肿瘤坏死因子对晶状体上皮细胞的粘附移行作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ α,ＴＮＦ－０６３３）对晶状体上皮细胞在细胞外基质上的粘附移行作用。以及在此过程中整合素分子的表达情况。方法：借助细胞粘附实验和移行实验研究ＴＮＦ－α对体外培养的牛晶状体上皮细胞在细胞外基质上的粘附和移行,以及整合素抗体封闭后对细胞的影响。ＴＮＦ－α对细胞表面整合素的表达调节经免疫荧光染色后由流式细胞仪检测。结果：ＴＮＦ－α可以明显促进晶状体上皮细胞在Ⅳ型胶原、层粘蛋白、纤维连接蛋白上的粘附移行。抗体封闭实验表明整合素β１、α２、α５亚基参与细胞的粘附,在细胞移行中发挥主要作用的是α亚基而非β亚基,流式细胞仪检测表明ＴＮＦ－α可上调晶状体上皮细胞中整合素的表达。结论：胶原、层粘蛋白、纤维连接蛋白是晶状体囊的主要成分。肿瘤坏死因子α促进晶状体上     

过表达miR-21对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用

目的探讨过表达miR-21对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用。方法将miR-21过表达慢病毒载体及空载体慢病毒转染至人晶状体上皮细胞系——LEC B3细胞,并将实验分为Control组(未转染)、miR-21-NC组(转染空载体慢病毒)和miR-21组(转染miR-21过表达慢病毒载体)。荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白GFP的表达,RT-qPCR方法检测miR-21的表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miR-21与FasL的靶向关系,Western-blot检测细胞中凋亡相关蛋白FADD、caspase-3、Bcl-2及Bax的表达,试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况。结果在荧光显微镜下观察,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白细胞组未见绿色荧光。与Control组相比,miR-21组中miR-21的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率、FADD、caspase-3和Bax的表达水平均明显下降,差异均具有统计学意义(P0.05);miR-21-NC组与Control组相比差异无统计学意义(P0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miR-21与FasL存在靶向关系。结论 miR-21可以抑制晶状体上皮细胞发生凋亡,既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用。     

年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的超微结构观察

目的探讨年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的超微结构变化。方法10例年龄相关性皮质性白内障的晶状体上皮细胞分为膨胀期组(8例)和成熟期组(2例),用日本产AEM-1200型透射电镜对其超微结构进行观察、对比。结果成熟期组晶状体上皮细胞与膨胀期组相比出现大量异型核、染色质凝缩、内质网扩张明显、线粒体肿胀、变空严重,嵴变形扭曲且大量减少或消失,呈现空泡化,且呈现明显的凋亡表现。结论晶状体上皮细胞不同时期的超微结构改变与白内障的发生发展密切相关。     

榄香烯诱导晶状体上皮细胞凋亡及其机制

目的 :探讨天然药物单体榄香烯 (Elemene,Ele)诱导晶状体上皮细胞 (lensepithelialcell,LEC)凋亡及其机制。方法 :通过透射电子显微镜观察Ele对LEC超微结构的影响 ;采用流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)研究Ele对LEC的DNA含量及线粒体跨膜电位 (mitochondrialtransmembranepotential,ΔΨm)的影响。结果 :透射电镜下可观察到Ele组LEC呈现核染色质凝集、固缩、边集、核碎裂等典型的细胞凋亡形态学改变。Ele组LEC细胞核的DNA含量随药物作用时间的延长而下降 ,与空白对照组有显著差异 (P <0 0 1) ;细胞质线粒体ΔΨm在药物作用早…     

ADV-miR-184体外转染对人晶状体上皮细胞移行的影响

目的 探讨携带miR-184的重组腺病毒(ADV-miR-184)体外转染对人晶状体上皮细胞移行的影响.方法 ADV-miR-184在293细胞中扩增、纯化并滴定病毒滴度;ADV-miR-184体外感染人晶状体上皮细胞(HLE-B3),采用细胞划痕法测定ADV-miR-184对HLE-B3移行距离的影响.结果 测定ADV-miR-184的病毒滴度为1.6×109 puf/mL;分别将ADV-miR-184以MO110、MO150、MOI100、MOI200、MOI500转染HLE-B3 72 h后,细胞移行距离随着ADV-miR-184的浓度增加而减少,MOI100组与MOI50组、MOI10组相比有明显差异(P＜0.05).但与MOI200、MOI500实验组相比变化不明显.与对照组比较,MOI100感染细胞的移行距离在转染后24 h、48 h、72 h、96 h明显缩短(P＜0.05).结论 ADV-miR-184可成功转染人晶体上皮细胞,并可抑制细胞的移行,提示miR可能参与后发性白内障的形成过程.     

