组(8±6)％,DDP组、goserelin组和goserelin +DDP组均明显低于NS组,差异有统计学意义(P＜0.05).goserelin组原始卵泡+窦前卵泡率为(71.5±8.1)％,goserelin+DDP组为(62.4± 4.1)％,cetrorelix组(71.2±7.4)％,cetrorelix+DDP组(63.8±2.9)％,均明显高于DDP组的(47.0±4.8)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).goserelin组血清AMH水平为(98±27) ng/ml,明显高于NS组的(66±17) ng/ml,差异有统计学意义(P＜0.05);各组裸鼠血清FSH、雌二醇和孕酮水平分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 GnRH类似物能抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,同时上调AMH分泌、减少动情次数、延长动情周期时间、增加原始卵泡+窦前卵泡率,从而保护卵巢功能.     

酞胺哌啶酮对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的作用

目的 :观察酞胺哌啶酮对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的抑制作用。方法 :于裸鼠背部右侧皮下接种SKOV3 瘤源 ,随机分为 4组 :治疗组 - 1和对照组 - 1,皮下移植后次日开始分别给予酞胺哌啶酮 2 0 0mg kg .d-1、等体积 0 .5%羧甲基纤维素钠腹腔内注射 ,共 4周。治疗组 - 2和对照组 - 2 ,皮下移植第 15天开始分别给予酞胺哌啶酮 2 0 0mg kg .d-1和等体积 0 .5%羧甲基纤维素钠 ,共 2周。定期检测皮下瘤体积和裸鼠体重。用免疫组化方法检测肿瘤组织微血管内皮细胞的表达情况 ,在光学显微镜高倍视野下 (2 0 0× )分别计数肿瘤组织的微血管密度 (MVD)。结果 :治疗组裸鼠皮下瘤体积较对照组明显减小 :治疗结束时 ,治疗组 - 1抑瘤率为 4 0 .2 % (P <0 .0 1) ;治疗组 - 2抑瘤率为 2 8.5% (P <0 .0 5)。治疗组裸鼠体重与对照组无明显差异 (P >0 .0 5)。两治疗组皮下瘤的MVD明显降低 ,治疗组 - 1的抑制率为 4 3.7% (P <0 .0 1) ,治疗组 - 2的抑制率为4 2 .1% (P <0 .0 5)。结论 :酞胺哌啶酮能抑制人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤生长及微血管生成 ,其生长抑制作用以早期应用效果显著 ,且其副作用不明显     

Reduced and delayed expression of GDF9 and BMP15 in ovarian tissues from women with polycystic ovary syndrome

PurposeGrowth differentiation factor 9 (GDF9) and bone morphogenetic protein 15 (BMP15) play crucial roles in follicular development and oocyte maturation. This study aimed to investigate and compare the expression of these proteins in ovarian tissues of women with and without polycystic ovary syndrome (PCOS).MethodsOvarian tissues from 28 patients with PCOS and 26 normal ovulatory women were collected, and the expression of GDF9 and BMP15 in oocytes and granulosa cells was evaluated via immunohistochemical staining.ResultsGDF9 and BMP15 were first expressed in primordial follicles at very low levels, and their expression increased gradually with follicular development, reaching the highest levels in Graafian follicles. However, less GDF9 and BMP15 expression was observed in primordial, primary, and secondary follicles in ovarian tissues of PCOS patients compared with levels in the control tissues (P < 0.05). In Graafian follicles, GDF9 and BMP15 expression reached comparable levels in the PCOS and control groups (P > 0.05).ConclusionsThe expression of GDF9 and BMP15 in ovarian tissues varies among the developmental stages in both oocytes and granulosa cells in human ovarian tissues. The expression of these proteins is reduced and delayed in the early follicular stage in PCOS ovarian tissues, and these differences in expression may be associated with aberrant follicular development in patients with PCOS.     

中药养巢方治疗卵巢功能减退疗效及对性激素水平、卵泡发育的影响

目的 探讨中药养巢方治疗卵巢功能减退疗效及对患者性激素水平、卵泡发育的影响.方法 选取80例卵巢功能减退患者,按照随机数字表法分为对照组与治疗组,每组40例.对照组采用雌二醇片雌二醇地屈孕酮片复合片(芬吗通)治疗,治疗组采用中药养巢方治疗.比较两组临床疗效、治疗前后性激素水平、排卵率、3、6个月内妊娠率、子宫内膜厚度及...     

