miR-27a-3p调控Ras/Raf/MEK/ERK信号通路抑制肾透明细胞癌细胞增殖的研究

目的 探讨miR-27a-3 p对肾透明细胞癌细胞Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的作用,观察其对肾透明细胞癌细胞增殖的影响.方法 使用脂质体试剂lipofectamine 2000将miR-27a-3p模拟物或miR-NC转染至肾透明细胞癌细胞株Caki-1和A-498;qRT-PCR和Western blot检测miR-27a-3p的靶基因KRAS及下游通路蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖能力.结果 KRAS基因和下游通路蛋白的表达降低;转染miR-27a-3p后的肾透明细胞癌细胞周期明显被抑制,G0/G1期的细胞比例上升(P<0.01);肾透明细胞癌细胞活力和增殖能力降低(P<0.05).结论 过表达miR-27a-3p在体外可以显著降低肾透明细胞癌细胞Ras/Raf/MEK/ERK蛋白的表达,进而显著抑制其增殖能力.     

NRCAM-PI3K-AKT信号通路影响miR-505对前列腺癌细胞的增殖抑制作用

目的我们研究已经发现微小RNA-505(miR-505)可靶向调控神经细胞黏着分子(NRCAM)抑制前列腺癌的增殖、侵袭及转移。本研究拟进一步探讨miR-505在前列腺癌动物模型的功能,以及miR-505/NRCAM参与的下游调控信号通路。方法建立裸鼠皮下形成异体移植瘤模型,分析miR-505对前列腺癌的增殖力影响,免疫组化进一步探讨其参与的可能通路;在NRCAM抑制表达的人前列腺癌细胞株LNCaP和PC3细胞株中,蛋白质印迹法检测PI3K-AKT信号通路的蛋白表达水平;抑制NRCAM表达的PC3及LNCaP,细胞增殖实验证实NRCAM对细胞增殖力的影响。结果裸鼠动物模型发现miR-505过表达细胞株形成的皮下移植瘤明显比对照组的生长速度减缓(P<0.05),并且移植瘤的AKT及EGFR蛋白的表达是明显下降的(P<0.05)。前列腺癌细胞株中,抑制NRCAM的表达均可以导致磷酸化位点的AKT、EGFR及FAK的蛋白水平表达均下调。并且抑制NRCAM的表达,前列腺癌细胞PC3及LNCaP的增殖力下降(P<0.05)。结论 miR-505可能靶向调控NRCAM,影响PI3K/AKT信号通路的表达,而抑制前列腺癌细胞的增殖力。     

miR-154对前列腺癌细胞功能影响的实验研究

目的 研究miR-154在对前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞生物学功能的影响.方法 采用RT-PCR方法检测前列腺癌和癌旁正常组织样本中miR-154的表达.运用细胞增殖实验(CCK-8法)、克隆形成实验及细胞周期分析评估上调miR-154对前列腺细胞系DU145和PC-3的作用.结果 与癌旁正常前列腺组织相比,miR-154在前列腺癌组织中的表达水平显著下调.体外实验中,miR-154过度表达能显著抑制癌细胞的生长,细胞克隆形成数明显降低.流式细胞术检测发现癌细胞的生长受到抑制,在G0/G1期比率明显升高,而上调miR-154可以使前列腺癌细胞阻滞在G1期,而抑制细胞的增殖.结论 miR-154可以影响前列腺癌细胞的增殖功能,有望成为前列腺癌治疗的新靶点.     

miR-200a与肝细胞癌增殖转移及预后关系的研究进展

目的对近年来微小RNA(miR)-200a与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖转移及预后关系的研究进展进行综述。方法系统查阅国内外相关文献,总结miR-200a在HCC中的表达情况,及其在HCC增殖、转移、预后等过程中的作用及相关机制。结果 miR-200a在HCC的组织、细胞及患者血清中的表达下调,正常表达或高表达的miR-200a对HCC细胞的增殖及侵袭转移具有显著的抑制作用,HCC患者癌组织和血清中miR-200a的差异性表达对HCC的诊断和预后判断具有一定的潜在价值。尽管目前有关miR-200a与HCC的研究取得了诸多进展,但只有少部分生物学功能得到鉴定,其相应的下游靶基因调控机制亦尚待进一步研究。结论 miR-200a不仅对HCC的增殖、侵袭和转移具有抑制作用,而且在HCC的早期诊断、预后判断等方面具有一定的临床应用价值。     