ADV-miR-184体外转染对人晶状体上皮细胞移行的影响

Objective Investigate the effects of the recombinant adenoviral vector containing microRNA-184 (ADV-miR-184) on the migration of human lens epithelial cells in vitro.Methods ADV-miR-184 WaS amplified,purified,and titmted in 293 cell line.Human lens epithelial cells (HLE-B3) were then transfected with ADV-miR-184.The) effect of miR-184 on the migration of these transfected cells was evaluated by the scratch assay.Results The original titer of ADV-miR-184 was 1.6×109 puf/mL.HLE-B3 cells were transfected with ADV-miR-184 at different multiplicity of infection (MOI),including MOI10,MOI50,MOI100,MOI200 and MOI500,for a period of 72 h.The migrating distances of HLE-B3 cells were inbitied by MOI100 significantly higher titers of ADV-miR-184 transfection.Transfection with inhibited the migration of HLE-B3 cells compared with groups of control,MOI10,or MOI50 (P＜0.05).In contrast,no differences were showed between MOI100 and MOI200 or MOI500 groups.The migrating distances of HLE-B3 ceils transfected with MOI100 were also significantly inhibited at 24h,48h and 96h tremments compared with controls (P＜0.05).Conclusion ADV-miR-184 could be successfully used to tnmsfect human lens epithelial cells.The miR-184 inhibited the migration of human lens epithelial cells,which suggests that the miR virus may play a role in the development of the posterior capsular opacification.     

LPS对晶状体上皮细胞TLR4和CD14 mRNA表达的影响

目的:探讨脂多糖(LPS)对晶状体上皮细胞(LECs)Toll样受体4(TLR4)和CD14表达的影响。方法:采用不同浓度的LPS与体外培养的牛LECs共同孵育不同时间,再用一步法反转录多聚酶链反应(PCR)检测LECs中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达。结果:50μg/LLPS组、100μg/LLPS组、200μg/LLPS组、500μg/LLPS组、1000μg/LLPS组的LECs中TLR4mRNA的表达均分别显著高于对照组(P0.01);100μg/LLPS作用24h、48h、72h后LECs的TLR4mRNA表达均显著高于对照组(P0.01);100μg/LLPS作用24h后LECs的CD14mRNA表达亦显著高于对照组(P0.05)。结论:LPS可促进LECs中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达,提示白内障手术后眼内细胞反应和后发性白内障的发生发展可能与TLR4和CD14表达增加有关。     

半乳糖诱导大鼠晶状体上皮细胞凋亡与白内障形成的关系

目的研究半乳糖对大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响,并探讨细胞凋亡与白内障形成的关系。方法将半乳糖单侧眼球后注射W istar大鼠,裂隙灯下观察晶状体混浊情况,运用流式细胞仪检测各组晶状体上皮细胞C-MYC水平,用末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡。结果半乳糖诱导第7天半数以上晶状体混浊度为Ⅱ期,至14 d时87%晶状体混浊度为Ⅳ~Ⅴ期,在第24天时100%晶状体混浊度Ⅳ~Ⅴ期;乳糖诱导第7天细胞凋亡率为5.6%~8.4%,从第7天开始凋亡细胞数逐渐增多,第14天时细胞凋亡率达30.2%~41.8%,第24天时镜下最多可观察到60%的凋亡细胞;晶状体上皮细胞C-MYC水平在半乳糖诱导第7天和14天均高于对照组(P<0.05),24 d接近正常水平。结论半乳糖诱导大鼠白内障形成过程中出现晶状体上皮细胞的凋亡,其机制可能与半乳糖诱导晶状体上皮细胞C-MYC高表达有关。     

