PCR结合寡核苷酸探针杂交检测临床常见真菌的实验研究

目的 建立PCR结合生物标记的寡核甘酸探针斑点杂交技术,鉴定临床常见的真菌。方法 首先用真菌通用引物扩增白念球菌、热带念球菌、假热带念球菌、近平滑念球菌、光滑念球菌、解脂念球菌、克鲁斯念球菌、季也蒙念球菌、黄曲 霉、烟曲霉的核糖体大亚单位基因的保守区序列,然后用生物素标记的种特异性寡核苷酸探针与扩增产物杂交,并将此方法用于临床标本和临床分离菌株的检测。结果 通用引物可以扩增上述11种临床常见真菌的DNA,扩增片段长度在260bp左右。9种特异性探针分别与11种真菌标准菌株的PCR扩增产物杂交,结果表明每种探针都具有高度特异性。斑点杂交法和Southerm杂交法检测敏感性相同,为100fg;琼脂糖凝胶电泳法检测敏感性为1pg。通过69例临床标本和31例临床分析菌株的检测,PCR－杂交法的结果和真菌培养法的结果基本一致。结论 PCR结合生物素标记的寡核苷酸探针杂交技术可将9种临床常见真菌鉴定到种,方法快速、敏感、特异。     

细胞因子的多聚酶链反应检测

本文介绍用PCR技术检测细胞因子的原理、方法及其在基础和临床免疫学研究中的应用现状。其检测原则是,从受检细胞提取RNA,经逆转录合成cDNA作为模板,根据待测细胞因子外显子设计相应的引物进行PCR扩增。产物经凝胶电泳分离后用光密度计扫描、DNA印迹或斑点印迹法加以鉴定或定量。本法最低检出量为0.47～0.55amol(10~(-18)mol),是目前检测细胞因子最敏感的方法,尤其适用于量微、基因表达水平极低的受检标本。文中列举该技术在免疫学基础研究和临床上的应用。     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体的临床应用

本文应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术对１０５例非淋菌性尿道炎患者进行沙眼衣原体检测，捡出阳性者１２例，阳性率１１．４％。我们认为ＰＣＲ法检测沙眼衣原体具有快速简便、高度敏感性和特异性等优点，值得临床推广应用。     

多聚酶链反应检测LT^＋大肠杆菌

本文报告了用多聚酶链反应检测ＬＴ＾＋大肠杆菌Ａ亚基基因。将粪便标本直接接种于ＬＢ培养液，使用两个寡核苷酸引物，对该毒素Ａ亚基基因一段高度保守区域的ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测。最低检测的靶细菌量为５０ＣＦＵ。用改良艾力克试验，ＥＬＩＳＡ试验进行对照，对３０株已知细菌和６８例婴幼儿腹泻的粪便标本进行检测。在３０株细菌中，仅ＬＴ＾＋大肠杆菌，ＬＴ＾＋／ＳＴ＾＋大肠杆菌为阳性，余均为阴性。６８例     

膜芯片技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和3种支原体的方法学研究

目的建立和评价一个新的多重PCR．反向线点杂交技术（RIJB）快速同时检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct）、淋病奈瑟菌（坛）和3种支原体感染的方法。方法分别选择Ct隐蔽质粒和Ng16SrRNA基因设计两对特异性引物，以支原体内转录间隔序列（ITS）设计一对支原体属通用引物，生物素标记下游引物。构建三重PCR同时扩增Ct、Ng、解脲脲原体（仇）、微小脲原体（跏）、人型支原体（Mh）等菌DNA，然后与固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷酸探针杂交。并对142份经荧光定量PCR（FQ-PCR）检测0和坛的性病高危人群标本，以及45份经支原体液体培养法鉴定的标本进行检测。结果多重PCR可同时扩增Ct、Ng、Uu、Up和Mh标准菌株DNA，其PCR产物的片段长度为208～408bp。97份FQ-PCRCt阳性标本中有93份经多重PCR-RLB检测为Ct阳性，45份FQ-PCRCt阴性标本中35份多重PCR-RLB阴性。41份FQ-PCRNg阳性标本中34份多重PCR-RLBNg阳性，101份FQ-PCRNg阴性标本中98份多重PCR-RLB阴性。其中36份经多重PCR-RLB检测为混合感染。32份支原体液体培养阳性标本中28份多重PCR-RLB阳性，13份支原体培养阴性标本经多重PCR-RLB检测均为阴性。结论多重PCR-RLB可快速同时检测Ct、Ng、Uu、Up和Mh，为性传播疾病的临床诊断提供了一种可靠的方法。     