上皮性卵巢癌中Survivin的表达及意义

目的　探讨凋亡抑制基因Survivin在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义。方法　应用半定量RT-PCR及免疫组化的方法 ,分别检测SurvivinmRNA及蛋白在 5 2例上皮性卵巢癌、 2 5例良性上皮性卵巢肿瘤和 2 0例正常卵巢组织中的表达。结果　SurvivinmRNA及蛋白在 5 2例卵巢癌组织中的阳性表达率分别为 84 6 % (4 4 5 2 )、 6 5 4 % (34 5 2 ) ;在 2 5例良性肿瘤中的阳性表达率分别为 2 4 0 % (6 2 5 )、 0 (0 2 5 ) :在 2 0例正常卵巢组织中的阳性表达率分别为 15 0 % (3 2 0 )、 0 % (0 2 0 )。三者比较均差异有极显著性 (P <0 0 0 1) ;5 2例上皮性卵巢癌中 ,浆液性囊腺癌 30例 ,粘液性囊腺癌 16例 ,其他类型癌 6例 ,各种类型上皮性卵巢癌中SurvivinmRNA及蛋白阳性表达率比较 ,差异均无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;上皮性卵巢癌中 ,临床分期Ⅰ～Ⅱ期 16例 ,Ⅲ～Ⅳ期 36例。组织学分级G1 ～G2 19例 ,G333例。SurvivinmRNA及蛋白在卵巢癌组织中的表达随着卵巢癌临床分期及组织学分级的升高而显著增加 (P <0 0 5 )。结论　Survivin基因在卵巢癌的发生发展中起一定作用。     

酪氨酸激酶受体阳性单核细胞对卵巢肿瘤生长及微血管、淋巴管生成作用研究

目的 探讨酪氨酸激酶受体阳性（Tie2+）的单核细胞(Tie2+-U937)对裸鼠移植瘤生长和微血管、淋巴管生成的作用。方法 2013年1月至2014年2月在上海交通大学医学院构建裸鼠卵巢肿瘤皮下和原位模型,转染Tie2+-U937和NC-U937,分别将转染了荧光的人卵巢癌细胞系(SKOV3ip1-luc)与Tie2+-U937或者NC-U937按1:10比例混匀,注入裸鼠皮下和卵巢包膜下,单独的SKOV3作为阴性对照组,观察裸鼠成瘤时间和肿瘤大小;免疫组化检测肿瘤微血管和淋巴管的表达。结果 Tie2+-U937能够促进裸鼠皮下和原位移植瘤生长。皮下成瘤模型：注射后第8、21天Tie2组肿瘤总荧光强度值大于其他两组(P<0.05)。裸鼠于21d处死并称其肿瘤重量,Tie2组(0.43±0.16)g,U937组(0.18±0.04)g,Control组(0.13±0.08)g,Tie2肿瘤重量较其他两组重(P<0.05);Tie2组免疫组化CD31的表达明显大于其余两组(P<0.05);原位模型：注射后第14、35天Tie2组肿瘤总荧光强度值大于其余两组(P<0.05);Tie2组免疫组化CD31和LYVE-1的表达明显大于其余两组(P<0.05)。结论 Tie2+单核细胞能够促进卵巢肿瘤裸鼠皮下、原位移植瘤的生长,并且其促进肿瘤增殖的作用与微血管和淋巴管生成有关。     

Follicle development in grafted mouse ovaries after cryopreservation and subcutaneous transplantation

OBJECTIVE: Our aim was to determine the impact of freezing, thawing, and subcutaneous transplantation on follicular development in grafted mouse ovaries. STUDY DESIGN: The mice were divided into 3 groups: control (group 1), frozen-thawed grafting (group 2), and frozen-thawed grafting with human menopausal gonadotropin injection (group 3). After freezing and thawing, the ovaries were transplanted into the subcutaneous tissue. Two weeks after transplantation, grafted ovaries and blood samples were collected. RESULTS: Ovaries from group 3 contained significantly more follicles (246 +/- 43 follicles) than group 2(P <.05). The pattern and intensity of Cx37 immunohistochemical staining was similar in all groups. Follicle-stimulating hormone concentrations were significantly decreased in group 2 after ovarian grafting. CONCLUSION: In mice, gonadotropin treatment before subcutaneous grafting improved the survival of growing follicles. Subcutaneous ovarian transplantation may restore ovarian function and could obviate many of the problems that are related to ovarian banking for humans.     

MicroRNA-16逆转上皮性卵巢癌耐药的动物实验研究

目的:研究微小RNA-16(miR-16)对人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤耐药性的逆转作用,并初步探讨其逆转作用机制。方法:24只BALB/c裸鼠,随机分为四组,每组6只:Ⅰ组给予皮下接种卵巢癌SKOV3细胞株,成瘤后应用顺铂治疗;Ⅱ组皮下接种卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药细胞株,成瘤后给予顺铂治疗;Ⅲ组皮下接种卵巢癌SK-OV3/DDP顺铂耐药细胞株,成瘤后给予顺铂与miR-16阴性对照试剂(miR-16 Negative)协同治疗;Ⅳ组接种卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药细胞株,成瘤后给予顺铂与miR-16化学修饰模拟物(miR-16 Agomir)协同治疗。观察比较四组皮下肿瘤生长情况,种瘤后第35天处死裸鼠,称取肿瘤组织质量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肿瘤组织中bcl-2 mRNA表达,免疫组化方法检测各组肿瘤组织中bcl-2蛋白表达。结果:顺铂与miR-16 Agomir协同治疗组裸鼠皮下肿瘤生长受到明显抑制,其肿瘤组织中bcl-2 mRNA表达水平较其余各组降低,差异具有显著性(P<0.05),其bcl-2蛋白表达亦明显低于其余各组(P<0.05)。结论:miRNA-16可能通过对其靶基因bcl-2的反向调控作用,逆转裸鼠卵巢癌皮下移植瘤顺铂耐药性。