广西肝吸虫流行区人群及淡水鱼扇棘单睾吸虫感染调查

目的 了解扇棘单睾吸虫在广西人群和淡水鱼中的感染情况.方法 在肝吸虫流行地区,采用Kato-Katz 法检查居民粪便,选择部分吸虫卵阳性者驱虫并收集扇棘单睾吸虫成虫;采用压片和消化法检查鱼类扇棘单睾吸虫囊蚴.结果 在5 个调查点调查了671 人,发现吸虫卵阳性者383 例,感染率57.08%,在阳性者中选择128人进行驱虫,有73 人排出扇棘单睾吸虫成虫,占驱虫人数的57.03%,其中马山调查点占90.47%.在流行区内收集和消化了鱼类40 余种,有17 种鱼发现了扇棘单睾吸虫囊蚴:鲢鱼、鲫鱼、花鱼骨、海南似鱼乔、鲤鱼、棒花鱼、、Culter recurviceps、达氏鲌、南方拟餐、马口鱼、条纹小鲃、线细鳊、麦鲮、达氏鲌、蛇鮈、银鮈.其中,鲤鱼和鲫鱼为流行区人群最常生吃的鱼类.结论 广西肝吸虫病流行区人群粪检吸虫卵阳性者中,有相当一部分为扇棘单睾吸虫感染,17 种鱼检出该虫囊蚴,鲤鱼、鲫鱼等很可能是人感染的主要传播宿主.     

人体自然感染钩棘单睾吸虫及其鱼类宿主调查

在龙海市和南靖县市坑等５个村进行的人体肠道蠕虫感染调查中，查见类似华支睾吸虫的小型虫卵，经驱出的成虫和虫卵形态学观察，鉴定为钩棘单睾吸虫，人群感染率为０．３４％（１３／３８６７）。第二中间宿主查出１１种鱼类，囊蚴平均感染率为３６．３％（１２５／３４４），每尾感染鱼平均含囊蚴１０．７个。本文同时对该虫异位寄生可引起的临床严重后果进行了讨论。     

抗华支睾吸虫循环抗原噬菌体抗体基因分析

目的 对获得的抗华支睾吸虫循环抗原Fab抗体克隆进行基因分析.方法 将2株阳性克隆抗体基因进行测序,并用NCBI和Ig Blast Analysis of Immunog lobulinse quences中的分析软件,对其推导的氨基酸序列进行分析,再进一步模拟它们的二级结构.结果 E38、B05阳性克隆抗体基因与人免疫球蛋白κ轻链和γ重链可变区基因高度同源.推导的氨基酸序列均具有典型的抗体轻、重链可变区特征.用分析软件对推测的2株克隆轻链和重链Fd氨基酸序列进行二级结构模拟,结果显示以β-折叠和转角为主的平行肽链形成片层样结构,均符合抗体二级结构构型.结论 E38、B05阳性克隆外源基因均属于人免疫球蛋白κ轻链和γ重链可变区基因.     

东方次睾吸虫的实验动物易感性研究

目的了解东方次睾吸虫对多种实验动物的易感性。方法从广西宜州市苏村东方次睾吸虫流行区捕捞麦穗鱼,分离东方次睾吸虫囊蚴,定量感染不同的实验动物,然后定期检查粪便中是否出现虫卵,最后解剖取虫鉴定。结果东方次睾吸虫在鹌鹑、雏鸭、雏鸡、豚鼠和狗体内均可发育,对鹌鹑的感染率最高,从鹌鹑体内的回收率也最高,其次为雏鸭、豚鼠、雏鸡、狗。结论东方次睾吸虫能在狗、鹌鹑、鸡和鸭体内发育成熟,这些动物是东方次睾吸虫的适宜终末宿主。     

PCR法检测华支睾吸虫感染的应用研究

目的 探索PCR法在基层医院检测华支睾吸虫感染的应用前景。方法 采集94例普通住院患者粪便和血清样本,分别采用改良加藤厚涂片法（Kato-Katz） 、PCR法和ELISA法3种方法进行华支睾吸虫检测,以Kato-Katz法为评价标准,对PCR法和ELISA法的检测结果进行分析。结果 研究共纳入2018年9—10月住院患者粪便和血液样本均有的患者94例,其中男性53例,女性41例,分别占56.4%、43.6%;20岁以下3例,20~39岁26例,40~59岁33例,60岁及以上32例,分别占3.2%、27.7%、35.1%、34.0%。Kato-Katz法检出华支睾吸虫阳性数26份,阳性率为27.66%,PCR法检出阳性数23份,阳性率为24.47%,ELISA检出阳性数53份,阳性率为57.45%,3种方法阳性率差异有统计学意义（P<0.01）。PCR法灵敏度和特异度分别为53.85%和86.76%,阳性预测值和阴性预测值分别为60.87%和83.10%。ELISA法灵敏度和特异度分别为96.15%和57.35%,阳性预测值和阴性预测值分别为46.30%和97.50%。结论 在华支睾吸虫高流行区的基层医院开展PCR检测华支睾吸虫感染有应用价值。     

