组织因子小干扰RNA在预防支架内再狭窄的研究进展

冠状动脉支架置入术后再狭窄是经皮冠状动脉介入治疗领域研究的难点及热点,研究表明,组织因子在支架内再狭窄中发挥了重要作用;从基因层面,抑制组织因子表达可明显减少支架内再狭窄的发生。现就新兴的RNA干扰技术抑制组织因子在支架内再狭窄过程中的研究进展做一综述,期待更好地指导基础研究及临床治疗。     

内皮细胞表型改变对平滑肌细胞表型转换及迁移的作用

目的　观察内皮细胞表型改变对平滑肌细胞表型转换及迁移的作用。方法　建立Transwell共培养体系 ,将内皮细胞和平滑肌细胞分别接种于下室和上室 ,检测不同内皮表型对平滑肌细胞表型基因α SM actinmRNA表达及迁移的影响。结果　与内参照相比 ,融合生长内皮使平滑肌α SM actinmRNA表达增加 ,而对数生长内皮细胞使平滑肌α SM actinmRNA表达明显减少。对照组平滑肌细胞在基础状态下存在少量迁移 ,对数增殖内皮细胞组平滑肌迁移数比对照组增高约 4倍 (P <0 0 1) ,而融合生长内皮细胞组平滑肌迁移数仅为对照组的 0 5倍 (P <0 0 5)。结论　内皮细胞表型不同 ,对平滑肌细胞生物学特性的影响也不同 ,增殖期内皮明显减少平滑肌细胞表型基因α SM actinmR NA的表达、促进平滑肌表型向合成型转换和迁移     

Daily Exercise Enhances Acetylcholine-Induced Dilation in Mesenteric and Hindlimb Vasculature of Hypertensjve Rats

The effect of daily spontaneous running (DSR) on endothelial function was examined in spontaneously hypertensive rats (SHR). Following 8-     

血管内皮细胞对平滑肌细胞表型转化的影响

目的分析共培养时大鼠血管内皮细胞(VECs)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响。方法 VSMCs直接种植于培养板表面,VECs则种植于与VSMCs相对的浮胶底面。免疫荧光方法观察和鉴定VECs和VSMCs,RT-PCR和共聚焦显微镜分析表型相关基因的表达。结果原代培养的大鼠VECs呈铺路石样形态,vWF染色阳性。原代培养的大鼠VSMCs免疫荧光染色α-SMA呈阳性。RT-PCR检测结果表明,48h共培养组VSMCs的合成表型相关基因CRBP-1、Smemb的表达水平显著高于单独培养组,分别为1.4倍、1.5倍;72h达到峰值,分别为1.7倍、2.1倍,96h开始下降;共培养组中收缩表型标记物Smoothelin-B和SM-MHC的基因表达水平在48h、72h显著低于单独培养组,96hSmoothelin-B却高于单独培养组。单独培养组上述各基因的变化趋势不变或保持稳定。免疫荧光结果显示SM-MHC蛋白表达在共培养组中96h后从下降转为升高(P<0.05)。结论在共培养体系中,血管内皮细胞对血管平滑肌细胞表型转化的作用表现为先促进向合成型转化,96h后促进向收缩型转化。     

医源性胰岛素的心血管非治疗作用

医源性高胰岛素血症常见于使用大剂量外源性胰岛素,以获得接近正常血糖浓度的糖尿病患者,尤以2型糖尿病伴肥胖、胰岛素用量偏大者常见。随着研究的深入,高浓度胰岛素的心血管非治疗作用越来越引起研究人员的关注,现对医源性高胰岛素血症的心血管非治疗作用进行综述,并总结其可能的作用机制。     

外泌体microRNA在血管老化及其相关性疾病中的作用

血管老化是指血管结构和功能随增龄而发生的退行性改变,其影响多种疾病的发生、进展和预后。血管内皮细胞和血管平滑肌细胞是构成血管壁的主要细胞,是血管老化的重要细胞生物学基础。近年来,外泌体微小RNA(miRNA)与血管老化的关系成为研究热点。本综述将总结外泌体miRNA在血管内皮细胞和平滑肌细胞衰老过程中的作用,同时讨论外泌体miRNA在血管老化相关性疾病中的功能。     

动脉粥样硬化血管平滑肌细胞中干细胞因子mRNA的表达水平增加

目的：分析比较干细胞因子（ＳＣＦ）、ＴＧＦ－α及某些膜蛋白、核蛋白基因在不同病理状态下血管平滑肌细胞中的表达水平,探讨这些基因产物在动脉粥样硬化及高血压发病过程中所起的作用。方法：从维生素Ｄ３ 诱导动脉粥样硬化和一侧肾动脉结扎的高血压大鼠取出主动脉,在体外培养收集血管平滑肌细胞,抽提细胞总ＲＮＡ,以同位素标记的核酸探针作Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果：动脉粥样硬化及高血压血管平滑肌细胞中干细胞因子ｍ ＲＮＡ 表达比正常时高出许多倍,ＴＧＦα在高血压血管平滑肌细胞中有较高表达,而ｅｒｂＢ２ 表达无明显变化。结论：生长因子在血管的损伤修复中起重要作用,实验提示ＳＣＦ参与了动脉粥样硬化和高血压时动脉平滑肌细胞的增殖调控过程,可能通过干细胞因子这一系统参与血管损伤修复。这是干细胞因子除影响造血细胞等增殖外的又一重要功能     

血管钙化参与细胞相关研究的新进展

血管钙化是一个受细胞和基因主动调节的过程,涉及血管钙化促进因子和抑制因子的平衡失调。血管钙化常见于动脉粥样硬化晚期,与糖尿病、慢性肾病及衰老等疾病密切相关。血管细胞的成骨样分化是血管钙化的关键环节,但参与血管钙化调节的细胞来源尚不十分明确。目前认为调节血管钙化的细胞来源可能包括:血管平滑肌细胞、内皮细胞、周细胞、巨噬细胞及祖细胞等。本文现将相关进展作一简要综述。     

高胰岛素血症对平滑肌细胞基因异常甲基化的作用研究进展

调查发现70％的2型糖尿病患者合并动脉粥样硬化,进一步实验证实胰岛素导致血管平滑肌细胞表型转化是导致动脉粥样硬化发生的重要原因之一.平滑肌细胞表型转化已被证实与基因异常甲基化有关,最近发现高胰岛素可以导致平滑肌细胞基因异常甲基化,由此提出假设,血液中高浓度胰岛素可导致血管平滑肌细胞表型转化,最终导致动脉粥样硬化的发生.     

Atherosclerosis in the back yard

The phenomenon of neovascularization in atherosclerosis has been widely recognized through "the eyes of novel imaging techniques" in recent years. Oxidative stress, inflammation, and hypoxia have been implied as the underlying mechanisms. The pathophysiologic consequences and therapeutic implications of this neovascularization process for atherosclerosis have, however, remained challenging and controversial. In the current focus issue of the Journal, 4 articles and this commentary are devoted to this topic.     

Vasodilation and vascular control in contracting muscle of the aging human

There is accumulating evidence in humans that the control of blood flow to dynamically contracting skeletal muscle is altered with normal aging. Despite some inconsistencies in the literature, most healthy older subject groups studied to date (approximately 55-75 years) exhibited attenuated leg blood flow responses to moderate intensity leg exercise in comparison to younger (approximately 20-30 years) controls. In most cases, older subjects also have higher arterial perfusion pressures at rest and at any submaximal workload than their younger counterparts, suggesting a heightened level of vasoconstriction in the legs that could result from structural and/or functional alterations within the arterial vasculature. The influence of age on vasodilator responsiveness in the contracting limbs of humans remains an open question, with reports of blunted, similar, and augmented increases in local vascular conductance during graded exercise in older vs. younger adults. Recent results from the authors' laboratory suggest that the ability of vascular smooth muscle in the legs to dilate in response to physiological and pharmacological stimuli is relatively well preserved with advancing age in men; however, a sex difference may exist in that older estrogen-deficient women exhibit blunted leg vasodilator responses compared to younger women. Potential mechanisms underlying altered vascular control within the resistance vasculature of contracting muscles of older men and women remain to be determined, but could include (1) fewer, smaller, and/or stiffer vessels, (2) impaired endothelium-dependent vasodilation, (3) augmented sympathetic vasoconstriction, (4) alterations in metabolic or myogenic control, and (5) reduced effectiveness of the skeletal muscle pump. Systematic research involving both humans and animal models will be necessary to fully elucidate the mechanisms underlying compromised muscle blood flow in old age.     

衰老与动脉粥样硬化关系的研究进展

动脉粥样硬化及其相关疾病严重威胁人类的健康,其中衰老是重要的内在发病原因,可通过以下多种机制起致病作用:衰老引起血管内皮细胞功能障碍,影响受损内皮细胞的更新;衰老引起脂质代谢紊乱,诱导氧化型低密度脂蛋白产生增多;衰老还可刺激血管平滑肌细胞迁徙,使细胞表型发生改变,细胞增殖能力减退,导致斑块纤维帽变薄而增加易损性。目前端粒修复、线粒体功能矫正、修复受损DNA或增加抗衰老蛋白的表达等可延缓衰老的方法可有助于改善上述病理生理过程,从而防治动脉粥样硬化发生和发展。     

微小RNA对血管重塑的调节作用及研究进展

血管壁结构的适应性改变称为血管重塑,这种适应性改变可在动脉高血压、动脉瘤、血管介入术后再狭窄和动脉粥样硬化中出现。微小RNA(miR)对参与动脉血管重塑过程中的主要细胞因子有重要调节作用,其可能会促进或抑制血管壁结构的变化,调节平滑肌细胞(SMC)的表型,控制内皮细胞和巨噬细胞的炎症反应。不同类型的miR分别诱导SMC转化为收缩型或合成型;在动脉重塑过程中主要诱导SMC转化为合成型。因此,通过miR靶向重编程SMC表型可以调节重塑过程。此外,诱导内皮细胞重塑的刺激,如剪应力、血管紧张素Ⅱ、氧化低密度脂蛋白和细胞凋亡等,都是由miR介导的。例如,内皮细胞特异性miR-126在凋亡的内皮细胞的微泡中被转移,并在动脉粥样硬化的形成过程中发挥保护作用;特别是通过巨噬细胞的固有免疫系统的炎症反应,其会促进动脉重塑。miR-155诱导炎性细胞因子的表达;而miR-146a和miR-147则参与炎症的消除。然而,关于miR在血管重塑中的作用的数据仍然缺乏,因为这还需测试目前可获得的、高效的miR抑制剂对心血管疾病的治疗潜力。     

血小板衍生生长因子—BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞增殖的影响

目的 观察血小板衍生生长因子—BB对培养的人血管内皮细胞、兔平滑肌细胞和人成纤维细胞增殖的影响。方法 采用培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞，应用^3H—TdR掺入方法，观察血小板衍生生长因子—BB对三种细胞DNA合成的影响。结果 血小板衍生生长因子—BB可促进处于静止状态的三种细胞DNA的合成，并呈现出明显的浓度依赖关系，在30ng／ml的浓度时成纤维细胞DNA的合成达到高峰，在40ng／ml的浓度时内皮细胞、平滑肌细胞DNA的合成达到高峰。成纤维细胞、平滑肌细胞分别在PDCF-BB作用24h和36h年到DNA合成的高峰，内皮细胞在48h时DNA合成量最高。结论 血小板衍生生长因子—BB可明显促进培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞的增殖。     

腺病毒介导gax基因转染在培养的血管平滑肌细胞中的表达

目的 以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞(VSMC)，增强VSMC中gax基因的表达。方法 采用位置特异性重组方法构建携带大鼠gax基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV-gax)，经293细胞扩增，纯化制备高滴度病毒转染液；以病毒转染液常规转染VSMC后，应用RT—PCR、流式细胞仪和免疫细胞化学等方法分别检测VSMC中gax mRNA和蛋白质的表达。结果 流式细胞仪检测和免疫细胞化学染色均显示．AdCMV—gax转染VSMC后，VSMC的Gax蛋白表达率明显增高，转染后24小时即可达80％左右，高水平的表达可维持5天以上；AdCMV—gax转染前，PDGF—BB对gax基因转录和翻译水平的表达均有下调作用，AdCMV—gax转染后，无论有无PDGF—BB刺激，VSMC中gax基因的表达均比转染前显著增高。结论 腺病毒载体可有效地介导gax基因转染VSMC，并且表达为蛋白质。这有利于进一步研究gax基因对VSMC生物学行为的影响。     

化学合成小干扰核糖核酸抑制大鼠血管平滑肌细胞组织因子表达

目的:探讨血管壁组织因子小干扰核糖核酸(siRNA)对大鼠血管平滑肌细胞组织因子基因沉默作用的可行性和有效性.方法:设计并合成针对大鼠组织因子的25 bp双链siRNA分子.使用组织因子siRNA、对照siRNA转染大鼠血管平滑肌细胞,同时设立空白对照,实验共分6组(各组n=5).荧光显微镜观察转染效率.血小板源性生长因子-BB刺激血管平滑肌细胞后逆转录多聚酶链反应检测组织因子信使核糖核酸表达,免疫印迹和免疫组化检测组织因子蛋白表达.结果:siRNA成功转染到血管平滑肌细胞,转染效率约(90.0±2.3)%.3对候选siRNA筛选出基因抑制效率最高一对,与阴性对照组相比,转染24 h组织因子信使核糖核酸表达减少(86.0±0.6)%,转染48 h蛋白质印迹分析组织因子蛋白表达减少(92.0±1.0)%,同时免疫组化检测组织因子表达明显减弱.结论:RNA干扰能明显下调大鼠血管平滑肌细胞组织因子表达.     

反义c—myc寡核苷酸对AVP诱导鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨ＡＶＰ对鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响和反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸对ＡＶＰ作用的干预效应。方法：以培养ＳＤ大鼠ＶＳＭＣ为模型,采用培养细胞计数,蛋白质定量和细胞周期分析方法及ｍＲＮＡ打点杂交技术,动蛋白质定量和细胞周期分析方法及ｍＲＮＡ打点杂交技术,动态观察ＡＶＰ对ＶＳＭＣ增殖的影响和反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸的干预效果。结果：（１）ＡＶＰ促ＶＳＭＣ数目增加,在４８ｈ时与对照组比较,有统