孕酮对大鼠脑损伤后大脑皮质及海马CA1区环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的: 观察孕酮对大鼠脑损伤后皮质及海马CA1区COX-2和iNOS表达的影响.方法: 雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤组和孕酮治疗组,按照改良的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型.孕酮治疗组伤后1h、 6h腹腔注射孕酮16mg/kg.各组于伤后24h取材.用免疫组织化学法及免疫蛋白印迹法,观察大鼠皮质及海马CA1区COX-2、iNOS的免疫阳性细胞数和蛋白表达水平变化.结果: 与假手术组大鼠相比,脑损伤组大鼠皮质及海马CA1区COX-2、 iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平较假手术组增加;孕酮治疗组与脑损伤组比较,大鼠皮质及海马CA1区COX-2、 iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平减少,差异有统计学意义.结论: 孕酮可能通过降低COX-2、 iNOS的表达发挥脑损伤保护作用.     

核转录因子κB/环氧化酶-2参与糖尿病肾病大鼠肾细胞增殖

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)/环氧化酶-2(COX-2)信号与糖尿病肾病大鼠肾细胞增殖的关系.方法 单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型,16周后切除左肾.用免疫组织化学检测肾皮质NF-κB和COX-2蛋白的表达;用正常糖和高糖培养基培养肾小管上皮细胞,24、48和72 h后收集细胞,用免疫细胞化学检测PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测NF-κB和COX-2蛋白的表达.结果 (1)糖尿病模型组肾脏肥大指数增加.肾小球体积增大,系膜基质增多;(2)糖尿病模型组肾组织中活化的NF-κB和COX-2蛋白表达高于对照组,两者呈显著正相关;(3)高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达强于正常糖组;(4)高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB和COX-2蛋白的表达,两者呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PCNA阳性率呈显著正相关.结论 活化NF-κB,上调COX-2蛋白表达从而引起肾脏固有细胞的增殖可能是糖尿病肾脏损伤的机制之一.     

小白菊内酯对帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元的保护作用

目的:探讨小白菊内酯在帕金森病小鼠模型中抑制核因子NF-κB(nuclear factor kappa B)信号通路对多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法:将C57BL/6N小鼠随机分为模型组、干预组和对照组。通过行为学、免疫组织化学和免疫蛋白印记法观察各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、核因子NF-κB、环氧合酶-2(COX-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达变化情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平下降,NF-κB、COX-2和caspase-3阳性细胞大量表达,蛋白水平显著升高(P0.01)。抑制剂组小鼠上述变化明显减轻(P0.01)。结论:在MPTP所致PD模型小鼠中,小白菊内酯通过抑制核因子NF-κB信号通路减少凋亡蛋白caspase-3表达,从而发挥神经保护作用。     

核转录因子κB/环氧化酶-2参与糖尿病肾病大鼠肾细胞增殖

目的探讨核转录因子-κΒ(NF-κΒ)/环氧化酶-2(COX-2)信号与糖尿病肾病大鼠肾细胞增殖的关系。方法单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型,16周后切除左肾。用免疫组织化学检测肾皮质NF-кB和COX-2蛋白的表达;用正常糖和高糖培养基培养肾小管上皮细胞,24、48和72h后收集细胞,用免疫细胞化学检测PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测NF-кB和COX-2蛋白的表达。结果(1)糖尿病模型组肾脏肥大指数增加,肾小球体积增大,系膜基质增多;(2)糖尿病模型组肾组织中活化的NF-кB和COX-2蛋白表达高于对照组,两者呈显著正相关;(3)高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达强于正常糖组;(4)高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-кB和COX-2蛋白的表达,两者呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PCNA阳性率呈显著正相关。结论活化NF-κB,上调COX-2蛋白表达从而引起肾脏固有细胞的增殖可能是糖尿病肾脏损伤的机制之一。     

