PPARγ表达上调抑制肝星状细胞增殖的实验研究

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达上调对肝星状细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养HSC—T6细胞至对数生长期,以不同浓度的PPARγ激动剂15d—PGJ2作用24h后应用RT—PCR的方法观察分析各组肝星状细胞PPARγmRNA的表达,MTT检测HSC增殖情况,流式细胞仪分析HSC—T6细胞凋亡情况。结果15d—PGJ2处理的HSC—T6细胞中PPARγmRNA表达比例上调;凋亡细胞数明显增多。不同浓度的15d—PGJ2均可抑制HSC—T6细胞的增殖,以2μmol／L组最为显著。结论PPARγ表达上调能够抑制HSC—T6增殖并诱导其凋亡。     

15d-PGJ_2对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的观察15d-PGJ2上调过氧化质体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达以及对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖凋亡的影响。方法体外培养HSC-T6细胞,取对数生长期的细胞,应用1、2、3μmol.L-1不同浓度的PPARγ激动剂15d-PGJ2作用24h,同时以不加药物只加无血清培养基做为对照组,24h后应用RT-PCR的方法观察分析各组间肝星状细胞PPARγ mRNA表达的变化,Western blot检测相应的胞质内NF-κB抑制蛋白表达。MTT检测HSC增殖,吖啶橙荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪分析细胞周期。结果经15d-PGJ2处理的HSC细胞中PPARγ mRNA表达比例上调;胞质内NF-κB蛋白表达明显抑制。MTT结果显示不同浓度的15d-PGJ2对HSC-T6细胞的增殖均有抑制作用,以2μmol.L-1组最为明显;吖橙啶染色显示经PPARγ激动剂处理组凋亡细胞数明显增多,流式细胞仪结果显示15d-PGJ2处理组细胞产生了G1期阻滞作用。结论15d-PGJ2能够上调PPARγ表达并抑制HSC-T6增殖及诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与抑制NF-κB活性有关。     

罗格列酮增强顺铂抑制人肺腺癌细胞增殖作用

目的　探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮 (Rosiglitazone,RSG)的体外化疗增敏作用及机制。方法　体外培养人肺腺癌A549细胞,MTT法测定药物的细胞生长抑制率,吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)荧光双染,流式细胞仪(Flowcytometry,FCM)检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测药物处理前后PPARγ,Bcl 2蛋白表达的改变。结果　RSG(1 25, 2 5μmol·L-1 )分别与CDDP合用,可增加CDDP对A549细胞的抑制率, (q> 1 )。RSG(1 25μmol·L-1 )可增强CDDP诱导A549细胞凋亡作用。RSG(1 25μmol·L-1 )处理后,A549细胞的PPARγ蛋白核内表达上调,Bcl 2蛋白表达下调, (P<0 01)。结论　过氧化物酶体增殖因子活化受体γ配体罗格列酮能增强顺铂抑制A549细胞增殖并诱导凋亡作用。PPARγ蛋白核内表达上调,Bcl 2蛋白表达下调在罗格列酮对A549细胞体外化疗增敏作用中发挥重要的作用。目的　探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮 (Rosiglitazone,RSG)的体外化疗增敏作用及机制。方法　体外培养人肺腺癌A549细胞,MTT法测定药物的细胞生长抑制率,吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)荧光双染,流式细胞仪(Flowcytometry,FCM)检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测药物处理前后PPARγ,Bcl 2蛋白表达的改变。结果　RSG(1 25,     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ在大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝纤维化形成中的作用

