八株小鼠胸腺基质细胞系产生白细胞介素1及白细胞介素6的水平

应用IL-1诱导LBRM33-IA5细胞产生IL-2、及支持IL-6依赖细胞系KD-83细胞的增殖,分别测定了本室所建8株小鼠胸腺基质细胞系自发分泌IL-1及IL-6的能力.8株MTSC 分泌IL-1水平不同,>100U/ml者,1株;30～40U/ml 者,2株.8株细胞均能产生IL-6,其中7株的分泌水平>80U/ml;1株为38U/ml.比较各株分泌IL-1及IL-6的水平,本文显示,在MTSC 各系中,尚存在IL-1非依赖性IL-6分泌途径.本文尚比较了两种测定IL-1活性的方法,支持胸腺细胞增殖法测得者,实为IL-1+IL-6的效应,不能反映IL-1的实际水平.     

小鼠胸腺上皮细胞株MTECB自发产生低水平IL—6

本室所建立的小鼠胸腺上皮细胞株ＭＴＥＣＢ以５．０×１０＾５细胞／ｍｌ的浓度在含１０％小牛血清的ＤＭＥ培养液中，５％ＣＯ２３７℃条件下，培养６ｄ，离心收集上清液。以ＩＬ－６依赖细胞株采用ＭＴＴ法对ＭＴＥＣＢ的上清液进行ＩＬ－６活性检测。结果发现ＭＴＥＣＢ能自发产生低水平的ＩＬ－６，其活性单位为１９．２Ｕ／ｍｌ。ＭＴＥＣＢ的ＩＬ－６产生量低于献报道的其他胸腺上皮细胞株，说明我们建立的胸腺上皮细胞株有     

小鼠胸腺基质细胞系诱导裸鼠骨髓干细胞分化为T细胞

为研究Ｔ细胞分化发育的过程，在体外建立了７株小鼠胸腺基质细胞系，应用这些小鼠胸腺基质细胞系及其培养上清在体外与经过分离的裸鼠骨髓干细胞共育７２小时后，用双荧光抗体染色，分析共育后的裸鼠骨髓细胞，发现有部分细胞分化为ＣＤ￣（３＋）ＴＣＲαβ￣－，ＣＤ３￣（３＋）·ＴＣＲαβ和ＣＤ３￣－ＴＣＲαβ￣＋细胞亚群，不同的胞腺基质细胞系和培养上清的诱导作用亦有差别。     

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC_B自发产生低水平IL－6

本室所建立的小鼠胸腺上皮细胞株ＭＴＥＣＢ以５．０×１０５细胞／ｍｌ的浓度在含１０％小牛血清的ＤＭＥ培养液中，５％ＣＯ２３７℃条件下，培养６ｄ，离心收集上清液。以ＩＬ－６依赖细胞株采用ＭＴＴ法对ＭＴＥＣＢ的上清液进行ＩＬ－６活性检测。结果发现ＭＴＥＣＢ能自发产生低水平的ＩＬ－６，其活性单位为１９．２Ｕ／ｍｌ。ＭＴＥＣＢ的ＩＬ－６产生量低于文献报道的其他胸腺上皮细胞株，说明我们建立的胸腺上皮细胞株有新的特点，反映出胸腺上皮细胞存在高度异质性。     

小鼠胸腺基质细胞系的分型

为鉴定８株小鼠胸腺基质细胞（Ｔｈｙｍｉｃｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，Ｔｓｃ）系的类型及本室研制出的抗小鼠ＴＳＣ单抗的价值，我们采用细胞ＥＬＩＳＡ和免疫荧光法对３０种自制的及国外引进的ＭＴＳ系列抗小鼠ＴＳＣ单抗与８株ＭＴＳＣ细胞系的反应性进行了观察，结果表明：①ＭＴＳＣ１，２为髓质型胸腺上皮细胞（Ｔｈｙｍｉｃｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＴＥＣ）的不同亚群；ＭＴＳＣ３，５，６，７，８为皮髓质交界型ＴＥＣ的不同亚群。②在不同类型的ＴＳＣ间及胸腺细胞和ＴＳＣ间，均存在共同抗原。③ＭＴＳ系列ＭｃＡｂ不能鉴定的ＭＴＳＣ系，能用本室自制的抗小鼠ＴＳＣＭｃＡｂｓ定型。     