荧光定量聚合酶链反应检测精液中沙眼衣原体

用荧光定量聚合酶链法对126名男性不育患者和60名正常生育男性的精液进行了沙眼衣原体检测,男性不育组阳性率为19.8%,生育组阳性率为5.0%,两组比较有显著差异。     

多聚酶链反应检测XX男性和真两性畸形中SRY基因

采用多重聚合酶链反应技术（ＭＰＣＲ）对５例４６，ＸＸ男性和２例４６，ＸＸ真两性畸形患者进行ＳＲＹ基因筛查。结果显示，４例典型的４６，ＸＸ男性均具有ＳＲＹ基因，但无Ｙｑ重复ＤＮＡ序列，表明其性别反转与ＳＲＹ或ＳＲＹ所在的ＤＮＡ片段密切相关。此外，在１例伴有尿道下裂的４６，ＸＸ男性和２例４６，ＸＸ畸形中，均未发现有可检测的ＳＲＹ序列存在，说明这些病例具有不同的发病机制，很可能与Ｘ或常染色体上的性别决…     

聚合酶链反应检测胎盘组织中解脲支原体与沙眼衣原体感染

本文应用聚合酶链反应技术对３８６例产妇的胎盘进行了解脲支原体，沙眼衣原体检测，检出ＵＵ阳性者４０例，阳性率１０．４％，ＣＴ阳性者３２例。阳性率８．３％，提示胎盘组织中ＵＵ，ＣＴ感染与先天性宫内感染有关，值得重视。结果表明ＰＣＲ法具有高度特异性，敏感性，且快速，简便，可有效地检出胎盘组织中ＵＵ、ＣＴ感染。     

聚合酶链反应制备生物素标记原位杂交用探针

聚合酶链反应制备生物素标记原位杂交用探针张雷刘鸿瑞王志永原位杂交能良好地定位检测内、外源性核酸物质，并在研究疾病的发生、发展机制中具有重要的作用。但核酸探针的来源困难防碍了这一技术在病理学中的广泛应用。我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法制备ＥＢ病毒原位...     

多聚酶链反应（PCR）检测不典型结核杆菌的DNA

本文采用ＰＣＲ技术检测结核杆菌的ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ），其中临床诊断为结核或可疑结核者９例，肿瘤６例，结节病３例，淋巴结炎４例，共２２例。病理诊断确诊为不典型结核者１４例，不能除外结核者４例，结节病２例，瘤样病变２例。所有病例经抗酸染色均未查到结核杆菌。ＰＣＲ检测结果表明，２２例中１８例呈阳性（占８１．８２％），４例呈阴性。ＰＣＲ技术敏感、特异，对于不典型结核病例检查ＴＢ－ＤＮＡ片段用于辅助诊断颇     

聚合酶链反应掺入生物素探针在细胞原位杂交中的应用

在PCR反应体系中，以Bio－11-dUTP部分代替dTTP，做人类白细胞抗原（HLA）－DQA、DQB、DRB及DPB等位点的聚合酶链反应（PCR）。扩增产物有较高的生物素掺入。以此为生物素标记探针应用于细胞原位杂交检查诸位点的mRNA表达水平，取得了满意的结果。此方法简化了基因探针的制备，可应用于任意目的mRNA和DNA的分子杂交。一、材料和方法1．模板DNA的制备：随机取正常人血标本sml，1／10体积的2％乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，经快速法分离染色体DNA「‘’ZHLA－DQA位点的PCR掺入探针的制备：依文献「Zj进行。同时以未掺入…     

聚合酶链反应检测丝虫病患者泌尿道沙眼衣原体及解脲法原体的研究

本文采用聚合酶链反应方法,检测了５０例患者尿中沙眼衣原体（ＣＴ）及解脲支原体（ＵＵ）Ｄ届时选择３０例正常作作为对照,结果显示,丝虫病患者尿中ＣＴ ＤＮＡ、ＵＵ ＤＮＡ和两者混合感染检出率分别为３０％、２５％和２０％,高于正常对３６３％（Ｐ〈０．０１）,ＣＴ及ＵＵ感染与病人的病情、病程有一定的关联。提示乳糜尿的发生、发展与泌尿道ＣＴ和ＵＵ感染有关。     

多聚酶链反应在登革病毒研究中的应用进展

本文综述了多聚酶链反应在登革病毒感染的检测、发病机制研究以及变异性分析方面的应用研究进展。     

孕早期沙眼衣原体宫内感染的检测

本研究利用ＰＣＲ技术和地高辛标记的ＤＮＡ探针对５９例早孕绒毛组织中沙眼衣原体染进行研究。结果发现２例绒毛组织有沙眼衣原体感染，并感染率为３．４％，研究证实沙眼衣原体可引起孕早基歼宫内感染，建议对沙眼衣原体感染的孕妇进行宫内感染的产前诊断。     