目的研究大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝纤维化形成过程中肝组织核因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)的表达变化及意义。方法建立脂肪性肝纤维化大鼠模型,HE和Massson染色观察肝组织病理学变化,RT-PCR和免疫组织化学检测核转录因子PPARγ以及反映肝星状细胞(HSC)活化的特异性标记α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达变化。结果①模型组大鼠8w肝脏病理学呈现单纯性脂肪肝,12-16w呈现脂肪性肝炎,24w呈现脂肪性肝纤维化的病理学变化特点。②RT-PCR显示模型组PPARγ mRNA于高脂喂养8w即明显上调为0.84±0.07,对照组为0.54±0.12,P<0.05.12w达高峰为1.16±0.14,16w脂肪性肝炎明显时表达开始下调为0.73±0.05,24w下调更为明显为0.34±0.15,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而α-SMA mRNA于高脂喂养12w开始增高,24w达高峰,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。③免疫组织化学显示模型组PPARγ主要在脂肪变性的肝细胞核表达增高,在肝纤维化形成部位其阳性染色明显减少,而α-SMA阳性细胞主要在纤维间隔、汇管区等纤维形成区域表达增多。结论单纯性脂肪肝时,PPARγ的高表达可能是机体的一种适应性反应,随着高脂诱导的肝损伤程度的加重,PPARγ的表达逐渐降低与肝星状细胞的激活密切相关,从而促进脂肪性肝纤维化的发生、发展。     

罗格列酮对类胰蛋白酶诱导的大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原及过氧化物酶体增殖物活化受体γ表达的影响

目的观察罗格列酮对类胰蛋白酶诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原及过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)表达的影响,探讨罗格列酮抑制肝纤维化的作用机制。方法将大鼠HSC-T6进行体外培养,取对数生长期细胞分为空白对照组,1、10、100 ng/ml类胰蛋白酶组,10 ng/ml类胰蛋白酶+(5、10、20μmol/L)罗格列酮组。用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HSCⅠ型胶原及PPARγ的表达。结果类胰蛋白酶可以诱导大鼠HSCⅠ型胶原表达并使HSC PPARγ表达减少(P<0.05),罗格列酮可以不同程度抑制类胰蛋白酶的上述效应,且各组Ⅰ型胶原的表达水平均低于10 ng/ml类胰蛋白酶组(P<0.05),各组PPARγ的表达水平均高于10 ng/ml类胰蛋白酶组(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论罗格列酮能够上调PPARγ表达并抑制类胰蛋白酶诱导的HSCⅠ型胶原的表达,抑制肝纤维化的发生。     

姜黄素通过上调PPARγ抑制糖基化终末产物诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤

目的观察姜黄素(curcumin)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤的作用,并探讨相关机制是否与姜黄素上调过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)相关。方法原代培养家兔膝关节软骨细胞;TUNEL染色法检测细胞凋亡;Rhodamine-123试剂盒检测线粒体跨膜电位(△Ψm);ATP试剂盒检测线粒体ATP生成;分光光度法检测caspase-3活性;Western blot检测PPARγ、细胞色素C、Bax及Bcl-2蛋白表达;real-time PCR检测PPARγmRNA含量;DNA-binding法检测PPARγ活性。结果 AGEs(200 mg·L-1)可明显诱导兔软骨细胞凋亡,同时线粒体跨膜电位(△Ψm)降低、ATP生成减少,caspase-3活性增加,细胞色素C释放增加,Bax/Bcl-2的比值增加;线粒体通透性转换孔的抑制剂环孢霉素A(Cs A,100 nmol·L-1)可以明显抑制AGEs诱导的细胞凋亡;PPARγ特异性激动剂吡格列酮及姜黄素均可明显抑制AGEs诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤,给予PPARγ特异性抑制剂GW9662 10μmol·L-1预处理后,可以明显拮抗姜黄素的保护作用。同时,姜黄素可以明显上调AGEs诱导的PPARγ活性的降低,并伴随PPARγ相应的mRNA及蛋白表达水平的升高。结论姜黄素通过上调PPARγ,有效地保护AGEs诱导的软骨细胞线粒体损伤,从而抑制AGEs诱导的软骨细胞凋亡。     

