桃胶多糖对Caco-2细胞模型吸收葡萄糖的影响

目的:通过Caco-2体外细胞模型研究桃胶多糖影响葡萄糖吸收的机制。方法:以培养的Caco-2单层细胞为葡萄糖吸收模型,观察在桃胶多糖影响下,葡萄糖吸收量随时间的变化关系,从而推断桃胶多糖对葡萄糖跨膜转运过程的影响。结果:一定浓度桃胶多糖作用下,不同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),表明葡萄糖吸收受到桃胶多糖的抑制,且葡萄糖浓度越低,桃胶多糖抑制葡萄糖吸收的效果越显著(P<0.05);不同浓度的桃胶多糖作用下,相同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),且桃胶多糖浓度越高,抑制葡萄糖吸收的效果越好(P<0.05)。结论:桃胶多糖能够竞争性抑制葡萄糖的吸收,其是否可能通过影响或者占据肠道刷状缘侧钠葡萄糖共转运载体1(SGLT-1)上葡萄糖的吸收位点达到降血糖目的,其机制尚有待进一步研究。     

黄芪对脾虚模型大鼠肠道粘膜经由SGLT1/GLUT2的葡萄糖吸收的影响

摘要 目的：探讨黄芪对脾虚证模型大鼠小肠粘膜葡萄糖吸收的影响，并研究其可能通过调控SGLT1/GLUT2的作用机制。方法：采用注射利血平方法建立脾虚症模型大鼠，用在体灌流技术观察黄芪对大鼠小肠粘膜的葡萄糖吸收影响并收集小肠粘膜，检测钠依赖葡萄糖转运蛋白（SGLT1）和2型葡萄糖转运蛋白（GLUT2）转运蛋白和mRNA的表达变化。结果：与正常组对比，模型组大鼠体重及尿D-木糖排泄率明显降低（P<0.01），同时葡萄糖吸收量、SGLT1和GLUT2的蛋白及mRNA表达均下降（P<0.01），与模型组相比，通过黄芪水煎液的干预治疗，各指标有得到明显的改善。结论：黄芪能够改善利血平致气虚的模型大鼠小肠对葡萄糖吸收的功能。     

Caco-2细胞研究黄芪中活性成分毛蕊异黄酮的吸收转运

黄酮类成分是中药中一类重要的活性成分,其药理活性和体内过程是近些年研究的重点。毛蕊异黄酮是中药黄芪中黄酮类的主要活性成分,近些年的研究表明其具有多种药理活性,但在体内的吸收转运特性尚不明确。该实验运用Caco-2细胞模型,用芹菜素作为内标物质,采用高效液相法测定药物浓度的方法,分别研究不同浓度以及加入不同类型的蛋白抑制剂后的吸收转运特性。数据进行Q检验,结果表明毛蕊异黄酮低、中、高3种浓度的Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)=1.38<1.5,加入不同类型的蛋白抑制剂后,和空白组的Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)进行比较,均无显著性差异。说明毛蕊异黄酮的吸收可能主要以被动转运为主,同时有主动转运机制参与,其转运可能不受P-糖蛋白、MRP2蛋白、SGLT蛋白影响。     

Caco-2细胞模型及其在中药吸收转运研究中的应用

Caco-2细胞模型是一种筛选药物离体口服吸收特性的模型,现已广泛应用于评价药物在小肠的吸收特性和转运机理的研究。作者描述了Caco-2细胞的培养及其细胞单层模型如何建立和验证;探讨了Caco-2细胞用于药物吸收转运研究的机制;对其在中药被动转运、载体介导的主动转运、中药外排机制和吸收过程中药物相互作用等方面的应用进行了详细的阐述;并评价了该细胞用于中药吸收转运机制研究中的作用;最后对该细胞模型可能的应用发展前景提出了展望。     

稳定同位素示踪法用于Caco-2细胞葡萄糖吸收模型的研究

目的 建立Caco-2细胞葡萄糖吸收模型,为考察药物对葡萄糖吸收的影响提供方法。方法 Caco-2细胞培养7,14,21 d后,分别加入25,50,75,100 mmol·L-1的葡萄糖溶液孵育5,10,15,20 min,采用高效液相色谱-质谱联用技术,以稳定同位素示踪法比较培养时间、葡萄糖浓度以及孵育时间对葡萄糖吸收的影响。结果 Caco-2细胞培养21 d后葡萄糖的吸收优于培养7 d和14 d的吸收,吸收量大,趋势稳定。此时用75 mmol·L-1的葡萄糖溶液孵育细胞10 min,葡萄糖吸收量与100 mmol·L-1比较差异无统计学意义,但高于25,50 mmol·L-1时的葡萄糖吸收量。结论 本实验条件下建立的Caco-2细胞模型可作为研究葡萄糖吸收的模型。     

