桂郁金种质资源的SSR分析

目的:为了了解桂郁金种质资源的遗传多样性和亲缘关系。方法:利用SSR分子标记技术对广西12个不同产地的35份桂郁金种质进行分析,并运用NTsys 2.10e软件进行聚类。结果:11条引物扩增得到片段52条,其中35条为多态性片段,多态率达67.31%,遗传相似系数的范围在0.63~1.00之间。结论:广西12个不同产地的桂郁金种质存在着较大的差异,遗传多样性较丰富。该结果可以为桂郁金优良种质资源筛选,良种繁育等研究提供一定的参考依据。     

丹参基因组SSR位点的特征分析及引物开发

丹参为唇形科鼠尾草属多年生落叶开花植物,以根与根茎部位入药,广泛用于多种疾病的治疗。本研究采用生物信息学方法,从丹参基因组框架图序列中发掘出4 832 个长度超过40 bp 的基因组SSR 位点。结果表明,二核苷酸重复基元和三核苷酸重复基元是构成丹参基因组SSR 位点的主要类型,分别占全部SSR 位点总数的37.3%和61.3%。此外,富含A/T 碱基的SSR 位点,包括AT/TA、AAT/ATT、ATA/TAT、TAA/TTA,分别占全部SSR 位点总数的30.5%,21.6%,17.1%,20.4%,在数量上明显高于其他类型。以基因组SSR 位点为基础,共设计基因组SSR 引物序列1 079 对。这些引物可用于基因组多样性分析、遗传图谱构建、分子标记筛选等工作,为后期丹参群体遗传学与基因组学研究奠定基础。     

桂郁金的化学成分及药理作用研究进展

就近年来对中药材桂郁金所含的化学成分以及桂郁金具有的药理作用的研究进展作一综述。通过查阅相关文献和资料,进行分析和综合。桂郁金具有多种有效和生物活性的化学成分以及广泛的药理作用。研究中药材的化学成分及其药理作用对于促进我国中药的开发与利用具有重要意义。桂郁金作为中国的传统中药材和近年来研究发现桂郁金的药用价值具有广阔的研究前景。     

桂郁金与桂莪术的薄层鉴别

目的：建立桂郁金与桂莪术药材中的姜黄素和莪术醇的薄层鉴别方法。方法：采用薄层色谱法鉴别桂郁金与桂莪术药材中的姜黄素、莪术醇。结果：桂郁金供试品在与姜黄素对照品色谱相应的位置上,显示相同颜色的斑点,而在与莪术醇对照品色谱相应的位置上,未显示有相同颜色的斑点。桂莪术供试品色谱中,在与姜黄素、莪术醇对照品色谱相应的位置上,均显示相同颜色的斑点。结论：方法操作简便、准确、重现性好。     

裂叶牵牛获得表达序列标签资源的简单序列重复信息分析

 目的 为了在裂叶牵牛中开发功能性EST-SSR分子标记,分析裂叶牵牛EST-SSRs特征。方法 从NCBI公共数据库中下载裂叶牵牛EST序列,运用DNAstar软件中的Seqman Pro程序,对下载序列进行拼接和聚类,去除冗余序列,利用SSRIT软件筛选重复序列长度≥20 bp的二、三、四、五、六、七、八核苷酸7种类型的SSR,统计分析裂叶牵牛EST-SSRs的特征。结果 从NCBI公共数据库中下载62 388条裂叶牵牛EST序列,剔除冗余序列,得到全长为8.35×106 bp的无冗余EST序列11 569条。在这些序列中搜索出985条EST序列含有1 132个SSRs,占无冗余EST序列的9.78%,平均每7.37 kb EST出现1个SSR位点。二核苷酸重复基元SSR出现频率最高（51.06%）,其次是三核苷酸（33.57%）,AG/TC、GA/CT和AAG/ TTC是二、三核苷酸中的优势重复基元。裂叶牵牛EST-SSRs以4~10次重复为主,基序长度主要集中于20~30 bp。结论 裂叶牵牛EST-SSR的出现频率高,重复类型丰富,理论上表明这些EST-SSRs具有较高的可用性。本实验通过对裂叶牵牛EST资源的SSR信息的研究,为分子水平和生物信息学角度上开发裂叶牵牛的SSR功能性标记提供了候选序列。     

