苯对骨髓CD34+细胞及单个核细胞凋亡的影响

目的　探讨不同苯浓度作业场所对淋巴细胞微核和 /淋巴细胞百分比高的工人的骨髓CD34 细胞数量及单个核细胞AnnexinV ,Fas阳性表达率的影响。方法　对 2 0例淋巴细胞微核和 /淋巴细胞百分比偏高的苯作业工人和 10例正常人 ,采用流式细胞术检测CD34 细胞数量 ,单个核细胞AnnexinV和Fas的阳性表达率 ;气相色谱法测定作业场所苯浓度。结果　苯浓度 34～ 5 82mg/m3 作业工人骨髓CD34 细胞数量明显低于正常对照组 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,相关分析呈负相关 (P <0 .0 5 ) ,r =- 0 .95。骨髓单个核细胞AnnexinV阳性表达率与Fas阳性表达率明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,相关分析呈正相关 (P <0 .0 5 ) ,r =0 .96 ;苯浓度 8～ 32mg/m3 作业工人骨髓仅CD34 细胞数量高于正常对照组。结论　动态测定苯作业工人骨髓CD34 细胞数量 ,AnnexinV和Fas阳性表达率对慢性职业性苯中毒有早期诊断和预防意义     

局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠血脑屏障通透性的研究

【目的】探讨局灶性缺血再灌注损伤后早期大鼠血脑屏障(blood brain barrier,BBB)功能障碍的变化和水肿形成的规律。【方法】应用伊文思蓝法(Evans-Blue,EB)观察再灌注后不同时间点BBB通透性变化,采用干湿重法计算脑含水量评估脑水肿、TTC法评估脑梗死面积。【结果】脑缺血再灌注3 h时,大鼠BBB通透性明显增加(P<0.05),24 h最高(P<0.01);缺血再灌注各组缺血侧大脑半球EB含量与对侧相比差异有显著性(P<0.05)。与假手术组相比EB含量差异均有显著性(P<0.05)。脑含水量变化与BBB通透性改变呈平行关系;但缺血再灌注后各时间点梗死面积差异无显著性。【结论】缺血再灌注损伤早期,大鼠BBB完整性受到破坏,脑水肿加重,因此应将BBB的结构和功能稳定性作为缺血再灌注损伤早期治疗的关注重点。     

天麻素对局灶脑缺血再灌注海马中BDNF及TrkB的影响

目的 探讨天麻素对局灶性脑缺血再灌注损伤的海马脑源性神经营养因子及其受体TrkB含量变化的影响.方法 120只SD大鼠体重200～2209,随机分为三组:假手术组(n=40),局灶脑缺血再灌注组(n=40)和天麻素治疗组(n=40).线栓法制备大脑中动脉梗阻(MCAO)模型,药物组在脑缺血再灌注即刻和12h腹腔注射天麻素,模型组和假手术组均注射等量生理盐水.分别在缺血再灌注2h、4h、6h、12h和24h处死动物,运用RT-PCR技术检测缺血侧海马组织内BDNF和TrkB的mRNA的表达变化.结果 再灌注损伤后,损伤侧海马组织内BDNF和TrkB的mRNA表达均增高.在天麻素治疗组中BDNF和TrkB的mRNA于再灌注2h上升,4h达高峰.结论 脑缺血后损伤侧海马神经元内BDNF和TrkB的mRNA含量增多,可能有利于受损神经元的修复.     

川芎嗪预处理对沙鼠脑缺血再灌注损伤影响

目的 探讨川芎嗪预处理对沙鼠前脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法 雄性沙鼠随机分为对照、脑缺血再灌注、缺血预处理、川芎嗪预处理组,参照Kirino法制备脑缺血再灌注模型,Kitagawa法制备脑缺血预处理模型,HE染色法观察海马区神经细胞形态变化,免疫组织化学法检测神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,4-pellet taking test(4-PTT)旱路迷宫法测试动物学习记忆功能。结果 与脑缺血再灌注组比较,缺血预处理和川芎嗪预处理组中存活神经元密度(12.93±3.17,18.74±4.21)增加;GFAP(8.50±1.25,12.72±1.38)表达增加,凋亡神经细胞数量(16.50±5.25,9.72±3.38)下降;参照记忆指数和工作记忆指数得到改善(P均<0.05)。结论 川芎嗪预处理可改善脑缺血再灌注沙鼠的学习记忆功能,其机制与增强星形胶质细胞活性、减少神经细胞凋亡有关。     

