小胶质细胞介导帕金森病模型小鼠的炎症损伤

背景:研究表明帕金森病的黑质纹状体存在小胶质细胞的激活,但其释放炎症因子在帕金森病发病过程中的作用尚不明确。目的:观察小胶质细胞激活所释放的两种炎症因子整合素α及肿瘤坏死因子α在小鼠黑质部位的蛋白表达及酪氨酸羟化酶的蛋白表达。方法:将C57BL/6小鼠经腹腔注射百草枯(10mg/kg),设为帕金森病模型组,并设置对照组,观察两组小鼠行为活动。用高效液相法测定小鼠黑质纹状体多巴胺的含量。采用免疫组织化学法检测黑质部位酪氨酸羟化酶、整合素α及肿瘤坏死因子α蛋白表达。结果与结论:百草枯可造成帕金森病模型组小鼠运动减少,并伴有运动迟缓、震颤、探嗅、竖毛及尾巴硬类似于帕金森病样的行为表现,并且脑内黑质纹状体多巴胺含量降低(P<0.05),酪氨酸羟化酶蛋白表达降低(P<0.05),整合素α和肿瘤坏死因子α蛋白表达增加(P<0.05),肿瘤坏死因子α在模型组小鼠黑质纹状体有阳性表达,且主要分布在小胶质细胞上。结果表明小胶质细胞介导的炎症损伤参与了帕金森多巴胺能神经元的损害过程。     

川芎提取物对神经小胶质细胞缺氧损伤的影响及机制

目的分析川芎提取物对神经小胶质细胞缺氧损伤的影响及机制。方法采用无糖低氧方法构建神经小胶质细胞缺氧损伤模型,并用蛋白免疫印迹法验证,将神经小胶质细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、模型组及干预组。空白对照组于正常环境下用DMEM培养基中进行细胞培养,阴性对照组将川芎提取物(200μg/ml)置于正常培养基中进行处理,模型组于缺氧损伤状态下用DMEM培养基进行细胞培养,干预组将川芎提取物(200μg/ml)置于正常培养基后进行缺氧处理。根据CCK-8法对缺氧细胞活力进行观察,并用酶联免疫吸附试验法对乳酸脱氢酶(LDH)释放情况进行检测,根据蛋白免疫印迹法对低氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达水平进行检测,采用流式细胞分析仪对细胞增殖周期进行检测。结果随着缺氧时间的增加,各组神经小胶质细胞中HIF-1α的表达增多;相比空白对照组,模型组在缺氧48 h后细胞增殖能力显著降低(P 0. 05),而干预组细胞增殖能力显著高于模型组(P 0. 05)。相比空白对照组,模型组在缺氧48 h后神经小胶质细胞LDH释放量明显增多(P 0. 05);而空白对照组与阴性对照组LDH释放量的比较,并无显著差异(P 0. 05);干预组神经小胶质细胞LDH释放量明显少于模型组(P 0. 05)。经流式细胞仪检测(以相对细胞粒子数进行比较)结果发现,模型组神经小胶质细胞在缺氧48 h后G2+S期比率较空白对照组明显下降,而干预组神经小胶质细胞G2+S期比率较模型组明显升高(P 0. 05)。结论川芎提取物具有阻滞缺氧神经小胶质细胞LDH释放的作用,可提高缺氧神经小胶质细胞G2+S期比率,提示其可能具有保护神经小胶质细胞缺氧损伤的作用。     

CORM-3介导小胶质细胞ICAM-1抑制放射性脑损伤炎症反应

目的本研究旨在探讨水溶性一氧化碳分子释放剂(CORM-3)对放射性脑损伤炎症反应的影响及其分子机制。方法 BV2系小胶质细胞,随机分为正常对照组、单纯照射组和照射加CORM干预组,通过ELISA法测定各组照射后24 h炎症因子TNF-α、IL-1β的表达情况;采用免疫荧光法判断各组小胶质细胞激活形态,TUNEL染色比较各组共培养后原代神经元凋亡情况,并用Western blot法检测P38 MAPK通路对CORM干预放射后细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达的影响。结果 BV2细胞放射后24 h TNF-α、IL-1β表达明显增高;CORM-3可减轻放射后小胶质细胞活化程度及炎症表达,降低了放射后TUNEL阳性细胞百分比;CORM-3抑制了放射后BV2细胞磷酸化P38及ICAM-1蛋白的表达增加,而P38抑制剂进一步下调放射后BV2细胞ICAM-1的表达。结论 CORM-3通过P38 MAPK-ICAM-1通路抑制内源性小胶质细胞活化和外源性白细胞趋化的双重调控方式改善放射后脑损伤炎症反应,进而减轻放射后炎症所致神经元损伤,这为改善鼻咽癌放疗后脑损伤的治疗提供了有潜在前景的新途径。     

