组蛋白甲基转移酶EZH2在头颈恶性肿瘤中的作用研究进展

果蝇Zeste基因增强子人类同源物EZH2是多梳抑制复合物2的催化亚基之一,具有组蛋白甲基转移酶的作用,通过甲基化组蛋白3第27位赖氨酸参与对目的 基因的负性表观遗传调控.既往研究表明,EZH2在头颈恶性肿瘤组织中高表达,且与肿瘤发生发展、侵袭转移和预后不良密切相关,因此EZH2有望成为治疗头颈恶性肿瘤新的分子靶点.本...     

MGMT和EGFR蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨喉鳞状细胞癌组织中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达与临床病理特征及其相互之间的关系,研究其在肿瘤发生发展以及治疗中的作用。 方法 采用免疫组织化学染色法检测MGMT、EGFR的表达,分析103例喉癌组织标本与临床病理特征的关系。 结果 MGMT的表达与分化程度、T分期以及临床分期呈正相关(χ2为13.302、8.394、11.403,P值分别为0.001、0.039、0.010<0.05);EGFR的表达与T分期以及临床分期呈正相关(χ2为14.933、16.603,P值分别为0.002、 0.001<0.05)。分层分析发现,MGMT、EGFR 两者的表达强度存在正相关(χ2=5.369, P=0.019<0.05)。 结论 喉鳞状细胞癌中 MGMT、EGFR的表达与T分期、临床分期均有相关性,测定两者的表达水平可评估喉鳞状细胞癌的恶性程度并指导喉癌的治疗。     

二氟甲基鸟氨酸（DFMO）引起的迟发性可逆性听力下降

DFMO是一种化学抗癌药 ,通过阻断鸟氨酸脱羧酶抑制多氨合成。早在 80年代就发现该药能引起听力下降 ,但停药一段时间后听力可基本恢复。该作者通过动物实验 ,研究 DFMO引起耳聋的特点以及该药致聋机理。该作者设计 3个实验 ,实验 1将动物分成 3组 ,对照组皮下注射生理盐水 ,实验组分为 5 0 0 mg/ kg/ d DF-MO和 10 0 0 mg/ kg/ d DFMO两组 ,从第 7天开始连续用药 14天。实验 2将动物分为生理盐水组和 10 0 0 mg/kg/ d DFMO组 ,从第 1天开始连续用药 2 0天。实验 3将动物分实验组 10 0 0 mg/ kg/ d DFMO和生理盐水组 ,从第 3天开始…     

N-甲基-D-天冬氨酸受体与水杨酸耳毒性

N-甲基-D-天冬氨酸受体属于离子型谷氨酸盐受体,是一种具有多种调控位点并对Ca2+高度通透的双重门控通道,它可以通过不同亚基的选择性表达改变自身的结构和功能,影响突触的可塑性.水杨酸类药物是临床常用的解热、镇痛及抗风湿药物.国内外大量的研究证明水杨酸具有耳毒性,表现为可逆性的感音神经性聋和耳鸣,但其具体的机制目前尚不明确.近年来研究认为,耳鸣与听觉中枢的可塑性有关.     

组蛋白甲基转移酶EZH2在头颈恶性肿瘤中的作用研究进展[综述]

果蝇Zeste基因增强子人类同源物EZH2是多梳抑制复合物2的催化亚基之一,具有组蛋白甲基转移酶的作用,通过甲基化组蛋白3第27位赖氨酸参与对目的基因的负性表观遗传调控。既往研究表明,EZH2在头颈恶性肿瘤组织中高表达,且与肿瘤发生发展、侵袭转移和预后不良密切相关,因此EZH2有望成为治疗头颈恶性肿瘤新的分子靶点。本文就EZH2的结构与功能,EZH2在头颈恶性肿瘤的作用机制做一综述。     

小鼠前庭神经核内N-甲基-D-天冬氨酸受体定位和发育

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D- aspartate,NMDA)受体亚基NMDAR1和NMDAR2A/B在小鼠前庭神经核的细胞学定位和生后发育特征。方法免疫组织化学染色方法检测谷氨酸受体在小鼠前庭神经核的细胞学定位和生后发育特征。结果NMDAR1和NMDAR2A/B免疫反应产物丰富的分布在前庭神经上核、外侧核及部分下核、内侧核,主要定位于神经元胞体、树突和轴突样纤维终末上。生后早期的NMDAR1和NMDAR2A/B表达具有明显的动态变化,生后7天(P7)的表达微弱,随后逐渐上调,至P21达高峰,然后维持此水平。结论NMDAR1和NMDAR2A/B是构成前庭神经元功能性NMDA受体的重要亚基,NMDA受体可能参与小鼠出生后神经元成熟调控过程。     