7株小鼠胸腺基质细胞系诱导裸鼠骨髓干细胞表达CD4…

为研究胸腺微环境在Ｔ细胞发育中的作用，我室在体外建立了７株小鼠胸腺基质细胞系，命名为ＭＴＥＣ１－ＭＴＥＣ７。通过初步分离得到裸鼠骨髓富含干细胞的细胞群，表面ＣＤ４及ＣＤ８分子均为阴性，将分离的骨髓干细胞为胸腺基质细胞共育３天后，经双色荧光抗体染色，ＦＡＣＳ分析发现胸腺基质细胞可诱导裸鼠骨髓干细胞表达ＣＤ４ＣＤ８分子。ＭＴＳＣ－ＳＮ及ＭＴＳＣ主要诱导的是ＣＤ４＾＋ＣＤ８＾－细胞，部分ＣＤ４＾＋ＣＤ８     

7株小鼠胸腺基质细胞系诱导裸鼠骨髓干细胞表达CD4及CD8分子

为研究胸腺微环境在Ｔ细胞发育中的作用，我室在体外建立了７株小鼠胸腺基质细胞系，命名为ＭＴＥＣＩ～ＭＴＥＣ７。通过初步分离得到裸鼠骨髓富含干细胞的细胞群，表面ＣＤ４及ＣＤ８分子均为阴性。将分离的骨髓干细胞与胸腺基质细胞共育３天后，经双色荧光抗体染色，ＦＡＣＳ分析发现胸腺基质细胞可诱导裸鼠骨髓干细胞表达ＣＤ４ＣＤ８分子。ＭＴＳＣ－ＳＮ及ＭＴＳＣ主要诱导的是ＣＤ４＋ＣＤ８－细胞，部分ＣＤ４＋ＣＤ８＋细胞，而ＣＤ４－ＣＤ８＋细胞极少，这种诱导特点可能和基质细胞系的类型有关。     

小鼠胎肝基质细胞系MFLC克隆的建立,鉴定及细胞因子分泌

用体外长期培养的方法建立了小鼠胎肝基质细胞系ＭＦＬＣ，此细胞系是以上皮细胞为主的混合细胞系，能分泌多种细胞因子。为精确分析胎肝基质细胞在Ｔ细胞发育中的作用，对此细胞系进行了克隆化培养，共获得１１个克隆。对这些克隆进行角蛋白染色、倍增时间测定、染色体检查以及ＩＬ－６、趋化因子分泌水平的检测，结果表明，这些克隆在细胞学特性以及细胞因子的分泌上均有差异。     

胸腺细胞对胸腺基质细胞生长及功能的调节

目的研究胸腺细胞对不同亚群胸腺基质细胞生长及功能的调节作用。方法胸腺基质细胞增殖以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定，ＩＬ－７活性以促ＩＬ－７依赖株法检测，其ｍＲＮＡ表达以ＲＴ－ＰＣＲ法检测。结果胸腺细胞与ＭＴＳＣ４细胞分别以８０∶１，４０∶１或２０∶１的比例共育时，能明显抑制ＭＴＳＣ４细胞的增殖，而培养上清中ＩＬ－７活性无明显改变；当两种细胞的比例为１０∶１或５∶１时，则对ＭＴＳＣ４细胞的增殖无任何影响，而培养上清中的ＩＬ－７活性明显升高。ＲＴ－ＰＣＲ证实，与胸腺细胞共育的ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４细胞，ＩＬ－７ｍＲＮＡ水平明显提高。结论胸腺细胞能促进ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４细胞分泌ＩＬ－７，对不同亚群基质细胞的生长和功能有不同调节作用     

