心肌营养素-1上调大鼠心肌转录因子GATA4 mRNA的表达

[目的]研究心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)对心肌转录因子GATA4 mRNA表达的影响。[方法]应用RT-PCR半定量技术,分别测定不同刺激剂量CT-1作用24 h及0.1nmol/L的CT-1作用不同时间后,大鼠心肌细胞GATA4 mRNA表达情况。[结果]心肌细胞GATA4 mRNA表达值在0.001 nmol/L、0.01 nmol/L、0.1 nmol/L1、nmol/L及10 nmol/L的CT-1作用24 h后分别为0.504±0.044、0.73±0.029、1.217±0.023、2.109±0.11、2.613±0.089;与对照组0.445±0.024相比,0.01nmol/L以上组均差异显著(P<0.05);在0.1 nmol/L的CT-1作用10 min、30 min1、h、2 h3、h、6 h1、2 h及24 h后分别为0.591±0.2、0.613±0.096、0.618±0.088、0.608±0.132、0.657±0.055、1.109±0.089、1.309±0.111、1.323±0.074;与对照组0.55±0.1067相比,6 h以后均表现为极显著性差异(P<0.01)。[结论]CT-1刺激与大鼠心肌转录因子GATA4 mRNA表达有明显的相关性。     

GATA转录因子在心脏生长发育及心肌肥厚发生发展中的作用

转录因子是调控DNA转录过程中的可溶性蛋白质分子，它具有识别并结合于特定DNA调节序列的能力。与T／AGATAA／G序列结合的转录因子称为GATA转录因子。GATA结构普遍位于启动子、转录起始部位的上游或接近启动子的部位、增强子、位点控制区(LCR)及人珠蛋白上游等。     

心肌营养素-1在柯萨奇病毒感染心肌细胞中的作用

目的探讨在柯萨奇病毒感染心肌细胞中心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)是否通过STAT3途径发挥治疗作用。方法建立柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞模型,将SD大鼠原代心肌细胞培养48 h后随机分为5组:Con组、Virus组、CT-1组、AG490组、AG490+CT-1组。各组于相应处理后培养30 min,通过Western blot测定STAT3活化水平,分别于培养12 h、24 h、36 h时观察各组心肌细胞病变、搏动情况,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,观察细胞损伤程度。结果 Virus组、AG490+CT-1组、AG490组心肌细胞感染CVB3后,逐步出现细胞病变,细胞搏动停止,培养液中LDH水平明显高于Con组(P<0.05),心肌酶逐渐升高与前一时间点比较(P<0.05)。CT-1组磷酸化STAT3(P-STAT3)水平与Con组相比明显增高(P<0.05),心肌细胞病变明显减轻,LDH释放量显著减少,与Virus组比较差异显著(P<0.05)。AG490+CT-1组较Con组及CT-1组STAT3磷酸化水平显著减低,心肌细胞病变明显,LDH释放量明显增高(P<0.05),与Virus组比较无显著差异(P>0.05)。结论 CT-1在CVB3感染心肌细胞过程中具有心肌保护作用,STAT3磷酸化抑制剂AG490可阻断这一保护作用,提示在病毒感染时CT-1通过介导STAT3磷酸化发挥心肌细胞保护作用。     

心肌营养素-1在心血管系统作用的研究进展

心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)是Pennica等[1]在1995年利用小鼠心脏发育的胚胎干细胞模型克隆出的一种促进心肌肥大的细胞因子,此外,在心血管系统中还有多种生物学作用.现就其研究进展综述如下.     

压力超负荷大鼠心肌营养素-1表达对贝那普利干预的反应

目的 探讨心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)在腹主动脉缩窄所致大鼠压力超负荷心肌肥大模型表达的变化及其与心肌肥大的关系,以及贝那普利(benazepril,Ben)对CT-1表达及心肌肥大的影响.方法 用腹主动脉缩窄术建立大鼠压力超负荷性心肌肥厚模型,术后随机分为左室肥厚组(n=7)和贝那普利干预组(n=7,贝那普利1 mg·kg-1·d～,灌胃3周),另设一假手术组(n=7)为对照.干预3周后测定血流动力学指标、左心室质量指数,应用放射免疫分析法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌中CT-1 mRNA表达.结果 与假手术组比较,左室肥厚组动物的血压与左心室质量指数显著升高(P＜0.05);心肌组织AngⅡ含量和CT-1 mRNA表达水平明显增加(P＜0.01).贝那普利干预可显著降低血压和左心室质量指数(P＜0.05),同时降低肥厚心肌组织AngⅡ浓度与CT-1 mRNA表达水平(P＜0.01).结论 CT-1的过度表达参与了压力超负荷性大鼠心肌肥大的发病过程;贝那普利对CT-1的表达及心肌肥大有抑制作用.     