广西莪术EST-SSR标记开发

目的利用NCBI公布的姜黄EST序列,挖掘SSR位点,开发近缘种广西莪术EST-SSR标记。方法下载NCBI公布的姜黄EST序列,利用SSR-FINDER搜索SSR位点,采用Primer5.0设计SSR引物,挑选30个表现型差异较大的广西莪术进行有效性及多态性检测。结果 12 678条EST序列含有SSR位点1 243个,其中二核苷酸、三核苷酸重复序列最多,分别占50.36%,31.54%,以AT/TA和CT/GA出现频率最高。利用Primer5.0设计引物共325对,PCR检测表明,104对引物可以扩增出稳定清晰的带型;在至少30份不同种质广西莪术中检测到48对SSR引物具有多态性,占设计引物的38.09%。结论姜黄EST资源中含有高频率的SSR位点,且EST-SSR标记开发效率较高。     

马蹄香表达序列标签资源的SSR信息分析

目的分析马蹄香EST资源的SSR信息,为开发EST-SSR标记奠定基础。方法从GenBank中获得马蹄香EST序列,用Sequencher4.8软件进行序列拼接得到Uni-EST序列,用SciRoKo3.4软件对Uni-EST序列进行SSR扫描,分析EST-SSR的分布频率和重复基元的类型特征。结果共获得10274条马蹄香EST序列,通过预处理共得到全长为5.11×106bp的无冗余Uni-EST6643条。在这些序列中共搜索出1408个SSR位点,分布在1232条Uni-EST序列中,发生频率为18.55%,EST-SSR的平均长度为22.30bp,平均每3.63kb含1个SSR位点。单核苷酸重复在马蹄香EST-SSR中占主导地位,发生频率为12.24%,其次为二核苷酸重复,发生频率为5.01%。在所有重复基元中,A/T基元出现频率最高,其次为AG/CT。结论马蹄香EST中SSR出现的频率较高,并且类型较为丰富。     

桂郁金提取物的抗炎镇痛作用

目的:研究桂郁金提取物的镇痛抗炎作用。方法:选用昆明种小鼠,体重(22±2)g,每个实验随机分为6组,生理盐水组、阳性对照组、醇提物、水提物低、高剂量组(按生药量计8,16 g.kg-1)。各组小鼠分别连续ig 7 d,用小鼠醋酸致痛、热致痛、二甲苯致小鼠耳廓肿胀和冰醋酸致小鼠腹腔渗出及小鼠棉球肉芽肿模型,观察桂郁金提取物的抗炎镇痛作用。结果:桂郁金醇提物、水提物低、高剂量对小鼠痛阈有明显的提高作用,扭体反应抑制率分别为59%,67%,59%,76%(P<0.01);桂郁金醇提物大剂量对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有抑制作用,肿胀抑制率49%(P<0.05);桂郁金醇提物、水提物对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、小鼠棉球肉芽肿增生均有抑制作用(P<0.01)。结论:桂郁金提取物有抗炎镇痛作用。     

黄花蒿EST资源的SSR信息分析及标记开发

目的:研究黄花蒿Artemisia annua EST-SSRs的分布频率及核苷酸重复特征,开发微卫星(microsatellites)标记,为黄花蒿种质资源利用提供理论依据与技术支持。方法:NCBI下载黄花蒿94 923条EST序列经组装后去除冗余,MISA获得EST-SSRs序列,分析EST-SSRs组成特点和分布规律。Pfam2go注释黄花蒿SSR-ESTs数据集,GOSlim程序对注释结果进行分类。Primer3程序设计18对SSR引物扩增黄花蒿基因组DNA,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测多态性。结果:黄花蒿拼接组装后获得24 601条序列,含2 110个SSR,出现频率为8.6%,其中二、三核苷酸重复分别占28%,50.4%,三核苷酸重复中ACC/GGT为主要类型,占9.8%。312条黄花蒿SSR-ESTs序列被功能注释。15对引物建立了合适的PCR反应体系,在36个黄花蒿样品中扩增呈现良好多态性。结论:黄花蒿EST-SSR基元类型丰富,在检测的18对引物中有效扩增和多态性均较高,根据EST资源规模开发SSR标记是可行的,为进一步开展黄花蒿种质资源的研究奠定了基础。     