AGEs对视网膜小胶质细胞和T淋巴细胞免疫调控因子表达的影响

【目的】研究糖基化终末产物（AGEs）对视网膜小胶质细胞和T淋巴细胞中的免疫调控因子的作用及对糖尿病视网膜病变的免疫机制。【方法】测定在不同浓度AGEs培养基中体外培养的视网膜小胶质细胞和T淋巴细胞产生的免疫调控因子的mRNA水平。【结果】视网膜小胶质细胞中白介素－1β（IL-1β）,Ⅱ型主要组织相容性抗原复合物（MHCⅡ）,细胞间黏附分子－1（ICAM－1）,抗原递呈细胞共刺激分子CD80,CD86的mRNA表达量显著上升（P〈0．05）,与AGEs的浓度呈正相关。淋巴细胞中的干扰素γ（IFN－γ）,IL－8,单核细胞趋化蛋白－1（MCP-1）的表达量显著上升（P〈0．05）,与AGEs的浓度呈正相关。在100μg／mL浓度的AGEs培养条件下,与小胶质细胞共培养的T淋巴细胞中的IFN－γ,CD69,MCP－1表达量,相对T细胞在100μg／mL AGEs浓度下将单独培养的水平的上升更为显著。【结论】在AGEs模拟的糖尿病环境中,小胶质细胞的免疫活性显著提高,继而激活T淋巴细胞,成为糖尿病视网膜病原发病机制之一。     

α整合素表达及与骨肉瘤细胞恶性侵袭的关系

目的：探讨人骨肉瘤MG-63细胞表面纤联蛋白相关的Ot整合素的表达及其在肿瘤侵袭中的作用。 方法：实验于2004-01／08在南方医院中心实验室完成。人骨肉瘤细胞系MG-63在含体积分数为0．1的血清的DMEM培养基中培养。采用免疫细胞化学和流式细胞仪检测MG-63细胞表面α整合素的表达；基质胶／滤膜法检测MG-63细胞的侵袭能力；抗体及短肽RGD封闭法研究不同的纤联蛋白相关的α整合素在骨肉瘤侵袭过程中的作用。 结果：①α4，α5和αV整合素在MG-63细胞表面均有阳性表达。②α5和αV功能封闭抗体对MG-63细胞的侵袭作用无明显影响。③α4表达较弱，但α4封闭抗体和RGD短肽都可明显抑制MG-63细胞的恶性侵袭能力（P〈0．05）。④α4功能封闭抗体和RGD短肽联合应用与RGD单独应用对MG-63细胞侵袭的抑制作用无明显差别。 结论：不同α整合素受体对骨肉瘤细胞恶性侵袭的作用不同，α4整合素对MG-63细胞的恶性转移能力有明显的诱导作用，而α5和αV整合素在此作用中无明显的作用。除α4整合素以外，还有其他细胞表面受体可以通过与纤联蛋白的相互作用而诱导MG-63细胞的侵袭。     

水通道蛋白4基因沉默与体外培养星形胶质细胞的形态生长及其增殖效应

目的:研究短发夹环质粒载体对体外培养的星形胶质细胞水通道蛋白4表达的基因沉默效果。方法:实验于2003-12/2005-05在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。实验动物为SPF级Wistar新生3d大鼠20只,进行大鼠星形胶质细胞分离、培养。实验使用传至第三代的星形胶质细胞。构建特异性抑制水通道蛋白4表达的短发夹环质粒载体水通道蛋白4RNAipGenesil-2,将体外培养的星形胶质细胞分为水通道蛋白4基因沉默组、水通道蛋白4基因沉默对照组、脂质体组和正常对照组,运用脂质体法转染质粒载体,分别于转染后2,3,5,7d通过观察细胞形态和数量的改变,应用反转录-聚合酶连反应、免疫组织化学分别检测水通道蛋白4mRNA和蛋白的表达,水通透实验验证水通道蛋白4基因沉默后星形胶质细胞的水通透功能。结果:星形胶质细胞水通道蛋白4基因沉默后,水通道蛋白4mRNA及蛋白的表达呈进行性减少,至第7天水通道蛋白4mRNA和蛋白表达水平分别减少了(80.12±1.01)%和(80.2±2.54)%,细胞数量减少约60%,星形胶质细胞从扁平和多角形变成类纤维形胶质细胞。水通透实验证实经水通道蛋白4基因沉默的星形胶质细胞体积增大的速度慢于正常星形胶质细胞。结论:构建的水通道蛋白4基因沉默pGenesil-2质粒载体可抑制星形胶质细胞水通道蛋白4的表达;水通道蛋白4参与星形胶质细胞快速水转运过程;水通道蛋白4也对维持体外培养的星形胶质细胞形态、生长、增殖起重要作用。     