IL-6阳性细胞在小鼠胸腺内的定位

目的：检测IL－6阳性细胞在小鼠胸腺的分布。方法：采用免疫酶细胞化学，免疫荧光双染及免疫电镜技术方法原位显示小鼠胸腺不同部位IL－6阳性神经的表达情况。结果：光镜免疫酶组织化学确定了IL－6阳性细胞的分布范围，即IL－6在胸腺皮质和髓质的某些特定的细胞表达；进一步采用免疫荧光双染色及免疫电镜技术对IL－6阳性细胞进行了解析，确定了小鼠胸腺内IL－6阳性细胞主要是胸腺实质中不同形态的巨噬细胞，IL－6不存在于胸腺上皮细胞及胸腺细胞。结论：巨噬细胞是小鼠胸腺IL－6的主要来源，参与胸腺细胞发育微环境的构成。     

小鼠胸腺基质细胞系(MTEC1)在裸鼠体内生物学特性研究

通过流式细胞仪（ＦＡＣＳ）、组织学染色和免疫组化的方法研究了脾内注射的小鼠胸腺上皮细胞系ＭＴＥＣ１和初代培养的小鼠胸腺基质细胞在裸鼠脾脏内存活状态及功能特性。结果发现ＭＴＥＣ１细胞不仅能够在脾脏内存活，而且在ＭＴＥＣ１细胞周围有大量不成熟的淋巴细胞。初代培养的小鼠胸腺基质细胞则不能在脾脏内存活。     

小鼠胸腺基质细胞株MTECB的细胞学特性

用免疫组织化学和透射电镜技术对本室所建立的小鼠胸腺基质细胞株ＭＴＥＣＢ进行了细胞学鉴定。免疫组织化学观察显示：４０ｋＤ、４５ｋＤ角蛋白和波形蛋白呈现强阳性，５２ｋＤ，５４ｋＤ，５８ｋＤ角蛋白和Ｓ－１００蛋白呈现阴性。电镜下见到，具有桥粒和张力丝结构，含较多的囊泡和髓样体，发达的高尔基复合体和线粒体。另外ＭＴＥＣＢ还表现为酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、非特异性酯酶弱阳性。据此我们认为ＭＴＥＣＢ为上皮细胞来     

基因转染法建立小鼠胸腺基质细胞系

利用基因转染方法使细胞获得不死性，快速建立小鼠胸腺基质细胞（ＭＴＳＣ）系。用含有多瘤病毒ｍＴ基因的重组质粒Ｚｉｐ－ｍＴ以脂质体介导法转染初代培养的ＭＴＳＣ，经过８００μｇ／ｍｌ的Ｇ４１８筛选，得到５个ＭＴＳＣ克隆。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明所得细胞克隆的染色体中整合有ｍＴ基因，说明ｍＴ基因的整合是导致细胞转化的原因。基因转染建系比常规建系所需时间大大缩短，仅需２个月。     

松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素-7表达的影响

目的 探讨松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素7(IL-7)表达的影响及其意义.方法 1.培养大鼠胸腺上皮细胞,应用广谱角蛋白抗体进行免疫细胞化学显色鉴定;MTT法观察褪黑素(1×10-3～10-9mol/L)干预对细胞生长的影响;细胞分空白对照组、褪黑素10-8mol/L处理组和褪黑素10-6mol/L处理组,RT-PCR法观察细胞IL-7 mRNA的表达;2.选用清洁级雄性SD大鼠110只,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素7.5ms/(kg·d)腹腔注射组和松果体摘除+褪黑素15mg/(kg·d)腹腔注射组.术后4周和8周取材,运用免疫组织化学和RT-PCR方法 观察胸腺上皮细胞IL-7表达的变化. 结果 褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞的生长无显著影响,但能使IL-7 mRNA的表达水平呈剂量依赖性升高;松果体摘除对大鼠胸腺上皮细胞表达IL-7无显著影响,补充褪黑素15mg/(kg·d)4周后IL-7表达显著增高,8周后均下降至正常水平. 结论 松果体及褪黑素可能通过影响大鼠胸腺上皮细胞IL-7的表达,从而调节胸腺细胞的分化发育.