桂郁金石油醚和醋酸乙酯部位化学成分的研究

目的 对桂郁金的石油醚和醋酸乙酯部位进行化学成分研究.方法 用硅胶柱层析和制备HPLC分离桂郁金石油醚和醋酸乙酯部位的化学成分,用现代波谱技术鉴定化学成分的结构.结果 从桂郁金的石油醚部位分离得到3个化合物,分别是ComosoneⅡ(1),5,10-双甲基-2-甲氧基-7-甲基-1,4-蒽二酮(2)和Curcuzedoalide(3);从醋酸乙酯部位分离得到2个化合物,分别是邻苯二甲酸二丁酯(4)和β-谷甾醇(5).结论 有4个化合物为首次从该植物中分得.     

适用于SSR分析的广西莪术DNA提取方法考察

目的:获取适用于广西莪术简单序列重复(SSR)分析的高质量DNA,为该品种的遗传多样性研究提供参考。方法:选择广西莪术嫩叶为材料,采用经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法提取广西莪术总DNA,考察手工和机器研磨的差异性,采用UV检测DNA浓度和纯度,DNA作为模板进行聚合酶链反应(PCR)扩增,引物选择clest SSR-01,clest SSR-03,clest SSR-06,clest SSR-08,clest SSR-14,clest SSR-15,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA扩增效果。结果:改良CTAB法所提DNA的A260 nm/A280 nm1.8~2.0,蛋白质、多糖、RNA等物质去除较彻底,DNA符合PCR扩增结果要求,使用姜黄属通用引物能扩增出清晰条带。经典CTAB法所提DNA的A260 nm/A280 nm1.50~1.60,含较多杂质,无法用于PCR扩增等分子生物学研究。结论:改良CTAB法提取所得DNA质量较好,可有效去除次生代谢产物对DNA的干扰,适用于广西莪术SSR分子标记和遗传多样性分析。     

不同种质广西莪术植物形态、药材性状及挥发油产量的聚类分析

目的:通过对不同种质广西莪术进行植物形态、药材性状、挥发油产量的聚类分析,为该品种的选育和分类提供参考。方法:采用原植物鉴别法测量广西莪术的植株生长期数据。药材采收后按2010年版《中国药典》的标准记录莪术药材性状的各项数据;挑选单株质量150 g的材料进行挥发油的提取与测定。数据采用系统分析方法进行聚类,在分类中挑选植株生长良好、药材和挥发油产量高的优良品种。结果:以植株形态不同性状为指标,样本聚为4类。以药材性状与产量为指标,样本聚为4类。以莪术挥发油为指标,按挥发油产量与颜色分类,样本聚为3类。结论:综合3次分类可将原本不确定的品种进行归类确认,系统聚类法可有效对广西莪术进行品种鉴定归类,为优良品种选育和种质资源遗传多样性考察提供参考。     

桂郁金水提物对大鼠肝胞浆和微粒体内Ⅱ相脱毒酶的影响

目的:研究桂郁金水提物对大鼠肝胞浆液和微粒体内Ⅱ脱毒酶的影响.方法:雄性SD大鼠,桂郁金水提液按(生药剂量)0.81,2.43,7.29 g·kg-13个剂量组,灌胃给药,1次/d,连续3周,末次给药后,动物取血,分离血清,测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr),摘除肝脏,差速离心法制备肝脏胞浆液及微粒体,测定胞浆液的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)和微粒体内谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和尿苷二磷酸-葡萄糖醛酸转移酶(UGT)的活性.结果:桂郁金水提液对大鼠体重增长和肝脏指数及血清ALT,AST含量均无明显影响;桂郁金各剂量组明显降低Cr含量(P＜0.01);中、高剂量组明显降低了BUN含量(P＜0.01).在肝胞浆液,与对照组比较,桂郁金各剂量组对CAT和GR的活性没有明显影响;桂郁金各剂量均明显增高GSH-Px活性(P＜0.01);桂郁金中、高剂量明显增高SOD活性(P ＜0.01,P＜0.05).在肝微粒体中,与对照组比较,桂郁金各剂量组对UGT的活性没有显著的影响;桂郁金各剂量均明显增高GST活性(P＜0.05).结论:桂郁金对大鼠肝脏和肾脏没有毒性,对肾脏可能还具有保护作用.桂郁金可诱导胞浆液和微粒体内脱毒酶的功能,具有抗氧化作用,并能加速体内毒性代谢物的排除,增加肝脏的解毒能力.     