miR-24通过SIRT1调控晶状体上皮细胞凋亡的研究

目的探讨氧化应激情况下miR-24对晶状体细胞凋亡的调控。方法采用实时定量PCR检测40例白内障患者晶状体上皮组织及临近晶状体上皮组织中miR-24的表达水平,并在氧化应激情况下检测miR-24的表达变化。通过miR-24 mimics、miR-24 inhibitor转染晶状体上皮细胞SAR01/04以过表达和敲低miR-24,利用pcDNA3.1-SIRT1转染SAR01/04以过表达SIRT1,FITC/PI流式细胞术检测晶状体细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况,CCK-8检测细胞活性状态。结果miR-24在白内障晶状体上皮组织中的表达高于临近组织,氧化应激情况下促进miR-24表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);氧化应激情况下,敲低miR-24抑制晶状体上皮细胞的凋亡;过表达或敲低miR-24可以分别降低或促进SIRT1的表达;过表达miR-24和过表达SIRT1后抑制了晶状体细胞的凋亡。结论氧化应激促进晶状体上皮细胞miR-24表达上调,miR-24通过下调SIRT1促进晶状体上皮细胞的凋亡,为白内障的靶向治疗提供一定的策略。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔晶体上皮细胞的增殖作用

观察碱性纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF)对兔晶体上皮细胞（rabbit lens epithelial cells,RLECs)的促增殖作用,以及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,用第2－3代培养细胞,用MTT法测定细胞增殖,用免疫组织化学法观察PCNA的表达,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果显示bFGF可促进兔晶体上皮细胞的增殖,尤其是浓度为10μg/L作用最明显;正常细胞组PCNA表达呈阴性,添加bFGF组PCNA表达呈强阳性;并显示进入S期的细胞明显增加,提示bFGF是促进兔晶体上皮细胞增殖的重要因素。     

不同雌激素对大鼠海马和脑皮质区域雌激素受体α和β表达的差异性调节研究

目的:探讨不同种类雌激素药物对雌性去势大鼠海马和脑皮质区域雌激素受体(estrogenreceptor,ER)的调节差异。方法:雌性去势大鼠分别给予倍美力或补加乐持续灌胃3个生理周期,采用半定量RT-PCR法检测雌激素受体ERα、ERβ的mRNA表达,免疫组化法检测ERα、ERβ蛋白的分布及表达。结果:倍美力组海马和脑皮质ERαmRNA表达均显著低于去势对照组,ERα蛋白在海马中相对表达量也低于对照组,但在脑皮质中表达无改变;该组上述两个区域中ERβmRNA以及脑皮质ERβ蛋白的表达无显著改变,仅海马ERβ蛋白表达升高。补加乐组脑皮质和海马ERβmRNA和蛋白表达均显著高于去势对照组,海马ERαmRNA表达也高于对照组,但脑皮质ERαmRNA及脑皮质和海马ERα蛋白的表达水平均无显著改变。结论:两种不同种类雌激素药物对雌性去势大鼠认知区域中ERα、ERβ表达的调节水平存在显著差异,这可能是选用不同的雌激素药物进行激素替代治疗产生的保护认知疗效存在差别的机制之一。     

罗格列酮对人子宫肌瘤细胞凋亡和雌激素受体表达的影响

目的:探讨罗格列酮对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法:不同浓度的罗格列酮(10-8,10-7和10-6 mol/L)处理原代培养的人子宫肌瘤细胞24,48和72 h.用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞生长曲线,用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用放射...     

烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞Muc5ac表达的影响

目的： 探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的黏液蛋白Muc5ac表达的影响及其可能机制。方法: 分别应用不同浓度(0、8、16、20 mg/L) 的烟曲霉菌提取物（AFE）作用体外培养人支气管上皮细胞16HBE-14o不同的时间。实验还应用热处理的AFE（HT-AFE）、丝氨酸蛋白酶抑制剂（抑肽酶）和蛋白激酶激活受体-2（PAR-2）阻断剂（FSLLRY-NH2）。应用细胞免疫组织化学和酶联免疫法(ELISA)检测细胞Muc5ac蛋白量,同时应用RT-PCR检测Muc5ac mRNA 的表达。结果: 正常未给予AFE刺激培养条件下的对照组细胞仅表达少量Muc5ac,而给予不同浓度的AFE作用后,细胞合成和分泌Muc5ac的量明显高于对照组（P＜0.01）,并呈明显的时间和浓度依赖性。丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR-2特异性阻断剂可以明显抑制AFE的上述作用。另外,热处理的AFE蛋白酶活性完全灭活,不能促进细胞Muc5ac表达增加。结论: AFE依赖其蛋白酶活性激活受体PAR-2,促进呼吸道上皮细胞Muc5ac表达增加,使黏液分泌增加。     

