M_2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流家兔心房钠尿肽分泌的影响

[目的]建立离体跳动灌流心房模型,并探讨激活M2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流心房钠尿肽(ANP)分泌的影响.[方法]利用急性剥离的家兔左心房和放射免疫分析方法观察M2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流心房动力学及灌流液中ANP分泌的影响.[结果]记录到的离体跳动灌流心房模型心房内压及每搏搏出量与文献报道基本一致;卡巴胆碱明显抑制心房内压和搏出量,显著增加灌流心房ANP的分泌,此效应被M2型毒蕈碱受体抑制剂Methoctramine阻断.[结论]成功建立离体跳动灌流心房模型;M2型毒蕈碱受体的激活增加心房ANP的分泌.     

心房钠尿肽对力竭小鼠心脏抗氧化作用及其分泌机制的研究

目的 观察游泳力竭小鼠心肌组织中乳酸(lactic acid,LD)含量及血浆心房钠尿肽(atria1 natriuretic peptide,ANP)的分泌,以探讨力竭心脏的ANP分泌作用及抗氧化作用机制.方法 ①对小鼠进行分组及负重游泳,力竭即测试心肌LD和血浆ANP含量;②采用家兔离体心房灌流模型,利用不同浓度的乳酸缓冲液(4、8和12 mmo1/L)及其氮气模拟力竭心脏,探讨力竭心脏分泌ANP的机制；③利用氮气复制缺氧家兔离体心房灌流模型模拟力竭心脏,观察力竭心肌MDA含量的变化及其机制探讨.结果 ①游泳力竭小鼠心肌组织LD(P＜0.01)和血浆ANP含量(P＜0.01)与对照组相比均明显增高；②灌流浓度分别为4mmol/L(P ＜0.05)、8 mmo1/L (P＜0 05)和12rmmol/L(P ＜0.001)的乳酸缓冲液与对照组相比并不增加离体心房灌流模型中ANP的分泌,反而抑制ANP的分泌；但缺氧能明显增加心房ANP的释放(与对照组相比,P＜0.001)；③缺氧的离体心房灌流模型显示,缺氧组心肌组织中MDA含量比对照组显著降低(P＜00S),而预处理KT5823(1mmol/L)再给予缺氧组心肌组织中MDA含量明显增高(与缺氧组相比,P＜0.01).结论 ①力竭心脏的缺氧分泌大量ANP,而不是乳酸.②力竭时分泌的ANP对心脏具有抗氧化作用,其作用是通过ANP→cGMP→PKG信号传导途径.     

JNK信号传导通路在星形胶质细胞缺氧/复氧后损伤的作用

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞（astrocyte,AC）缺氧/复氧损伤模型,探讨JNK信号转导通路与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,传至第3代,细胞自然纯化,实验设正常对照组（N）、SP600125组（SP组,10 μmol /L）、缺氧/复氧组（H/R组）和缺氧/复氧＋SP600125组（H/R＋SP组）.分别利用MTT法、AnnexinV/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染法、WB法检测缺氧8 h,复氧4、6、12、24 h时细胞存活率、凋亡率、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）的变化.结果 ①缺氧/复氧后细胞活力出现明显下降,SP600125阻断JNK通路后细胞活力高于H/R组;②缺氧/复氧后细胞凋亡率增加,SP600125阻断JNK通路后能够减轻细胞凋亡.③各组AC的JNK水平无显著变化,缺氧/复氧干预后p-JNK表达上调,用SP600125阻断JNK通路后,H/R＋SP组较H/R组p-JNK水平降低.结论 JNK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧/复氧损伤过程.     