MicroRNA-155对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的作用及机制研究

目的探讨miR-155在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞生长、侵袭与转移过程中的作用及可能的作用机制。方法构建人的miR-155类似物并体外转染PTC BCPAP细胞,通过CCK8及transwell试验观察细胞增殖及侵袭能力的变化。miR-155类似物体外转染BCPAP细胞并用Western blot方法检测MAPK通路相关蛋白本底及磷酸化表达。给予ERK通路抑制剂U0126观察能否逆转miR-155过表达造成的甲状腺癌细胞异常增殖及侵袭能力增强。结果过表达miR-15548 h后通过CCK8试验检测发现BCPAP细胞明显增殖,过表达miR-15524h、48 h后通过transwell试验发现甲状腺癌细胞侵袭能力明显增强(P<0.05);利用Western blot检测MAPK信号通路相关蛋白JNK、ERK、P38的表达均明显上调(P<0.05)。同时检测细胞内p-ERK蛋白表达升高(P<0.05),利用ERK通路抑制剂U0126与miR-155共同处理细胞发现p-ERK表达较miR-155组明显降低(P<0.05)。同时,我们检测各组细胞的增殖及侵袭情况,发现U0126能逆转miR-155造成的促增殖及促侵袭作用。结论miR-155能通过激活MAPK通路的ERK通路,进而促进PTC BCPAP细胞的增殖以侵袭能力,为治疗甲状腺癌提供了潜在的靶点。     

循环miR-222-3p和miR-136-5p与转移性去势抵抗性前列腺癌患者多西他赛化疗疗效的相关性

目的:本研究旨在探讨循环miR-222-3p、miR-136-5p和miR-34c-5p作为转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)多西他赛化疗早期治疗反应的生物标志物的潜能,并通过生物信息学分析探讨miR-136-5p潜在靶基因在前列腺癌中的相互作用。方法:我们运用实时荧光定量PCR测量30例患者多西他赛治疗前后血清中3种microRNA的水平。综合分析miRWalk 3.0、TargetScan和miRDB三大数据库的检索结果,以预测miR-136-5p靶基因,将筛选出的基因输入到"DAVID v6.8"数据库中,以进行KEGG信号通路分析。结果:血清miR-222-3p和miR-136-5p水平与多西他赛治疗显著相关(P0.05),对多西他赛无反应患者治疗前miR-222-3p水平较高(P0.05)。AUC为0.76(95%CI:0.55～0.97),是对多西他赛无反应患者的有效预测因子。多西他赛化疗后miR-34c-5p高表达患者的总生存期较短(log-rank P0.05)。miRWalk预测出17 138个基因与miR-136-5p相关,进一步分析发现936个基因可能是miR-136-5p的潜在靶点,KEGG信号通路分析表明这些基因主要分布在7个信号通路中。其中Rap1信号通路与前列腺癌细胞的转移密切相关。结论:我们的研究表明,循环miR-222-3p是多西他赛早期治疗反应的生物标志物,值得临床进一步研究。miR-136-5p可能在前列腺癌中起抑癌作用。     

微小RNA-148a对胃癌细胞MKN45增殖能力的影响及机制研究

目的：探讨微小RNA（miR）-148a对人胃癌细胞增殖的影响及可能机制。方法采用实时定量PCR技术检测60例胃癌组织及癌旁组织中miR-148a的表达水平。利用慢病毒包装建立稳定表达miR-148a的MKN45细胞系为转染组,未转染的MKN45细胞系为对照组。 CCK8法检测MKN45细胞的增殖情况,通过targetscan预测miR-148a的靶基因,Western-blot检测靶基因的表达水平。结果54例（90．0％,54/60）胃癌组织中miR-148a的表达量较癌旁组织下调,其中37例（61．7％,37/60）下降2倍以上;淋巴结转移、有无癌旁血管浸润及TNM分期Ⅲ～Ⅴ期者其表达量明显降低（P＜0．05）。转染miR-148a后3 d,MKN45细胞生长明显受抑,转染组吸光度值（0．978±0．091）明显低于对照组（1．182±0．074,P＝0．000）。转染组CDC25B（通过targetscan发现的miR-148a靶基因）蛋白表达较对照组明显降低。结论 miR-148a在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织;其具有抑制胃癌细胞增殖的作用,CDC25B可能是miR-148a发挥抑癌作用的靶基因。     