黏液玫瑰单胞菌16S rRNA基因序列及耐药性分析

目的对常规方法不易鉴定的一株临床细菌进行16S rRNA基因序列分析,并探讨该细菌的耐药性。方法菌株分离培养后进行常规的鉴定及药物敏感性分析,同时选择细菌的16S rRNA基因为靶序列,进行PCR扩增并测序,测序结果与GenBank比对。结果 API 20NE板条(法国生物梅里埃公司)将该菌鉴定为嗜中温甲基杆菌;细菌的16S rRNA基因序列与黏液玫瑰单胞菌相似性为99.5%;细菌的药敏试验显示对三代头孢耐药性高。结论黏液玫瑰单胞菌引起的感染比较罕见,菌株对三代头孢的高耐药应引起临床重视;16S rRNA基因序列分析方法可以较好地鉴定常规方法难以鉴定的不典型及罕见菌株。     

藐小棘隙吸虫感染因素的病例对照研究

目的　探索藐小棘隙吸虫易感因素。方法　本研究采用１∶１ 的个体匹配方法，选择８７ 对病例和对照进行回顾性调查，经条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ 回归模型分析。结果　认为影响藐小棘隙吸虫感染的主要危险因素是：饮生水、吃螺蛳、饮用水源和用沟塘水嗽口刷牙。结论　居民饮用水体和食用螺体中可能含有藐小棘隙吸虫感染期幼虫。     

华支睾吸虫可溶性抗原对BALB/C鼠免疫效果的研究

用华支睾吸虫成虫可溶性抗原加等量自制佛氏完全佐剂（FCA）免疫BAU3／C鼠，以不同免疫途径、不同时间观察其免疫效果。结果腹腔注射组和皮下多点注射组两次基础免疫间隔3周，第二次基免后两周抗体几何平均滴度分别为2560．00和1470．00，差异无显著性；以加倍剂量于基础免疫后19－122天进行加强免疫，抗体水平迅速提高，于第三天已超过基础免疫水平，但在此时间内进行加强免疫的效果差异无显著性；两次基础免疫间隔3周和4周，其加强免疫后的抗体几何平均滴度分别为5881.34和3044.37，前者优于后者。实验中分别用自制FCA和进口FCA加入可溶性抗原进行免疫，其效果基本一样，但前者制作简便，价廉实用，可取代进口FCA。     

新疆石河子地区绵羊嗜吞噬细胞无形体的检测和16S rRNA序列分析

目的 调查新疆石河子地区绵羊嗜吞噬细胞无形体感染状况以及分析其病原16S rRNA序列特征.方法 在石河子地区采集羊血,提取DNA,巢式PCR扩增16S rRNA基因并与GenBank中相应基因序列进行比对分析.结果 在109份羊血样本中,检测出阳性样本37份,阳性率为33.94％,检测出的16S rRNA(524 bp)基因序列与部分GenBank中嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因序列同源性达99％.结论 新疆石河子地区绵羊中存在嗜吞噬细胞无形体的感染.     

乳酸杆菌及嗜热链球菌的种水平鉴定——16SrRNA基因PCR扩增及序列分析

目的建立鉴定乳酸杆菌及嗜热链球菌的16SrRNA基因PCR方法。方法优化细菌DNA提取方法及PCR反应条件,将细菌16SrRNA基因的PCR产物克隆到质粒载体上并进行序列分析,以对乳酸杆菌酸奶分离株进行鉴定。结果 16SrRNAPCR鉴定方法将50株益生菌酸奶分离株分为7个种,分别为:保加利亚乳酸杆菌24株、嗜热链球菌12株、嗜酸乳酸杆菌7株、干酪乳酸杆菌3株、德氏乳酸杆菌2株、发酵乳酸杆菌1株及巴黎链球菌1株。结论建立的16SrRNA基因PCR方法灵敏、可靠,适用于乳酸杆菌及嗜热链球菌的鉴定。     