联苯双酯对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡及PPARγ表达的影响

摘 要 目的： 探讨联苯双酯(dimethyl dicarboxylate biphenyl,DDB)对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖和凋亡及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)表达的影响。方法: 接种HSC T6细胞于96孔板和6孔板中,分别用CCK 8法和流式细胞术测定不同浓度联苯双酯作用于细胞24 h后对细胞增殖和凋亡的影响;实时荧光定量PCR（Quantitative Real time PCR,Q-PCR）和Western blotting分别检测药物对HSC-T6细胞PPARγ mRNA和蛋白的表达的影响。结果: 相比于对照组（0 μmol·L^-1）,DDB在实验浓度（8～64 μmol·L^-1）能明显抑制HSC T6的增殖（P<0.05),促进HSC T6的凋亡（P<0.05);药物处理过的HSC T6细胞PPARγ mRNA及其蛋白表达均有显著提高。结论:DDB可通过上调HSC T6细胞中PPARγ的表达抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡。     

化浊解毒方含药血清对HSC-T6增殖、凋亡及PPARγmRNA表达的影响

目的:研究化浊解毒方含药血清对体外培养的大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及细胞外基质和PPARγmRNA表达的影响,以探讨化浊解毒方治疗肝纤维化的机制。方法:选择健康SD大鼠,每天灌服不同剂量(每L分别含有生药30,60,120 g)的化浊解毒方以及α干扰素(1 000 U.mL-1),按1 mL.(100 g)-1大鼠体质量给药,以制备含药血清;常规培养活化的肝星状细胞(HSC-T6),用不同浓度的含药血清进行干预,用MTT法检测HSC增殖、流式细胞术测HSC凋亡,ELISA法及RT-PCR法分别测细胞上清液中I型及Ⅲ型胶原的含量以及细胞中PPARγmRNA基因的表达。结果:与正常血清组比较,化浊解毒方药含药血清各浓度组均呈现出抑制HSC增殖的作用(P<0.05),以作用48 h最为明显,且呈剂量和时间依赖性。与正常血清对照组比较,化浊解毒方药含药血清各个浓度组在作用48 h后,细胞上清液中的I型及Ⅲ型胶原的含量均降低(P<0.05),并上调PPARγmRNA的表达(P<0.05)。结论:化浊解毒方药能有效治疗肝纤维化可能通过上调PPARγ的表达起到抑制肝星状细胞增殖,促进肝星状细胞凋亡,降低肝星状细胞活性有关。     

PPAR-γ的激动剂抑制肺癌细胞生长的实验研究

目的　研究肺癌细胞上过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR γ)的表达及其经配体 (激动剂 )活化后抑制肺癌细胞生长的机制。方法　以RT PCR和Westernblot检测肺癌细胞上PPAR γ的表达 ,并通过MTT和细胞计数检测经PPAR γ的激动剂作用后的细胞增殖情况 ,以TUNEL检测细胞的凋亡情况。结果　两种细胞上均有PPAR γ的表达 ;PPAR γ的配体作用后明显抑制细胞生长 ,且与时间和剂量有关 ;经配体活化的PPAR γ能诱导细胞凋亡 ,使其增殖受抑。结论　作为肺癌治疗的新靶点———PPAR γ在肺癌细胞上表达 ,且经配体活化后能通过诱导凋亡而抑制肺癌细胞的生长 ,从而为未来肺癌的治疗提供了新的途径     