247例子宫肌瘤患者沙眼衣原体PCR检测报告

子宫肌瘤是女性生殖器官中最常见的一种良性肿瘤，其发生可能与雌激素长期刺激有关[1]，而与遗传无关[2]。我们自1995年2月至1995年10月．应用多聚酶链式反应（PCR）技术，随机对来我院诊治的247名子宫肌瘤患者，取宫颈分泌物，进行了沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，CT）检测，现将结果报告如下。材料与方法一、材料：l·样品：随机选择1995年2月至1995年10月来我院诊治，患有子宫肌瘤的患者247名，年龄最大为53岁，最小为29岁，用棉扶子采取宫颈分泌物，置装有lml生理盐水的试管中，洗脱细胞及分泌物后，置4℃冰箱待检。2·CT引物…     

用简并寡核苷酸引物构建人类染色体区带特异性探针池的技术

目的建立快速有效构建人类染色体区带特异性探针池及其文库的技术。方法显微切割人类染色体３ｐ２３－ｐ２６，３ｑ２１－ｑ２２，４ｐ１２－ｐ１６区带，用简并寡核苷酸引物－ＰＣＲ（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｅｄｐｒｉｍｅｒｅｄ－ＰＣＲ，ＤＯＰ－ＰＣＲ）扩增，并用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）检测扩增产物来源，再将区带特异性扩增产物克隆于ｐＵＣ１９载体构建区带特异性文库，以及用α－３２ＰＡＴＰ标记的ｇＤＮＡ行菌落原位杂交。结果经ＦＩＳＨ证实，３ｐ２３－ｐ２６，３ｑ２１－ｑ２２，４ｐ１２－ｐ１６探针池均在切割相应区带出现特异性信号。其中３ｑ２１－ｑ２２获得的１．２×１０４个阳性克隆。随机分析３０个含插入片段的白色菌落，其插入片段平均约４２０ｂｐ。２２０个白色克隆菌落原位杂交示单拷贝和低度重复序列占８１％（１７８／２２０）。结论改进的显微切割结合ＤＯＰ－ＰＣＲ为人类染色体探针池及文库构建建立了一个简易、高效的方法，这将有助于基因克隆和人类基因的全序列分析。     

荧光定量聚合酶链反应检测宫颈炎患者沙眼衣原体感染的临床应用

目的了解宫颈炎患者沙眼衣原体的感染状况。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术,对426例宫颈炎患者沙眼衣原体的感染状况进行了检测。结果在上述426例宫颈炎患者中检测出沙眼衣原体阳性标本60例,阳性率为14.08%(60/426)。结论在宫颈炎患者中沙眼衣原体有较高的感染率。     

巢式聚合酶链反应诊断肺炎衣原体感染的临床应用探讨

目的 应用并评价巢式聚合酶链反应技术诊断肺炎衣原体（Chlamyolia pueumoniae,Cp)感染。方法 采用以衣原体属及Cp种的16SrRNA特异片段为目的基因。对已知鼻咽拭子Cp培养结果的81例病例进行连续2次扩增,检测Cp基因组DNA,并对其应用予以评价。结果 以培养结果为标准。PCR方法的灵敏度为5/17（29.41%）,特异度为52/64（81.25%),阳性预计值为5/17（29.41%),特异度为52/64（81.25%)。阳性予计值为5/17（29.41%),阴性邓丈夫值为52/64（81.25%)。结论 这种巢式聚合酶链反应技术尚不能用于临床诊断Cp感染,有必要以诊断金标准对其应用进行评价。     

聚合酶链反应检测丝虫病患者泌尿道沙眼衣原体及解脲支原体的研究

本文采用聚合酶链反应方法,检测了５０ 例丝虫病患者尿中沙眼衣原体（ＣＴ） 及解脲支原体（ＵＵ）ＤＮＡ,同时选择３０ 例正常人作为对照。结果显示,丝虫病患者尿中ＣＴＤＮＡ、ＵＵ ＤＮＡ 和两者混合感染检出率分别为３０ ％ 、２５ ％ 和２０ ％ ,高于正常对３６３％ （Ｐ＜０－０１）,ＣＴ及ＵＵ 感染与病人的病情、病程有一定的关联。提示乳糜尿的发生、发展与泌尿道ＣＴ 和ＵＵ感染有关。