糖尿病大鼠心肌NF-κB、iNOS、COX-2表达的研究

目的：观察核因子-κＢ（ＮＦ-κＢ）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）以及环氧化酶-2（COX-2）3种炎症因子在糖尿病大鼠心肌组织的表达。方法:30只SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组，糖尿病组大鼠按60 mg/kg的剂量1次性腹腔注射链脲菌素。实验于24周末结束，观察2组大鼠的体重、平均血糖浓度、心重指数。并取心肌组织石蜡切片分别行NF-κＢ、iNOS和COX-2免疫组化染色。同时用凝胶电泳迁移率（EMSA）的方法测定心肌组织ＮＦ-κＢ活性。结果:(1)糖尿病大鼠心肌组织ＮＦ-κＢ阳性表达细胞明显多于对照组；（2）EMSA方法显示，糖尿病大鼠心肌组织ＮＦ-κＢ表达强度明显高于对照组；（3）对照组大鼠心肌组织未见iNOS的表达，糖尿病大鼠见明显iNOS的表达；（4）对照组大鼠心肌组织偶见COX-2的表达，糖尿病大鼠见明显COX-2的表达。结论:NF-κＢ、iNOS和COX-2在糖尿病大鼠心肌组织中表达活性明显增强。     

显性失活IκBα质粒对胰腺癌PC-3细胞株核因子-κB和环氧合酶-2表达的影响

目的：观察显性失活IκBα质粒转染胰腺癌PC-3细胞株后，对细胞核因子-κB（NF-κB）和环氧合酶-2（COX-2）表达的影响。 方法： 免疫组织化学证实NF-κB和COX-2在胰腺癌PC-3细胞株中的表达，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）检测PC-3细胞转染显性失活IκBα质粒后，细胞中NF-κB和COX-2表达的变化。 结果： 胰腺癌PC-3细胞株中存在NF-κB和COX-2的表达，转染显性失活IκBα质粒后，细胞中NF-κB和COX-2表达均下调，且体现出一定的时间依赖性关系。 结论： 胰腺癌PC-3细胞株中存在NF-κB和COX-2的阳性表达。显性失活的IκBα质粒可抑制细胞中NF-κB和COX-2的表达。     

匹罗卡品致痫大鼠脑内NF-κB及COX-2的表达

为探讨癫痫大鼠脑内核转录因子NF-κB及炎性因子环氧化酶-2(COX-2)的表达,本研究采用匹罗卡品(30mg/kg)诱导大鼠癫痫发作后,通过免疫组织化学和Westernblot方法,对癫痫大鼠脑内,主要是海马NF-κB和COX-2的表达进行了观察。结果显示:匹罗卡品诱导大鼠癫痫发作后,大鼠脑内尤其是海马神经元的胞浆和胞核内NF-κBp65免疫反应阳性增强,核移位增多,蛋白产物表达增多;COX-2免疫反应阳性明显增强,蛋白产物表达增多。以上结果提示,癫痫发作后可引起核转录因子NF-κB的活化及炎性因子COX-2的高表达。     

缺血预处理通过抑制炎症反应减轻缺血性脑损伤

目的:探讨缺血预处理对缺血性脑损伤的神经保护作用及其可能的机制.方法:以成年雄性SD大鼠为研究对象,短暂夹闭双侧颈总动脉制备脑缺血预处理模型,线栓法阻塞大鼠大脑中动脉建立脑缺血模型,检测大鼠神经功能损伤评分和脑梗死体积,测量缺血脑组织髓过氧化物酶(MPO)的活性,免疫组织化学法检测核转录因子-κB(NF-κB)的转录活性,免疫印迹法检测环氧合酶-2(COX-2)的表达水平,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.结果:缺血预处理减轻神经功能损伤和脑梗死体积,减轻MPO活性,抑制NF-κB的转录活性、COX-2的表达和TNF-α的分泌.结论:缺血预处理减轻缺血性脑损伤,其神经保护作用可能与抑制炎症反应和炎症因子的表达有关.     

丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质TNF-α和NF-κB表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法选取36只健康雄性大鼠,随机分为假手术组(Sham,12只),缺血再灌注组(I/R,12只)和丹参酮ⅡA治疗组(TanⅡA,12只),用线栓法阻塞大鼠右大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,脑缺血2h再灌注24h后,应用免疫组织化学方法与Western blot方法检测大鼠手术侧顶叶皮质TNF-α和NF-κB的表达。结果与Sham组相比,I/R组大鼠顶叶皮质TNF-α与NF-κB蛋白的阳性表达的平均光密度值显著升高(0.05);而与I/R组相比,TanⅡA组大鼠顶叶皮质TNF-α与NF-κB蛋白的阳性表达的平均光密度值显著降低(0.05)。结论丹参酮ⅡA能够降低脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质TNF-α与NF-κB蛋白的表达水平。     