线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的体会

目的详细说明建立一种操作简便、稳定可靠的局灶性脑缺血再灌注模型的方法与注意事项。方法 24只雄性SD大鼠随机分两组(模型组和假手术组)。参照并改进Koizumi及Zea-Longa腔内线栓法制备大脑中动脉阻断(MCAO)模型。结果模型组大鼠神经缺陷体征明显,梗死灶明显,梗死部位较恒定;假手术组脑组织结构完整,未见缺血性改变,TTC染色无梗死灶。结论用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型是成功的。     

PARP-1抑制剂PJ34对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响

[目的]探讨PARP-1抑制剂PJ34干预治疗对大鼠局灶脑缺血/再灌注损伤的影响. [方法]用线栓法建立局灶脑缺血/再灌注模型(Ⅰ组),分别经左侧侧脑室注射PJ34(Ⅱ组)、生理盐水(Ⅲ组)和假手术组(Ⅵ组);通过Klenow标记及TUNEL染色技术检测鼠脑中单、双链DNA断裂,分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中PARP-1蛋白的表达,同时测定脑组织及血浆中TNF-α、IL-6及IL-8含量变化和细胞凋亡情况. [结果]与Ⅰ组比较,Ⅲ组鼠脑缺血侧DNA单、双链断裂,PARP-1的表达均无明显差异,Ⅱ组缺血侧脑中Klenow及TUNEL阳性细胞数均明显减少,PARP-1的表达明显减少,TNF-α、IL-6及IL-8含量和凋亡减少.[结论]PARP-1抑制剂PJ34对脑缺血/再灌注损伤具有保护作用.     

眼针对大鼠脑缺血再灌注脑血流量及速度影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注模型(CIRI)大鼠脑皮层血流量及流速影响,探讨眼针治疗脑缺血性疾病的可能机制。方法运用激光多普勒微循环测量仪检测缺血24 h模型大鼠大脑皮层组织血流量及血流速度;观察电镜下毛细血管管壁的结构变化。结果模型组与眼针组大鼠大脑皮层组织血流量与血流速度分别为(63.28±8.84)、(169.38±19.89) PU和(18.98±6.75)、(57.43±28.84) mm/s,与模型组比较,眼针组大鼠大脑皮层组织的血流量明显升高、血流速度明显加快(P<0.01);眼针组大鼠大脑皮层毛细血管的超微结构基本正常,模型组内皮细胞坏死、萎缩。结论眼针能够增加ICRI模型大鼠脑皮层组织血流量,提高血流速度,改善毛细血管的内皮细胞结构。     

茶色素对脑缺血再灌注损伤大鼠一氧化氮合酶表达的影响

目的观察茶色素对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,并探讨其可能的保护机制。方法采用线栓法闭塞大鼠大脑中动脉建立脑缺血再灌注模型。雄性SD大鼠60只,随机分为缺血再灌注组、假手术组、银杏液组和茶色素组（50、100和200 mg/kg）。结果大鼠脑缺血再灌注后,梗死范围达23.5%±4.6%,神经症状评分增高为（2.8±0.4）分。中、高浓度茶色素可明显缩小脑缺血再灌注大鼠脑梗死范围（18.5%±3.6%和14.2%±2.9%）（P〈0.01）,高浓度茶色素可改善大鼠神经症状评分（1.9±0.3）分（P〈0.05）。与假手术大鼠比较,大鼠脑缺血再灌注后,脑组织MDA含量显著增加,SOD和GSH-Px活性明显降低。中、高浓度茶色素可降低脑缺血再灌注大鼠脑组织MDA含量,增加SOD和GSH-Px活性。大鼠脑缺血再灌注后,脑组织一氧化氮（NO）含量和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性分别为（16.98±0.95）μmol/mg·prot和（3.89±0.23）U/mg.prot,明显高于假手术组的（6.12±0.39）μmol/mg·prot和（1.89±0.21）U/mg·prot（P〈0.01）,中、高浓度茶色素处理后可明显抑制NO含量和iNOS活性增高,NO分别为（14.26±1.21）和（11.25±1.07）μmol/mg·prot,iNOS分别为（3.45±0.22）和（2.85±0.25）U/mg·prot。结论茶色素可浓度依赖性地对抗缺血再灌注引起的脑损伤,其机制可能与抑制iNOS诱导的NO产生增加有关。     

