TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用狭缝杂交和Northern印迹技术鉴定差异基因片段;以DNA自动序列分析仪测定所获cDNA核苷酸顺序。结果获得了6个差异表达的基因片段,4个在TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中被抑制,2个被激活;其中,A14、X1、D1、A23和C5等5个基因片段为新基因,其GeneBank登记号分别为AW731601、AW731602、AW731603、AW731604和BE239235。Northern印迹显示,基因D1在Jurkat和MCF-7中的表达明显高于其它肿瘤细胞,提示该基因可能具有肿瘤特异性。结论TRAIL诱导的细胞凋亡过程,涉及多种基因表达的改变。     

尿激酶型纤溶酶原激活因子cDNA的克隆与原核表达

目的构建尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21中表达,为进一步研究uPA奠定基础。方法应用逆转录RT-PCR,从人肝细胞cDNA中扩增人尿激酶型纤溶酶原激活因子基因序列,与原核表达质粒pET32a重组,获得表达质粒uPA-pET32a。用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与DNA测序进行鉴定,用IPTG诱导表达,并用Western blotting进行鉴定。结果从肝细胞cDNA中扩增的uPA基因片段长1296bp,酶切及DNA测序证实uPA-pET32a重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为68900Mr,经Western blotting证实为目的蛋白。结论成功构建了重组原核表达质粒uPA-pET32a,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期的相一致,为进一步的研究奠定了基础。     

小鼠生殖周期中纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达

目的 研究小鼠生后不同发育阶段生殖腺上皮中纤溶酶原激活系统的表达情况。方法 出生后第9天至60天小鼠72只,雌雄各半,按出生后第9、15、20、25、32、40、45、50、60天分为9组,每组8只小鼠,雌雄各半,取小鼠卵巢和睾丸,应用免疫组织化学方法,对卵巢和睾丸石蜡切片上纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达进行了检测和半定量分析。结果 出生后第9－30天的小鼠卵巢和睾丸中没有检测出纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达,而在第30－60天的小鼠卵巢中检测出uPA、uPAR表达,在第30－60天的小鼠睾丸中检测出tPA的表达,并且表达量较强。结论 小鼠生殖周期中纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达与大鼠生殖腺中的规律有一定差异。     

血管生成抑制剂Angiostatin抗肿瘤的研究进展

1 AS的发现、结构与来源 1994年,O'Reilly等从荷瘤小鼠血清中发现特异性抑制肿瘤血管内皮细胞增殖的因子,分子量38KD,命名为Angiostatin(AS).用不同的层析方法,O'Reilly又从携有Lewis肺癌的小鼠尿中提取AS,即鼠源AS.人们依靠类似的方法从人血液中提取出人源AS.人源AS和鼠源AS 是同一种物质. AS是纤溶酶原的一个内在片段,这一肽段是纤溶酶原氨基酸序列中Thr98-Val 440的一段序列,N末端是Thr98-C末端是Val440.纤溶酶原本身含有5个Kringles结构,第1-4个Kringles结构即为AS.这4个Kringles结构具有很高的同源性 ,半衰期2.5天,对实验肿瘤有强烈的抑制作用.纤溶酶原的第5个Kringles结构与前4个无同源性,抑制bFGF刺激的血管内皮细胞增殖的活性大于AS,可作为一个新颖的血管生成抑制剂,同时也可作为内皮细胞迁移的选择性抑制剂[1].     

蜕膜细胞条件培养液中TNF-α及EGF对卵巢癌细胞侵袭基因uPA/PAI-1表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(decidual cell conditioned media,DCM)中肿瘤坏死因子(TNF-α)及表皮生长因子(EGF)对卵巢癌细胞株(COC1)侵袭基因尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)/纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)表达的影响.方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取蜕膜细胞条件培养液(DCM),分别将加有TNF抗体及EGF抗体的DCM处理卵巢癌细胞株(COC1),利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭基因uPA/PAI-1的表达进行分析.结果 COC1表达PAI-1,不表达uPA.与DCM组比较,TNF-α抗体组可以使COC21 PAI-1mRNA的表达上调,二者之间差异有显著性(P＜0.01).与DCM组比较,FGF抗体组PAI-1mRNA的表达不明显,呈下调的趋势,二者之间亦差异有显著性(P＜0.01).结论 早孕DCM中TNF-α降低了DCM抑制COC1纤溶酶原系统作用的能力;而EGF增加了DCM的上述能力.同时说明纤溶酶原系统在COC1的侵袭能力方面不起主导作用.     

大鼠视觉相关脑区表达序列标签的克隆与鉴定

目的分析视觉相关脑区基因的差异表达并获取新的表达序列标签.方法利用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)技术分析大鼠外侧膝状体与视皮层基因差异表达情况,并筛选差异表达基因片段.结果经DDRT-PCR筛选并通过反Northern杂交去除假阳性,最终获得1个差异表达基因片段.对其进行克隆、测序和同源性比较发现,该片段为一新的表达序列标签,并与心肌细胞集钙蛋白的mRNA具有74%的同源性.结论视觉相关脑区差异表达序列的分析可能为研究视觉形成的分子机制或视觉通路的分子构筑提供有益的线索.     

弓形虫依钙蛋白激酶Calpain-like的克隆及生物学特性

目的克隆弓形虫RH株Calpain（依钙蛋白酶）-like基因，分析免疫生物学功能，筛选预防弓形虫感染的疫苗候选分子。方法利用人类、鼠类和其它寄生虫的Calpain基因同源性比较的保守区域合成混合引物，以弓形虫的RNA为模板，应用RT-PCR扩增弓形虫Calpain-like基因片段，扩增的片段通过TA克隆插入克隆载体pET32A，筛选阳性克隆进行双酶切鉴定和DNA序列分析，用克隆的基因片段制备特异性基因探针，经Northern blot技术证实弓形虫Calpain-like基因mRNA。结果RT-PCR扩增了316bp弓形虫Calpain-like基因，其DNA序列与日本血吸虫Calpain基因同一区域的同源性为70％，与计算机推测的弓形虫Calpain-like基因的同源性为100％。Northern blot显示了弓形虫Calpain-like基因mRNA的大小约6300bp。结论弓形虫RH株基因组中存在Calpain-like基因，Calpain-like基因在弓形虫RH株中高度表达。     

表皮组织型血浆酶原活化因子的表达与尿激酶、受体、血浆酶原抑制因子-1不同,在慢性静脉溃疡中升高

背景:纤溶酶原激活有效参与细胞外蛋白溶解,也是正常创面愈合的基本构成。同时,构成了慢性不愈合溃疡的发病。传统学说认为,尿激酶型纤溶酶原活化因子(uPA)与细胞外蛋白溶解活性相关涉及到组织修复过程,组织性纤溶酶原活化因子(tPA)主要与血管内纤维溶解相关。目的:本项研究旨在特征性划分各种纤溶酶原活化系统成分在慢性、急性、肉芽肿性创面的空间分布。方法:采用免疫组化染色检测uPA、tPA、尿激酶受体(uPA P)、纤溶激酶活化抑制因子(PAI-1)、vitronectin原位杂交法检测uPA、tPA和PAI-1的表达。样本来自8例慢性静脉溃疡,5例褥疮…     

利用荧光mRNA差异显示技术克隆短芒大麦盐胁迫相关基因的ESTs

目的:获取短芒大麦盐胁迫相关基因的ESTs.方法:应用荧光mRNA差异显示技术进行筛选,并利用反向Northern杂交方法对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性.结果:共获得32个与盐胁迫相关的cDNA序列,并获得GenBank 注册号.BLAST同源性分析结果表明,13个与已知基因序列有同源性,19个为未知ESTs.其类型分别为:诱导表达型,22个;增强表达型,7个;抑制表达型,3个.结论:通过荧光mRNA差异显示技术获得了短芒大麦盐胁迫相关基因的ESTs,对它们的进一步研究将为短芒大麦耐盐分子机制的发现提供思路.     

纤溶酶原激活因子及抑制因子在多囊卵巢综合征患者卵巢中的表达

\[摘要\]目的探讨纤溶酶原激活因子\[组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活因子(u-PA)\]及其抑制因子1(PAI-1)与多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制之间的关联。方法选择2007年12月至2008年10月于中南大学湘雅三医院接受宫腹腔镜检查及手术的PCOS患者共30例及正常卵巢活检标本20例,用化学发光法检测血清性激素水平,免疫组化方法检测t-PA、u-PA及PAI-1的表达。结果PCOS组u-PA、t-PA在颗粒细胞中表达阳性率分别为20.00%及26.67%,在卵泡膜细胞中表达阳性率分别为33.33%及20.00%,对照组u-PA、t-PA在颗粒细胞中表达阳性率分别为65.00%及75.00%,在卵泡膜细胞中表达阳性率分别为75.00%及50.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。PCOS组PAI-1在卵泡膜细胞中表达阳性率为56.67%,在间质细胞中表达阳性率为63.33%,对照组PAI-1在卵泡膜细胞中表达阳性率为10.00%,在间质细胞中表达阳性率为10.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论PCOS患者卵巢组织中纤溶酶原激活、抑制因子的异常表达与PCOS排卵障碍的发生密切相关。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …