肺泡Ⅱ型细胞的分离培养及年龄对其增殖的作用

目的：建立肺泡Ⅱ型细胞的分离培养方法，研究年龄对其增殖的影响。方法：应用梯度离心和贴壁培养分离大鼠肺泡Ⅱ型细胞，比较幼年，中年和老年大鼠培养肺泡Ⅱ型细胞的增殖能力，结果：证明该分离方法最终每只可收获（１．１±０．６）×１０＾７个细胞，细胞活力９４．１％，肺泡Ⅱ型细胞纯度为（９１．６±２．４）％，肺泡Ⅱ型细胞的增殖能力均呈现幼年线〉中年组〉老年组的变化。结论：成功地建立肺泡Ⅱ型细胞的分离培养方法，老     

老年大鼠肺泡Ⅱ大型细胞细胞外基质成分和基底膜厚度的变化

目的：探讨老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质成分和基底膜厚度的变化。方法：用免疫细胞化学和图像分析技术幼年（１～２个月）、中年（８～９个月）和老年（２５～２８个月）大鼠肺泡Ⅱ型细胞层粘连蛋白和纤维连接蛋白的变化及肺泡Ⅱ型细胞基底膜的厚度。结果：老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞层粘连蛋白减少，纤维边接蛋白增多，基底膜增存。结论：老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质的发生改变，可能导致肺泡修复能力的异常。     

不同龄大鼠肺泡Ⅱ型细胞表面活性物质的变化

目的 探讨衰老对肺泡Ⅱ型细胞合成表面活性物质代谢的影响。方法 利用形态计量和Northern杂交方法比较了幼(1～2月龄)、中(9～10月龄)和老年(25～28月龄)大鼠肺泡Ⅱ型细胞内板层体数及肺组织内肺泡表面活性物质相关蛋白(SP)A、B和C基因的表达。结果 老年鼠肺泡Ⅱ型细胞内板层体数为12.20±4.99个/细胞,高于幼年鼠的11.25±3.29个/细胞(P<0.01),但低于中年鼠的13.37±4.55个/细胞(P<0.05)。肺组织中SP-A、SP-B和SP-C基因的表达各年龄组之间则无差别。结论 肺泡Ⅱ型细胞对表面活性物质代谢的年龄相关性变化能力可能是代偿性分泌增加而达到的新的动态平衡的结果,并不是老化时肺功能下降的原因。     

老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质成分和基底膜厚度的变化

目的 :探讨老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质成分和基底膜厚度的变化。方法 :用免疫细胞化学和图像分析技术分析幼年 (1～ 2个月 )、中年 (8～ 9个月 )和老年 (2 5～ 2 8个月 )大鼠肺泡Ⅱ型细胞层粘连蛋白和纤维连接蛋白的变化及肺泡Ⅱ型细胞基底膜的厚度。结果 :老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞层粘连蛋白减少 ,纤维连接蛋白增多 ,基底膜增厚。结论 :老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质的代谢发生改变 ,可能导致肺泡修复能力的异常     

人骨肉瘤浸润淋巴细胞和引流淋巴结细胞体外抗瘤活性

从１２例骨肉瘤患者手术切除的实体瘤中分离肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），从患者引流淋巴结中分离淋巴细胞（ＬＮＬ），以ｒＩｌ—２激活培养，并以４小时５１Ｃｒ释放试验测定ＴＩＬ和ＬＮＬ体外抗瘤活性。结果表明：１２例骨肉瘤患者的ＴＩＬ培养１５～２５天，对Ｋ５６２和ＬｉＢｒ靶细胞（效靶比２５∶１）平均杀伤活性分别为５９．７±１２．６％和４４．２±１０．２％，激活的ＬＮＬ对Ｋ５６２和ＬｉＢｒ细胞的杀伤活性分别为５５．２±１１．６％和４０．８±９．１％，二者对Ｋ５６２和ＬｉＢｒ细胞杀伤活性相差不显著（Ｐ＞０．０５）。其中６例患者ＴＩＬ和ＬＮＬ对自身肿瘤细胞杀伤活性分别为３８．８±９．５％和３５．５±７．６％，二者相差不显著（Ｐ＞０．０５）。     