miR-221通过作用DVL2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能

目的 评价miR-221在前列腺癌细胞系中表达的变化对其神经内分泌样转化及其侵袭功能的影响.方法 以Northern blot检测LNCaP、LNCaP-AI两种前列腺癌细胞系中7种microRNA的表达变化;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCaP和LNCaP-AI细胞系中miR-221的作用;CCK-8法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;qRT-PCR和Western blot检测转染的细胞中神经元特异性烯醇化酶(NSE)及dishevelled-2( DVL2)表达的变化.结果 与雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)的细胞系LNCaP相比,miR-221在雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的细胞系LNCaP-AI中明显高表达.通过转染使miR-221在LNCaP细胞系中高表达可促进细胞的NSE表达,加速其神经内分泌样分化.而在LNCaP-AI细胞系中下调miR-221水平则会升高靶基因DVL2的表达水平,并增强LNCaP-AI细胞的迁移和侵袭能力.结论 该实验证实在AIPC和ADPC细胞系中miR-221存在表达差异.miR-221可促进前列腺癌细胞的神经内分泌样转化,这可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因.MiR-221可通过作用DVI2调节晚期前列腺癌细胞的转移和侵袭.     

miR-145下调与结直肠癌上皮间叶转化的分子机制探讨

目的:研究miR-145通过靶向调节目的基因对结直肠癌(CRCs)上皮间叶转化(EMT)的影响。方法:通过实时荧光定量PCR检测不同进展CRC肿瘤患者组织样本,验证miRNA差异表达;利用划痕实验检测多株CRC细胞株过表达miR-145后细胞的转移能力;通过Western blot检测过表达miR-145后细胞EMT相关分子标志表达变化;结合生物信息学、Luciferase报告系统以及Western blot预测并验证miR-145的靶基因。结果:miR-145在高转移预后差的CRC肿瘤组织中表达明显上调,且过表达miR-145后CRC细胞株转移能力明显降低,间叶细胞多种分子标志显著下调,而上皮细胞多种分子标志显著上调,其转移能力明显降低。生物信息学预测microRNA靶基因以及实验证实miR-145可以直接靶向调节TGFBR2蛋白表达,是TFG-β信号通路的主要受体及信号分子。结论:miR-145直接靶向调节TGFBR2影响TFG-β通路,抑制EMT过程,进而抑制肿瘤的侵袭和转移。过表达miR-145能够抑制CRC细胞的转移。miR-145是临床诊断CRC的新靶标,对CRC的防治及预后分析具有潜在的临床意义。     

复方中药紫龙金对前列腺癌的体外作用

目的　探讨复方中药紫龙金对前列腺癌的体外作用机理。　方法　应用MTT法、软琼脂集落生长实验、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP、DU 1 4 5和PC 3细胞的增殖抑制、集落生长抑制、周期阻滞和诱导凋亡作用 ;应用RT PCR方法检测对前列腺特异性抗原基因PSA和雄激素受体基因AR、凋亡相关基因Bcl 2和Bax以及抑癌基因p1 6表达的影响。　结果　紫龙金对 3种前列腺癌细胞系均具有剂量依赖性增殖抑制和G0 /G1 期阻滞作用 ,作用 72h时 3种细胞IC50 分别为 0 .79、0 .4 2和 0 .5 2mg/ml;对LNCaP和DU 1 4 5细胞具有诱导凋亡作用 ,可以显著抑制DU 1 4 5细胞的集落生长 ;紫龙金可以下调LNCaP细胞PSA、AR和Bcl 2表达 ,下调DU 1 4 5细胞Bcl 2 ,上调Bax和P1 6基因表达。　结论　紫龙金可以通过抑制前列腺癌细胞增殖、抑制集落生长、G0 /G1 期阻滞、诱导凋亡、调节PSA、AR、Bcl 2、Bax和p1 6基因表达等作用机理发挥抗肿瘤作用     