姜黄素衍生物对原代大鼠肝星状细胞作用的体外研究

目的：观察姜黄素衍生物（Curc-OEG）抑制原代肝星状细胞（HSC）增殖、活化以及诱导其凋亡的作用,探讨其可能的作用机制。方法：采用IV型胶原酶、DNA酶消化SD雄性大鼠肝脏,percoll梯度离心得到纯化的肝星状细胞。细胞分离后1d分别加入0、6.25、12.5μg/mL的姜黄素衍生物,作用7d后用RT-PCR及Western blot检测细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2的mRNA水平和蛋白表达量。活化的肝星状细胞在第14天分别加入0、6.25、12.5、25、50、75μg/mL的姜黄素衍生物,作用24h后RT-PCR检测凋亡基因Bax、Bcl-2的mRNA水平和纤维化相关基因TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA水平。结果：药物作用7d后,6.25μg/mL和12.5μg/mL浓度药物处理组与对照组相比,细胞数目分别减少了56%和86%。在12.5μg/mL浓度药物作用下,原代肝星状细胞α-SMA、TGF-β1及Smad2的mRNA表达水平分别下调83%、85%及75%,蛋白表达水平分别下调94%、92%及73%（P〈0.05）。25μg/mL浓度药物作用24h后,细胞凋亡明显。在50μg/mL浓度药物作用下,活化的肝星状细胞Bax的mRNA表达水平上调约2.3倍,Bcl-2的mRNA表达水平下调约5.6倍;TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA表达水平分别下调90%、83%、74%、65%（P〈0.05）。结论：姜黄素衍生物可以明显抑制原代肝星状细胞的增殖和活化,促进活化的肝星状细胞凋亡及减少细胞外基质的沉积。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制.方法:培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10-6、10-7、10-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达.结果:在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成;西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达.结论:西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关.     

EPA、DHA对脂多糖诱导大鼠系膜细胞增殖及PPARγ表达的影响

目的 观察二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）对脂多糖（LPS）诱导大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响。方法 用脂多糖(15 mg·L^-1)刺激大鼠肾小球系膜细胞,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸(10、100 μmol·L^-1)分别培养48 h后,采用噻唑蓝（MTT）方法检测肾小球系膜细胞的增殖情况;采用实时定量PCR方法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ mRNA的表达;采用Western Blot方法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ 蛋白的表达。结果 二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸显著抑制脂多糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,增加过氧化物酶体增殖物激活受体γ mRNA和蛋白的表达。结论 二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸对受损肾小球系膜细胞的保护作用可能与抑制肾小球系膜细胞增殖,激活潜在的抗炎因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ有关。     

PPARγ激动剂的研究进展

过氧化物酶体增殖剂活化受体γ（PPARγ）是一个由配体激活的核转录因子，属于核激素受体（nuclear hormone receptor)超家族。被激动剂激活以后，该受体可以促进葡萄糖的利用以及胰岛素的增敏。因此，PPARγ激动剂有希望成为一类全新的Ⅱ型糖尿病治疗药物。本文对现有的PPARγ天然和合成的激动剂进行一个综述。     

曲格列酮在人前列腺癌细胞中对核受体结合蛋白1表达调控的影响

目的探讨在人前列腺癌株DU145细胞中过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)的特异性激动剂曲格列酮对核受体结合蛋白1(NRBP1)的表达调控作用。方法 MTT法检测不同浓度曲格列酮(浓度分别为0.5、5.0、10.0μmol/L)作用24 h后对DU145细胞增殖的影响。在DU145细胞中用PPARγ的特异性激动剂曲格列酮处理24 h后,在转录水平和翻译水平检测NRBP1的表达。结果曲格列酮各浓度实验组对细胞的活性和增殖无影响(P>0.05)。曲格列酮作用于DU145细胞后在转录水平和翻译水平对NRBP1有明显抑制作用。结论 PPARγ在DU145细胞中可抑制NRBP1的表达。     

罗格列酮在治疗2型糖尿病外的有益作用

罗格列酮（Rosiglitazone RSG）是一种新型的口服噻唑烷二酮类（thiazolidinedione，TZDs）降糖药，其作用靶点是过氧化物酶体增殖活化受体（peroxidsome proliferatoractiyated receptor,PPARγ），该受体是一种蛋白质，存在于胰岛素敏感组织脂肪、骨骼肌和肝组织中。PPARγ属于转录因子中核激素受体类，可与核醛X受体（RXR）相结合形成异二聚体，     

噻唑烷二酮类药物抑制肿瘤细胞作用研究进展

过氧化物增殖活化受体(PPARs)是核受体超家族成员,PPARs超家族有3个亚型:α、β/δ和γ,是细胞自我稳定的关键配体活化转录调节因子。PPAR-γ受刺激后可诱导细胞周期停止,也会促进脂肪细胞的末期分化。仅在PPAR:RXR(视黄醇X受体)异源二聚体的形式下,PPAR-γ激动剂才与DNA连接[1-2]。噻唑烷二酮类     

