脂质体转染bcl-2反义核酸对HL-60细胞凋亡的影响

目的人白血病细胞系ＨＬ－６０细胞高表达凋亡抑制基因ｂｃｌ－２蛋白，是研究细胞增殖、凋亡的良好模型。通过脂质体转染ｂｃｌ－２反义核酸，观察其对细胞增殖的抑制，对ｂｃｌ－２蛋白表达影响，及诱导细胞凋亡出现。方法ＨＬ－６０细胞在３７℃、５％ＣＯ２条件下，培养于含１５％小牛血清及含青、链霉素（每毫升各１００Ｕ）的ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中，细胞接种密度为１０７／Ｌ，反义核酸终浓度为５μｍｏｌ／Ｌ，反义核酸与脂质体比例为１．０ＯＤ：５０μｌ。脱离小牛血清转染２４ｈ，同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体＋无义组，再连续培养４天，做免疫组化，检测ｂｃｌ－２蛋白表达。提取总ＲＮＡ，行ＲＴ－ＰＣＲ分析ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达，以及透射电镜检查，观察细胞凋亡情况及脂质体转染情形。结果脂质体转染ｂｃｌ－２反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０细胞增殖，在转染后第五天最明显，经统计学处理，反义组与空白及无义对照组有显著性差别，脂质体转染反义核酸组与其余组均有统计上显著性差别。（２）降低ｂｃｌ－２蛋白表达水平，处理前ｂｃｌ－２免疫组化阳性率为６２±１．４８％，经转染ｂｃｌ－２反义核酸处理后，ｂｃｌ－２表达率为３２．５±１．     

成人急性淋巴细胞白血病分子生物学改变与临床治疗及预后关系的初步研究

应用多聚酶链反应技术检测了１４例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患者的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因、ＴＣＲγ基因重排及ＩｇＨ基因重排，结果发现，ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因阳性５例，阳性率３５．７％，其中４例为Ｂ－ＡＬＬ，１例ＴＣＲγ及ＩｇＨ基因重排均阴性。ｂｃｒ／ａｂｌ（＋）患者与ｂｃｒ／ａｂｌ（－）患者在临床表现方面无显著性差异，但ｂｃｒ／ａｂｌ（＋）患者治疗效果比ｂｃｒ／ａｂｌ（－）患者差。     

B型非何杰金淋巴瘤中bc1－2基因的重排

本文用两种１８染色体上特异性ＤＮＡ片段的探针和１４号染色体上免疫球旦白重链结合区探针，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法对２５例Ｂ型非何杰金淋巴瘤病例（Ｂ－ＮＨＬ）进行ｂｃ１－２基因重排的检测，并作了免疫表型和染色体核型检查。发现５６％（１０／１８例）的滤泡型ＮＨＬ和１／７例弥漫型ＮＨＬ病人出现了ｂｃ１－２基因重排。９１％（１０／１１例）重排病例的ｂｃｌ－２基因片段与重排的Ｉｇ重链结合区的片段一起移动。证实了ｔ（１４；１８）染色体易位。结果表明，ｂｃ１－２基因重排与滤泡型ＮＨＬ的发病有密切关系。     

细胞凋亡调控蛋白在人骨髓CD34造血细胞中的表达

通过程序性死亡（ＰＣＤ）的几个重要调控蛋白Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２在人正常骨髓高度纯化的ＣＤ３４＋造血细胞上的表达水平，了解正常生理状态下，造血细胞是否也存在着ＰＣＤ及其相关的调节机制。方法根据阳性选择策略建立了高效免疫磁性分离系统对人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞进行了富集，随之采用免疫荧光双标记二维流式细胞仪分析法检测三个ＰＣＤ相关调控蛋白在ＣＤ３４＋造血细胞上的表达。结果流式细胞仪及免疫桥酶联组化鉴定ＣＤ３４＋造血细胞的纯度达９０％～９５％。Ｐ５３在ＣＤ３４＋造血细胞上的表达为０．２％～０．８％、ｃ－ｍｙｃ为１．９％～１１．３％、ｂｃｌ－２为０．４％～１．５％；而在骨髓单个核细胞则分为０．１％～０．６％、０．１％～０．４％和０．１％～０．８％。结论正常生理状况下，造血细胞的生存、增殖、分化、成熟及死亡与Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２调控蛋白具有密切相关性，它们表达水平的高低决定了造血细胞在数量与质量上的平衡状态     

淋巴细胞性白血病／淋巴瘤bcl—2基因重排的研究

目的：探讨ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排的临床意义。方法：应用多聚酶链反应技术检测９种恶性淋巴瘤细胞系和不同类型淋巴系统恶性肿瘤临床标本中ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排情况。结果：２种细胞系,１例慢性淋巴细胞白血病及６例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）有ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排,其中,３６．４％滤泡型ＮＨＬ及１８．２％弥漫性ＮＨＬ有重排。ｂｃｌ－２基因断裂点绝大多数（８／９）位于主要断裂区（ＭＢＲ）。结论：ｂｃ     

大肠癌bcl—1基因蛋白表达及意义

探讨原癌基因ｂｃｌ－１表达与大肠癌的发生，发展及预后的关系。方法：应用可识别ｂｃｌ－１基因编码蛋白的单克隆抗体对４１例大肠癌组织进行了ＡＢＣ免疫组化染色，观察不同类型大肠癌组织ｂｃｌ－１的表达和分布，比较其阳性率。结果：ｎｃｌ－１基因编码蛋白在远癌“正常”大肠粘膜组织中未见表达；在大肠接口 组织中表达率高达４８．８％，明显高于正常大肠粘膜。     

fas／apo—1,bcl—2蛋白在急性髓系白血病细胞的表达特点及意义

用免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）分析了１９例急性髓系白血病（ＡＭＬ）骨髓细胞ｆａｓ／ａｐｏ－１，ｂｃｌ－２蛋白表达水平的变化，结果表明大部分ＡＭＬ骨髓过表达ｂｃｌ－２蛋白，部分病例表达ｆａｓ／ａｐｏ－１两者表达呈一定的负相关性，分析结果显示ｂｃｌ－２蛋白过表达所致的凋亡抑制状态是化疗耐药的主要机制之一，而ｆａｓ／ａｐｏ－１的表达是预后较好的特征。     

何杰金氏病中抗细胞凋亡基因bcl－2翻译产物的定位

采用高敏感多重ＰＡＰ免疫细胞化学技术，研究抗细胞凋亡基因ｂｃｌ－２在淋巴结何杰金氏病中的表达与分布。结果表明，２１例中有７例（３３％）可检出ｂｃｌ－２蛋白阳性的Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（Ｒ－Ｓ）细胞；其中２例（混合细胞型）尚含大量反应性淋巴滤泡，其生发中心也呈阳性反心。相反４例作为阳性对照的炎性淋巴滤泡增生中，ｂｃｌ－２蛋白主要分布于富含长寿命（ｌｏｎｇ－ｌｉｖｅｄ）Ｂ细胞的套区（ｍａｎｔｌｅｚｏｎｅ），而生发中心则均为阴性。结果提示，ｂｃｌ－２基因高表达介导的细胞凋亡障碍可能与Ｒ－Ｓ细胞发生有关。     

子宫内膜良恶性病变bcl－2，p53蛋白表达的免疫组化研究

用ＡＢＣ免疫组化方法观察８５例子宫内膜良恶性病变ｂｃｌ－２和ｐ５３蛋白的表达．结果：各型子官内膜增生ｂｃ１－２高表达，ｐ５３阴性表达。子宫内膜典型腺癌Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级ｂｃ１－２阳性分别为１６／２０例，５／８例和２／７例，显示ｂｃ１－２表达随典型腺癌分化程度降低而降低（Ｐ＜０．０５），ｐ５３阳性分别为３／２０Ｒ例，３／８例和４／７例，显示ｐ５３蛋白表达随典型腺癌分化程度降低而升高（Ｐ＜０．０５）子宫内膜癌ｂｃｌ－２和ｐ５３蛋白表达呈负相关。结果还提示，ｂｃ１－２和ｐ５３可能对宫内膜癌具有重要作用。     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL－60细胞中bcl－2基因表达的研究

目的：研究ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达并探索ｂｃｌ－２基因ｍＲＮＡ特异的反义寡聚脱氧核苷酸（反义ＯＤＮ）对ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因表达的影响．方法：采用细胞原位杂交和免疫细胞化学染色技术检测ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，人工合成ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ特异性反义ＯＤＮ片段与ＨＬ－６０细胞共培养，在作用一定时间后分别测定细胞中ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化．结果：ｂｃｌ－２基因在ＨＬ－６０细胞中既有转录水平的高表达，又有翻译水平的高表达，人工合成的反义ＯＤＮ片段在一定浓度范围内，作用一段时间后细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达无显著改变，而蛋白表达却呈现了显著下降，与浓度和作用时间呈正相关．结论：人工合成的反义ＯＤＮ片段可以抑制ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２的转录作用．在进行白血病基因治疗的实验研究中，ｂｃｌ－２基因可以作为基因治疗的一个有用的靶基因．     