广西地不容SSR标记开发及遗传多样性研究

目的基于广西地不容转录组序列开发SSR引物,并用于该物种自然居群遗传多样性的研究。方法从广西地不容转录组测序获得的unigene序列中挖掘SSR位点,采用Oligo 7.0软件设计引物,通过电泳法筛选得到多态性高的SSR引物用于遗传多样性研究。结果从广西地不容转录组20 637条unigene序列中,搜索到6 833个SSR位点,出现频率为33.11%。基于转录组序列设计50对引物,筛选得到10对多态性高的引物。10对引物在5个居群63个样本中共扩增得到83个条带,有效条带百分率为100%,多态性信息量(PIC)为0.6889。在物种水平和居群水平上,Nei基因多样性指数(H)分别为0.725 2和0.613 4,Shannon多样性指数(I)分别为1.576 6和1.220 3,观察杂合度(Ho)分别为0.584 5和0.558 4,期望杂合度(He)分别为0.731 2和0.643 5。居群的遗传分化系数(Fst)为0.146 5,基因流(Nm)为1.456 9。UPGMA聚类分析表明,5个居群可分为3支系。结论开发的SSR标记适用于广西地不容的遗传多样性分析。广西地不容在物种和居群水平上均具较高的遗传多样性,遗传分化主要存在于居群内部。     

桂郁金茎叶、生品与炮制品挥发油的比较分析

目的:分析桂郁金茎叶、生品与炮制品的挥发油化学成分。方法:用水蒸气蒸馏法提取挥发油后采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析。结果:从桂郁金茎叶中分离得到57个化学成分,鉴定了37个;桂郁金生品中分离出45个化学成分,鉴定了22个;从桂郁金炮制品中分离出44个化学成分,鉴定了32个。结论:3个样品挥发油的成分及含量均存在较大差异。     

不同产地温莪术遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析＊

目的 采用简单序列重复区间（ISSR）分子标记技术分析不同产地温莪术的遗传多样性和亲缘关系。方法 以3个产地8个温莪术居群的42个样品为材料，从20条ISSR引物中筛选出6条进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测后，利用PopGene 32软件对不同居群ISSR标记结果进行多态性分析，通过UPGMA方法聚类并构建亲缘关系树。结果 6条引物共扩增出 42 个多态性位点，居群水平多态位点平均百分率为29.17%。居群间遗传分化系数Gst为0.3886，居群间每代个体的基因流系数（Nm）为 0.7868。8个居群遗传一致性范围为 0.8481-0.9736，遗传距离范围为 0.0268-0.1647。结论 供试8个温莪术居群之间的遗传多样性水平偏低，遗传变异较少，基因流动性水平较低。本研究的开展为温莪术的引种栽培及育种提供了一定的分子生物学依据。     

RP-HPLC测定桂郁金中吉玛酮的含量

目的:建立RP-HPLC测定桂郁金中吉玛酮的含量.方法:采用正交试验优化样品处理的提取条件,采用RP-HPLC检测吉玛酮的含量,Phenomenex C18色谱柱(4.6 mm×250 mm.5 μm),流动相76％乙腈,流速1.0 mL· min-1,检测波长为217 nm.结果:吉玛酮在0.056 7～2.324 7 μg呈良好的线性关系(r=0.999 99),平均回收率98.05％.RSD 0.69％;容县产桂郁金吉玛酮含量最高,而平南产含量最低;桂郁金块根炮制品及桂郁金茎叶中吉玛酮的含量明显低于自然阴干的桂郁金块根.结论:吉玛酮含量测定方法简单、准确、快速;不同产地、不同部位以及不同炮制品的桂郁金吉玛酮含量相差很大.     