应用G-CSF对不同人群外周血CD+34细胞和T细胞亚群影响的动态变化

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对健康人及处于完全缓解的恶性血液病患者的外周血CD+34细胞和T细胞亚群的影响.方法对12例健康人和16例自体外周血干细胞移植患者,以G-CSF 150 μg/12 h,皮下注射,连用6 d.应用流式细胞仪测定外周血CD+34和T细胞亚群.结果 (1)应用G-CSF前,两者的外周血CD+34细胞分别为(0.39±0.27)%和(0.47±0.25)%,两者之间无明显差异(P>0.05).应用72 h后,CD+34细胞分别达(1.29±0.64)%和(1.47±0.95)%,较前均有明显增加(P<0.01),两者之间无明显差异(P>0.05).应用96 h后,CD+34细胞达高峰,分别为(1.41±0.73)%和(1.58±0.83)%,两者之间无明显差异(P>0.05),但较应用G-CSF前差异显著(P<0.01).(2)无论是否应用G-CSF,恶性血液病患者的T细胞亚群比例均处于倒置状态,而健康人T细胞亚群则比例正常.随两者应用G-CSF后CD+34细胞逐渐增加,T细胞亚群变化不明显.结论健康人及处于完全缓解的恶性血液病患者,在应用G-CSF后,外周血CD+34细胞比例逐渐增加并于96 h后达到高峰,T细胞亚群无明显变化.     

缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后环氧合酶-2的影响

目的 探讨缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤环氧合酶-2(COX-2)表达的影响,以探讨其脑保护的机制.方法 成年健康SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组(Sham),缺血再灌注损伤组(I/R),缺血后处理组(IPO).线栓法建立大脑中动脉闭塞再灌注模型.缺血再灌注24h后留取大脑皮质组织,免疫组化、Western blot检测COX-2蛋白的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测COX-2 mRNA表达.结果 脑缺血再灌注24 h后,脑皮质内COX-2 mRNA和COX-2蛋白的表达增加(P＜0.05).应用缺血后处理能显著地减少脑缺血再灌注后脑组织内COX-2蛋白的表达(P＜0.05).缺血再灌注24h后,与假手术组相比,缺血再灌注损伤组和缺血后处理组COX-2 mRNA和COX-2蛋白表达明显增多(P＜0.05);但与缺血再灌注损伤组相比,缺血后处理组COX-2 mRNA和COX-2蛋白表达减少(P＜0.05).结论 缺血后处理能抑制大鼠脑缺血再灌注损伤皮质内COX-2的表达,这可能是其脑保护作用的部分机制.     

CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞在儿童哮喘中的作用研究

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)在儿童支气管哮喘发病中的作用。方法选取2015年8月-2017年7月在该院儿科诊断为哮喘的患儿80例,分为急性发作期(急性组)、缓解期(缓解组)的哮喘儿童,各40例,另选取年龄、性别匹配的健康儿童(对照组) 40例,应用流式细胞术检测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T百分比,实时荧光定量PCR检测功能基因Foxp3相对表达量。结果急性组CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T百分比(0. 98±0. 92)和Foxp3基因相对表达量(2. 55±1. 37)最低,其次为缓解组(3. 46±1. 53,6. 82±2. 66)和对照组(5. 30±2. 56,15. 33±6. 81),3组比较差异均有统计学意义(均P0. 05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg降低是儿童哮喘的发病机制之一。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对哮喘大鼠气道炎症的影响

目的观察CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）对哮喘大鼠气道炎症的影响。方法将卵白蛋白（OVA）免疫耐受大鼠CD4^＋CD25^＋Treg细胞过继转移给哮喘大鼠,然后观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数及分类,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5和IFN-1及血清OVA特异性IgE含量,HE染色观察肺组织的病理改变。结果与哮喘组比较,过继转移CD4^＋CD25^＋Treg细胞后哮喘大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞百分率降低（P〈0．05）,嗜酸性粒细胞（Eos）百分率明显降低（P〈0．01）;BALF中IL4和IL-5含量明显降低,IFN-1含量明显升高,血清OVA特异性IgE含量明显降低（P〈0．05）;气道炎症明显减轻。结论过继转移OVA免疫耐受大鼠CD4^＋CD25^＋Treg细胞可以明显抑制哮喘的慢性气道炎症。     