红景天苷对大鼠心房钠尿肽分泌的影响

[目的]探讨红景天苷对大鼠心房钠尿肽(ANP)分泌的影响.[方法]采用大鼠离体搏动的心房灌流模型,利用蛋白激酶C(PKC)的β,δ及ε(PKCβ,PKCδ,PKCε)阻断剂观察红景天苷对大鼠心房ANP分泌的影响.采用放射免疫法测定ANP含量.[结果]与对照组比较,红景天苷明显增加心房ANP的分泌(P<0.01);PKCβ亚型阻断剂LY333531和PKCε亚型阻断剂EAVSLKPT均可完全阻断红景天苷增加ANP分泌的效应,而PKCδ亚型阻断剂Rottlerin则部分减缓红景天苷对ANP分泌的效应.[结论]红景天苷明显增加心房ANP的分泌,作用机制认为是通过PKC信号通路的激活实现的.     

JNK信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮的干预作用

目的：探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮（PGZ）的干预作用.方法：采用游离脂肪酸（FFA）诱导小鼠βTc3细胞凋亡;以MTT法观察FFA对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学和Western Blot法检测在FFA、特异性JNK抑制剂SP600125及PGZ作用下磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化c-jun（p-c-jun）的表达.结果：FFA对体外生长的βTc3细胞具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,JNK阻断剂及PGZ可显著减少这一过程引起的凋亡;且FFA诱导βTc3细胞凋亡伴随着JNK信号通路中p-JNK和p-c-jun的升高;用SP600125预处理细胞后,可明显减少p-JNK和p-c-jun的活化;而PGZ未能抑制FFA引起的JNK活化.结论：JNK信号通路参与了FFA诱导的小鼠βTc3细胞凋亡;PGZ可明显抑制胰岛βTc3细胞凋亡,但这一过程可能没有通过JNK信号通路.     

JNK通路介导LPS诱导脐静脉内皮细胞PD—L1表达的实验研究

目的探讨脂多糖（LPS）刺激脐静脉内皮细胞表达程序性死亡因子配体1（PD—L1）与C—JUN氨基末端激酶（JNK）信号通路的关系。方法体外培养脐静脉内皮细胞,按2x107／m1种植在6孔培养板中,在无血清培养基中静止24h后随机分成阴性对照组、LPS组及SP600125＋LPS组,其中阴性对照组不加干预因素;LPS组先用DMSO（0．1％V／V）作用1h,再用LPS（1．0}xg／m1）刺激24h;SP600125＋LPS组先用SP600125（20μmol／L）作用1h后再用LPS刺激24h,Western．blot测定各组PD．L1及P．JNK蛋白表达。结果SP600125＋LPS组PD—L1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;而SP600125＋LPS组和对照组PD．L1蛋白表达与LPS组比较均明显减少,差异均有统计学意义（P〈0．05）。SP600125＋LPS组细胞P．JNK蛋白表达与对照组和LPs组比较均减少,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LPS可能通过JNK信号通路调控脐静脉内皮细胞表达PD．L1。     

JNK信号通路在同型半胱氧酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究JNK信号通路在同型半胱氨酸（Hcy）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡中的作用。方法在人脐静脉内皮细胞培养基中加入不同浓度Hcy培养24h，以及加入SP600125预处理再加入10．0mmol／L的Hcy作用2h。用TUNEL法检测HUVECs凋亡情况。用Western-Blot法检测不同组HUVECs表达P-JNK的蛋白含量。结果用0．3mmol／L的Hcy干预后，HUVECs凋亡和JNK表达开始高于对照组（均P〈0．01）。100mmol／L最显著（均P〈0．01），呈浓度依赖关系；而SP600125两种浓度对HUVECs凋亡和JNK表达均有抑制作用，其中10．0umol／L更显著（P〈0．01）。结论Hey能够诱导HUVECs凋亡和上调JNK的表达，而SP600125具有明显的抑制作用，这可能是其促进动脉粥样硬化形成的重要机制之一。     

JNK信号通路在右美托咪定预处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨JNK信号通路在右美托咪定(DEX)预处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MI-RI)中的作用机制.方法 将大鼠分为对照(N)组、缺血再灌注(I/R)组、右美托咪定预处理(D)组、JNK信号通路抑制剂SP600125(SP)组、右美托咪定与SP600125(D+SP)组.记录各组大鼠心率(HR)、左心室发展压(LVDP)、左室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)、左心室舒张末压(LVEDP)、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率(AI)情况,电镜观察心肌超微结构变化,Western blot检测心肌组织GRP78、JNK、p-JNK蛋白表达.结果 与N组相比,其余组HR、LVDP、±dp/dtmax降低,LVEDP、心肌梗死面积、AI、GRP78、p-JNK、p-JNK/JNK蛋白表达增加(P<0.05);与I/R组相比,D组、SP组、D+SP组HR、LVDP、±dp/dtmax增加,LVEDP、心肌梗死面积、AI、GRP78、p-JNK、p-JNK/JNK蛋白表达均降低(P<0.05).电镜下N组心肌细胞超微结构完整,I/R组结构严重破坏,D组、SP组、D+SP组破坏较少.结论 右美托咪定预处理可能通过抑制JNK信号通路,减轻大鼠离体心脏过度的内质网应激及其介导的凋亡,从而减轻MIRI.     

异丙肾上腺素对家兔心房钠尿肽分泌的影响

[目的]观察β肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素对心房钠尿肽(ANP)分泌的影响,探讨其机制.[方法]采用搏动的心房灌流模型及放射免疫技术观察异丙肾上腺素对ANP分泌、环磷酸腺苷(cAMP)逸出量及心房动力学变化的影响.[结果]异丙肾上腺素可明显抑制ANP的分泌,显著增加心房搏出量及环磷酸腺苷逸出量;蛋白激酶非选择性抑制剂Staurosporine可减缓异丙肾上腺素对ANP分泌的抑制效应.[结论]β肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素抑制ANP分泌作用由cAMP依赖性信号传导途径来实现.     

磷酸化JNK介导大肠杆菌诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡

目的研究大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡的机制以及特异性c-jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125的保护作用。方法分别用台盼蓝染色和P1标记流式细胞仪检测E.coli感染不同时间后U937细胞的死亡率及凋亡率；Western blot方法分析JNK信号转导通路的激活情况。结果E.coli可诱导U937细胞凋亡，并且具有时间依赖性，此凋亡过程可被JNK的阻断剂SP600125阻断；在此过程中，JNK在E.coli感染10min和20min时被激活并磷酸化。结论E.coli诱导的U937细胞凋亡依赖JNK信号转导通路；SP600125通过特异性地抑制JNK活性降低E.coli诱导的U937细胞凋亡率。     

内皮素及其受体对心脏细胞肥大与增殖的作用

目的观察内皮素-1(ET-1)及其受体(ETR)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的作用。方法体外乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞培养,一定浓度的ET-1作用细胞24h,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定细胞DNA、蛋白质合成,Bradford法测定细胞总蛋白含量,RT-PCR法测定心肌细胞心钠素(ANP)mRNA的表达;用针对ETA受体(ETAR)、ETB受体(ETBR)的特异性拮抗剂BQ123、BQ788分别阻断两个受体,观察两种受体的作用。结果ET-1显著促进心肌细胞和心脏成纤维细胞3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,ET-1的作用呈剂量依赖性,并且使心肌细胞ANP mRNA表达明显增加,ET-1的作用可被ETAR拮抗剂BQ123明显抑制,ETBR拮抗剂BQ788对此无影响。结论ET-1促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,ET-1的作用通过ETAR介导,ETBR对此无明显作用。     

低氧激活ERK／JNK通路促进Smad2／3蛋白磷酸化诱导小鼠心脏成纤维细胞表型转换的实验研究

目的研究体外低氧诱导小鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）向心脏肌成纤维细胞（cardiac myofibroblasts,CMFs）表型转换过程中,促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信号通路与Smad2／3蛋白磷酸化的关系。方法新生小鼠第1代CFs低氧（37℃、3％O2）无血清培养48h,免疫荧光检测α-SMA蛋白;新生小鼠CFs给予3种MAPK（ERK、JNK和p38）特异性抑制剂常氧培养1h,进行低氧培养30min,免疫印迹检测ERK、JNK、p38和Smad2／3蛋白磷酸化水平。结果①低氧显著上调新生小鼠CFs中α-SMA蛋白的表达;②低氧能显著地促进ERK、JNK和P38蛋白磷酸化,PD98059（ERK特异性抑制剂）、SP600125（JNK特异性抑制剂）和SB203580（P38特异性抑制剂）能抑制低氧诱导的ERK、JNK和P38蛋白的磷酸化;③PD98059（ERK特异性抑制剂）和SP600125（JNK特异性抑制剂）能抑制低氧诱导的Smad2／3蛋白的磷酸化,SB203580（P38特异性抑制剂）无此作用。结论①低氧可诱导小鼠CFs细胞发生表型转化为CMFs;②ERK和JNK信号通路能调控Smad2／3蛋白的磷酸化表达;③MAPK和Smad信号通路可能参与低氧诱导的小鼠CFs细胞的表型转化。     

肌浆网释放Ca2+对心房钠尿肽分泌的影响

目的 观察肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)释放Ca2+对心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)分泌的影响.方法 利用SR激活剂和阻断剂,采用搏动的离体心房灌流模型及放射免疫技术观察SR释放Ca2+对家兔心房ANP分泌的变化.结果 SR抑制剂Ryanodine明显促使心房ANP的分泌,同时显著抑制心房搏出量和心房搏动压,而SR激活剂咖啡因的作用与Ryanodine完全相反.心肌兴奋-收缩耦联脱敏剂2,3-丁二酮单肟(BDM)促使ANP的分泌,对心房搏出量和心房搏动压呈抑制效应.腺苷酸环化酶直接激活剂福司柯林明显抑制ANP分泌,同时显著增加cAMP逸出量和心房搏出量.阻断L-型Ca2+通道明显促进心房ANP的分泌,但未能改变咖啡因对ANP分泌的抑制效应.结论 阻断SK或L-型Ca2+通道使细胞内Ca2+浓度降低可促进ANP的分泌,而激活二者则抑制ANP分泌.     

埃他卡林通过c-JNK信号通路抑制缺氧诱导的人肺血管内皮细胞凋亡

目的:研究KATP通道开放剂埃他卡林在缺氧诱导的肺血管内皮细胞凋亡调节中的作用及机制?方法:细胞分组培养并经过药物及缺氧处理后,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法对细胞活性进行测定,同时采用Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,采用Western blot对JNK?磷酸化JNK?caspase-3等蛋白的表达进行检测?结果:缺氧可降低细胞活性,诱导肺动脉内皮细胞凋亡,而埃他卡林可抑制凋亡,这种细胞保护作用可被KATP拮抗剂5-HD阻断;埃他卡林可抑制缺氧引起的c-JNK通路的磷酸化激活,并抑制下游凋亡蛋白caspase-3的表达,与c-JNK抑制剂SP600125作用一致,而5-HD处理组的趋势则相反?结论:埃他卡林可通过开放KATP通道抑制缺氧诱导的肺动脉内皮细胞凋亡,这种保护机制涉及了对c-JNK通路及下游凋亡蛋白的调节?     

曲美他嗪对急性低压缺氧大鼠心肌损伤的保护作用

【目的】研究曲美他嗪(Trimetazidin,TMZ)对低压缺氧致大鼠心肌损伤的保护作用。【方法】将60只雄性SD大鼠随机分为常氧对照组、低压缺氧模型组、TMZ高、中、低剂量组分别给予20、10、5 mg/kg,每组12只。除常氧对照组外,其他组均应用低压氧舱模拟海拔7 000 m高原,持续12 h,建立高原缺氧模型。HE染色观察心肌组织形态学变化;比色法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性;放免法检测血浆内皮素-1(ET-1)、心钠素(ANP)含量。【结果】与低压缺氧模型组比较,HE染色显示,各剂量TMZ均可减轻大鼠低压缺氧造成的心肌损伤,TMZ高、中、低剂量组均可显著降低低压缺氧小鼠血浆LDH活性(P<0.01,中、低剂量TMZ P<0.05),减少血浆中ET-1及ANP含量(P<0.01)。【结论】TMZ对急性低压缺氧大鼠心肌的损伤具有显著的保护作用。