TET基因与5-羟甲基胞嘧啶在慢性鼻窦炎中的表达及意义

目的:探讨TET基因和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)在慢性鼻窦炎(CRS)中的表达及临床意义.方法:获取20例CRS伴鼻息肉患者的息肉组织(CRSwNP组),20例CRS不伴鼻息肉患者的钩突组织(CRSsNP组)和10例鼻中隔偏曲患者的中鼻甲组织(对照组).通过免疫荧光技术、Western-Blot和实时荧光定量PCR检...     

3-甲基腺嘌呤对人下咽癌细胞的放射增敏效应及其机制研究

目的 探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenire,3-MA)对人下咽癌细胞(Fadu 细胞)的放射增敏作用及其机制.方法 用5mmol/L的3-MA联合2 Gy、4 Gy剂量X线照射作用于Fadu细胞,克隆形成实验和单细胞凝胶电泳技术分别检测各处理组的细胞存活率(克隆形成率)和DNA损伤程度(尾矩),采用两组独立样本的t检验分析各组间差异；用不同浓度的3-MA(1、2、5、10 mmol/L)分别作用于细胞,流式细胞仪检测各组细胞周期并应用单因素方差分析比较组间差异.Western blot检测各组p62和CyclinB1的蛋白表达水平.结果 单独使用3-MA对细胞存活率和DNA 损伤程度无明显影响；与不加3-MA组相比,加3-MA组细胞在2 Gy和4 Gy剂量的X线作用下细胞存活率显著降低(t值分别为13.41、13.98,P值均＜0.001),DNA损伤程度明显加重(t值分别为7.07、6.91,P值均＜0.001).对照组和1、2、5、10 mmol/L浓度3-MA作用后的G2/M期细胞百分数分别为(17.10±1.20)％、(23.30±2.36)％、(39.90±3.12)％、(58.47±1.65)％、(76.13±3.51)％,组间差异有统计学意义(F=278.4,P＜0.001).Western blot方法检测,3-MA作用于细胞后,p62蛋白表达水平呈剂量依赖性上升,CyclinB1蛋白表达水平呈剂量依赖性下降.结论 自噬抑制剂3-MA能加强X线对人下咽癌细胞的致DNA损伤作用和引起G2/M期阻滞,从而具有放射增敏效应.     

外周听觉改变致听皮质突触N-甲基D-天冬氨酸受体亚基表达变化

目的观察听觉剥夺后重塑模型中听皮质突触N-甲基D-天冬氨酸受体亚基(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B)表达变化。方法采用清洁级SD大鼠90只,分成听觉剥夺组、听觉剥夺后重塑组及对照组,Optiprep沉降梯度超速离心从初级听皮质提取高度纯化的突触体后,采用Western blotting蛋白质印迹检测技术对生后听觉剥夺14天组、28天组、42天组、听觉剥夺7天后再给予纯声暴露的各实验组听皮质突触体NR2B表达进行比较。结果听觉剥夺使生后14天组和28天组动物听皮层NR2B表达水平明显下降(P<0.05),听觉剥夺7天后再给予纯声暴露则又使NR2B表达水平明显提高(P<0.05),呈现双向调节趋势。听觉剥夺和纯声暴露对生后42天组成熟大鼠听皮层NR2B表达不再产生明显调节作用(P>0.05)。结论在大鼠生后发育关键期,听觉剥夺、可改变听皮层NMDA受体NR2B蛋白表达水平;为研究感觉功能发育可塑性机制提供了重要实验资料。     

蛋白酪氨酸磷酸酶基因启动子过甲基化与喉癌的关系

目的：探讨蛋白酪氨酸磷酸酶（PTEN）基因启动子过甲基化与喉癌的关系。方法：采用过甲基化特异性PCR和RT-PCR法分析喉癌（喉癌组）及正常喉组织（对照组）PTEN基因启动子过甲基化及其mRNA表达情况。结果：喉癌组有16例（40．0％）PTEN基因启动子过甲基化;对照组未发现过甲基化。对照组PTEN基因mRNA的高、中、低表达率及阴性率分别为77．8％（7／9）、22．2％（2／9）、0和0,淋巴结转移组分别为26．7％（4／15）、33．3％（5／15）、26．7％（4／15）和13．3％（2／15）,两组比较,PTEN mRNA表达差异有统计学意义（P〈0．05）。病理高分化PTEN基因mRNA高、中、低表达率及阴性率分别为60．0％（6／10）、30．0％（3／10）、10．0％（1／10）和0,病理低分化mRNA分别为16．7％（2／12）、25．0％（3／12）、41．7％（5／12）和16．7％（2／12）,两者比较,其mRNA表达差异有统计学意义（P〈O．05）。PTEN基因在喉癌组织中,mRNA呈现低表达的10例中有7例（70．0％）出现启动子过甲基化,mRNA呈现高表达的17例中仅有4例（23．5％）出现启动子过甲基化;PTEN基因mRNA高表达与低表达在启动子过甲基化率的差异有统计学意义（P〈O．05）。结论：PTEN基因启动子过甲基化是该基因在喉癌中失活的原因之一,PTEN基因表达下降与喉癌淋巴结转移及病理低分化有关。     

喉癌组织RKIP基因甲基化表达调控研究

摘要：目的检测喉癌组织中Raf 1激酶抑制蛋白（ Raf 1 kinase inhibitor protein, RKIP ）基因启动子区域的甲基化状态及其蛋白表达情况,并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP ）技术及免疫组化方法检测53例喉癌组织及34例癌旁组织中RKIP基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况。结果喉癌及癌旁组织中RKIP基因启动子甲基化发生率分别为17%、3%,两者比较差异具有统计学意义（P=0.045）。结论RKIP基因启动子区高甲基化状态可能是造成喉癌组织中RKIP表达缺失的分子机制之一,RKIP蛋白表达缺失与喉癌的发生发展及转移有关。     

Stathmin基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 观察stathmin基因和蛋白质在喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)中的表达情况,探讨stathmin基因与喉鳞癌生物学行为的关系及临床意义,进一步认识喉鳞癌发生和发展的分子机制.方法选取2005年3月至2006年4月的38例喉鳞癌患者,术中从肿瘤中心部位取癌组织(实验组),在肿瘤边缘外1.0cm部位取癌旁正常组织(对照组).应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析38例患者的喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin基因mRNA的表达水平,冰冻切片免疫组织化学方法检测喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin蛋白的表达情况.结果 RT-PCR结果显示,stathmin基因mRNA在38例喉癌患者的喉癌组织和癌旁正常组织均呈阳性表达;经半定量分析,stathmin mRNA在喉癌组织中的表达水平明显高于在癌旁正常组织的表达水平(t=9.655,P＜0.05).免疫组织化学发现,stathmin蛋白在26例(26/38,68.4%)患者的喉癌组织呈阳性表达,在13例(13/38,34.2%)患者的癌旁正常组织呈弱阳性表达;stathmin蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于在癌旁正常组织的阳性表达率(x2=8.901,P＜0.05).同时发现,stathmin mRNA的表达水平和stathmin蛋白的阳性表达率在Ⅲ期和Ⅳ期喉癌组明显高于Ⅰ期和Ⅱ期病例组(t=6.284,x2=5.810,P＜0.05),有颈部淋巴转移组明显高于无转移组(t=9.350,x2=6.923,P＜0.05).结论 stathmin基因和蛋白在喉鳞癌中的表达明显高于癌旁正常组织,在中晚期喉鳞癌中的表达明显高于早期喉鳞癌,并且与颈淋巴转移有关.stathmin基因与喉鳞癌的发生和发展均有密切关系,并可能与喉癌的预后有关.     

程序性细胞死亡因子5在喉鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨程序性细胞死亡因子5（PDCD5）在喉鳞状细胞癌组织中的表达及与临床病理指标的相关性。方法 采用逆转录多聚酶链式反应（RT PCR）技术和Western blot免疫印记技术检测41例喉鳞状细胞癌及29例癌旁正常黏膜组织中PDCD5mRNA和蛋白的表达情况,进一步应用免疫组化方法验证其在喉鳞状细胞癌组织中的定位表达。结果 PDCD5 mRNA喉鳞状细胞癌组织中较癌旁正常组织的表达明显降低,表达差异有统计学意义（P=0.006）;Western blot结果显示PDCD5 蛋白在喉鳞状细胞癌组织中较癌旁正常组织的表达明显降低,表达差异有统计学意义（P=0.012）。肿瘤组织中PDCD5 mRNA表达缺失与PDCD5蛋白表达缺失之间存在明显的相关性（Pearson r= 0.695, P<0.01）。免疫组化进一步证实PDCD5在肿瘤组织中的高频率缺失。χ2检验分析发现PDCD5蛋白表达缺失与喉鳞状细胞癌患者的年龄、性别、肿瘤原发部位和有无淋巴结转移无相关性,但是与肿瘤TNM分期以及组织学分级之间相关(mRNA P=0.032, P=0.021;蛋白 P=0.027, P=0.016)。结论 PDCD5在喉癌中多呈低表达,在喉鳞状细胞癌的发生、发展过程中可能起重要作用。     