转录因子GATA家族在人血管内皮细胞中的表达

【目的】了解转录因子GATA家族在人血管内皮细胞中表达的情况。【方法】体外培养人的脐静脉内皮细胞(HUVECs)、主动脉内皮细胞(HAECs)、肺动脉内皮细胞(HPAECs)及肠系膜动脉内皮细胞(HMAECs)4种血管内皮细胞,取1×106个上述细胞采用RT-PCR法检测转录因子GATA家族mRNA在人的上述四种血管内皮细胞中的表达情况并对结果进行定性分析。【结果】GATA-2mRNA及GATA-3mRNA在上述4种血管内皮细胞中均表达,GATA-2mRNA及GATA-3mRNA在大部分人血管内皮细胞中表达,仅HUVECs细胞中未能检测到GATA-4的表达,HMAECs未能检测到GATA-6的表达。而在HUVEC、HAEC、HPAECs及HMAECs4种血管内皮细胞均未检测到GATA-1mRNA及GATA-5mRNA的表达。【结论】转录因子GATA家族在人不同血管内皮细胞中的表达是不一致的,GATA-2及GATA-3在上述4种血管内皮细胞中均表达,它们可能参与血管内皮细胞的基因调控。     

转录调节因子-1在喉癌组织中的表达及其临床意义

目的研究转录调节因子-1(Ets-1)蛋白在喉癌组织中的表达及其在喉癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化法(SP法)检测34例喉癌组织、癌旁组织及15例卢带息肉中Ets-1的表达,采用图像分析软件系统对免疫组化结果进行半定量分析。结果 Ets-1蛋白在喉癌组织中的表达量和阳性表达率明显高于癌旁组织和息肉组织(P<0.05);癌旁组织与息肉组织间的表达比较差异无统计学意义(P>0.05);喉癌患者中不同性别、年龄、肿瘤大小、临床分型Ets-1的表达差异无统计学意义(P>0.05);不同病理分级、临床分期及淋巴结转移间差异有有统计学意义(P<0.01)结论Ets-1在喉癌组织中的高表达对喉癌的发生、发展和转移起重要作用     

缺血性心肌病GATA4蛋白表达变化的研究

目的：探讨缺血性心肌病患者转录因子GATA4蛋白的表达,研究GATA4蛋白在心肌重塑过程中的重要调控作用。方法入选缺血性心肌病组126例及对照组60例。检测两组患者血清GATA4蛋白浓度、血清肌球蛋白重链浓度,超声心动图检测左室舒张末内径、室间隔舒张末厚度、左室后壁舒张末厚度及左室射血分数等指标,根据Devereux公式计算左室心肌质量及左室心肌质量指数。结果与对照组比较,缺血性心肌病组血清GATA4蛋白浓度上升、血清肌球蛋白重链浓度升高(P<0.01),左室心肌质量及左室心肌质量指数增加(P<0.01)。结论缺血性心肌病患者GATA4蛋白过表达,GATA4蛋白水平升高,心肌肥厚,左心功能下降,推测GATA4作为转录因子可能参与了心肌缺血所致的心肌重构。     