新型隐球菌与肺泡上皮细胞的体外相互作用

目的研究新型隐球菌与肺泡上皮细胞的体外相互作用,探讨隐球菌肺部感染的发病机制。方法体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞A549(ATCC CCL-185),检测新型隐球菌2种变种对细胞的时间/浓度黏附率、通过率;检测新型隐球菌对细胞的损伤作用;透射电镜观察相互作用的超微结构。结果2种变种的新型隐球菌可以对A549细胞产生黏附与侵袭,黏附率与侵袭率呈现时间依赖性;同时还可以使A549细胞凋亡率升高,对其造成损伤,这与菌体的活力相关。超微结构可见隐球菌与肺泡上皮细胞的黏附与侵袭过程。2种变种之间在黏附率、通过率及对细胞的损伤作用方面差异无统计学意义。结论活的隐球菌黏附与侵袭肺泡上皮细胞是隐球菌感染肺部的重要条件,不同变种对肺部的易感性可能不存在差异。进一步明确二者的作用机制对隐球菌的发病机制研究具有重要意义。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人食管上皮细胞TAP-1和LMP-2表达的影响

目的:探讨不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)处理,体外原代培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的变化。方法:采用Western blot和RT-PCR技术从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度的DON处理24小时,体外培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2分子表达的变化规律及其量-效关系。结果:不同浓度(50、100、1 000、2 000μg/L)DON处理人食管上皮细胞24小时后,DON各处理组食管上皮细胞TAP-1蛋白的Western blot半定量检测结果分别为0.47±0.22、0.28±0.16、0.24±0.18和0.21±0.19,统计分析表明DON 100、1 000、2 000μg/L处理组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析表明,在0~2000μg/L浓度范围内,随DON处理浓度增高,食管上皮细胞TAP-1蛋白的表达量逐渐降低(r=-0.595,n=4,P<0.01)。RT-PCR结果发现,经不同浓度DON处理食管上皮细胞TAP-1mRNA的相对表达量虽然呈现先升高后降低的趋势,但与对照组相比无统计学差异。DON各处理组LMP-2蛋白的Western blot半定量检测结果分别为2.25±1.03、3.31±1.35、1.90±1.19和2.12±0.22均高于空白对照组(0.91±0.21),其中100μg/L处理组相对表达量最高,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果,DON 100μg/L处理组的LMP-2 mRNA的相对表达量最高为2.23±0.56,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。其余处理组差异无统计学意义。结论:DON可剂量依赖地抑制体外培养的人正常食管上皮细胞的TAP-1蛋白的表达,但对TAP-1的mRNA未见显著影响。DON(100μg/L)可以促进食管上皮细胞LMP-2蛋白和mRNA表达,其余各浓度未见明显影响。     

年龄相关性白内障晶体上皮细胞的基因表达谱变化的初步分析

目的:探讨年龄相关性白内障与正常透明晶状体前囊上皮细胞基因表达差异，为年龄相关性白内障发病机制的研究及治疗提供理论依据。 方法:提取年龄相关性白内障病人晶状体和正常透明晶状体前囊中央上皮细胞RNA，分别用cy3、cy5标记，再与含 8 064 个基因点的芯片杂交，筛选两个样本间表达差异的基因，并对这些基因进行初步功能分析。按不同功能类型分别选择9个存在显著表达差异的基因，应用实时荧光定量PCR技术验证基因芯片可靠性。 结果:年龄相关性白内障前囊中央上皮细胞中有724个差异表达基因，包括438个表达下调基因和286个表达上调基因。进行初步功能分类分析发现这些表达差异基因主要涉及晶状体结构蛋白基因、细胞骨架蛋白基因、细胞增殖及细胞凋亡以及细胞应激反应等方面。 结论:年龄相关性白内障与透明晶状体前囊上皮细胞存在基因表达差异，其中多数基因呈表达下调。表达下调基因功能涉及的生物学过程导致晶状体维持内环境稳定的能力下降，形成白内障。