支气管哮喘患儿CD4~+CD25~+Foxp3~+IL-10~+ T淋巴细胞水平变化和意义

目的:探讨对尘螨过敏的轻度持续支气管哮喘患儿淋巴细胞增殖情况及CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平变化。方法:选择30例对尘螨过敏的轻度持续支气管哮喘患儿作为实验组,同时选择30例健康儿童作为对照组。分离所有入选者的外周血淋巴细胞,给予户尘螨浸出液刺激48 h后检测淋巴细胞增殖的刺激指数以及CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平变化。结果:支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞接受户尘螨浸出液刺激后淋巴细胞增殖的刺激指数显著高于对照组(P<0.01),支气管哮喘患儿CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:支气管哮喘患儿接受过敏原刺激后发生明显的增殖反应,支气管哮喘患儿存在CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞功能障碍。     

子痫前期患者蜕膜中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性 T细胞及NK细胞的相关研究

目的:对子痫前期(PE)患者蜕膜中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)和NK细胞进行相关研究,探讨子痫前期发病机制中相关的免疫学变化。方法:选择子痫前期患者30例(轻度13例、重度17例)、正常晚期妊娠妇女30例。采用免疫组织化学法检测胎盘蜕膜CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞和NK细胞后计数并检测其平均灰度值。结果:①子痫前期患者蜕膜CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞阳性表达率均明显低于正常晚期妊娠者(P均<0.05);②子痫前期患者蜕膜NK细胞数高于正常孕妇(P均<0.05)且NK细胞CD56组化染色平均灰度值高于正常孕妇(P均<0.05)。结论:子痫前期患者蜕膜的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞均低于正常孕妇;蜕膜的NK细胞数均高于正常孕妇,这一结果造成母胎免疫耐受失衡且NK细胞呈激活状态,杀伤活性增强,导致子痫前期。     

内皮细胞微粒与CD8~+ CD25~+ FoxP3~+调节T细胞对子痫前期发生发展的作用探究

目的通过探讨子痫前期患者外周血内皮细胞微粒(endothelial microparticles,EMPs)与CD 8~+ CD 25~+ FoxP 3~+调节T细胞(regulatory T cell,Treg)之间关系,阐明EMPs对Treg功能影响及其在子痫前期发病过程中的机制。方法选取2017年6月至2018年5月在上海市嘉定区妇幼保健院行产检的子痫前期孕妇60例为研究组,其中38例非重度子痫前期患者为A组,22例重度子痫前期患者为B组;同时随机选取60例健康孕妇为对照组。收集所有孕妇外周血,应用流式细胞仪检测外周血EMPs、CD 8~+ CD 25~+ FoxP 3~+ Treg、FoxP 3 mRNA表达水平及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、白介素(Interleukin,IL)-10、IL-6、IL-17血清浓度。比较各组之间以上指标差异并研究其相关性。结果与对照组比较,A、B组EMPs水平显著升高,且B组高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,A、B组CD 8~+ CD 25~+ FoxP 3~+ Treg比例及FoxP 3 mRNA表达水平显著降低,且B组较A组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,A、B组TGF-β、IL-6、IL-17的血清浓度均升高,其中IL-6、IL-17在B组中水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β在A组与B组间差异无统计学意义(P>0.05)。3组患者IL-10水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析结果显示,B组EMPs水平与CD 8~+ CD 25~+ FoxP 3~+ Treg、FoxP 3 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.379、-0.427,P=0.001、0.004),与TGF-β、IL-6、IL-17呈正相关(r=0.376、0.427、0.257,P=0.024、0.005、0.037),与IL-10不相关(r=0.173,P=0.217)。结论 EMPs在子痫前期患者血浆表达水平上升,在子痫前期发病机制中起到一定的作用,为临床诊断及治疗提供新的思路。     