黄酮类化合物在Caco-2细胞模型中的吸收规律

目的:研究黄酮类化合物—槲皮素、木樨草素、芹菜素、大豆苷元、染料木素、木樨草苷、忍冬苷、黄芩苷及芦丁在Caco-2细胞模型中的吸收特性,探讨其吸收与结构的关系。方法:分别测定Caco-2细胞在各种条件下对9种黄酮类化合物的吸收。结果:Caco-2细胞对9种黄酮类化合物吸收均以偏酸性介质为佳;吸收量均随着浓度的增加而呈线性增加;当pH5·5时,5种黄酮苷元的吸收量顺序为:槲皮素>木樨草素>染料木素>芹菜素>大豆苷元;4种黄酮苷的吸收量的顺序为:木樨草苷>忍冬苷>黄芩苷>芦丁。结论:①酸性介质有利于9种黄酮类化合物在Caco-2细胞模型中的吸收,介质pH的改变对槲皮素在Caco-2细胞模型上吸收的影响最大,而对芹菜素、染料木素和大豆苷元的影响较小。②9种黄酮类化合物在Caco-2细胞模型上的吸收均为被动扩散。③黄酮苷元母核上的-OH数目及B-环的连接位置均对黄酮苷元的吸收有影响,而苷元糖苷化后,其连接糖的数目、种类及连接位置在黄酮苷的吸收中起主导作用。本实验中黄酮苷元的吸收均高于黄酮苷。     

Caco-2细胞模型考察不同转运蛋白对瑞香素口服吸收的影响

目的:研究在Caco-2细胞模型中不同转运蛋白对瑞香素吸收的影响。方法:采用Caco-2细胞单层模型研究转运蛋白对瑞香素的吸收影响。采用HPLC法检测药物浓度,计算其表观渗透系数,考察不同转运蛋白抑制剂对瑞香素吸收的影响。结果:在10μg/ml的瑞香素溶液中加入P-gp抑制剂维拉帕米50μmol后,瑞香素PBA/PAB均无显著性差异(P>0.05);加入MRP2抑制剂环孢素10μmol后,PBA/PAB降低了10%;加入BCRP抑制剂潘生丁25μmol后,PBA/PAB降低了29%。结论:在瑞香素的跨膜转运的过程中不存在肠道转运蛋白P-gp的作用,但可能存在MRP2、BCRP的外排。     

盐酸巴马汀在Caco-2细胞中的吸收机制

目的:研究盐酸巴马汀在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法:用Caco-2细胞单层模型研究盐酸巴马汀的双向转运,并考察时间、药物浓度、抑制剂、pH及温度对盐酸巴马汀吸收的影响。用高效液相色谱法检测药物浓度,计算其表观渗透系数。结果:盐酸巴马汀在Caco-2细胞模型中,从单层细胞层顶端到基底端的转运大于基底端到顶端的转运,随时间和浓度的增加,药物吸收呈饱和趋势,且P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂维拉帕米、pH和温度对它的转运有影响。结论:盐酸巴马汀在Caco-2细胞模型中的吸收主要是由载体介导的主动转运,且该主动转运的载体位于Caco-2细胞单层的顶端。     

补骨脂素在Caco-2细胞模型中的吸收特性研究

 目的 研究补骨脂素在Caco-2细胞模型中的吸收特性,为设计合理的给药方式提供依据。方法 利用MTT实验筛选出 补骨脂素在Caco-2细胞中的安全浓度,然后用Caco-2细胞单层模型研究补骨脂素的双向转运,采用高效液相色谱法检测药物 浓度,计算其表观渗透系数,考察时间、药物浓度对补骨脂素吸收的影响。结果 补骨脂素在Caco-2细胞模型中的转运中对 应时间点表观渗透系数值(P_app)A→B约等于B→A,随时间增加P_app逐渐下降,而在所测浓度范围内P_app值基本保持恒定。 结论 补骨脂素在Caco-2细胞模型中的吸收机制主要是被动转运。     

肉桂酸在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的:研究肉桂酸单体在Caco-2细胞模型中的吸收机制.方法:用Caco-2细胞单层模型研究肉桂酸的双向转运机制,考察时间、浓度、pH和P-gp抑制剂对肉桂酸吸收的影响.采用高效液相色谱检测肉桂酸的浓度,计算其表观渗透系数(Papp).结果:肉桂酸在caco-2细胞模型中的转运与时间和浓度呈正相关,转运过程受pH的影响,P-gp抑制剂维拉帕米对其转运有影响.从单层细胞层顶端到基底端的转运与基底端到顶端的转运无显著性差异.结论:肉桂酸在caco-2细胞模型中的吸收以被动转运为主.     