miR-152对前列腺癌细胞株迁移和侵袭能力的影响

目的研究miR-152在前列腺癌、前列腺正常组织中的表达情况及其在前列腺癌细胞系中的作用。方法采用TaqMan荧光定量RT—PCR方法检测8例前列腺癌和8例前列腺正常组织的样本中miR-152的表达水平。运用Transwell细胞迁移实验及侵袭实验评估miR一152对前列腺细胞系PC-3和DU145细胞功能的影响。结果与正常前列腺组织相比,miR-152在前列腺癌组织中的表达水平显著下调（P〈0．05）。体外实验中上调miR152的表达可以显著降低前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力（P〈O．05）。结论miR-152在前列腺癌中可作为一种肿瘤抑制因子,影响前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。     

【原创论文】组蛋白甲基转移化酶基因SETDB1促进前列腺癌细胞的增殖、迁徙和侵袭

SETDB1已在部分人类肿瘤中被确立为癌基因。本研究的目的是检测艇珏坫J基因及蛋白在人前列腺癌组织、细胞系、前列腺增生组织、前列腺上皮细胞中的表达。并研究SETDB1基因对前列腺癌细胞在体外的增殖、迁徙、侵袭的作用。方法：应用实时定量聚合酶链反应（Real-timeqPCR）免疫组化检测SETDB1基因及蛋白在人前列腺癌组织、细胞系、前列腺增生组织、前列腺上皮细胞中的表达。借助siRNA下调SETDB1在前列腺癌细胞系的表达,分别应用细胞计数实验、细胞克隆形成实验、流式细胞技术;细胞划痕实验、细胞小室侵袭实验对SETDB1下调后的细胞进行检测。结果：SETDB1在人前列腺组织、细胞中高表达,下调SETDB1在前列腺癌细胞系的表达后,前列癌细胞的增殖、迁徙、侵袭能力降低。结论：SETDB1可以作为前列腺癌的癌基因进一步研究。     

DEAD盒RNA解螺旋酶5和微小RNA-205在前列腺癌中的表达及临床意义

目的 检测DEAD盒RNA解螺旋酶5（DDX5）和微小RNA-205（miR-205）在前列腺癌（PCa）中的表达情况,并分析二者与PCa预后的关系。方法 选取2015年4月至2017年4月于北京市朝阳区双桥医院行前列腺癌根治术或穿刺活检术的86例PCa患者为研究对象,取患者术中切除的癌组织及癌旁组织分别作为PCa组和对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测组织中DDX5 mRNA、miR-205的水平。采用免疫组化法检测组织中DDX5的表达情况。分析DDX5、miR-205表达水平与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存分析DDX5、miR-205表达水平与PCa患者的预后关系。采用Cox回归分析PCa预后不良的影响因素。结果 PCa组的DDX5 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组（均P<0.05）,miR-205表达水平低于对照组（P<0.05）。PCa患者中DDX5、miR-205表达与肿瘤分期、血清PSA、Gleason评分、肿瘤转移均有相关性（均P<0.05）,而与患者年龄、切缘性质均无相关性（均P>0.05）。经Kaplan-Meier生存分析,DDX5阳性表达患者的3年累积生存率低于DDX5阴性表达患者（P<0.05）;miR-205高表达患者的3年累积生存率高于miR-205低表达患者（P<0.05）。多因素Cox分析结果显示,DDX5水平偏高、miR-205水平偏低是PCa不良预后的危险因素（HR=2.598、3.342,均P<0.01）。结论 在PCa患者癌组织中DDX5高表达,miR-205低表达,二者与PCa的多种临床病理及预后有关,是PCa患者预后不良的危险因素。     