bcl－2和P53蛋白在中枢神经系统肿瘤中的表达

应用免疫组化ＳＰ法观察了ｂｃｌ－２和Ｐ５３蛋白在７４例中枢神经系统肿瘤中的表达情况。结果表明：（１）ｂｃｌ－２蛋白的阳性表达率为１０．８％。（２）Ｐ５３蛋白在胶质瘤中均有表达，表达率不同，颅咽管瘤、垂体瘤、脑膜瘤、反应性胶质细胞增生和正常脑组织为阴性。据此本文认为：（１）ｂｃｌ－２基因在脑瘤发生过程中的作用有限。（２）Ｐ５３蛋白可能参与了脑胶质的发生、发展过程，且与肿瘤的组织分化程度有关。（３）ｂｃｌ－２和Ｐ５３两种癌蛋白表达无明显关系。     

抗凋亡基因bcl—x—1逆转录病毒表达载体的构建与鉴定

抗凋亡基因ｂｃｌ┐ｘ┐１逆转录病毒表达载体的构建与鉴定白庆咸１黄高升１陈协群２（１第四军医大学病理学教研室西安７１００３３２第四军医大学西京医院血液科）关键词凋亡ｂｃｌ－ｘ－１基因，逆转录病毒表达载体中图号Ｒ７５３ｂｃｌ－ｘ－１是ｂｃｌ－２家族的新成...     

霍奇金病RS／H细胞bcl—2,fas和cyclin D1蛋白表达及其相关关系

该文利用免疫组化检测了４０例霍奇金病（ＨＤ）／Ｈ细胞ｂｃｌ－２,ｒａｓ、ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达,并对其相关关系进行了研究。结果显示：ｂｃｌ－２和ｆａｓ蛋白一信号在ＲＳ／Ｈ细胞中主要呈浆膜型。在ＨＤ上亚型ＬＰ,ＮＳ,ＭＣ和ＬＤ中ｂｃｌ－２阳性细胞密度逐渐增高（Ｐ〈０．０５）,而ｆａｓ阳性细胞密度依次降低（Ｐ〈０．０５）;并呈明显负相关（ｒ＝－０．５６９０）。在４０例ＨＤ中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１阳性表达     

类风湿关节炎病人滑膜细胞增生与fas和bcl-2基因的表达

目的探讨类风湿关节炎（ＲＡ）病人滑膜细胞增生是否与细胞凋亡有关。方法通过体外转录合成,并标记ｆａｓ及其配体（ｆａｓＬ）和ｂｃｌ－２ＲＮＡ探针,应用原位杂交方法检测１９例滑膜组织的基因表达。用免疫组织化学方法检测蛋白表达。用ＤＮＡ电泳和流式细胞分析仪检测细胞凋亡。结果７例ＲＡ病人滑膜衬里层细胞明显增生,其中６例有ｆａｓｍＲＮＡ表达,５例表达ｂｃｌ－２,而ｆａｓＬｍＲ－ＮＡ在所有病例均不表达。在ＲＡ滑膜衬里层中,ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ总是伴随ｆａｓ而表达,且ｆａｓ和ｂｃｌ－２的表达率较骨性关节炎（ＯＡ）及正常对照者（ＮＣ）明显增高（Ｐ＜０．０５）。免疫组织化学结果表明,ｆａｓ和ｂｃｌ－２蛋白在滑膜衬里层有表达。从６例ＲＡ、４例ＯＡ病人及３例正常对照者滑膜组织中提取ＤＮＡ,仅１例ＯＡ病人可见典型的ＤＮＡ梯形图形。培养的ＲＡ和ＯＡ病人滑膜细胞经流式细胞分析仪检测,表明自发凋亡的细胞很少（＜５％）。结论ＲＡ病人滑膜细胞内不存在明显的细胞凋亡现象,ｂｃｌ－２过量表达可能抑制了ＲＡ滑膜细胞凋亡,是ＲＡ滑膜细胞增生的原因之一。     

bcl—2和P53蛋白在中枢神经系统肿瘤中的表达

应用免疫组化ＳＰ法观察了ｂｃｌ－２和Ｐ５３蛋白在７４例中枢神经系统肿瘤中的表达情况。结果表明；（１）ｂｃｌ－２蛋白的阳性表达率为１０．８％。（２）Ｐ５３蛋白在胶质瘤中均有表达。率不同，颅咽管瘤、垂体瘤、脑膜瘤、反庆性胶质细胞增生和正常脑组织的为阴性，据此文认为，（１）ｂｃｌ－２基因在笙 的作用有阴。９２）Ｐ５３蛋白可能参与了脑胶质发生、发展过程，且与肿瘤的组织分化程度有关。（３）ｂｃｌ０２和Ｐ５３     

皮肤鳞状细胞癌细胞周期调节因子的研究

采用免疫组化染色检测３０ 例皮肤鳞癌组织细胞周期蛋白Ｄ１（ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１） 、细胞周期蛋白依赖性激酶４（ＣＤＫ４） ,ｐ１６ 及Ｒｂ 的表达,阳性率依次为６６－７ ％ ,５３－３ ％ ,３３－３ ％ 和３６－７ ％ ;ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 及ＣＤＫ４ 于癌巢边缘细胞表达强于中央癌细胞,且其分化程度越低,阳性着色细胞越多,着色越深。提示细胞周期尤其Ｇ１ 期的正向调节因子的过度表达及负向调节因子的低表达在皮肤鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用。     

何杰金氏病中抗细胞凋亡基因bcl—2翻译产物的定位

采用高敏感多重ＰＡＰ免疫细胞化学技术，研究抗细胞凋亡基因ｂｃｌ－２在淋巴结何杰金氏病中的表达与分布。结果表明，２１例中有７例（３３％）可检出ｂｃｌ－２蛋白阳性的Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（Ｒ－Ｓ）细胞；其中２例（混合细胞型）尚含大量反应性淋巴滤泡，其生发中心也呈阳性反应。相反４例作为阳性对照的炎性淋巴滤泡增生中，ｂｃｌ－２蛋白主要分布于富含长寿命Ｂ细胞的套区，而生发中心则均为阴性。结果提示，ｂｃ     

bcl—x基因在白血病细胞中的表达及意义

目的：探讨ｂｃｌ－ｘ基因在白血病中的表达及意义，方法：采用免疫组织化学方法检测１９例白血病及４株白血病细胞中Ｂｃｌ－ｘ的表达，并用Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹法确定白血病细胞株中Ｂｃｌ－ｘ表达形式。结果：白血病中Ｂｃｌ－ｘ阳性率为７３．７％（１４／１９），４株白血病细胞均表达Ｂｃｌ－ｘ－１形式。结果：白血病细胞中Ｂｃｌ－ｘ１表达可能与白血病发病有关。     

鼻咽癌不同组织类型中bcl-2及c-myc的表达

目的 检测鼻咽癌不同组织类型中ｂｃｌ－２及ｃ－ｍｙｃ的表达,探讨其与鼻咽癌组织分化的关系。方法 按１９９１年,ＷＨＯ鼻咽癌组织分类标准,随机选取低分化鳞状细胞癌（ＰＤＳＣ）２７例、分化型非角化性癌（ＤＮＫＣ）３５例及未分化型非角化必副产品（ＵＮＫＣ）３８例活检存档标本,用免疫组化方法检测鼻咽癌细胞中ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ的表达。结果 ｂｃｌ－２在ＰＤＳＣ、ＤＮＫＣ及ＵＮＫＣ中的阳性率分别为８５．２％、８０％及８４．２％;ｃ－ｍｙｃ在ＰＤＳＣ、ＤＮＫＣ及ＵＮＫＣ中的阳必表达率８１．５％、７６．５％及７８．９％,其中包括细胞核或细胞浆染色阳性。ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ在ＰＤＳＣ、ＤＮＫＣ及ＵＮＫＣ中的表达差异无统计学意义（Ｐ〉０．０５）。结论 鼻咽癌不同组织类型中ｂｃｌ－２及ｃ－ｍｙｃ的表达无显著性差异,提示ｂｃｌ     

原发性中枢神经系统恶性淋巴瘤bcl-2基因产物的表达

本研究运用免疫组织化学方法，观察１６例中枢神经系统Ｂ细胞淋巴瘤ｂｃｌ－２蛋白的表达，结果表明，１２例滤泡中心性淋巴瘤ｂｃｌ－２蛋白阳性，１例淋巴浆细胞性淋巴瘤ｂｃｌ－２蛋白阳性，阳性率为８１．２５％。１２例ｂｃｌ－２蛋白阳性者中１０例表达为Ⅱ～Ⅲ级。阳性细胞分布主要呈弥漫性，亦有围绕血管呈袖套状分布。ｂｃｌ－２基因产物高表达介导的细胞凋亡障碍，可能与中枢神经系统淋巴瘤的发生有关。ｂｃｌ－２蛋白在中枢神经系统小圆细胞肿瘤的鉴别诊断中，不失为一种较为简便、可靠的技术