旋毛虫53kDa ES抗原蛋白二级结构及B细胞表位预测

目的　分析旋毛虫 5 3kDaES抗原蛋白二级结构及B细胞表位。方法　应用生物信息分析软件DNASTAR和Anthep ro5 .0 ,按照Kyte -Doolittle氨基酸亲水性标准对旋毛虫 5 3kDaES抗原的亲水性基序、二级结构及B细胞表位进行分析预测。结果　在旋毛虫 5 3kDaES抗原蛋白中 ,第 1 9- 2 5、4 0 - 5 1、6 1 - 6 7、99- 1 0 5、1 1 1 - 1 1 9、1 2 6 - 1 34、1 37- 1 5 2、1 79- 1 85、1 91 - 2 0 0、2 1 9- 2 38、2 6 1 - 2 6 7、2 81 - 2 95、31 2 - 32 3、331 - 343、36 7- 372、2 90 - 393位氨基酸残基具有较强的抗原性 ,第 1 9- 2 5、4 0 - 5 1、6 1 -6 7、99- 1 0 5、1 1 1 - 1 1 9、1 2 6 - 1 34、1 37- 1 5 2、1 79- 1 85、1 91 - 2 0 0、2 1 9- 2 38、2 6 1 - 2 6 7、2 81 - 2 95、31 2 - 32 3、331 - 343、36 7- 372、390- 393位氨基酸残基可能是B细胞的表位。结论　对旋毛虫 5 3kDaES抗原蛋白和B细胞表位的分析为研制旋毛虫病新的诊断抗原奠定了基础     

大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的巢式PCR检测及基因序列的测定

目的 探讨ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫的应用价值并测定其基因序列.方法 采用地塞米松免疫抑制法诱导SD大鼠感染肺孢子虫;制作肺印片、肺组织匀浆液及支气管肺泡灌洗液(BAL)涂片进行六亚甲基四胺银(GMS)染色镜检;提取肺孢子虫DNA进行巢式PCR扩增,测序后与GenBank的不同宿丰肺孢子虫相关序列进行比较分析.结果 用ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR法均能检测出实验感染大鼠BAL和肺组织卡氏肺孢子虫DNA,阳性率为100%(10/10),比较BAL标本、肺印片和肺组织匀浆液GMS染色法的检出效率,BAL最低,肺组织匀浆液最高.其中20%(2/10)大鼠的BAL标本用GMS染色法未能检测出,但用巢式PCR方法 均能成功扩增;所测SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列长度为516bp,ITS1、5.8S rDNA、ITS2基因片段分别为198、158、160bp,与GenBank的大鼠(L27658)、小鼠(AY532651)和长爪沙鼠(AY875972)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性分别为96%(452/467)、88%(275/310)、95%(152/159),其变异位点多在ITS1和ITS2基因片段.结论 ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫敏感性高、特异性强,可作为早期诊断肺孢子虫肺炎方法,特别适用无创性标本的检测;成功获取SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基冈序列,与不同宿主比较其5.8S rDNA较保守,ITS1和ITS2基因变异较大,适合基因分型和系统进化研究.     

16S rRNA、16S-23S rRNA基因测序分析检测主要血流感染病原菌比较

目的比较细菌16S rRNA、16S-23S rRNA 基因测序分析在血流感染病原菌检测中的作用。方法提取临床上血流感染常见的金黄色葡萄菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、化脓性链球菌、奇异变形杆菌、潘尼变形杆菌、屎肠球菌、粘质沙雷菌、宋内志贺菌、产气肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、腐生葡萄球菌基因组 DNA,运用 16S rRNA、16S-23S rRNA 基因进行 PCR 扩增。扩增产物经测序后在美国国家生物技术中心(NCBI)上进行比对分析,确定菌种。结果在所分析的 19 种临床血流感染常见细菌中,16S rRNA 基因测序分析可将除粘质沙雷菌外的细菌鉴定到种的水平,但无法完全区分近缘种属;16S-23SrRNA 成功鉴定 17 种细菌,除大肠埃希菌、宋内志贺菌外所有细菌均成功鉴定到单一种的水平。结论 16S-23S rRNA 基因可作为血流感染细菌检测较好的分子靶标。     

Molecular phylogeny of Amblyomma exornatum and Amblyomma transversale,with reinstatement of the genus Africaniella (Acari: Ixodidae) for the latter