转录因子GATA4和甲胎蛋白在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达对比及相关性

目的:探讨转录因子GATA4和甲胎蛋白(AFP)在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达及二者相关性.方法:获取小鼠孕10.5 d、孕13.5 d、孕15.5 d、孕17.5 d、出生后0.5 d的肝组织,半定量RT-PCR检测GATA4和AFP mRNA的表达,并以成鼠肝、正常肝细胞株和肝癌细胞株作为对照.将小鼠GATA4真核表达载体成功转染正常肝细胞并鉴定,将多柔比星作用肝癌细胞,然后均进行以下指标监测:半定量RT-PCR法检测GATA4、AFP和胎蛋白转录因子(FTF)mRNA的表达,免疫印迹法检测GATA4和AFP蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清AFP的含量.结果:随着胎肝细胞分化的不断成熟,GATA4和AFP的表达逐渐下降,至出生后0.5 d已降至成肝水平.GATA4、FTF和AFP在正常肝细胞不表达,而在肝癌细胞高表达;正常肝细胞转染GATA4后,FTF和AFP表达显著增高,其细胞上清液AFP含量亦明显增高.多柔比星作用肝癌细胞后,6 h内GATA4的表达首先降低;随着时间延长(≥12 h),FTF和AFP表达逐渐降低,细胞上清液AFP含量亦逐渐降低,差别具有显著的统计学意义.结论:GATA4在胎肝组织和肝癌细胞中高表达并可能对AFP也有一定的上调作用.     

心肌营养素-1在扩张型心肌病大鼠心肌的表达

目的探讨心肌营养素-1（CT-1）在DCM大鼠心肌的表达及作用。方法30只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组：DCM组20只,腹腔内注射阿霉素（ADM）2．5mg／kg,2次／周,共6周,诱导大鼠DCM模型;对照组10只,同法注射等量生理盐水。第8周时行心脏超声检测,用VG染色观察心肌组织病理改变,用半定量RT—PCR检测CT-1在对照组大鼠与DCM大鼠心肌的表达。结果DCM组的心脏较对照组明显扩大,且心肌纤维化明显,心肌CT-1表达明显升高（P〈0．01）。结论在阿霉素诱导的DCM大鼠心肌中CT-1过度表达,可能与其保护心肌细胞、促进心肌细胞肥大有关。     

大鼠压力超负荷心肌糖蛋白130表达及贝那普利干预研究

目的 研究糖蛋白130(GP130)在腹主动脉缩窄所致大鼠压力超负荷性心肌肥大模型中的表达变化与心肌肥大的关系,以及贝那普利(Benazepril,Ben)对GP130蛋白表达及心肌肥大的影响.方法 用腹主动脉缩窄术建立大鼠压力超负荷性心肌肥厚模型,随机分为左室肥厚组(LVH,n=7)、贝那普利干预组(n=7,贝那普利1 mg·kg-1·d-1,灌胃3周),另设一假手术组(n=7)为对照.干预3周后测定血流动力学指标、左心室质量指数,应用放射免疫分析法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,免疫组化法检测心肌中GP130 蛋白水平表达.结果与假手术组比较,左室肥厚组动物的血压与左心室质量指数显著升高(P＜0.05);心肌组织AngⅡ含量(P＜0.01)和GP130蛋白表达水平明显增加(P＜0.05).贝那普利干预可显著降低血压和左心室质量指数(P＜0.05),同时降低肥厚心肌组织AngⅡ浓度(P＜0.01)与GP130蛋白表达水平(P＜0.05).结论 GP130蛋白的过度表达参与了压力超负荷性大鼠心肌肥大的发病过程;贝那普利对GP130蛋白表达及心肌肥大有抑制作用.     

p300特异性siRNA载体的构建及其对心肌细胞GATA4表达的影响

目的 构建并筛选小鼠p300特异性siRNA载体,并观察p300表达降低对心脏特异性转录因子的调控作用,为进一步研究p300介导的组蛋白乙酰化失衡对心脏发育的影响奠定基础.方法 针对小鼠p300基因的保守序列区域设计并构建3个重组质粒p300 RNAi1,p300 RNAi2和p300 RNAi3.利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养的乳鼠心肌细胞,分别利用RT-PCR和免疫荧光从mRNA和蛋白水平检测p300表达,判断抑制效率,并检测心脏特异性转录因子GATA4的表达水平.结果 pSOS-HUS组和p300 RNAi2组中p300 mRNA水平表达较正常对照组无明显降低,而p300 RNAi1组和p300 RNAi3组中p300 mRNA表达量较正常组有明显降低(分别为0.220 8±0.020 0,0.170 8±0.040 0,vs 0.509 5±0.030 0),且差别有统计学意义(P<0.05),抑制率分别为56.7%和66.5%.转染p300RNAi1组和转染p300RNAi3组的GATA4 mRNA表达水平(分别为0.423 1±0.110 0,0.262 7±0.080 0)明显低于正常组(0.856 4±0.070 0)和阴性对照组(0.841 5±0.040 0),差别有统计学意义(P<0.05).结论 p300特异性siRNA 质粒载体构建成功,p300 RNAi1和p300 RNAi3具有确切阻断p300蛋白表达的作用,并下调GATA4的表达.     