吸烟对肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的：观察吸烟或不吸烟者肺泡巨噬细胞凋亡的变化。方法：对吸烟或不吸烟者肺泡巨噬细胞进行染色观察及流式细胞仪ＤＮＡ分析。结果：吸烟者肺泡巨噬细胞生存时间延长,吸烟组存活率为（７６．３±１２．５）％,不吸烟组为（５５．４±１１．６）％,两者差异显著（Ｐ＜０．０５）。荧光染色吸烟组凋亡细胞百分率为（３８．６±１１．５）％,不吸烟组凋亡细胞百分率为（５９．４±１２．１）％。流式细胞仪观察凋亡细胞百分率吸烟组为（１１．５±１０．４）％,不吸烟组为（２９．１±８．６）％。吸烟组巨噬细胞凋亡较不吸烟者明显减少。结论：烟雾中某些成分可能通过抑制巨噬细胞凋亡,在肺气肿的发病中起重要作用。     

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、原代培养与鉴定

 【目的】探讨胎鼠肺泡Ⅱ型细胞原代培养及鉴定方法，建立肺泡Ⅱ型细胞培养模型，为体外研究肺泡Ⅱ型细胞及胎儿肺发育提供实验手段。【方法】采用低浓度胰酶消化20d胎鼠肺组织，经差速离心和特异性免疫吸附后，分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞，进行原代培养；根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和肺表面活性特异蛋白A的分泌，用免疫细胞化学染色、透射电镜及酶联免疫吸附法对分离的细胞进行形态学和功能鉴定。【结果】原代培养的肺Ⅱ型细胞12h开始贴壁，外观呈多边形，岛状生长。培养的24～48h，细胞连接成单层，胞浆内颗粒明显，培养的6～7d细胞内颗粒大量减少；免疫细胞化学鉴定细胞肺表面活性特异蛋白A（surfactant pmtein A，SP-A）染色阳性，透射电镜可见观察到细胞内板层小体，培养液中SP-A含量随培养时间延长逐渐增多，于培养36h达峰值，为80ng／mL；细胞纯度达（92±2）％，产量为（18．6±7）×10^6。【结论】差速离心和免疫黏附法是一种高效的分离和纯化胎肺Ⅱ型细胞的方法，所得细胞产量大、纯度高，可以用于体外研究肺泡Ⅱ型细胞和晚期胎肺发育的研究.     

应用免疫磁珠法分离脐血CD_(34)~+造血细胞

目的：分离脐血CD细胞，以了解其造血增殖活性。方法：应用免疫磁珠法（Isolex50系统）分离脐血CD细胞，并对其实验方法进行了改进。结果：常规方法CD纯度较低，经过改进，脐血CD细胞由分离前的（1．39±0．76）％增加至（59．46±17．35）％，CD细胞富集倍数为（62．31±55．19）倍。分离后组分CFU－GM、BFU－E、CFU－Mix较分离前分别增加了（41．05±15．77）、（13．14±8.66）及（34．80±19．58）倍，而阴性组分所形成的集落显著减少。结论：免疫磁珠法可以有效地分离CD细胞，造血祖细胞集落大多来源于CD细胞。     

高效分离培养肿瘤浸润淋巴细胞方法的建立

提高肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的增殖能力和杀伤活性，是其临床应用前需解决的关键问题。为此，作者对ＴＩＬ的分离和培养条件进行了探讨，建立了以机械分散法，０．０５％胶原酶和０．００３％ＤＮＡ酶室温消化６小时加冷消化１８小时的酶消化法和７５％与１００％Ｆｉｃｏｌｌ非连续密度梯度离心法相结合的分离纯化ＴＩＬ方法。分离出的ＴＩＬ在体外条件培养基中多数能扩增到１０９以上的应用标准，ＮＫ、ＬＡＫ活性分别可达５８．３±１１．７％和４８．６±１０．６％，其中发挥主要作用的是ＣＤ８Ｔ细胞。因此，本法不失为一种有效的分离培养ＴＩＬ的方法。它的建立为应用ＴＩＬ治疗恶性肿瘤奠定了良好的实验基础。     