丹参酮ⅡA对阿尔茨海默病模型大鼠脑组织caspase-3、Akt与NF-κB表达的影响

目的观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠脑组织Akt、NF-κB、caspase-3表达水平的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、AD模型组和TanⅡA治疗组。在大鼠脑海马内注射Aβ方法建立AD动物模型。免疫荧光法检测Aβ1-16标记部位和表达水平,免疫组化法检测caspase-3的表达水平,免疫组化染色和Western blot法检测Akt、NF-κB的表达水平。结果 Aβ1-16在假手术组中无表达,而在AD模型组和TanⅡA治疗组二者间Aβ1-16表达水平无明显差异(P0.05)。Akt的表达在模型组低于假手术组和TanⅡA治疗组,差异有统计学意义(P0.05),而模型组NF-κB与caspase-3的表达水平明显高于假手术组和TanⅡA组,差异显著(P0.05)。结论 TanⅡA可降低模型鼠NF-κB与caspase-3的表达水平,且上调Akt的表达。     

Biphasic activation of nuclear factor kappa B and expression of p65 and c-Rel after traumatic brain injury in rats

Background and object

Nuclear factor kappa B (NF-κB) functions as a key regulator in the central nervous system and regulates the inflammatory pathway. There are two peaks of cerebral NF-κB activation after neonatal hypoxia–ischemia and subarachnoid hemorrhage. Our previous studies found that NF-κB activity was up-regulated at an early stage and remained elevated at day 7 after traumatic brain injury (TBI). However, data are lacking regarding an overview of NF-κB activity and expression of NF-κB subunits after TBI. Hence, the current study was designed to detect the time course of NF-κB activation and expression of NF-κB p65 and c-Rel subunits around the contused cortex following TBI.

Methods

Adult Sprague–Dawley rats were randomly divided into sham and TBI groups at different time points. A TBI model was induced, and then the NF-κB DNA-binding activity in the surrounding areas of injured brain was detected by electrophoretic mobility shift assay. Western blotting was used to measure the protein levels of p65 and c-Rel in the nucleus. The concentrations of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1β (IL-1β) were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Moreover, the distribution of c-Rel and p65 was examined by immunohistochemical studies.

Results

There were double peaks of cerebral cortical NF-κB activity, at 3 and 10 days post-injury. Additionally, protein levels of p65 were found to be elevated and peaked at 3 days after TBI, while levels of c-Rel were elevated significantly during the later phase of injury. Furthermore, TNF-α and IL-1β concentrations also showed a biphasic increase.

Conclusions

Biphasic activation of NF-κB could be induced after experimental TBI in rats. NF-κB p65 and c-Rel subunits were elevated at different post-TBI time periods, leading to a hypothesis that different NF-κB subunits might be involved in different pathophysiological processes after TBI.     

Vitamin D deficiency reduces the benefits of progesterone treatment after brain injury in aged rats

Administration of the neurosteroid progesterone (PROG) has been shown to be beneficial in a number of brain injury models and in two recent clinical trials. Given widespread vitamin D deficiency and increasing traumatic brain injuries (TBIs) in the elderly, we investigated the interaction of vitamin D deficiency and PROG with cortical contusion injury in aged rats. Vitamin D deficient (VitD-deficient) animals showed elevated inflammatory proteins (TNFα, IL-1β, IL-6, NFκB p65) in the brain even without injury. VitD-deficient rats with TBI, whether given PROG or vehicle, showed increased inflammation and greater open-field behavioral deficits compared to VitD-normal animals. Although PROG was beneficial in injured VitD-normal animals, in VitD-deficient subjects neurosteroid treatment conferred no improvement over vehicle. A supplemental dose of 1,25-dihydroxyvitamin D₃ (VDH) given with the first PROG treatment dramatically improved results in VitD-deficient rats, but treatment with VDH alone did not. Our results suggest that VitD-deficiency can increase baseline brain inflammation, exacerbate the effects of TBI, and attenuate the benefits of PROG treatment; these effects may be reversed if the deficiency is corrected.     