Angiotensin Ⅱ induced upregulation of Gαq/11, phospholipase Cβ3 and extracellular signal-regulated kinase 1/2 via angiotensin Ⅱtype 1 receptor

Background The role of the Gαq/11-mediated signal transduction pathway in angiotensin Ⅱ (Ang Ⅱ) induced cardiac hypertrophy remains unclear. This study was to investigate the role of the Gαq/11 signal transduction pathway in the development of cardiac hypertrophy in 2K1C hypertensive rats and in cultured neonatal rat ventricular myocytes (NRVMs) and to elucidate the effects of the pathway on Ang Ⅱ induced cardiac hypertrophy.Methods Renal hypertension was induced in 2K1C hypertensive rats by placing a silver clip around the left renal artery. At 8 weeks after operation, the systolic blood pressure, the ratio of left ventricular weight to body weight (LV/BW), and the concentration of AngⅡ in the heart were measured. The protein levels of Gαq/11 and extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) were assayed by Western blot analysis, and the activity of phospholipase C (PLC) in the myocardium was detected using ［3H］-PIP2 as a substrate. Changes in ［3H］-leucine incorporation and in the protein levels of the signal molecules Gαq/11, PLCβ3, and ERK1/2 were measured after NRVMs were stimulated with 10-7mol/L AngⅡ.Results The protein levels of Gαq/11 and ERK1/2 in the hearts of 2K1C rats increased by 35.8% and 31.9%, respectively, compared with the sham group. The PLC activity in the 2K1C group was also significantly increased (P&lt;0.05). The levels of Gαq/11, PLCβ3, and ERK1/2 increased significantly after NRVMs were stimulated by AngⅡ. The upregulation of Gαq/11, PLCβ3 and ERK1/2 in NRVMs occurred prior to ［3H］-leucine incorporation increases, and could be inhibited with losartan. Conclusion AngⅡ can initiate cardiac hypertrophy and upregulate signal molecules in the Gαq/11-mediated signal transduction pathway, such as Gαq/11, PLCβ3 and ERK1/2, at both tissue and cellular levels.     

CT-1mRNA和gp130在高血压大鼠心肌中的表达变化及意义

目的观察CT-1mRNA和gp130在高血压大鼠心肌中的表达变化、意义,以及替米沙坦对心肌营养素-1(CT-1)和糖蛋白130(gp130)表达的影响。方法 20只雄性SD大鼠行腹主动脉缩窄术后2周造成压力负荷性心肌肥厚模型,随机分为心肌肥厚组和替米沙坦组,另设10只作为假手术组。替米沙坦组灌胃给药3 mg/(kg.d),连续4周。原位杂交法检测心肌的CT-1mRNA表达水平;免疫组化法检测心肌中gp130表达水平。结果与假手术组比较,心肌肥厚组心肌组织CT-1mRNA和gp130表达水平明显增加。与心肌肥厚组比较,替米沙坦组CT-1mRNA和gp130含量显著降低(P<0.01)。结论压力超负荷性大鼠心肌中CT-1mRNA及其受体gp130的过度表达与心室重构的发生密切相关;替米沙坦逆转心室重构的机制可能与抑制CT-1及受体gp130的过度表达相关。     

外源性心脏营养素-1对脊髓损伤后保护性研究

目的 探讨心脏营养素-1(cardiotrophin-1, CT-1)对大鼠损伤脊髓的保护作用,并初步探讨其可能的作用机制。 方法 90只大鼠随机分为9组：脊髓损伤前正常大鼠(0 h)以及脊髓损伤模型建立后1 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、6 d、12 d组(n=10),RT-PCR测定损伤脊髓组织CT-1及其受体糖蛋白130(gp130)、白血病抑制因子受体(LIFR) mRNA表达。大鼠随机分为3组：CT-1干预组、模型组和神经生长因子(NGF)干预组(n=30),分别给予rhCT-1(100 μg·kg^-1·d^-1)或等量生理盐水或NGF硬膜内灌注,给药后第3天、1周、2周于损伤脊髓处取材行H-E和尼氏染色,对比分析各组神经元计数。大鼠随机分为模型组及CT-1干预组(n=30),损伤后1、4、12周完整剥离大鼠小腿三头肌(n=10),比较两组肌肉质量及总蛋白量。 结果 与损伤前(0 h)相比,大鼠脊髓损伤后CT-1 mRNA表达出现一过性增高(1 h,P<0.05),而后呈进行性下降趋势;其受体表达出现反馈性增高。CT-1干预组、NGF干预组神经元及尼氏体数量均高于模型组(P<0.05),前两组间差异无统计学意义。脊髓损伤后4周、12周时CT-1干预组大鼠小腿三头肌湿质量及总蛋白含量均高于模型组(P<0.05)。 结论 CT-1对大鼠脊髓损伤后神经元存活及功能维持具有一定的保护作用。     