板蓝根提取液中有效成分的吸收转运特性分析

目的:研究板蓝根中有效成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运特征。方法:建立Caco-2细胞摄取、转运模型,考察受试化合物对该细胞的安全性,以跨膜电阻值、碱性磷酸酶活性和荧光素钠通透性3个指标检验细胞模型,考察浓度、时间、温度、抑制剂及p H对受试化合物吸收的影响。采用HPLC检测受试化合物,计算其表观渗透系数(Papp)与外排率。结果:板蓝根样品中精氨酸、腺苷能被小肠吸收细胞较好吸收,精氨酸Papp在1.01×10-6~1.35×10~(-6)cm·s~(-1),腺苷Papp在0.40×10~(-6)~0.71×10~(-6)cm·s~(-1)。2种成分在Caco-2细胞中膜通透性良好;精氨酸被吸收程度优于腺苷,精氨酸吸收率50%。板蓝根提取液中精氨酸、腺苷成分外排率(ER)均在1.0~2.0,存在P-糖蛋白(P-gp)外排转运蛋白介导两者的吸收转运,板蓝根样品中存在其他成分促进精氨酸、腺苷的P-gp外排作用。结论:板蓝根药材中精氨酸和腺苷能够被小肠细胞较好地吸收,存在吸收转运方向差异性,且都受到P-gp外排作用。     

黄芪多糖对结肠癌SW620细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:研究黄芪多糖对结肠癌细胞SW620增殖的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:体外培养的SW620细胞,分别给予黄芪多糖(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 g·L~(-1)),培养48 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测黄芪多糖对人结肠癌细胞SW620增殖的影响;用1.0 g·L~(-1)黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,碘化丙啶(PI)单染检测药物处理后的肿瘤细胞周期,Annexin V/PI双染检测药物处理后的肿瘤细胞凋亡率;分别加入0.25,0.5,1.0 g·L~(-1)黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,Caspase-9和细胞色素C的表达。结果:黄芪多糖能够抑制人结肠癌细胞SW620的增殖(P0.05,P0.01),且呈浓度依赖效应;与空白组比较,黄芪多糖1.0 g·L~(-1)处理组G2/M期比例增加,早期凋亡率增加,并且晚期凋亡率和总凋亡率均增加(P0.05,P0.01);与空白组比较,黄芪多糖0.25,0.5,1.0 g·L~(-1)组Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C和促凋亡基因Bax表达量增加,Caspase-9前体和抗凋亡基因Bcl-2表达降低(P0.05,P0.01)。结论:黄芪多糖对结肠癌细胞SW620具有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用,其诱导凋亡机制可能是通过线粒体凋亡通路实现的。     

基于Caco-2细胞模型研究蝙蝠葛碱的跨膜吸收机制

目的:研究蝙蝠葛碱在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制.方法:采用Caco-2细胞模型,进行A-B和B-A双向转运实验,计算表观渗透系数(Papp)、外排比率(ER)和累积转运量,考察蝙蝠葛碱不同质量浓度、细胞两侧pH梯度和螫合剂EGTA对蝙蝠葛碱转运的影响.结果:高、中、低浓度下的ER分别为1.11,4.49和7.24,即中、低浓度下转运有明显极化现象;顶侧pH 7.4和6.5时,ER值分别为3.95和9.38,即pH梯度存在时,蝙蝠葛碱吸收减少,外排增加;加入螯合剂EGTA后,Papp,ER和累积转运量均无显著改变.结论:蝙蝠葛碱的吸收有主动转运机制存在;pH梯度能驱动了蝙蝠葛碱的外排转运,偏碱性环境较酸性环境易于吸收;其吸收途径主要为跨细胞通道转运.     