大鼠血管新生内膜形成过程中NF-κB的活化和ICAM-1及COX-2表达的变化

目的：探讨大鼠血管内膜增生过程中NF-κB活化与内膜炎性增生的相互关系。方法:Western blotting分析血管壁中NF-κB p65、IκBα及其下游炎性基因ICAM-1和COX-2的表达；用免疫沉淀分析检测NF-κB p65的苏氨酸磷酸化。结果:内皮剥脱后，血管总蛋白与核蛋白中p65的含量于术后7 d达峰值；术后21 d下降但仍高于0、1 d组；但胞浆p65含量无明显变化。p65苏氨酸磷酸化水平与NF-κB核转位成负相关关系。IκBα于术后1 d表现出一过性降低，术后14 d开始回升，21 d接近正常组水平；与此相反，ICAM-1和COX-2的表达于内皮剥脱后升高，至14 d时达峰值，21 d时表达量下降但仍高于正常组。结论:血管内皮剥脱诱导的内膜增生过程中伴有持续的NF-κB p65活化和炎性因子的表达。     

异丙酚对大鼠内毒素脑损伤AIF表达和细胞凋亡的影响

目的: 研究凋亡诱导因子(AIF)和细胞凋亡在大鼠内毒素(LPS)脑损伤中的变化情况,探讨异丙酚在脑损伤中的保护作用及其机制。方法: SD大鼠72只,雌雄不限,体重220~250 g,随机分为3组(n=24):内毒素组(LPS组)和内毒素+异丙酚组(LPS+propofol组)经左颈内动脉注射LPS(1 mg/kg)建立大鼠内毒素脑损伤模型,对照组(control组)经颈内动脉注射等量生理盐水,LPS+propofol组颈内动脉注射LPS后即予异丙酚100 mg/kg剂量腹腔注射。3组分别于6、12、24和48 h随机处死6只大鼠,取额叶皮质,检测脑组织含水量,Annexin V-PI法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学检测AIF、NF-κB和caspase-3表达水平的变化,Western blotting测AIF表达的变化。结果: 与对照组相比,LPS组和LPS+propofol组各时点脑组织含水量增高,凋亡细胞增多,AIF、NF-κB和caspase-3表达增加(P<0.05, P<0.01);与 LPS组比较, LPS+propofol组各时点脑含水量、凋亡细胞、AIF、NF-κB和caspase-3表达明显减少 ( P<0.05, P<0.01)。结论: 异丙酚减轻大鼠内毒素性脑损伤的机制与抑制脑组织AIF表达水平及减轻神经细胞凋亡有关。     

姜黄素降低Ⅲ型CP/CPPS模型鼠炎性反应因子的表达

目的研究姜黄素对Ⅲ型慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)模型鼠炎性反应因子表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、CP/CPPS模型组(model)、姜黄素50及100 mg治疗组(cur-50 mg,cur-100 mg)和p38抑制剂组(SB203580),连续腹腔给药12 d后,real-time PCR检测前列腺组织中TNF-α、p38、COX-2的mRNA表达;免疫组化检测TNF-α,COX-2的蛋白表达;Western blot检测p38、p-p38和NF-κB蛋白的表达。结果 CP/CPPS模型组的NF-κB、p-p38、TNF-α和COX-2蛋白,TNF-α、COX-2和p38的mRNA表达较假手术组升高(P0.01);cur-100 mg组和SB203580组可显著缓解模型组的变化(P0.01);cur-100 mg组中的COX-2蛋白和mRNA均比SB203580组明显下降(P0.05);相较模型组,姜黄素2个组、SB203580组p-p38与NF-κB的表达呈正相关(P0.01)。结论姜黄素能够降低CP/CPPS模型鼠NF-κB、TNF-α和COX-2及p-p38等炎性反应因子的表达。     

微小RNA-155通过调控核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1/核因子κB信号通路加剧新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 探讨微小RNA-155（miRNA-155）是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1（NOD1）/核因子κB（NF-κB）信号通路在新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤中发挥作用。方法 选择新生雄性大鼠40只,分4组,每组10只。分别是假手术组、缺氧缺血组（HI组）、阴性对照组（NC antagomir组）、miRNA-155抑制组（miRNA-155 antagomir组）。大鼠经10%水合氯醛（400 mg/kg）麻醉后取左脑测定脑组织含水量;采用HE染色,于光学显微镜下观察各组大鼠脑海马组织病理形态学改变;采用Western blotting法检测各组大鼠脑组织中NOD1、NF-κB p65、NF-κB p50、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）和p-NF-κB p50的蛋白表达水平;采用Real-time PCR法检测各组大鼠脑组织及血清中miRNA-155、NOD1、NF-κB p65和NF-κB p50的mRNA表达水平。结果 与假手术组相比,HI组和NC antagomir组新生大鼠脑组织含水量显著升高,miRNA-155 antagomir组显著降低（P＜0.05）;假手术组海马细胞排列整齐,细胞形态结构及层次清晰完整,无空泡,间质无水肿;HI组和NC antagomir组可见海马细胞排列紊乱,形成空泡,胶质细胞增生,细胞间隙增宽出现水肿,坏死细胞数增多;miRNA-155 antagomir组脑组织水肿明显减轻,海马细胞排列紊乱现象有所改善,坏死细胞数减少。与假手术组相比,HI组和NC antagomir组新生大鼠NOD1、p-NF-κB p65和p-NF-κB p50蛋白表达水平显著升高,而miRNA-155 antagomir组与HI组和NC antagomir组相比显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;HI组和NC antagomir组新生大鼠脑组织及血清NOD1 mRNA表达水平显著高于假手术组,miRNA-155 antagomir组NOD1 mRNA表达水平与HI组和NC antagomir组相比显著降低（P＜0.05）,但各组大鼠NF-κB p65及NF-κB p50的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 MiRNA-155可通过调控NOD1/NF-κB信号通路促进新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤,其作用机制可能与miRNA-155激活NOD1信号通路,促进下游NF-κB发生磷酸化,加剧缺氧、缺血新生乳大鼠脑组织炎症。     

