人化SCID鼠的建立及在人单抗制备中的应用

人化联合免疫缺陷鼠可作为人类免疫系统的模型，在检测人体免疫应答、提示ＨＩＶ感染、肿瘤以及自身免疫系统疾病等的发病机理和人单克隆抗体的制备等领域中得以广泛应用。本文概述了人化ＳＣＩＤ鼠的构建过程，并总结了其在蛊人单克隆抗体中的应用进展。     

人化SCID鼠的建立及其对脊髓灰质炎病毒的免疫应答

经测定鼠尾采血获取的血清,10只SCID鼠在所设实验室条件下饲养4个月前后均达到鼠IgG含量低于5μg/ml的合格标准,5只SCID鼠腹腔移植入2或4×10~7个人外周血淋巴细胞(hu—PBL),建立人化SCID(hu-PBLSCID)鼠,可在移植后4周和12周测到其血清中人IgG的存在,最高可达109μg/ml。以脊髓灰质炎Ⅰ型病毒(Polio—1 virus,Polio-1)作抗原免疫5只hu-PBL-SCID各5次,每鼠均能产生抗Polio-1的特异性人抗体,滴度最高达1:640,表明所建立的人化SCID鼠具备了一定的免疫应答能力。     

用人胎肝细胞重建SCID鼠人免疫系统

用人胎肝细胞重建重症联合免疫缺陷鼠(SCID)人免疫系统(SCID-hu)的初步结果。通过免疫组织化学及流式细胞术检测,腹腔内注射胎肝细胞第2周,SCID鼠脾内即可见人淋巴细胞,至第10周仍可测到CD20~ 、CD19~ 、CD3~ 人淋巴细胞;用HBx蛋白重复免疫SCID-hu鼠后第2周,外周血中可测到人源抗HBx抗体(IgG)。提示:人干细胞可在SCID鼠体内存活、分化、成熟,并能对抗原产生特异性的初次及再次免疫反应,腹腔内注射人胎肝细胞是一种较简便、实用的重建SCID-hu的方法,并可用于人源单抗、肿瘤及HIV等病毒感染性疾病的研究;SCID-hu可望解决人源单抗制备中B细胞来源困难的问题。     

人-鼠杂交瘤制备人单克隆抗体技术的研究

本文采用小鼠骨髓瘤细胞系(Sp2/0)与破伤风类毒素(TT)免疫的人外周血淋巴细胞(PBL)进行融合,对人—鼠杂交瘤细胞系制备人单克隆抗体的技术条件进行了探讨。按免疫时间(d)及体外刺激与否分为4组。结果表明:(1)PWM+TT体外刺激可导致B细胞总数增加,且融合率高,容易建成稳定分泌人单抗的细胞株。(2)经TT免疫的人PBL,6d就有抗TT抗体(IgG)的前体细胞出现。15d及21d时,抗TT抗体前体细胞的频率更高。(3)体内免疫7d及14d并分别经体外刺激的两组共建立5株阳性株。经双扩碓定IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏、传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人Ig的分泌量为0.42～1.15μg/ml。经染色体核型鉴定,碓认为人-鼠杂种细胞。     

SCID—hu人鼠嵌合模型在生物医学研究中的应用

将人的造血干细胞移植到重症联合免疫缺陷（Ｓｅｖｅｒｅ－ｃｏｍｂｉｎｃｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔＤｉｓｅａｓｅ，ＳＣＩＤ）小鼠体内，构建成ＳＣＩＤ－ｈｕ人鼠嵌合小鼠模型，该ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠模型的构建为在体内研究脸造血，免疫系统的病理机能及人造血干细胞基因治疗提供了有力的工具。     

人骨髓造血细胞经腹腔内和尾静脉注射移植SCID鼠的研究

目的 :比较腹腔内与尾静脉注射对SCID鼠进行异种骨髓移植的体内植入能力及GVHD的发生情况 ,为异种骨髓移植构建银屑病动物模型奠定基础。方法 :密度梯度离心法分离正常人骨髓单个核细胞 (BMMNC) ,以 4× 10 7的剂量分别经尾静脉和腹腔注射移植于经γ射线预照射的SCID鼠 ,移植后观察GVHD反应及外周血白细胞恢复动力学 ,并采用流式细胞术检测小鼠外周血及骨髓中人源性CD4 5 + 细胞比例 ,观察嵌合状态。结果 :单纯尾静脉注射移植组 ,在移植后 2周即出现明显GVHD症状 ,12周仅存活 1例 ;尾静脉注射结合CsA +MTX处理组 ,个别小鼠出现轻度GVHD表现 ,12周存活率 80 % (8 10 ) ;而经腹腔内注射者移植后出现轻度GVHD症状 ,之后逐渐恢复正常 ,12周存活率 70 % (7 10 )。移植后外周血白细胞动力学恢复情况、外周血及骨髓中人CD4 5 + 细胞比例 ,尾静脉注射结合CsA +MTX处理者与经腹膜腔内注射者二组间比较无显著性差异。结论 :人骨髓造血细胞可以顺利地由SCID鼠腹腔归巢到骨髓造血组织 ,并能重建骨髓造血 ,腹腔内注射的移植方式不影响植入能力 ,既可达到骨髓移植的目的 ,又可减少GVHD的发生及反应强度     

SCID小鼠-人白血病模型在白血病研究中的应用新进展

本文综述了白血病细胞在重症联合免疫缺陷（severe combined immunodetlciency,SOD）小鼠体内的增殖、分化及发病机制的研究进展，并介绍了SCID小鼠．白血病模型在白血病发病学、白血病细胞生物学、临床诊疗措施和病人预后判断等方面的可能性应用价值，SCID小鼠-人白血病模型为白血病的深入研究提供了新的手段。     

SCID小鼠-人白血病模型在白血病研究中的应用新进展

本文综述了白血病细胞在重症联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠体内的增殖、分化及发病机制的研究进展,并介绍了SCID小鼠-白血病模型在白血病发病学、白血病细胞生物学、临床诊疗措施和病人预后判断等方面的可能性应用价值,SCID小鼠-人白血病模型为白血病的深入研究提供了新的手段。     

体外免疫建立分泌卵巢癌反应性单克隆IgG人—鼠杂交瘤

用正丁醇提取的人卵巢癌细胞ａｏ１０／１７抗原，置于含免疫反应剂的无血清培基中免疫人脾细胞。经融合、筛选和克隆化，建立了９株分泌人源性单克隆ＩｇＧ抗体（ＨｍＡｂ）的人－鼠杂交瘤细胞系ＡＦ１～ＡＦ９。酶标抗体竞争抑制试验表明，其中ＨｍＡｂＡＦ５和ＡＦ８能识别卵巢癌抗原分子上的不同表位；杂交瘤细胞系所分泌的ＨｍＡｂ的效价高，所识别的抗原表达于卵巢癌细胞的表面     

Hu—TLC—SCID小鼠的建立及其对2型登革病毒的免疫应答

利用２型登革病毒（ＤＶ２）体外免疫人扁桃腺淋巴细胞（Ｈｕ－ＴＬＣ）移植给ＳＣＩＤ小鼠，以建立Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠。并用不同剂量灭活ＤＶ２加强免疫，观察小鼠对ＤＶ２的免疫应答。结果表明，移植Ｈｕ－ＴＬＣ后第２周起，可在Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠血清中检出入ＩｇＧ，最高达４１２．８６μｇ／ｍｌ。移植后次日用不同剂量灭活ＤＶ２加强免疫，每２周加强１次，首次加强免疫后第２周，Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠血清中出现抗ＤＶ２特异性人ＩｇＭ；第４周起有特异性人ＩｇＧ产生，最高达１：６４００。其含量和产生动态与抗原量有关。     

重组人源细胞珠蛋白单抗制备及检测方法建立

目的制备重组人源细胞珠蛋白（recombinanthumanCytoglobin,rhCygb）单克隆抗体,并建立检测该蛋白双抗体夹心ELISA法,为下一步研究rhCygb药代动力学做准备。方法用纯化的rhCygb免疫BALB/c小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法获得抗rhCygb的单克隆抗体杂交瘤细胞,间接ELISA法筛选制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法。结果筛选获取了稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过抗原表位相加法实验获得5株表位不同的细胞株,Western-blotting验证能与rhCygb特异性结合,间接ELISA法验证其不与本实验室制备的其它PET28a-BL21蛋白及BL21裂解液发生交叉反应。本方法灵敏度为1.25ng/ml,在浓度为10～1250ng/ml时,线性关系良好,相关性达0.9931,实验内和实验间平均变异系数分别为6.2%和10.92%。结论成功建立了灵敏度好、特异性高的双抗体夹心法,为下一步研究rhCygb药代动力学奠定了基础。     

人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC—1的建立及其在人单克隆抗体制备中的应用

本文报告在国内首次建立的一株能用于制备人源性单克隆抗体(以下简称人单抗)的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1。FMC-1对8-偶氮鸟嘌呤及鸟本苷具有抵抗性,对HAT培基敏感。细胞倍增时间为24～36小时,无人I_(?)或其轻重链的合成及分泌。目前已传代至136代,细胞中的人染色体稳定。经与人胃痛周围淋巴结的淋巴细胞再次杂交,获得两株人鼠人杂交瘤即HGO_3和HMG_7,在体外传代已6个月,抗体分泌稳定。其中HGO_3分泌抗胃癌的人单抗。HMG_7是经体外致敏人淋巴细胞与FMC-1融合获得的一株杂交瘤,能分泌针对鼠抗人胃癌单抗MG_7的人单抗。两株杂交瘤1×10~6细胞在24小时内的抗体分泌量达25μg～50μg/ml.初步认为FMC-1是一值得推荐用于人单抗制备的种间骨髓瘤细胞系。     

SCID-hu人鼠嵌合模型在生物医学研究中的应用

将人的造血干细胞移植到重症联合免疫缺陷（Ｓｅｖｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，ＳＣＩＤ） 小鼠体内，构建成ＳＣＩＤｈｕ 人鼠嵌合小鼠模型。该ＳＣＩＤｈｕ 小鼠模型的构建为在体内研究人造血、免疫系统的病理生理机能及人造血干细胞基因治疗提供了有力的工具。     

单克隆抗体——从鼠到人

单克隆抗体的产生己经有 2 0多年的历史 ,但在其研制和应用的进程中忽冷忽热 ,本文介绍了一种新的产生人单抗的技术路线———新的转基因鼠Xenomouse ,为人单抗的制备和应用带来新的希望。     

抗TNF-α人-鼠嵌合抗体的构建及表达

目的：构建和表达抗ＴＮＦ－α人－鼠嵌合抗体。方法：将抗ＴＮＦ－α鼠单抗Ｚ８的轻、重链可变区基因插入到含有人ｋ链和ＩｇＧ１重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人－鼠嵌合抗体真核表达载体转染真核细胞,通过ＥＬＩＳＡ,ＲＴ－ＰＣＲ、免疫印迹检测ＴＮＦ－α的活性。用Ｌ９２９细胞检测嵌合抗体体外中和ＴＮＦ－α的活性。结果：ＥＬＩＳＡ鉴定结果表明该嵌合抗体与ＴＮＦ－α特异性     

人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1的建立及在人单抗制备中的应用

本文报告在国内首次建立的一株能用于制备人源性单抗的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1。FMC-1对8-偶氮鸟嘌呤及鸟本苷具有抗药性,最大耐受剂量分别可达64ng/ml和1×10~(-4)