喉癌组织中表皮生长因子受体mRNA含量测定

目的建立TagMan探针逆转录一实时荧光定量PCR技术测定喉癌组织中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）mRNA水平的方法，分析其应用价值。方法设计高特异性引物和探针，以TagMan探针逆转录．实时荧光定量PCR技术对32例喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织学正常喉黏膜组织EGFR mRNA表达水平进行测定。构建含有EGFR的重组质粒，进行测序鉴定。结果经测序分析证实，含EGFR的重组质粒构建成功，喉癌组织中EGFRmRNA相对含量（中位数0．025）高于癌旁正常喉黏膜组织中EGFRmRNA相对含量（中位数0。008），两者间的差异经Wilcoxon秩和检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TagMan探针逆转录一实时荧光定量PCR技术可作为一种喉癌组织中EGFRmRNA水平定量测定的新方法。     

Aberrant promoter hypermethylation of multiple genes in head and neck squamous cell carcinoma

PURPOSE: Epigenetic alteration, via promoter hypermethylation, inactivates genes important for the development of head and neck squamous cell carcinoma (SCCHN). The aim of this study is to characterize and correlate, with clinical parameters, the promoter methylation profile of DNA repair genes, hMLH1 and O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT), and tumor-suppressor gene p16. MATERIALS AND METHODS: Fifty-one cases of SCCHN, collected from the paraffin block archives (1997-1999) in the Department of Pathology at the University of Arkansas for medical sciences, provided DNA for methylation-specific PCR using primers specific for hMLH1, MGMT, and p16. RESULTS: Sixty-two percent displayed promoter hypermethylation in at least one gene, with 23% seen for hMLH1, 30% for MGMT, and 36% for p16. Promoter hypermethylation of these genes separately or in combination was not associated with history of smoking and alcohol use, tumor size, nodal status, clinical stage, and overall survival. Promoter hypermethylation of more than 1 gene was significantly associated with increased 2-year disease-free survival. The probability of surviving 2 years without tumor recurrence was 100% with promoter hypermethylation in 2 or 3 genes and 46% with promoter hypermethylation in none or just 1 gene (P=.013). Promoter hypermethylation of 2 or 3 genes was independently related to increased 2-year cumulative disease-free survival (P=.028). CONCLUSIONS: Promoter hypermethylation of hMLH1, MGMT, and p16 genes was commonly detected in 47 SCCHN cases with up to 65% showing aberrant promoter hypermethylation in at least 1 gene. Promoter hypermethylation of 2 or 3 genes was significantly associated with increased 2-year disease-free survival, suggesting that promoter hypermethylation of multiple genes might improve survival. Significant correlation was also noted between a positive alcohol use history and promoter hypermethylation of the MGMT gene with no promoter hypermethylation of the p16 gene.     

STAT3在喉癌中的表达特征及其与Survivin表达的关系

目的探讨信号传导与转录激活因子3（STAT3）在喉癌中的表达特征及其与Survivin表达的关系。方法采用免疫组织化学方法检测40例喉鳞状细胞癌组织和12例喉正常黏膜组织中STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白和Survivin蛋白的表达;运用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）检测上述组织中STAT3 mRNA和Survivin mRNA的表达。结合病例资料进行统计学处理,采用χ2、t检验。结果喉癌组织中STAT3、p-STAT3和Survivin蛋白及STAT3 mRNA和Survivin mRNA的阳性表达率均明显高于正常喉黏膜（P＜0.01）; STAT3、p-STAT3蛋白和STAT3 mRNA在喉癌中的表达均与喉癌的临床分期相关（分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01）;Survivin蛋白和 Survivin mRNA在喉癌中的表达与临床分期及淋巴结转移相关（P＜0.01,P＜0.01）STAT3和Survivin的表达呈正相关。结论STAT3的过量表达可能在喉癌的发生、发展中起重要作用,它的异常激活也可能通过上调Survivin基因的表达,延长喉癌细胞生存时间。