The phylogeny of the hard tick genus Amblyomma Koch, 1844 deserves special attention, because several poorly studied tick species associated with reptiles still bear the name of this genus, although they may not belong to it. This study focuses on the phylogeny of two such species with uncertain taxonomic status, i.e., Amblyomma transversale (Lucas, 1845) and Amblyomma exornatum Koch, 1844, analyzing two mitochondrial (cytochrome c oxidase subunit 1 and 16S rRNA) and two nuclear (18S and 28S rRNA) genes.In the cox1 phylogenetic analysis, both Am. transversale and Am. exornatum were part of a sister group to all other Metastriata, whereas in the 16S rRNA gene analysis, Am. transversale belonged to a sister group to three subfamilies (Amblyomminae Neumann, 1911; Haemaphysalinae Hoogstraal and Aeschlimann, 1982; Bothriocrotoninae Klompen, Dobson and Baker, 2002), and Am. exornatum formed a sister group to other Amblyomminae. However, based on the 18S and 28S rRNA genes, Am. transversale belonged to a sister group of either Bothriocrotoninae alone or of both Bothriocrotoninae and Haemaphysalinae, respectively. In the latter two phylogenetic analyses Am. exornatum always clustered within Amblyomminae. Morphological comparisons revealed that Am. transversale has at least four unique characters and shares a high number of traits with the genera Robertsicus Barker and Burger, 2018 and Archaeocroton Barker and Burger, 2018, as well as with the subgenus Alloceraea Schulze, 1918 (represented by Haemaphysalis inermis Birula, 1895). These results justify that the genus Africaniella Travassos Dias, 1974 should be reinstated, and the species name of Am. transversale should be used as Africaniella transversale (Lucas, 1845).     

Prevalence and molecular characterization of Anaplasma phagocytophilum in roe deer (Capreolus capreolus) from Spain

Anaplasma phagocytophilum can infect a wide range of vertebrates; nevertheless, some genetic variants are associated with particular species of tick vectors and animal hosts. It has been suggested that roe deer (Capreolus capreolus) mainly acts as a reservoir of several A. phagocytophilum non-pathogenic variants for other animal species. The aim of this study was to determine the prevalence and identify the genetic variants of A. phagocytophilum in roe deer from Spain in order to assess host-pathogen associations and their pathogenic potential.The spleens of 212 roe deer hunted in Spain were individually collected and analysed by a commercial qPCR kit in order to detect the presence of A. phagocytophilum DNA. Positive samples were further characterized at groESL, 16S rRNA and msp2 partial genes. The possible influence of several intrinsic (age and sex) and extrinsic factors (ecological area) on A. phagocytophilum prevalence was analysed using a logistic regression.Overall, 41.5 % of the samples resulted positive to A. phagocytophilum. The percentage of infected roe deer was significantly higher in the Mediterranean and Oceanic areas than in the Continental and Mountain regions; nevertheless, prevalence was not related to age or sex. Sequence analysis at groESL and 16S rRNA genes allowed the identification of three ecotypes (I to III) and four variants (“Y”, “X”, “W”, “I”), respectively. A high percentage of roe deer from Spain is infected with different variants of A. phagocytophilum; these results have implications for public and animal health since some of these ecotypes and variants have been previously identified in both human and animal clinical cases.     

安徽地区家畜嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因检测和序列分析

目的了解安徽农村地区散养家畜自然感染嗜吞噬细胞无形体状况和基因特征。方法应用巢式PCR对怀远、明光和广德县采集的148份家畜全血样本进行嗜吞噬无形体16S rRNA基因检测,并对扩增产物测序,应用生物软件MEGA4.0进行序列分析。结果 148份家畜全血样本中检测出山羊、牛和犬嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因阳性率分别22.1%、25.0%和40.0%。26份PCR阳性扩增产物测序成功,序列分析结果表明：检出序列可归为4群,I群优势株占分析序列的66.7%,与北京、浙江和湖北等地检测序列同属一个分支。目的基因测定序列与参考序列同源性达97.0~99.0%。结论安徽调查地区农村家畜动物存在嗜吞噬细胞无形体感染,山羊是该地区嗜吞噬细胞无形体的重要宿主动物之一。     

PCR—Dotblot杂交法直接检测临床病原菌的报告

目的为了寻找临床病原菌系统，检测和鉴别的有力手段。方法用真细菌保守的１６ＳｒＲＮＡ基因为模板，以ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交的方法检测临床病原菌。结果它将１６ＳｒＲＮＡ基因的广谱性和变异性并存之特点和ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交的敏感性结合起来，对该法的建立进行了探讨，并初步用于临床感染的检测。结论为细菌通用检测法的建立提供了基础。