大鼠胰岛的分离和纯化

目的：改进分离与纯化方法，以获得较高纯度和活力的大鼠胰岛。方法：用改良的酶法分离、Ｄｅｘｔｒａｎ梯度法纯化大鼠胰岛。用ＤＴＺ法判定胰岛纯度；用ＡＯ／ＰＩ法判定胰腺存活率；用大鼠胰岛移植于ＳＴＺ糖尿病小鼠法判定其功能。结果：雌、雄性ＳＤ和Ｗｉｓｔａｒ大鼠间胰岛形态无明显差异。Ⅴ型和Ⅺ型胶原酶对大鼠胰岛分离效果相似；分离以０．１％胶原酶分次消化、作用３０ｍｉｎ为宜，细胞存活率达９０％。纯化用２２％—１６％—１４％—９％梯度所获得胰岛的纯度＞９０％。胰岛移植于糖尿病小鼠可使其血糖从移植前的（２６．７０±２．５３）ｍｍｏｌ／Ｌ降低至（１３．９８±３．９２）ｍｍｏｌ／Ｌ，维持２～３ｄ。结论：所改进的制备方法可获得较高纯度和活力的大鼠胰岛。     

过热30分钟后大鼠脾细胞增殖反应及IL─1活性测定

本实验复制大鼠过热动物模型，高温环境中体温升高达１．１８±０．１９℃时，断髓处死动物，无菌取脾。结果表明．过热性体温升高大鼠脾细胞在ＣｏｎＡ诱导下增殖反应明显高于对照组。过热大鼠脾细胞产生ＩＬ─１的能力明显高于对照组。     

老年危重Ⅱ型糖尿病患者的强化胰岛素治疗

目的：探讨适应危重老年Ⅱ型糖尿病患者的胰岛素治疗方法。方法：应用强化胰岛素治疗危重Ⅱ型老年糖尿病患者２９例。结果：患者的糖化血红蛋白从（１７．１±９）％降至（７．３±２．６）％,并随着血糖控制至近正常水平,患者的一般情况及心肾功能均有改善,,肺部及泌尿道感染减少、微血管并发症减轻,病情稳定后患者未发生过严重低血糖。结论：强化胰岛素治疗较常规胰岛素治疗能显著改善患者的血糖水平。     

成人静脉内皮细胞单次传代大规模体外培养

用胶原酶消化成人静脉，总数：２５．９±６．７２×１０￣３个细胞。获取９．１２±４．３×１０￣３个细胞／ｃｍ￣２，活细胞率为９９％。以２．３９±０．４３×１０￣３个细胞／ｃｍ￣２的接种密度将其接种到一次性塑料培养皿中进行原代培养。待细胞进入增殖平台期后（生长时间为：７．２５±０．５ｄ），以１：２６比例将原代细胞进行传代培养。经８±０．８２ｄ培养后，细胞接触仰制形成。整个体外培养扩增时间为：１５±１．４ｄ，血管内皮细胞数增加了３３３±４０倍。经荧光标记第Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体和透射电镜观察证实：１９９％以上的原代及传代细胞为血管内皮细胞。扩增后的血管内皮细胞染色体２ｎ＝４６条，未发现异倍体细胞。在原代和传代细胞的条件培养液内ｔ－ＰＡ和ＶＷＦ含量相差无统计学意义。     