胃癌组织中miR-497表达及其生物学意义

目的检测胃癌组织和癌旁组织中miR-497的表达差异,寻找其下游作用靶点。方法选取2010-2013年期间在中国医科大学附属第一医院胃肠外科手术切除的94例胃癌及其癌旁组织。用RT-PCR法定量检测miR-497在其中的表达;在线软件预测miR-497靶基因,用阴性对照及miR-497-mimics转染SGC-7901细胞系,RT-PCR及Western检测胃癌细胞miR-497过表达后靶点基因mRNA及蛋白水平的改变;MTT法检测miR-497-mimics组（miR-497过表达）细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗的敏感性。结果①miR-497表达量在胃癌组织中明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0．01）。②BCL2L2被预测为miR-497的靶基因,miR-497在胃癌SGC-7901细胞中过表达后BCL2L2蛋白表达在miR-497-mimics组细胞中明显弱于阴性对照组细胞,BCL2L2mRNA在2组细胞中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。miR-497-mimics组细胞对5-FU的Ic50值明显低于阴性对照组细胞（P=0．0046）。结论miR-497在胃癌组织中低表达,BCL2L2为miR-497的靶基因,miR-497过表达可提高胃癌细胞对5-Fu的敏感性,这为进一步研究miR-497与BCL2L2在胃癌中的作用及治疗提供了新的方向。     

MYL9在间质中的表达下调与前列腺癌患者的不良临床预后

【摘要】〓目的〓研究MYL9在前列腺癌组织中的表达水平与前列腺癌临床预后的相关性。方法〓采用免疫组织化学检测80例前列腺癌根治术患者前列腺癌及61例癌旁良性前列腺组织中的MYL9的表达水平,并与前列腺癌(PCa)患者的临床特征相比较。结果〓在良性和前列腺癌组织中,MYL9均主要在前列腺间质而不是在前列腺上皮细胞表达,前列腺癌样本中的MYL9表达水平相对于良性前列腺组织显著下调(PCa=3.21±1.46 vs. Benign=4.63±0.97,P<0.001)并伴有肿瘤间质容积的明显减少。MYL9的下调表达与前列腺癌的Gleason评分(P<0.001)明显相关。结论〓表明MYL9表达下调越明显,则前列腺癌患者临床预后越差。该研究为MYL9在前列腺癌组织中的下调表达可作为预测人类前列腺癌患者的不良临床预后的指标提供了证据。     

FOXN2在前列腺癌组织的表达及对前列腺癌细胞生物学的影响

探讨双头框蛋白N2（FOXN2）在前列腺癌（PCa）组织中的表达以及对PCa细胞生物学的影响。方法 选取宜宾市第二人民医院50例接受手术治疗的PCa患者的标本及癌旁组织,通过RT-qPCR实验和Western blot实验分别检测PCa组织和癌旁组织中的FOXN2 mRNA及蛋白的表达水平,并分析PCa组织中FOXN2与患者临床病理特征的相关性。通过RT-qPCR实验检测正常前列腺细胞RWPE-1、PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中FOXN2 mRNA的表达水平。选取PC-3细胞为研究对象,分为FOXN2过表达组、空载体对照组以及对照组,分别通过MTT实验、流式细胞实验、Transwell实验以及Western blot实验检测各组细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况以及相关蛋白Bax、CyclinD1、MMP-2的表达量。结果 与癌旁组织相比,FOXN2的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,与TCGA数据库中结果一致。FOXN2低表达与PCa患者淋巴转移、TNM分期以及Gleason评分有关（P=0.003、0.005、0.002）。与人正常前列腺细胞RWPE-1相比,FOXN2在PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中均呈现低表达（P<0.05）,其中PC-3细胞中表达量最低。与对照组和空载体对照组相比,FOXN2过表达组的PC-3细胞在作用24 、48 、72 h后增殖能力显著下降（F=290.400、57.735、113.014,P<0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著下降（P<0.05）;PC-3细胞的凋亡率显著升高（P<0.05）,Bax蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;PC-3细胞的迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）,MMP-2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。结论 FOXN2在PCa组织及细胞中低表达,过表达FOXN2可抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。