乙型肝炎患者血清HBV DNA定量检测

近年来 ,定量ＰＣＲ检测技术不仅用于科研领域 ,也成为临床检验重要的检测手段。现将 16 9例乙型肝炎(以下简称乙肝 )患者的血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ定量检测结果 ,结合临床资料 ,报告如下。1　材料和方法1.1　检测对象　 2 0 0 0年 10月至2 0 0 1年 2月 ,在我院住院治疗的各型乙肝患者共 16 9例 ,其中男 118例 ,女5 1例 ,平均年龄 37.3岁。按 2 0 0 0年全国病毒性肝炎治疗方案的诊断标准分型 ,急性肝炎 14例 ,慢性肝炎轻度47例 ,慢性肝炎中度 6 4例 ,慢性肝炎重度 16例 ,重型肝炎 8例 ,肝硬化 2 0例。1.2　检测方法　 16 9例乙肝患者均作Ｈ…     

聚合酶链反应检测慢性乙型肝炎病毒感染

HBV持续复制可能是慢性乙型肝炎持续活动、血清谷雨转氨酶(ALT)反复波动的重要原因，通常通过检测血清HBV标志物了解是否有HBV复制，但在某些HBsAg(-)和HBV标志物全阴的慢性乙型肝炎，其ALT反复异常难以解释。作者利用PCR检测HBsAg( )和HBsAg(-)慢性乙肝血清中HBV DNA，以查明慢性乙肝与HBV复制的关系。     

双带PCR提高检测血清HBV—DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ。该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性，与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品）和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品），ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交。     

献血员乙型肝炎病毒感染状况的调查

为了解合格献血员中乙型肝炎（乙肝）病毒感染状况，用酶联免疫法和聚合酶链反应分别检测５８３例献血员ＨＢＶ血清标志物及ＨＢＶＤＮＡ。结果显示：ＨＢＶ－Ｍ阳性３２６例，检出率５５．９％，ＨＢＶＤＮＡ阳性５７例，检出率为９．７８％，说明目前献血员隐匿着乙肝病毒感染。筛选献血员乙肝病毒的方法有待改进。     

61例患者HBV五项指标和PCR—HBV DNA同期检测结果的临床意义

６１例患者ＨＢＶ五项指标和ＰＣＲ—ＨＢＶＤＮＡ同期检测结果的临床意义甘肃省平凉地区医院内三科张天成ＰＣＲ－ＨＢＶＤＮＡ新技术的建立和应用，为临床上检测并进一步认识ＨＢＶ感染开辟了新的途径，本文就６１例患者的检测结果分析了其临床意义。１临床资料收集门诊...     

HBV感染者血清标志物模式与HBVDNA的水平

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清标志物模式与HBVDNA水平的关系。方法：采用时间分辨荧光免疫定量分析法（TRFIA）和荧光定量PCR技术（FQ—PCR）分别检测542例乙型肝炎感染者血清HBVM和HBVDNA。结果：542例乙型肝炎感染者血清标本HBVM模式有10种,HBVDNA检出总阳性率83．39％（452／542）,各种模式HBVDNA的阳性率存在显著差异性,高拷贝数的HBVDNA主要存在于HBeAg阳性的各种模式中,与其它模式比较有显著差异（P〈0．05）。结论：动态监测HBVM和HBVDNA含量有利于对乙肝患者的诊断及疗效提供客观依据。     

血清HBV DNA含量在乙型肝炎诊治中的临床价值

目的 :了解乙型肝炎 (乙肝 )患者血清HBVDNA含量在乙肝诊治中的临床价值。方法 :采用荧光定量PCR技术定量检测 13 9例乙肝患者血清中HBVDNA含量 ,比较不同病变程度患者血清中HBVDNA含量的差异 ,同时检测其病毒标志物和丙氨酸转氨酶 (ALT)水平并进行比较分析。结果 :急性乙肝 (AH)患者血清中HBVDNA含量〔(2 .14± 2 .96)拷贝·ml-1〕显著低于慢性乙肝 (CH)〔(5 .3 6± 2 .3 4)拷贝·ml-1〕和活动性肝炎肝硬化 (LC)患者〔(4 .96± 2 .3 3 )拷贝·ml-1〕 ;HBeAg阳性组患者血清中HBVDNA含量显著高于HBeAg阴性组 ,而且HBeAg、HBeAb阴性组仍可检出较高水平的HBVDNA ;血清HBVDNA含量与ALT无相关关系。结论 :血清HBVDNA含量与不同类型肝病和病毒标志物有一定相关性 ,与ALT无相关关系 ,对乙肝的诊治有很高的临床价值     

乙型肝炎患者血清HBV DNA与HBV-M检测比较分析

目的：探讨不同免疫标志物的乙型肝炎（乙肝）患血清HBVDNA阳性率及其临床意义。方法：用PCR方法检测乙肝患血清HBVDNA,用ELISA方法检测乙肝五项标志物即HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb。结果：212例HBsAg,HBeAg,HBcAb均阳性的标本HBVDNA也全部阳性,阳性率为100%;158例HBsAg,HBeAb,HBcAb均阳性的标本,HBVDNA62例阳性,阳性率为39.2%,HBsAg,HBcAb阳性标本55例。其中30例HBVDNA阳性,阳性率为54.5%; 三抗体HBsAb,HBeAb,HBcAb阳性标本40例,其中5例HBVDNA阳性,阳性率为12.5%。结论：PCR方法更灵敏。只有检测HBVDNA才能确证HBV的真实感染和得制情况。     