海马神经元条件培养液体外诱导大鼠骨髓间质干细胞向神经元样细胞和神经胶质样细胞的分化:与含b-FGF培养基和无血清培养基的比较(英文)

背景:目前关于骨髓间质干细胞能否向神经元方向分化的报道不多,且争论多集中在分化后的神经元是否仅具有神经元形态而不具有神经元功能.目的:探讨海马神经元条件培养液诱导大鼠骨髓间质干细胞向神经元样细胞和神经胶质样细胞分化的可能性.方法:将第5代大鼠骨髓间质干细胞分为4组:条件培养基组加入海马神经元和胶质细胞的培养液;b-FGF组加入含b-FGF的DMEM培养基;无血清培养组加入含Neurobasal和B27的无血清培养基;阴性对照组加入含胎牛血清的DMEM.各组诱导12,24 h后,应用免疫细胞化学染色行神经元特异性烯醇化酶、微管相关蛋白2、胶质纤维酸性蛋白的鉴定,Western-blot法检测细胞神经元特异性烯醇化酶、微管相关蛋白2和胶质纤维酸性蛋白的表达.结果与结论:诱导12,24 h后,条件培养基组、b-FGF组、无血清培养组骨髓间质充干细胞微管相关蛋白2、胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶均呈阳性表达,阴性对照组未见表达.与阴性对照组比较,诱导后24 h,条件培养基组、b-FGF组、无血清培养组微管相关蛋白2表达均明显增强(P < 0.05),且条件培养基组增强幅度显著高于另两组(P < 0.05);条件培养基组、b-FGF组、无血清培养组神经元特异性烯醇化酶及胶质纤维酸性蛋白表达无明显差异.结果证实海马神经元条件培养液可体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞,与含b-FGF的培养基和无血清培养基相比,海马神经元条件培养基诱导的神经元和神经胶质细胞阳性率最高.     

海马区星形胶质细胞培养上清液体外诱导人脂肪基质细胞向神经元样细胞的分化

目的:观察海马区星形胶质细胞培养上清液能否在体外诱导人脂肪基质细胞向神经元样细胞分化。方法:实验于2004-10/2005-06在华北煤炭医学院中心实验室完成。在无菌条件下从Wistar乳鼠分离出海马组织,从分离的海马组织中获得星形胶质细胞,并收集其培养上清液。取外科手术获得的人腹部皮下脂肪组织进行人脂肪基质细胞的原代培养。30例患者均知情同意。取第3代人脂肪基质细胞接种到培养孔中,预先放置无菌盖玻片的24孔培养板,制备细胞爬片或者接种到培养瓶中,细胞生长达50%～60%融合时,去除培养液,换为海马区星形胶质细胞培养上清诱导液进行诱导,对照组培养液为无血清培养基。倒置相差显微镜下连续观察细胞生长情况和形态变化,应用免疫细胞化学、鉴定神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白、神经细胞的特异性标志神经元特异性烯醇化酶、微管联合蛋白2和神经胶质细胞的特异性标志胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:①诱导培养第3天,部分人脂肪基质细胞开始变形,从原先的细长梭状细胞变成神经元样细胞,可见细胞伸出突起,多为双极或多极细胞。②刚分离接种的人脂肪基质细胞镜下呈圆形,悬浮状态,接种后24h内贴壁,并开始伸展,多呈梭形。1周后细胞融合成单层,排列出现方向性,但有少量圆形及卵圆形细胞混杂生长。③第4,5代人脂肪基质细胞在诱导48h后形态即开始发生变化,扁平的胞体较预诱导后逐渐回缩,向外伸出突起,72h后扁平的胞浆向胞核收缩,突起继续延长,以后随时间进展,具有典型神经细胞形态特点的细胞数量逐渐增多,形成双极或多极细胞。④免疫细胞化学检测人脂肪基质细胞诱导5d后发现有(10.5±3.7)%神经巢蛋白、(38.4±5.2)%胶质纤维酸性蛋白、(15.7±2.3)%神经元特异性烯醇化酶表达,未见微管联合蛋白2的表达。结论:海马区星形胶质细胞培养上清液可以在体外诱导人脂肪基质细胞向神经元样细胞方向分化。     

高压氧预处理对体外大鼠脑小胶质细胞产生细胞因子的影响

背景高压氧可以减轻脑组织的缺血再灌注损伤,这种作用与高压氧对小胶质细胞的调节作用有着密切的联系.目的探讨高压氧对体外大鼠脑小胶质细胞活性、分泌产生白细胞介素1、肿瘤坏死因子α和一氧化氮的影响.设计完全随机分组设计,对照实验.单位上海第二军医大学海医系潜水医学教研室、免疫教研室、病理教研室、实验动物中心.材料实验于1999-05/2000-01在解放军第二军医大学潜水医学实验室及免疫教研室完成.实验选用新生1日龄SD大鼠30只.方法[1]用消化法培养新生SD大鼠的脑组织小胶质细胞.非特异性酯酶染色及细胞免疫化学染色鉴定小胶质细胞.[2]原代小胶质细胞按2×105/孔浓度接种于48孔培养板,将小胶质细胞随机分以下5组对照组未经高压氧处理;高压氧(0.2 MPa 1 h)预适应3,7,10,14 d组.经各时程高压氧处理后,随机分成2大组,其中一组细胞培养液添加细菌脂多糖(激活小胶质细胞)1 mg/L,另一组则不添加.[3]白细胞介素1活性测定采用胸腺细胞增殖法.肿瘤坏死因子α活性测定采用L929细胞的细胞毒性试验.以Griess法测定亚硝酸的含量代表一氧化氮含量.[4]两样本比较采用未配对计量资料t检验.主要观察指标不同时程高压氧预处理后大鼠脑小胶质细胞在静息和激活不同状态下白细胞介素1、肿瘤坏死因子α活性和一氧化氮含量.结果SD大鼠30只均进入结果分析.[1]静息小胶质细胞细胞外液白细胞介素1、肿瘤坏死因子α活性和一氧化氮含量各组间差异不明显.[2]脂多糖激活的小胶质细胞细胞外液白细胞介素1活性和一氧化氮含量高压氧预处理10和14 d组明显低于对照组[10 d组0.409±0.014,(5.21±0.77)μmol/L;14 d组0.381±0.004,(4.93±1.02)μmol/L,P＜0.05].[3]脂多糖激活的小胶质细胞细胞外液肿瘤坏死因子活性高压氧预处理14 d组明显低于对照组[(51.20±1.13)%,(70.10±2.26)%,P＜0.05].结论0.2 MPa的高压氧预处理可抑制活化小胶质细胞分泌产生白细胞介素1、肿瘤坏死因子α和一氧化氮,但对于静息小胶质细胞无明显作用.     

栝楼桂枝汤对活化小胶质细胞抗炎作用的研究

目的：探讨栝楼桂枝汤对活化小胶质细胞抗炎因子的表达水平以及上游炎症信号通路的活化情况。方法：体外LPS刺激制备小胶质细胞的细胞炎症模型,用MTT实验筛选药物最佳干预浓度,经栝楼桂枝汤水提液处理后,应用ELISA法、RT-PCR法、Western-blotting法检测细胞抗炎因子的表达及相关炎症信号通路蛋白的表达水平。结果：栝楼桂枝汤水提液可显著促进LPS诱导的小胶质细胞中抗炎因子的表达,同时可上调相应通路蛋白的表达水平。结论：栝楼桂枝汤可通过TRIF信号通路发挥抗神经炎症的作用,为栝楼桂枝汤的临床应用提供基础实验依据。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察

失眠症又称不寐，指入睡困难，或维持睡眠障碍（易醒、早醒和再入睡困难）导致睡眠时间减少或睡眠质量下降，不能满足身体生理需要，明显影响日间社会功能和生活质量。现将星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察总结如下。