姜黄苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析

目的对姜黄Curcuma longa苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)基因(Cur PAL)全长进行克隆并开展生物信息学分析,为姜黄次生代谢产物的生物合成机制研究奠定基础。方法利用RT-PCR和RACE相结合的方法,以姜黄叶片c DNA为模板,克隆获得Cur PAL全长,进行生物信息学分析。结果克隆的Cur PAL(登录号为KJ780359)全长c DNA为1 293 bp,其中包括5’-UTR 243 bp,3’-UTR 123 bp,含有1个927 bp的完整开放阅读框(opening reading frame,ORF),编码308个氨基酸;预测蛋白质相对分子质量为33 000,理论等电点p I为5.76;Cur PAL蛋白性质稳定,为可溶性蛋白;Cur PAL编码的蛋白质序列包含与夹竹桃PAL蛋白质相同的脱氨基位点和催化活性位点,氨基酸序列多重比较发现,Cur PAL编码的氨基酸序列与中国李、浙江红山茶、拟南芥、辣椒、小果野蕉PAL氨基酸序列的同源性达到75%以上;与姜目类的植物(如小果野蕉)的PAL聚为一支,说明两者亲缘关系较近;通过蛋白质二维、三维结构的预测,表明Cur PAL蛋白为全α型蛋白,由同源四聚体构成。结论首次克隆并获得Cur PAL基因全长c DNA,为姜黄素生物合成途径的阐明和改善中药材品质提供科学依据。     

69份苦玄参种质SSR遗传多样性及品质性状相关标记分析

目的:采用简单重复序列(SSR)分子标记技术对广西苦玄参主产区69份苦玄参种质样本进行遗传多样性及亲缘关系分析,并筛选与苦玄参苷含量相关联的优良种质基因。为苦玄参种质资源评价、遗传进化分析及分子标记辅助育种等提供依据。方法:基于转录组测序技术,开发20对引物进行批量扩增。利用各标记位点的遗传多态信息,分析69份苦玄参种质的遗传多样性及亲缘关系,并通过一元线性和多元逐步回归分析,筛选与苦玄参苷含量相关联的分子标记。结果:20对SSR引物共扩增出76个等位基因,平均每个位点观测等位基因3.8个,高于有效等位基因数(1.9692个),稀有等位基因率为38.2%,等位基因分布不均匀。等位基因多态率范围为0~59%,平均38.24%,各位点多态率差异较大。各位点多态信息含量(PIC)变化范围为0~0.6211,平均0.3780;Shannon多态性信息指数变化范围为0~1.2401,平均0.7590;Nei’s基因多样性指数(Nei)变化范围为0~0.6823,平均0.4409;以上3个指标最高的为P21,最低为P7,各位点遗传多样性存在较大差异。各位点平均观测杂合度为0.3824,低于平均期望杂合度(0.4425),表现为杂合子缺失;平均遗传分化系数Fst为0.3659;基因流Nm平均值为0.4332,种质遗传分化较大,基因流较小。一元线性回归分析和多元逐步回归分析结果表明,与苦玄参苷IA和IB相关的位点各有5个,其中仅有1个位点与2个成分的含量均相关。结论:20个SSR标记位点遗传多样性存在较大的差异,供试69份种质遗传分化大,基因流较小;从供试20个SSR标记中筛选出9个与苦玄参苷含量相关联的标记位点,试验结果可为苦玄参遗传进化分析及良种选育和繁育等提供依据。     

HPLC测定广西莪术不同炮制品超微细粉中牻牛儿酮的含量

目的:研究广西莪术4种不同炮制品超微粉碎前后对其中牻牛儿酮含量的影响。方法:超微细粉的制备采用低温(-30±2)℃球磨技术,磨细至1.0～2.0μm尺寸;采用HPLC,色谱柱大连依利特Hypersil ODS2 C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水(65∶35);紫外检测波长为210 nm。结果:不同炮制品超微细粉中牻牛儿酮的含量在粒径为75～53μm的普通粉末较高,而粒径为1.0～2.0μm的莪术超细粉末含量明显降低。结论:超微细粉的粒径对广西莪术炮制品中牻牛儿酮含量有明显影响,含量并不随粒度的减小而增加,为广西莪术不同炮制品提取工艺提供试验参考数据。