白藜芦醇对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡及增殖能力的影响

目的通过体外培养兔软骨细胞,研究白藜芦醇对重组人白细胞介素-1β(rh IL-1β)诱导体外骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡及增殖能力的影响。方法采用分阶段酶消化法体外培养兔软骨细胞,加入不同浓度白藜芦醇含药血清,1 h后,以10 ng/ml IL-1β刺激,24 h后,通过TUNEL法和Hoechst 33342荧光染色检测软骨细胞凋亡;以MTT和流式细胞仪检测细胞增殖能力。结果白藜芦醇能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,呈剂量依赖性;MTT和流式细胞仪检测显示白藜芦醇能恢复OA软骨细胞的增殖能力。结论白藜芦醇可以抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,并能明显拮抗IL-1β对软骨细胞增殖的抑制。     

羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导的大鼠软骨细胞核因子-κB活化

目的 探讨羧甲基壳聚糖对白细胞介素(IL)-1β诱导下大鼠软骨细胞核因子(NF)-κB活化及一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 体外培养大鼠膝关节软骨细胞,用10ng/ml IL-1β刺激,并不加或加入不同浓度的羧甲基壳聚糖处理,通过蛋白质免疫印迹(Westem blot)检测NF-κBn和NF-κBc及I-κB表达,通过蛋白质免疫印迹和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析软骨细胞iNOS的表达.采用单因素方差分析.结果 羧甲基壳聚糖能明显抑制IL-1β诱导下软骨细胞I-κB的降解(0.21±0.06)和NF-κB的核转位,降低IL-1β诱导下软骨细胞iNOS和NO的产量.结论 羧甲基壳聚糖可能通过抑制NF-κB信号通路的活化,而下调IL-1β诱导的软骨细胞iNOS表达,从而保护IL-1β刺激下的软骨细胞.     

羧甲基壳聚糖对白细胞介素-1β刺激的软骨细胞增殖能力和表型的保护作用

目的评价羧甲基壳聚糖对重组人白细胞介素-1β（rhIL-1β）刺激下的软骨细胞表型、细胞增殖能力的影响,并探讨其作用机制.方法体外培养兔关节软骨细胞,用rhIL-1β刺激,同时加入不同浓度的羧甲基壳聚糖,培养24 h后,通过噻唑蓝（MTT）、流式细胞仪检测细胞增殖能力,以Na235SO4蛋白掺入试验检测蛋白多糖的合成,以Greiss反应测定上清液中一氧化氮（NO）浓度,通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法分析软骨细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原,蛋白多糖聚糖体（Aggrecan）及诱导性一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达.结果羧甲基壳聚糖能明显拮抗IL-1β对软骨细胞增殖的抑制作用,恢复软骨细胞合成蛋白多糖的能力,减少软骨细胞NO的合成,提高Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚糖体mRNA的表达,抑制Ⅰ型胶原、iNOS mRNA的表达,且羧甲基壳聚糖对软骨细胞的保护作用呈剂量依赖性.结论羧甲基壳聚糖能维持IL-1β刺激下的软骨细胞的增殖能力和表型.     

白细胞介素-1β对关节软骨细胞线粒体和细胞内活性氧影响的研究

目的 研究重组大鼠白细胞介素-1β (rrIL-β)诱导关节软骨细胞退变是否与其破坏线粒体的完整性和促进细胞内活性氧的表达有关.方法 体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,以10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β刺激,培养24 h后,通过Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)和碘化丙啶双标及Hoechst 33342荧光染色检测细胞凋亡;以罗丹明-123荧光染色和活性氧检测试剂盒检测线粒体膜电位及细胞内活性氧浓度;用荧光素酶反应检测线粒体合成三磷酸腺苷(ATP)能力来评价线粒体功能.采用t检验进行统计分析.结果 IL-1β刺激组软骨细胞的线粒体膜电位、ATP含量及软骨细胞内活性氧浓度分别为(24±4)U,(4.1 ±0.8) pmol/106个细胞及(89±7)U,均低于对照组[分别为(86±10)U,(13.3±3.0) pmol/106个细胞及(17±3)U],差异均有统计学意义(t值分别为2.693,2.587,2.665,P值分别为0.026,0.039,0.021).IL-1β刺激能明显降低软骨细胞的线粒体膜电位及其合成ATP的能力,并且能促进细胞内活性氧的表达.结论 IL-Iβ能通过破坏软骨细胞线粒体膜的完整性和促进细胞内活性氧的表达,来诱导软骨细胞去分化,从而促进关节软骨退变.     

慢性阻塞性肺疾病相关性气管支气管软化症模型建立及评价

目的 建立一种慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关性气管支气管软化症模型制备方法，并评价丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580)的作用效果。方法 通过烟熏联合脂多糖气管滴入法制备大鼠COPD模型，分离COPD大鼠气管支气管软骨细胞、培养及传代，然后加入10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β处理筛选的软骨细胞24 h诱导软骨细胞退变，建立COPD相关性气管支气管软化症模型。采用SB203580干预退变软骨细胞，流式凋亡和CCK8法分别检测软骨细胞凋亡、增殖活性；甲苯胺蓝染色和免疫组织化学法观察软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量；Western印迹检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13蛋白表达；荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、MMP-13表达水平。结果 COPD大鼠支气管软骨细胞分离鉴定成功，10 ng/ml IL-1β即能诱导构建稳定的COPD相关性气管支气管软化症细胞模型；通过CCK8法筛选确定第4代支气管软骨细胞、5μmol/L SB203580为最佳...     

SIRT2对白细胞介素-1β诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响

目的明确沉默信息调节因子(SIRT) 2对白细胞介素(IL)-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的影响。方法分离培养兔关节软骨细胞,以IL-1β处理细胞,Realtime PCR和Western印迹方法检测SIRT2表达。关节软骨细胞感染SIRT2过表达慢病毒,检测IL-1β诱导后细胞中SIRT2表达。MTT检测细胞增殖,流式细胞术测定凋亡,Western印迹方法分别测定线粒体和胞质中细胞色素(Cytochrome) C蛋白水平。结果 IL-1β处理细胞后的兔关节软骨细胞中SIRT2表达水平降低,感染SIRT2过表达慢病毒能够提高细胞中SIRT2的表达水平。IL-1β处理后的兔关节软骨细胞增殖活性降低,细胞凋亡增多,细胞线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低,胞质中Cytochrome C蛋白水平升高。过表达SIRT2的关节软骨细胞经IL-1β诱导后,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞线粒体中Cytochrome C蛋白水平升高,胞质中Cytochrome C蛋白水平降低,与单纯经IL-1β诱导的细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论过表达SIRT2减少IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡,提高细胞增殖活性,作用机制与抑制线粒体释放Cytochrome C有关。     

独活寄生汤抑制白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡的作用机制

目的探讨独活寄生汤抑制白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞凋亡的作用机制。方法从8只SPF级SD大鼠膝关节分离获取软骨细胞并培养,采用Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定。噻唑蓝(MTT)检测不同浓度独活寄生汤对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响,从而优化独活寄生汤最佳干预浓度。将第2代软骨细胞随机分为空白组、模型组、独活寄生汤组,空白组以含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养液培养,模型组以10 ng/ml IL-1β和10%FBS的DMEM培养液培养,独活寄生汤组采用300μg/ml独活寄生汤、10 ng/ml IL-1β和10%FBS的DMEM培养液培养。干预48 h,逆转录PCR检测各组软骨细胞中miR-98的表达;Western印迹法检测各组软骨细胞中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达。结果Ⅱ型胶原免疫组化染色后阳性组软骨细胞胞质为棕黄色。100、200、300、400μg/ml独活寄生汤均能抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,以300μg/ml独活寄生汤最为明显(P0.01)。与模型组比较,独活寄生汤组软骨细胞中miR-98表达明显下降(P0.05)。与模型组比较,独活寄生汤组软骨细胞中的Bcl-2蛋白表达显著升高,而Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达明显下降(P0.05)。结论独活寄生汤能够抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,可能是通过下调miR-98起作用的。     

透明质酸对骨关节炎软骨细胞白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的研究透明质酸(HA)对大鼠创伤性膝关节炎离体细胞模型白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,加入不同浓度的透明质酸钠,1 h后以10μg/L的IL-1β刺激,培养24 h后,通过免疫荧光检测软骨细胞膜ATP,IL-1β和TNF-α水平。结果 IL-1β组软骨细胞线粒体ATP丢失较正常软骨细胞显著升高;IL-1β和TNF-α水平在IL-1β组显著升高,与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。透明质酸钠干预IL-1β诱导的大鼠软骨细胞后,H20组和H40组的IL-1β及TNF-α水平明显低于IL-1β组(P<0.05),而H10组中IL-1β及TNF-α水平与IL-1β组比较无统计学意义(P>0.05)。结论透明质酸钠能够减少大鼠创伤性膝关节炎软骨细胞线粒体ATP的丢失,下调IL-1β和TNF-α水平。     