HBV-M定量检测与HBV-DNA含量水平关系的初步探讨

目的 研究乙型肝炎病毒标志物定量检测结果与其HBV-DNA含量的临床关系。方法 采用时间分辨免疫定量和荧光定量-PCR技术,对HBV-DNA和HBV-DNA含量进行检测。结果 在HBsAg/HBeAg/HBcAb,HBsAg/HBcAb/HBcAb,HBeAg/IC及单纯HBcAb阳性的四个组别中,HBV-DNA阳性率分别是97.17%、30.56%、100%和25%;在HBsAg,HBeAg,HBeAb,HBcAb定量检测高,低值两组HBV-DNA含量对比中,HBV-DNA阳性率分别为76.92%、58.14%;100%、97.26%;20.00%、11.42%;64.62%、27.63%。结论 HBV-DNV比HBV-M更能及时准确反映乙型肝炎病毒感染者的病程情况。     

乙型肝炎患者血清中分泌型IgA水平与HBV DNA含量的关系

湖北省鹤峰县人民医院检验科,鹤峰 445800目的 研究乙型肝炎患者血清中分泌型IgA(SIgA)水平与乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量的关系,为临床提供一个新的评价HBV复制状态及肝细胞损伤的指标。方法 100份经ELISA检测并确诊为乙型肝炎的患者血清用荧光定量PCR检测HBV DNA的拷贝数,用ELISA并经酶标仪定量其SIgA的量。结果 SIgA的含量与HBVDNA的拷贝数的对数呈正相关(r=0.69,P<0.01),在HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )组和HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )组中SIgA含量差异无显著性意义(P>0.05),而HBV DNA拷贝数前者明显高于后者(P<0.01)。结论 乙型肝炎患者血清SIgA的含量在评价HBV的传染性及肝细胞损伤程度方面比乙型肝炎血清学标志物(HBV-M)更灵敏、准确。     

应用聚合酶链反应制备HBV DNA生物素探针

通过聚合酶链反应将Bio-11-duTP掺入扩增的HBV DNA中,制备了长度为120bp的生物素探针,可检测到0.1pg的HBV DNA。PCR际记法简便迅速,特异性强,所用DNA量少且无需分离纯化,其标记探针得率高,活性强。     

宫内感染乙型肝炎病毒的新生儿及其母亲HBV基因结构分析

目的：探讨HBV基因变惜民宫内感染的关系。方法：扩增2对发生宫内感染的新生儿及母亲血清中2．5kb HBV DNA,克隆、测序并分析其基因结构。同时用免疫染色法检测孕妇胎盘组织HBsAg。结果：母婴HBV DNA序列中,前S1、前S2和S区都发生突变并且导致相应编码蛋白的氨基酸组成发生改变,其中以前S2区突变率为最高（P＜0．01）;而前C、C区基因只有少数核苷酸发生沉默突变、孕妇胎盘组织各层细胞中均有HBsAg阳性信号。结论：新生儿HBV的细胞源性宫内感染可能主要与HBV突变 有前S／S区的基因变异有关,而前C／C区相对比较保守,未见明显相关。     

套式PCR技术检测肝细胞癌患者血清HBV DNA

应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与ＰＣＲ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）的方法作了比较。２种方法灵敏度均可达１０￣（－５）ｐｇ。套式ＰＣＲ无需制备探针，试验周期短，更适于推广。１６例ＨＣＣ患者检出ＨＢＶＤＮＡ９例（５６．２５％）。ＨＢｓＡｇ阳性组９例检出４例，ＨＢｓＡｇ阴性组４例检出２例。３例未测ＨＢＶ血清标记物均检出ＨＢＶＤＮＡ。结果表明ＨＣＣ患者血清中仍有ＨＢＶＤＮＡ低水平复制，仍具传染性。     

氧化苦参碱对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒DNA表达量的影响

目的:观察氧化苦参碱对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒(HBV) DNA表达量的影响,进一步探讨其抗病毒机制.方法:用不同浓度的氧化苦参碱作用HepG2.2.15细胞,留取培养上清后,采用PCR-ELISA技术定量上清中HBV DNA,并比较其抑制率.结果:氧化苦参碱能直接抑制HepG2.2.15细胞内HBV DNA的复制,且随着药物浓度升高抑制作用逐渐增强.保持药物在培养上清中的浓度是保证抑制率的关键.结论:氧化苦参碱可以在DNA复制水平直接抑制乙型肝炎病毒的合成.     

一种新的乙型肝炎病毒全基因组克隆技术的建立

目的建立一种乙型肝炎病毒(HBV)全基因组扩增及克隆的新方法。方法设计含SalⅠ、NotⅠ酶切位点的引物,用一片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切后将PCR产物克隆入pBlueScript-(SK-)载体,进行HBV全基因组序列测定。结果用此方法成功获得35例HBV全基因组DNA序列。同时以重组质粒为模板进行敏感性和保真性测定,其敏感性为102个初始模板,核苷酸的人为突变率为1.6bp/kb。结论此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析,为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法。