莪术油在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

 目的研究莪术油及其部分活性单体在Caco-2体外细胞吸收模型中的吸收机制,并比较各成分以单体形式及以总油形式在细胞模型上透过的异同。方法应用Caco-2体外细胞吸收模型,分别考察莪术油(Zedoary Turmeric oil,ZTO)及其部分单体,包括莪术二酮(curdione)、吉马酮(germacrone)、呋喃二烯(furanodiene)、莪术醇(curcumol)在不同方向,不同浓度下的转运情况,并比较各单体与挥发油中相应成分在同一浓度下的转运情况。采用高效液相色谱法测定药物浓度,计算其表观渗透系数。结果莪术二酮、吉马酮、莪术醇有很高的表观渗透系数,且不随转运方向及给药浓度影响(P>0.05);而呋喃二烯及挥发油中的其他高脂溶性成分[包括呋喃二烯、莪术烯(curzerene)、β-榄香烯(β-elemene)]在Caco-2细胞模型上不透过;挥发油中其他成分不影响莪术二酮、吉马酮在细胞模型上的透过(P>0.05);莪术油及其活性单体透过Caco-2单层细胞膜后并无代谢产物可被检测。结论莪术油及其部分单体在Caco-2细胞模型中的转运机制为被动扩散,莪术油中高脂溶性成分及呋喃二烯由于被单层细胞膜摄取而不透过Caco-2细胞,挥发油中其他成分对单体成分的透过无影响。     

淫羊藿苷在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制

目的:研究淫羊藿苷在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法:通过研究10,20μmol.L^-1淫羊藿苷在细胞中的双向转运,考察时间、药物浓度及转运蛋白抑制剂对淫羊藿苷吸收的影响。用超高压液相法测定药物浓度,计算其表观渗透系数。结果:淫羊藿苷通过Caco-2细胞单层的转运量4 h内随时间延长呈线性增大,双向转运的渗透系数P_BA/P_AB大于4。在加入P-糖蛋白(P-gp)转运蛋白抑制剂维拉帕米后,淫羊藿苷P_AB增大了1.2倍[(1.37±0.10)×10^-6cm.s^-1],P_BA/P_AB显著降低(由4.83下降到2.72)。而加入转运蛋白多药耐药蛋白(MRP2)的抑制剂白细胞三烯C₄、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的底物潘生丁时,对淫羊藿苷转运影响不显著。结论:结果提示淫羊藿苷口服吸收差的原因有二:一是淫羊藿苷肠壁的渗透系数较小,二是可能存在肠道P-gp转运蛋白对淫羊藿苷的外排。     

党参、黄芪对实验性心肌缺血大鼠心电图影响的比较

目的 比较党参与黄芪提取物对实验性心肌缺血大鼠的保护作用。方法 采用垂体后叶素(Pit)法建立心肌缺血动物模型，以Ⅱ导联心电图T波和S—T段位移及心率的变化为指标，观察党参和黄芪对实验性心肌缺血大鼠的保护作用。结果 黄芪和党参均可减轻实验性心肌缺血大鼠心电图的T波抬高，并能减慢心率，但对心电图S—T段的位移无明显作用，并且党参减轻T波抬高的效果强于黄芪，而减慢心率的作用弱于黄芪。结论 党参和黄芪均对Pit致实验性心肌缺血起明显保护作用。     

Caco-2细胞单层模型中熊果酸摄取转运机制的研究

目的 研究熊果酸在Caco-2细胞单层模型中的吸收转运机制.方法 利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究熊果酸在有或无P-糖蛋白专属性抑制维拉帕米存在时,评价其双向转运特征,并考察时间、药物浓度、体系温度以及培养介质pH值对Caco-2细胞摄取熊果酸的影响.采用高效液相色谱-紫外检测法对熊果酸进行定量分析,计算其表现渗透系数(P_(app)).结果 浓度在10～40 μmol/L内,Caco-2细胞对熊果酸摄取量呈线性增加.双向转运研究发现加入P-糖蛋白专属性抑制剂维拉帕米后.其P_(app)发生显著改变,表观渗透率由3.445下降至1.386.结论 熊果酸在Caco-2细胞模型的吸收转运机制以被动转运为主,P-糖蛋白参与主动转运的过程.     

火焰原子吸收光谱法测定黄芪微量元素含量

目的:建立火焰原子吸收光谱法测定黄芪药材中的微量元素含量。方法:收集不同来源的黄芪药材,采用浓硝酸-高氯酸(4∶1,v/v)混合溶液消解黄芪样品,用火焰原子吸收光谱法测定其中的Cu、Zn、Mn和Fe含量,共测定了5种黄芪样品的微量元素含量。结果:黄芪药材中微量元素含量由高到低依次为FeZnMnCu,其加标回收率为97.96%~102.18%。结论:该方法快速、灵敏,稳定性好,可供黄芪的微量元素含量测定使用。