透明质酸对白细胞介素-1 β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子mRNA表达的影响

目的 研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β(rrIL-β)诱导体外软骨细胞基质金属蛋酶(MMP)及其抑制因子(TIMP) mRNA表达的影响,并探讨其作用机制.方法 体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,加入不同浓度的透明质酸(10、20、40 μg/m1),1 h后,以10 ng/ml IL-1β刺激,培养24 h后,以反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-3,9,13及TIMP-1 mRNA的表达,通过Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)浓度.结果 透明质酸可明显下调IL-1β诱导下软骨细胞MMP-3,9,13 mRNA的表达,但对TIMP-1 mRNA的表达无明显影响.不同浓度透明质酸对IL-1β诱导的软骨细胞高表达NO的抑制作用呈剂量依赖性.结论 透明质酸能抑制IL-1β诱导的软骨细胞MMP-3,9,13 mRNA的表达,上调TIMP-1/MMPs的比值,其保护作用可能与其抑制软骨细胞NO产量有关.     

白细胞介素-1β对人软骨细胞Bax mRNA表达的作用

目的 探讨人透明软骨细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)对凋亡基因Bax mRNA表达的作用。方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量PCR的方法检测IL-1β作用下传代培养的人透明软骨细胞Bax mRNA的含量。结果 对于传代培养人的软骨细胞，IL-1β浓度为1、10、100ng／ml作用12h，对Bax mRNA的调节作用存在剂量依赖关系，各组之间差异有显著性。结论 IL-1β可以按照剂量依赖方式正向调节软骨细胞Bax mRNA基因的表达，并通过对细胞凋亡的调控参与骨关节炎的发生、发展。     

N-乙酰半胱氨酸通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的内皮细胞损伤起保护作用。方法 体外分别应用不同浓度NAC对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行预处理,筛选出NAC减轻高糖诱导的HUVEC细胞毒性的最佳浓度。使用最佳浓度的NAC预处理高糖诱导的HUVEC,通过CCK-8检测细胞存活率,Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞凋亡的形态学改变,Western blot检测JAK2/STAT3信号通路的蛋白表达水平,DCFH-DA检测细胞内活性氧水平,ELISA检测相关炎症因子细胞间黏附分子1(ICAM-1)、核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的含量;荧光探针JC-1检测线粒体膜电位的变化。结果 应用7 mmol/L NAC预处理HUVEC 30 min可明显减轻高糖诱导的HUVEC损伤,使细胞存活率升高,细胞凋亡数量减少,细胞凋亡蛋白cleaved Caspase-3表达减少,胞内活性氧堆积及线粒体膜电位丢失减少(P＜0.01)。NAC能抑制高糖对p-JAK2、p-STAT3表达的上调作用(P＜0.01),同时可抑制高糖诱导的炎症反应,使炎症因子ICAM-1、NF-κB、TNF-α及白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的水平下降(P＜0.01)。结论NAC能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的HUVEC损伤起到保护作用。     

透明质酸对白细胞介素-1β诱导软骨细胞基质增殖能力和表型的影响

目的 研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β(rrlL-1β)诱导体外骨关节炎(OA)软骨细胞的表型和增殖能力的影响,并探讨其作用机制.方法 体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后.加入不同浓度的透明质酸(10、20、40 μg/ml),1 h后,以10ng/ml IL-1β刺激,培养24 h后,通过噻唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖能力;以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blotting检测Ⅰ、Ⅱ胶原及聚集蛋白聚糖的Mrna合成和蛋白表达.以Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)浓度,并通过诱导型一氧化氮合酶催化L-精氨酸和分子氧反应生成NO推算Inos的活力.结果 透明质酸可有效抑制IL-1β诱导OA软骨细胞Inos的活性和NO的产量.MTT和流式细胞仪检测显示透明质酸能恢复OA软骨细胞的增殖能力;RIT-PCR和Western-blotting检测显示透明质酸能提高OA软骨细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA的表达和蛋白合成,抑制Ⅰ型胶原mRNA的表达和蛋白合成,且呈剂量依赖性.结论 透明质酸对软骨细胞正常表型的维持有保护作用,并能明显拮抗IL-1β对软骨细胞增殖的抑制,这可能与透明质酸降低NO的含量和iNOS的活性有关.     