兰索拉唑促进溃疡愈合抑制幽门螺杆菌生长的实验研究

目的：比较北京怀信公司和成都华西药化公司提供的兰索拉唑和奥美拉唑、泰胃美、羟氨苄青霉素和德诺对大鼠慢性胃溃疡愈合或对离体ＨＰ中长的作用。方法：胃溃疡的产生是通过浆膜面局部应用５０％醋酸持续６０ｓ。大鼠用上述药物或生理盐水（对照组）治疗，第１１ｄ或２１ｄ检查溃疡面积。用离体方法培养ＨＰ。结果：在兰索拉唑组（５．４±２．２ｍｍ２）、奥美拉唑组（６．１±３．９ｍｍ２）和泰胃美（６．９±４．１ｍｍ２）等治疗组溃疡指数明显小于对照组（８．８±２．１ｍｍ２）（ｐ＜０．０１或ｐ＜０．０５），但兰索拉唑和奥美拉唑组间无明显差异（Ｐ＞０．０５）．上述药物除泰胃美外均抑制ＨＰ的生长，但抑制程度不同。兰索拉唑组（１２．５ｍｇ／Ｌ）为“０”，奥美拉唑组（２．５ｍｇ／Ｌ）为“＋＋”，羟氨苄青霉素（１２０．０ｍｇ／Ｌ）不“０”，德诺（１２０．０ｍｇ／Ｌ）为“＋”，泰胃美没有抑制作用。结论：在促进溃疡愈合和抑制ＨＰ生长方面，兰索拉唑的作用强于奥美拉唑和泰胃美。     

5/6肾大部分切除大鼠甲状旁腺细胞凋亡的变化及钙三醇的调节作用

目的：探讨慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）大鼠甲状旁腺细胞凋亡的变化以及钙三醇的调控作用。方法：研究对象为ＳＤ大鼠，分３组：Ａ组：ＣＲＦ组；Ｂ组：ＣＲＦ加用钙三醇组，每天皮下注射钙三醇５０ｎｇ；Ｃ组：假手术对照组。术后８周，采用流式细胞术检测大鼠甲状旁腺凋亡细胞比率（ＡＰＯ）和细胞周期，同时检测血清肌酐（ＳＣｒ）、Ｃａ＋｛２＋｝、Ｐ＋｛３－｝、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、全段甲状旁腺素（ｉＰＴＨ）以及尿内生肌酐清除率（ＣＣｒ）。结果：Ａ组和Ｂ组大鼠ＣＣｒ均较Ｃ组下降了近一半；Ａ组ＡＬＰ和ｉＰＴＨ显著高于Ｂ组和Ｃ组（％Ｐ％＜０．０１），而Ｂ组和Ｃ组差异无显著性（％Ｐ％＞０．０５）；Ａ组ＡＰＯ、Ｓ期细胞比率（ＳＰＲ）和增殖指数（ＰＩ）分别为（０．２３±０．１９）％、（１１．９９±２．７３）％和（１６．９３±３．４２）％，Ｂ组分别为（１．３２±０．５１）％、（２．９５±１．５８）％、（５．２４±２．２９）％，Ｃ组分别为（１．２９±０．４５）％、（０．７３±０．４６）％、（１．７６±０．７０）％，Ａ组ＡＰＯ显著低于Ｂ组和Ｃ组（％Ｐ％＜０．０１），Ａ组ＳＰＲ和ＰＩ显著高于Ｂ组和Ｃ组（％Ｐ％＜０．０１），但Ｂ组ＳＰＲ和ＰＩ仍高于Ｃ组     

油酸诱导的急性肺损伤模型肺泡液体清除能力的室验研究

目的 探讨油酸诱导的急性肺损伤模型肺泡内液体的清除能力。方法 油酸静脉注射复制急性肺损伤模型。清洁级雄性大鼠51只随机分为正常组、急性肺损伤组和特布他林治疗组。动脉血气、肺组织病理学检测评估肺损伤程度,电镜下观察急性分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞的变化,重力法测定血管外肺水量（EVLWI）。结果 急性肺损伤组大鼠肺损伤评分（6.37±1.26）分、血管外肺水量（4.02±0.69）mL/g显著高于正常组[(1.39±0.5)分和（2.73±0.50）ml/g,均P< 0.0５];特布他林治疗后大鼠肺损伤评分（5.23±1.14）分和血管外肺损伤量（3.50±0.45）mL/g较急性肺损伤显著下降（均P< 0.0５）。电镜下观察急性肺损伤组肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞形状不规则,染色质边集,线粒体肿胀,板层小体排空及空泡化等;经特布他林治疗后,电镜观察大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体肿胀程度及板层小体排空程度较急性肺损伤组轻。结论 油酸致急性肺损伤大鼠肺泡液体清除能力下降,特布他林可以减轻肺组织及肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤,提高肺水清除能力。     

尼群地平加小剂量倍他乐克治疗老年高血压病50例效果观察

采用尼群地平加小剂量倍他乐克治疗老年高血压病５０例，１个疗程后，血压明显下降，平均收缩压由２３．６±１．６ｋＰａ降至１７．５±１．４ｋＰａ，平均舒张压由１４．６±１．０ｋＰａ，总有效率达９６％。药物副反应轻微，不影响治疗，未发现心率、血糖、血脂的异常改变，认为两药合用有明显的协同作用，对于治疗Ⅰ、Ⅱ期老年高血压病是安全、有效的。     

应用免疫磁珠法分离脐血CD^＋34造血细胞

分离脐血ＣＤ＾＋３４细胞，以了解其造血增殖活性。方法：应用免疫磁珠法分离脐血ＣＤ＾＋３４细胞，并对其实验方法进行了改进。结果：常规方法ＣＤ＾＋３４纯度较低，经过改进，脐血ＣＤ＾＋３４细胞由分离前的（１．３９±０．７６）％增加至（５９．４６±１７．３５）％，ＣＤ＾＋３４细胞富集倍数为（６２．３１±５５．１９）倍，分离后组分ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｍｉｘ较分离前分别增加（４１．０５±１５．７     

快速分离肝癌患者外周血树突状细胞

目的探讨从肝癌患者外周血中大量快速分离树突状细胞（ＤＣ）有效方法。方法自肝癌患者外周血中分离出单个核细胞（ＰＢＭＣ）;ＰＢＭＣ与Ｇｍ－ＣＳＦ及ＩＬ－４共培养;检测培养前后ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７－２表达水平及ＤＣ诱导Ｔ细胞增殖能力。结果ＧＭ－ＣＳＦ及ＩＬ－４联合刺激选择性使ＰＢＭＣ中ＤＣ大量增殖,并通过增强ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达［从（１２．８±１．１）、（１５．１±１．０）增至１９．１±１．７）、（２１．６±１．５）,Ｐ＜０．０１］进一步增强ＤＣ免疫功能［由（６８２０±１４０）增至（１４０９０±１８０）ｍｉｎ－１,Ｐ＜０．０１］。结论联合应用ＧＭ－ＣＳＦ及ＩＬ－４能够从肝癌患者血中制备出大量高免疫活力ＤＣ。     

浓烟吸入诱发大鼠透明质酸升高的研究

目的　探讨大鼠烟雾吸入后透明质酸增多与大鼠肺吸入性损伤的关系。方法　４０ 只ＳＤ 大鼠随机分成５ 组：正常对照组和烟雾吸入后不同时间观察组。分别测定血清、支气管肺泡灌洗液和肺组织中的透明质酸含量,支气管肺泡灌洗液中的炎性细胞比例及蛋白含量。结果　烟雾吸入后,血清和肺组织中的透明质酸含量升高,１２ ｈ 达到高峰［ 血清：１２ ｈ 组（４７０．４±９７ ．５） μｇ／Ｌ,对照组（１８６．４ ±３１．５） μｇ／Ｌ;肺组织：１２ ｈ 组（６９７ ．５±１１５．１）μｇ／Ｌ,对照组（２０２ ．６ ±３９．４） μｇ／Ｌ］ 。而支气管肺泡灌洗液的各时间观察组升高不显著。支气管肺泡灌洗液蛋白含量６ ｈ 达高峰;细胞数在１２ ｈ 最多,主要是中性粒细胞。结论　烟雾吸入后支气管内炎性细胞以中性粒细胞为主。肺内透明质酸含量高于血液。透明质酸似可作为烟雾吸入性肺损伤的病理指征。