鬼针草总黄酮对肝纤维化大鼠治疗作用及机制探讨

目的观察鬼针草总黄酮(total flavones of bidens bip-innata L,TFB)对肝纤维化大鼠的治疗作用及机制。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,观察TFB对肝纤维化大鼠血清中HA、PCⅢ、CⅣ,肝组织中Hyp含量和肝脏病理组织学及肝组织中胶原增生程度的影响。同时采用α-SMA和TUNEL双重染色观察TFB对肝纤维化大鼠肝星状细胞(he-patic stellate cells,HSC)凋亡的影响。另体外分离培养HSC,MTT法观察TFB对HSC增殖的影响,电镜和流式细胞术法观察TFB对HSC凋亡的影响。结果TFB能降低肝纤维化大鼠血清中HA、PCⅢ、CIV和肝组织中Hyp含量,改善其肝脏病理损伤程度,减少肝纤维化大鼠肝组织中胶原的增生,抑制HSC的活化、增殖,促进活化的HSC凋亡。结论TFB对肝纤维化大鼠有很好的治疗作用,其抑制HSC活化、增殖,促进活化的HSC凋亡可能是TFB治疗肝纤维化的重要机制之一。     

PPARγ激动剂吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长、凋亡的实验研究

目的探讨过氧化物酶体增长因子活化受体了激动剂（PPARγ）吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长的机制。方法应用细胞增殖力测定、AO／EB荧光染色、流式细胞仪检测吡格列酮抑制胶质瘤细胞生长的情况。结果吡格列酮对胶质瘤细胞株U-251的生长有抑制作用,并呈时间与剂量依赖关系（P〈0．05）;可诱导胶质瘤细胞的凋亡,呈时间依赖关系（P〈0．05）,并出现细胞凋亡征象。结论PPARγ激动剂吡格列酮对胶质瘤细胞U-251具有生长抑制作用。其可诱导胶质瘤细胞凋亡可能是细胞生长抑制的机制之一。     

罗格列酮对人肺腺癌A549细胞整合素β_1表达的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮对肺腺癌A549细胞粘附分子整合素β1表达的影响及其作用机制。方法用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)和间接免疫荧光标记流式细胞仪分别测定罗格列酮对A549细胞PPARγ、整合素β1 mRNA和蛋白表达的影响。结果罗格列酮激动A549细胞PPARγ的表达,抑制整合素β1的mRNA及蛋白的表达,呈剂量依赖关系。用PPARγ阻断剂GW9662,可取消其对整合素β1的抑制作用(P<0.05),用丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路ERK抑制剂PD98059,可取消PPARγ对整合素β1的表达调控(P<0.05)。结论罗格列酮活化PPARγ抑制整合素β1的表达,丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路参与此过程。     

哌唑嗪和去氧肾上腺素对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨α1-肾上腺素受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(PZ)和激动剂去氧肾上腺素(PE)对体外活化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖和凋亡的作用。方法:体外培养HSC-T6;MTT法检测HSC-T6的增殖;ELISA法检测HSC-T6内cAMP含量;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测核蛋白因子κBp65(NF-κBp65)的表达。结果:在体外培养的活化大鼠肝星状细胞中,α1-AR激动剂PE(10-5、10-7、10-9mol/L)对HSC-T6具有明显的抑制cAMP合成,促进增殖,增强核转录因子κBp65的表达及抑制凋亡的作用,而α1-AR拮抗剂PZ(10-5、10-7、10-9mol/L)具有相反的作用。结论:α1-肾上腺素激动剂PE对体外活化的HSC-T6具有促进增殖和抑制凋亡的作用,而拮抗剂PZ具有抑制增殖和促进凋亡的作用,可能主要通过α1受体调控cAMP合成及NFκ-Bp65的表达起作用。