转录因子NF-κB在内毒素休克中的作用

目的探讨内毒素休克大鼠组织炎性介质的表达特征及其和核转录因子NFκB(nuclearfactorkappaB)的关系。方法应用免疫组织化学技术检测脂多糖(lippolysaccharice,LPS)内毒素休克大鼠肝肾组织转录因子NFκB、炎性介质ICAM1、VCAM1、iNOS的表达。结果LPS内毒素休克大鼠肝肾组织转录因子NFκBp65,炎性介质ICAM1、VCAM1、iNOS阳性细胞率高于正常对照组;炎性介质ICAM-1、VCAM-1、iNOS阳性细胞率与NF-κBp65阳性细胞率成正相关。用吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidinedithiocarbmate,PDTC)抑制转录因子NFκB的内毒素休克大鼠炎性介质ICAM1、VCAM1、iNOS阳性细胞率低于LPS组。结论核转录因子NFκB在LPS引起的大鼠内毒素休克炎性介质的表达中起调节作用。     

Aster yomena suppresses LPS-induced cyclooxygenase-2 and inducible nitric oxide synthase expression

Inflammation is a pathological process that is known to be involved in numerous diseases. Microbial infection or tissue injury activates inflammatory responses, resulting in the induction of proinflammatory proteins including cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS). Aster yomena is used in traditional Korean remedies to treat cough, asthma, and insect bites. Here, we investigated the effects of A. yomena extract (EAY) on the expression of COX-2 and iNOS induced by LPS. EAY inhibited NF-κB activation and IκBα degradation induced by LPS. EAY suppressed LPS-induced COX-2 and iNOS expression which are the target genes regulated through NF-κB activation in macrophages. EAY also suppressed LPS-induced nitrite production. These results suggest that EAY has the potential to be developed as a potent anti-inflammatory drug.     

依托度酸诱导SMMC7721细胞凋亡的分子机理研究

目的：探讨选择性环氧合酶抑制剂依托度酸（etodolac）诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡的分子机理。 方法： 采用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳法测定细胞凋亡情况；Western blotting法检测不同浓度etodolac处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的变化；流式细胞术检测半胱氨酸酶-3 (caspase-3)活性的变化；TransAMTM NF-κB p65/p50核转录因子活性检测试剂盒检测核因子-κB (NF-κB)活性变化。 结果： 流式细胞术显示etodolac（0.25、0.50、1.0、2.0 mmol/L）作用SMMC7721细胞48 h后，与对照组（0 mmol/L）相比，出现明显凋亡峰（P<0.01 vs control）；高浓度etodolac处理后DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNA Ladder, 凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降，Bax表达增加；与对照组相比，低浓度组（0.25 mmol/L）caspase-3活性未明显活化（P>0.05），NF-κB活性也未受明显抑制（P>0.05），随着etodolac浓度的增大（0.50、1.0、2.0 mmol/L），caspase-3活性明显活化（P<0.05 vs control）； NF-κB活性明显受到抑制（P<0.05 vs control）。经Pearson 相关分析，caspase-3活性和NF-κB活性呈显著负相关（r=0.919, P<0.01）。 结论： 选择性COX-2抑制剂etodolac可能通过抑制NF-κB结合活性，调节Bcl-2、Bax蛋白表达，活化caspase-3，从而诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡。