川芎嗪对发育期大鼠惊厥性脑损伤后海马caspase-1 mRNA表达的影响

目的:探讨发育期大鼠反复惊厥后海马caspase 1 mRNA表达及川芎嗪对其表达的影响。方法:162只20日龄健康SD大鼠随机分为对照组、惊厥组及川芎嗪组。采用三氟乙醚反复吸入(连续6次,每日1次)方法制作发育期大鼠惊厥模型。逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测各组动物反复惊厥后6 h及1、3、7 d时海马组织caspase 1 mRNA的表达,同时观察脑含水量的变化和光镜下海马区神经元病理改变,并对脑损伤进行病理半定量积分。结果:川芎嗪干预组各时间点caspase 1 mRNA表达较惊厥组均显著下调,脑含水量(7 d时除外)和脑损伤积分显著降低(P均<0.01),海马神经元水肿、变性、坏死均明显减轻。结论:川芎嗪能有效减轻惊厥性脑水肿和海马神经元病理损伤,其机制可能与抑制海马caspase 1 mRNA异常表达有关。     

川芎嗪对惊厥性脑损伤保护机制的研究进展

参考了近几年来的有关文献，介绍了川芎嗪在惊厥性脑损伤的研究进展，并论述了川芎嗪的应用前景。     

幼年大鼠惊厥性脑损伤白细胞介素-1β和白细胞介素-18的表达及川芎嗪干预的影响

目的探讨幼年大鼠反复惊厥后IL-1β和IL-18的表达及川芎嗪对其表达的影响。方法144只20日龄健康SD大鼠随机分为3组：对照组、惊厥组及川芎嗪干预组。通过三氟乙醚反复吸入(连续6次,每天1次)制作幼鼠惊厥动物模型。RT-PCR方法检测各组动物反复惊厥后6 h、1 d、3 d、7 d脑组织中IL-1β、IL-18 mRNA的表达,ELISA方法检测各时相点脑组织中IL-1β和IL-18蛋白表达,同时观察脑含水量变化。结果川芎嗪干预组各时间点脑组织IL- 1β、IL-18 mRNA和IL-1β、IL-18蛋白的表达较惊厥组显著下调(P＜0．05或P＜0．01),脑含水量较惊厥组显著降低(P＜0．01)。结论川芎嗪对幼鼠惊厥性脑损伤具有保护作用,其机制可能与抑制IL-1β、IL-18 mRNA及其蛋白的异常表达有关。     

川芎嗪对发育期大鼠惊厥性脑损伤海马ATP酶与脑含水量变化的影响

目的观察发育期大鼠反复惊厥后海马ATP酶与脑含水量的动态变化及川芎嗪干预对其的影响。方法162只20日龄健康sD大鼠随机分为3组：对照组、惊厥组及川芎嗪干预组。通过三氟乙醚反复吸入（连续6次，每天1次）制作发育期大鼠惊厥动物模型。取海马组织匀浆，检测各组动物反复惊厥后6h、1d、3d、7d海马组织中Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca2^＋-ATP酶的活性变化，同时观察脑含水量变化和光镜下海马区神经元病理改变。结果反复惊厥后6h、1d、3d海马Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶的活性均较对照组显著降低（P＜0．01），伴随脑含水量显著升高（P＜0．01），第7天三者与对照组相比较差异均无统计学意义（P＞0、05）。脑含水量变化与海马Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶的活性变化均呈显著负相关（前者r=-0．711，后者r=-0．673，P均＜0．01）。川芎嗪干预组海马神经元水肿、变性坏死明显减轻，各时间点Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶的活性较惊厥组显著升高（P＜0．05或P＜0、01），脑含水量显著降低（P＜0．01）。结论Na^＋K^＋ATP酶、Ca^2＋-ATP酶的活性降低与惊厥性脑水肿和海马神经元迟发性损害密切相关，川芎嗪对发育期惊厥性脑损伤的保护作用可能与提高海马Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶的活性有关。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时血红素氧化酶-1mRNA及其蛋白的表达

探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemia brain damage。HIBD)后海马区血红素氧化酶-1(heine oxygenase-1，HO-1)mRNA和蛋白表达的变化及作用。方法：7d龄sD仔鼠72只，完全随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交及免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO-1mRNA及蛋白阳性细胞数量的变化。结果：HIBD组右侧海马HO-1mRNA表达4h开始升高(42．8&;#177;6．1，t=25，P&;lt;0．05)，12h达高峰(85．7&;#177;6．4)，48h开始略有下降(67．7&;#177;6．1)，72h后(52．3&;#177;5．2)仍高于对照组(25．0&;#177;5．1，t=9．2，P&;lt;0．01)。HO-1蛋白的表达与HO-1 mRNA表达变化规律相一致。结论：HO-l mRNA及其蛋白表达的增加在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发病机制中有重要作用。     

脓毒症对大鼠海马区caspase-3表达的影响

目的 探讨脓毒症对大鼠海马区神经元的凋亡蛋白酶caspase-3表达的影响。 方法 80只30日龄健康雄性Wistar大鼠,随机分为盲肠结扎穿孔术（CLP） 组（n=50）和对照组（n=30）。CLP组采用CLP建立脓毒症模型,对照组行假手术不造成脓毒症模型。于手术后6、12、24 h,CLP组和对照组分别取10只大鼠,5只做神经行为学评分,另外5只处死取脑,采用蛋白免疫印迹法观察caspase-3的表达,术后24 h,两组各取3只大鼠,采用免疫荧光检测caspase-3的表达。 结果 对照组大鼠大脑海马区仅微量表达caspase-3,神经行为学评分较高。CLP组大鼠caspase-3的表达量于CLP后6 h就开始升高,24 h达高峰,均明显高于对照组（P＜0.05）,大鼠的神经行为学评分在CLP后6 h开始降低,并随着时间逐渐下降,均明显低于对照组（P＜0.05）。 结论 脓毒症脑损伤时大鼠的神经行为学评分降低,海马区神经元caspase-3表达上调,并随时间变化而波动。     

谷氨酸转运体mRNA在糖尿病大鼠脑损伤中的表达

目的探讨谷氨酸转运体(EAAT)在糖尿病脑损伤时表达情况及作用机制。方法 Wistar大鼠28只,随机分成2组(每组14只):对照组(常规饲料喂养)、模型组(高糖高脂饲料喂养+STZ注射诱导胰岛素抵抗),均自由进食进水,12h光照周期。饲养1个月后,测定血糖。6个月后以RT-PCR检测大鼠脑皮质EAAT-1、EAAT-2、EAAT-3的mRNA表达情况。结果糖尿病模型组血糖[(20.016±1.984)mmol/L]明显高于正常值(P<0.01)及对照组[(3.82±0.123)mmol/L,P<0.01]。对照组胰腺组织中可见大量胰岛细胞,而糖尿病模型组胰腺组织中胰岛细胞显著减少。模型组EAAT-3mRNA表达与对照组相比明显增加(P<0.01)。结论 EAAT-3高表达可能是糖尿病脑细胞损伤的主要机制。     

银杏叶提取物对惊厥性脑损伤大鼠天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响及意义

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）在惊厥性脑损伤发病机制中的作用及银杏叶提取物对脑损伤的可能保护机制。方法将20日龄健康SD大鼠108只随机分为3组：对照组、惊厥组及银杏叶提取物干预组。通过三氟乙醚反复吸人制备大鼠惊厥模型。干预组在每次惊厥后立即腹腔注射银杏叶提取物50mg／kg，12h后再重复注射1次，其他两组注射等量生理盐水。各组动物于末次惊厥后1、3和7d采用免疫组化法检测海马组织中caspase-3蛋白表达，采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测海马组织中caspase-3 mRNA表达。结果末次惊厥后1、3和7d海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较对照组显著升高，3d时达峰值（P均〈0．01）。银杏叶提取物干预组各时间点海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较惊厥组显著下调（P〈0．05或P〈0．01）。结论大鼠反复惊厥后海马caspase-3表达显著增高，提示caspase-3参与了惊厥性脑损伤的病理过程。银杏叶提取物能下调惊厥后海马caspase-3的异常表达，提示其对惊厥性脑损伤的保护机制可能与抑制海马caspase-3异常表达有关。     

银杏叶提取物对幼年期大鼠惊厥后海马caspase-3 FasL表达的影响

目的研究幼年大鼠反复惊厥后海马组织caspase-3、FasL表达的变化及银杏叶提取物干预对其的影响。方法108只加日龄健康SD大鼠随机分为三组：正常对照组、惊厥组及银杏叶提取物干预组，通过三氟乙醚反复吸入（每天1次，连续6d），制作幼年大鼠惊厥动物模型。用免疫组化（sP）法检测各组动物反复惊厥结束后1、3、7d海马组织中caspase-3和Fa8L蛋白的表达，RT—PCR方法检测各时相点海马组织中caspase-3mRNA的表达。结果反复惊厥结束后1、3、7d海马组织均有caspase-3、FasL的表达，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。银杏叶提取物干预组海马各时间点ca8pase-3mRNA及caspa8e-3、FasL蛋白的表达均较惊厥组显著下调（P〈0．05）。结论caspase-3、FasL参与了幼年期惊厥性脑损伤。银杏叶提取物对幼年期惊厥性脑损伤的保护机制，可能与抑制海马caspase-3、FasL的异常表达有关。     

弥漫性脑损伤大鼠肠道防御素-5 mRNA的表达

目的探讨弥漫性脑损伤后肠道防御素-5(RD-5)变化。方法大鼠32只,分为对照组(n=8),弥漫性脑损伤组(n=24),再分成3个亚组(24h、3d、7d)。观察回肠RD-5mRNA的表达,回肠肠黏膜的病理改变以及血液内毒素的变化。结果弥漫性脑损伤后24hRD-5mRNA的表达显著升高(P<0.01),伤后3d降低至正常水平以下。回肠肠黏膜损伤,血液内毒素伤后24h最高(P<0.01),3d至7d仍显著高于正常水平(P<0.01)。结论弥漫性脑损伤早期RD-5mRNA的表达增强可能是机体的一种保护性反应。     

发育期大鼠反复惊厥后海马组织NO、NOS变化及川芎嗪的干预研究

目的 探讨发育期大鼠反复惊厥后海马组织一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的变化及川芎嗪对其的影响，方法 三氟乙醚反复吸入（连续6次，每天1次）制成发育期大鼠惊厥动物模型，观察川芎嗪对反复惊厥后6h、1d、3d、7d海马组织NO含量、NOS活性及光镜下海马组织病理变化的影响。结果 ①反复惊厥后6h、ld、3d海马组织NO含量及NOS活性明显升高，与对照组相比有显著性差异（P〈0．01），第7天已恢复正常。②反复惊厥后6h海马神经细胞即有轻度水肿，第1～3天水肿、变性坏死明显，第7天有大量炎性细胞浸润、胶质细胞增生明显。③川芎嗪干预组海马组织病理变化明显改善．NO含量及NOS活性明显低于惊厥组，两组相比在第6h、1d、3d有显著差异（P〈0．01）。结论 反复惊厥发作可导致大鼠海马组织损伤，可能与NO大量生成，NOS活性明显增高有关。川芎嗪能改善惊厥后脑组织病理损伤，其机制可能与降低NO含量及NOS活性有关。     

反复惊厥幼鼠脑内氧化抗氧化水平和神经元凋亡

目的探讨反复惊厥后幼鼠脑内氧化、抗氧化能力平衡的变化和神经元凋亡的关系。方法96只20日龄健康SD大鼠随机分为两组:对照组及惊厥组。通过三氟乙醚反复吸入(连续6次,每天1次)制作发育期大鼠惊厥动物模型。检测各组动物反复惊厥后6h、1d、3d、7d海马组织MDA含量、SOD活性、T-AOC水平变化,同时原位末端标记法(TUNEL)进行大鼠海马神经元凋亡检测。结果反复惊厥后6h、1d、3d海马MDA含量均较对照组显著增高,SOD活性及T-AOC水平显著降低(P<0.01),皆以第1天改变最显著,第7天三者与对照组相比较差异均无统计学意义(P>0.05);而海马神经元凋亡却于反复惊厥后1d才显著增加,持续到惊厥后7d仍显著多于对照组(P<0.01)。结论反复惊厥后海马MDA含量显著增高,SOD活性、T-AOC水平显著降低,且三者的变化皆发生在神经元凋亡增多之前,提示氧化损伤、抗氧化能力下降可能参与惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生。     

促红细胞生成素对发育期小鼠脑损伤后神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的 研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对鹅膏蕈氨酸(ibotenic acid,Ibo)致发育期小鼠兴奋性脑损伤后神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响.方法 以144只健康雌性昆明小白鼠作为实验动物,其中7日龄(P7)、21日龄(p21)和42日龄(P42)小鼠各48只；再将同日龄小鼠随机(随机数字法)分为假手术组(n=16)、Ibo模型组(n=16)和EPO治疗组(n=16).采用颅内微量注射法向小鼠左侧海马注射Ibo 1μl(5μg)建立脑损伤模型.EPO治疗组小鼠海马注射Ibo后,腹腔注射5000 U/ (kg·d) EPO,连续3 d；Ibo模型组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水.各组小鼠在建模后3d处死,Nissl染色观察小鼠海马神经细胞凋亡病理改变；双抗体夹心ABC-ELISA法检测caspase-3含量变化；分光光度法检测caspase-3活性改变.结果 光学显微镜观察结果显示,与假手术组相比,Ibo模型组小鼠海马区神经细胞发生明显变性和死亡,神经细胞数量明显减少；EPO治疗组小鼠海马区神经细胞凋亡程度较轻.Ibo模型组与假手术组相比,caspase-3含量和活性明显升高(P ＜0.05)；EPO治疗组caspase-3含量和活性的升高幅度明显低于Ibo模型组(P＜0.05).结论 Ibo致脑损伤时,脑组织caspase-3的表达增强,导致神经细胞凋亡.EPO可减轻脑损伤后神经细胞凋亡,起到脑保护的作用,其机制可能与下调caspase-3的表达有关.     

川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的探讨中药川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法选用雄性Wistar大鼠25只,随机分为正常对照组(n=5)、脑缺血再灌注组(n=6)、尼莫地平组(n=7)及川芎嗪组(n=7)。正常对照组不做任何处理;余3组采用改良Zea Longa线栓法建立可再通脑缺血模型,模型成功建立后,各组大鼠腹腔分别注射0.9%氯化钠注射液、尼莫地平、川芎嗪;于脑缺血3 h和再灌注后48 h分别行神经功能评分。再灌注后48 h后测定各组大鼠脑血流。处死后对脑缺血再灌注组、尼莫地平组及川芎嗪组大鼠进行TTC染色计算脑梗死体积,并测定缺血区线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果缺血再灌注48 h后4组脑血流值两两比较差异均有统计学意义(P<0.01);尼莫地平组与川芎嗪组脑梗死神经功能恢复评分均低于给药前和缺血再灌注组,差异均有统计学意义(P<0.01),且川芎嗪组改善情况优于尼莫地平组(P<0.01);缺血再灌注各组大鼠脑梗死区相对体积组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。川芎嗪组大鼠脑组织线粒体SOD活性与其他缺血再灌注组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论川芎嗪具有抗氧自由基作用,可修复脑缺血再灌注损伤。     

参附注射液对脑再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的 探讨参附注射液(Shenfu injection,SF)对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)中脑神经元细胞凋亡及血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响,并探讨其可能的机制.方法 SD雄性大鼠42只,随机(随机数字法)分为假手术组(Sham组)、缺血一再灌注组(IR组)、参附注射液组(SF组),制造大脑中动脉阻塞模型,缺血2h后再灌注3h、6h.SF组于再灌注时腹腔注射参附注射液10ml/kg.光镜和电镜下观察脑组织神经细胞形态学变化,用Annexin-V-PI双染法通过流式细胞仪检测脑织凋亡细胞并计算凋亡率,应用RT-PCR技术检测HO-1.结果 IR组与Sham组相比,3、6h时点脑组织凋亡率明显增加(P＜0.01).SF组与IR组相比,SF组3、6h时点脑织凋亡率明显减少,差异均具有统计学意义(P＜O.O1),3、6h时点脑组织HO-1的表达显著增加(P＜0.01),脑组织结构损害明显减轻.结论 早期应用参附注射液可以诱导HO-1大量表达从而抑制细胞凋亡的发生,进而减轻脑组织损伤.     

坏死性胰腺炎所致大鼠肺损伤中乌司他丁对肺组织HO-1表达的影响

[目的] 探讨在大鼠坏死性胰腺炎（ANP）所致的肺损伤中乌司他丁（Ulinastatin UTI）对肺组织HO-1基因表达的影响。[方法]将大鼠分为Sham对照组、ANP组、乌司他丁预处理（UTI prevent）组和乌司他丁治疗（UTI treat）组。造模后12h取怖、胰腺组织常规HE染色，观察怖、胰腺组织损伤；取血后测定血清中淀粉酶含鼍；肺灌洗获得肺泡臣噬细胞（AM），培养后检测TNF-α水平；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测怖组织血红素氧合酶-1（HO-1）的表达；Western blot分析肺组织c-Jun磷酸化的情况。[结果] ANP组较Sham组TNF-α的水平显著升高，肺组织的HO-1表达和c-Jun磷酸化水平升高（P〈0．05）、UTI prevent组TNF-α的水平明湿降低，肺组织的HO-1表达和c-Jun磷酸化水平高于ANP组（P〈0．05）[结论]UT1减轻了大鼠ANP所致的肺损伤，其机制可能与肺组织HO-1基因表达升高有关。