Effects of creatine in a rat intestinal model of ischemia/reperfusion injury

Purpose  

Creatine belongs to a buffering system of cellular ATP level and has been reported to display direct antioxidant activity. Aim of this work was to investigate whether creatine treatment could ameliorate the antioxidant response of intestinal cells and limit the oxidative injury induced by anoxia and subsequent reoxygenation.     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞在HIV/AIDS患者中的作用及其与HIV病毒载量的相关性研究

目的研究HIV感染者/AIDS患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+ regulatory T cell,Treg)频率、功能及其临床意义。方法选择31例HIV感染者/AIDS患者和30例健康对照者,采用流式细胞仪检测各组外周血Treg的表型和频率。采取MACS磁珠分选Treg,利用[~3H]胸腺嘧啶掺入法检测Treg在特异性HIV抗原刺激下对CD4~+CD25~+T细胞的增殖影响。结果HIV/AIDS患者组与正常对照组相比较,外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞在统计学上无显著性意义。与正常对照组比较,HIV感染者外周血Treg比例升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常对照组比较,AIDS患者外周血Treg比例降低,差异有统计学意义(P<0.0001)。HIV RNA病毒载量与患者外周血Treg细胞数量呈正相关性(P<0.01)。Treg具有抑制HIV特异性的CD4~+CD25~- T细胞的增殖作用。结论HIV感染者/AIDS患者的细胞免疫功能紊乱,Treg能抑制HIV感染者/AIDS患者的HIV特异性细胞免疫反应,促进HIV病毒复制,与形成持续HIV感染有关。     

脑缺血再灌注损伤后TNF-α表达的变化及葛根素的干预作用

目的 研究大鼠缺血性脑损伤后缺血区脑组织TNF-α表达的变化规律,探讨葛根素对缺血性脑损伤的神经保护机制.方法 90只雄性SD大鼠,用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为手术+葛根素组,手术组,假手术组.每组在6、12、24、48和72 h观察,手术+葛根素组大鼠手术+葛根素组大鼠应用葛根素干预治疗,假手术组和手术组大鼠给予同等容量生理盐水.用免疫组化法观察各时间点TNF-α因子的表达.结果 与假手术组相比,手术组和手术+葛根素组脑缺血再灌注后缺血区脑组织TNF-α蛋白的表达均显著增加(P＜0.01);手术+葛根素组脑缺血再灌注后不同时间点TNF-α的表达均较手术组显著下降.(P＜0.01,P＜0.05).结论 葛根素对脑缺血再灌注后TNF-α的表达有下调作用.     

尤瑞克林对脑缺血再灌注损伤大鼠模型p38M APK信号通路的影响

目的探讨尤瑞克林对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型的神经保护作用及其可能的机制。方法 60只SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注损伤模型组和尤瑞克林治疗组,用线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h后,观察各组大鼠神经行为学评分,HE染色观察神经细胞组织形态变化,免疫组化法检测磷酸化p38MAPK的表达,TUNEL法检测凋亡细胞。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经行为学评分明显升高(P<0.01),HE染色神经细胞受损明显(P<0.01),脑组织磷酸化p38MAPK表达水平、凋亡神经细胞数量明显增加(P<0.01)。与模型组比较,尤瑞克林治疗组大鼠的神经功能缺损得到改善、神经元形态结构损伤减轻、磷酸化p38MAPK表达水平以及神经细胞凋亡数量回降(P<0.01)。结论尤瑞克林对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠有神经保护作用,其机制可能与抑制p38MAPK活化、减少神经细胞凋亡有关。     

化疗对乳腺癌患者外周血CD4~+CD25~+CD127~-调节性T细胞的影响

目的观察化疗对乳腺癌患者外周血免疫指标的变化并探讨其影响。方法采用流式细胞术分析129例乳腺癌患者化疗前后CD4+CD25+CD127-调节性T细胞占CD4+T细胞的比率及T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8;B淋巴细胞CD19;NK细胞(CD16+CD56)和CD4/CD8比值的动态变化。结果化疗后的乳腺癌患者CD4+CD25+CD127-调节性T细胞占CD4+细胞比率较化疗前降低,T淋巴细胞亚群中CD3、CD4、CD4/CD8增高,CD8、NK和CD19降低;乳腺癌患者外周血调节性T细胞的数量与临床分期和组织分化程度相关。结论乳腺癌患者化疗后调节性T细胞的数量降低,免疫调节抑制功能下降,免疫功能得到提高,但体液免疫及NK功能未见提高。