京尼平苷对老年大鼠软骨细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨京尼平苷对硝普钠诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用及机制。方法取8周龄的SPF级SD大鼠20只,颈椎脱臼处死后,酶消化法提取膝关节软骨细胞。采用硝普钠终浓度0. 75、1. 00、1. 50、2. 00 mmol/L,分别加入6孔板软骨细胞中,选取合适终浓度诱导软骨细胞凋亡。终浓度分别为20、40、80、160μg/L的京尼平苷加入96孔板软骨细胞,24 h后CCK-8检测京尼平苷抑制软骨细胞增殖的效果。选择硝普钠终浓度为1 mmol/L,京尼平苷终浓度分别为80、160μg/L的6孔板软骨细胞中,Hoechst34580染色观察凋亡软骨细胞核形态,罗丹明(Rho) 123染料检测线粒体膜电位,流式细胞技术检测软骨细胞凋亡; Western印迹法检测凋亡软骨细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Bax蛋白水平。结果硝普钠适宜浓度为1. 00 mmol/L,且细胞凋亡数与硝普钠浓度呈正相关(P<0. 05)。京尼平苷在20～160μg/L浓度范围内对体外培养二代软骨细胞无增殖抑制效果(P>0. 05)。80、160μg/L的京尼平苷对SNP诱导软骨细胞凋亡有一定保护作用,呈剂量依赖(P<0. 05);京尼平苷可降低凋亡软骨细胞中iNOS、Bax的表达(P<0. 05)。结论京尼平苷对硝普钠诱导大鼠软骨细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能是通过降低软骨细胞iNOS的表达、抑制软骨细胞的凋亡。     

白杨素通过调控SNHG9/miR-184对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨白杨素对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法 体外培养人软骨细胞,不同浓度(20、40、60μg/L)的白杨素与10 ng/ml的IL-1β共同干预软骨细胞24 h后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测细胞中裂解的半胱氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,RT-聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中小核仁RNA宿主基因(SNHG)9和miR-184表达。转染SNHG9过表达载体或小干扰RNA至软骨细胞后,用10 ng/ml的IL-1β干预24 h或60μg/L白杨素与10 ng/ml IL-1β共同干预24 h,上述相同方法检测细胞增殖、凋亡、Cleaved-caspase3蛋白表达及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α水平。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG9和miR-184靶向关系。结果 20、40、60μg/L的白杨素显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞光密度(OD)值(P<...     

硫化氢对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及有关机制。方法人脐静脉内皮细胞分别经不同浓度(25、50、100、200μmol/L)和不同时间(6、12、24 h)硫氢化钠预孵育24 h后加入100 mg/L氧化型低密度脂蛋白处理24 h,Hoechst 33258荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡,罗丹明123染色检测细胞线粒体膜电位变化,双氢罗丹明123染色检测细胞内活性氧的含量变化。结果硫氢化钠预处理能以时间和浓度依赖性的方式抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡(均P<0.01),硫氢化钠或N-乙酰半胱氨酸预先处理能显著阻断氧化型低密度脂蛋白引起的人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位降低、活性氧生成增多(均P<0.05)。结论硫化氢能显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其机制与减少细胞线粒体膜电位及降低活性氧生成有关。     

受体MDA5介导poly I:C诱导软骨细胞焦亡的机制研究

目的探讨受体MDA5介导poly I:C诱导软骨细胞焦亡的分子机制,为临床治疗骨关节病提供参考。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;采用流式细胞术分析细胞周期、细胞线粒体膜电位及细胞凋亡率;采用Real Time-PCR测定软骨细胞经poly I:C作用后相关炎性基因的表达水平。结果 poly I:C抑制软骨细胞的增殖并呈时间及剂量依赖性,其中24h、48h的IC50分别为1.1μg/ml和0.7μg/ml;将细胞阻滞在sub-G0期,引起线粒体膜电位下降;显著诱导炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-33、TNF-α基因高表达,表达差异具有统计学意义(P0.05);激活细胞炎性死亡相关Caspase-1、NLRP3、IL-1β、IL-18基因表达显著升高(P0.05);poly I:C作用后,胞内受体MDA5高表达,为对照组的118倍,提示其可能参与软骨细胞的增殖调控及细胞焦亡过程。结论 poly I:C转染软骨细胞后与MDA5受体结合,激活其下游的信号通路,促进炎症因子的转录,降低线粒体膜电位、阻滞细胞周期,进而抑制软骨细胞增殖、诱导细胞焦亡。     

亲环素A保护PC12细胞对抗β-淀粉样蛋白诱导的氧化应激损伤和凋亡

目的 探讨亲环素A(CyPA)对Aβ25 ～35诱导PC12细胞氧化应激损伤和凋亡的影响.方法 用不同浓度的CyPA预处理PC12细胞,再加入Aβ25 ～35继续培养,采用MTT法分析细胞存活率.用10 nmoL/LCyPA预处理PC12细胞,再加入Aβ25 ～35继续培养,碘化丙啶(PI)单染后流式细胞仪进行凋亡的定量检测;罗丹明123(Rd 123)染色流式细胞仪检测线粒体跨膜电位;二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色,倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量.结果 CyPA可提高细胞的存活率,减少Aβ25 ～35引起的细胞凋亡,CyPA还可以改善由Aβ25 ～35引起的线粒体跨膜电位的下降,降低Aβ25 ～ 35诱导产生的大量ROS.结论CyPA可对抗Aβ25 ～ 35对PC12细胞的毒性作用,并通过增加线粒体跨膜电位和降低ROS产生从而减少细胞凋亡.     

虾青素对Aβ25～35诱导小鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 研究虾青素(AST)对Aβ25 ～35诱导小鼠皮层神经元损伤的保护作用.方法原代培养的小鼠皮层神经元用AST预孵育2h,再与老化的10 μmol/L Aβ25-35共孵育24h.采用MTT法测定细胞活力,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡,DCFH-DA荧光法检测细胞内ROS水平,Rhodamine 123荧光法检测线粒体膜电位.结果 500～4 000 nmol/L的AST预处理能有效抑制10 μmol/L Aβ25～35诱导的神经元活力下降,降低细胞内ROS的水平.2 000 nmol/L AST对神经元线粒体膜电位的保护作用最明显,能显著抑制神经元凋亡.结论AST对Aβ25～35诱导小鼠皮层神经元损伤有明显的保护作用,其机制可能和保护线粒体功能有关.     

Fas抗体对气道上皮细胞凋亡的影响

目的观察Fas抗体、白介素1β（IL-1β）对体外培养的气道上皮细胞凋亡的影响。方法分离培养兔的气道上皮细胞（AEC）,加入IL-1β与不同浓度的Fas抗体共同孵育,以流式细胞术和TUNEL法检测AEC凋亡的变化。结果以流式细胞术和TUNEL法检测,Fas抗体对AEC凋亡呈剂量、时间-效应依赖性作用;IL-1β对Fas抗体诱导AEC的凋亡没有明显影响。结论Fas抗体能够有效的诱导正常和炎症状态下原代AEC发生凋亡,可能对抑制气道炎症和气道重塑有积极作用。     

硫酸氨基葡萄糖抑制白介素1β诱导的人骨关节炎软骨细胞合成一氧化氮研究

目的 研究硫酸氨基葡萄糖(GS)对白介素1β(IL-1β)诱导体外培养的人骨关节炎软骨细胞(HOC)合成一氧化氮(NO)的影响及其作用机制. 方法 取10例骨关节炎患者行全膝关节置换术的软骨标本获取软骨细胞进行培养.在HOC培养液中加入IL 1β(5μg/L)和不同浓度的GS(0.2 mmol/L,2.0 mmol/L,20.0 mmol/L)作用24 h,酶联免疫吸附(ELISA)测定检测细胞上清中的NO的含量,反转录聚合酶链反应(RT PCR)法和蛋白印迹法分别检测HOC中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白的表达. 结果 IL-1β刺激后HOC合成NO增加,iNOS mRNA和蛋白表达上调(t=-14.81,-45.38,均P＜0.01).2.0 mmol/L和20.0 mmol/L GS浓度依赖式抑制IL-1β诱导HOC合成NO(F=12.43,P＜0.05),抑制IL-1β诱导HOC中iNOS mRNA(F=142.28,P＜0.05)和蛋白的上调(F=78.08,P＜0.01).单独使用20.0 mmol/L的GS对HOC合成NO无影响(t=-0.17,P＞0.05). 结论 GS通过下调HOC细胞内iNOS mRNA和蛋白的表达从而抑制IL-1β诱导的NO合成.