瑞舒伐他汀逆转压力超负荷引起心肌肥厚的作用机制

目的 探讨瑞舒伐他汀(RSV)逆转腹主动脉缩窄术大鼠引起心肌肥厚的作用机制.方法 28只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、手术组、瑞舒伐他汀小剂量组[4 mg/(kg · d)]和瑞舒伐他汀大剂量组[10mg/(kg· d)],每组7只.腹主动脉缩窄术前5d及术后4周,各组均用相对应剂量的瑞舒伐他汀或生理盐水灌胃.术后4周结束实验,测量4组Wistar大鼠超声心动图参数、左室质量/体质量(LVW/BW)并观察左心室组织横截面细胞面积.采用RT-PCR法检测心肌组织中肥大相关因子ANF、β-MHC mRNA表达水平,Western blot法检测大鼠心肌细胞细胞核内GATA4、磷酸化的GATA4(p-GATA4)蛋白水平.结果 与假手术组相比,手术组舒张期室间隔厚度(IVSd)、左室后壁厚度(LVPWd)、左室质量/体质量(LVW/BW)和左室横截面心肌细胞面积(CSA)均明显增加(P＜0.01).在瑞舒伐他汀小剂量组与瑞舒伐他汀大剂量组,IVSd、LVPWd、CSA较手术组明显减小(P＜0.叭),LVW/BW较手术组也有较明显的减小(P＜0.05),且瑞舒伐他汀小剂量组与瑞舒伐他汀大剂量组结果无明显差异(P＞0.05),即左心室肥厚明显减轻.手术组大鼠左室射血分数(LVEF)较假手术组明显减低,瑞舒伐他汀小剂量组与瑞舒伐他汀大剂量组有明显改善(P＜0.01).手术组ANF、β-MHC mRNA表达以及GATA4磷酸化水平较假手术组明显升高(P＜0.01),瑞舒伐他汀小剂量组与瑞舒伐他汀大剂量组较手术组大鼠左心室组织中ANF、β-MHC mRNA表达以及GATA4磷酸化水平明显降低(P＜0.01).结论 GATA4可能参与了压力超负荷性引起的心肌肥厚过程,瑞舒伐他汀可抑制压力超负荷性引起的心肌肥厚,其作用机制可能与降低GATA4活性有关.     

NADPH氧化酶-4对大鼠高血压性心肌肥大的影响

目的：研究NADPH氧化酶-4（NOX4）及活性氧（ROS）在高血压性心肌肥大发生过程中的作用.方法：采用手术缩窄大鼠腹主动脉致压力超负荷心肌肥厚的方法,制作大鼠高血压性心肌肥大模型.48只大鼠分为4组,即假手术组（或对照组）、心肌肥大模型组（模型组）、4羟基2,2,6,6四甲基哌啶（4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-N-oxyl,Tempol）治疗组（Tempol组）和二亚苯基碘（DPI）治疗组（DPI组）.两治疗组分别于缩窄手术后给予含Tempol和DPI的饮用水.对4组大鼠,术前及术后2,4,8wk分别测定血压,术后8wk测定心脏质量指数以判断心肌肥大程度,术后8wk检测心肌组织中过氧化氢（H2O2）含量和NOX4mRNA表达.结果：模型组大鼠血压从术后2wk开始持续增高（P〈0.01）.两治疗组大鼠血压术后2wk时与模型组大鼠血压相同,但从术后4wk开始,Tempol和DPI的作用导致治疗组血压明显低于模型组（P〈0.05）.模型组左心室、心脏指数、心肌组织中H2O2含量及NOX4mRNA含量均显著高于对照组（P〈0.01）.DPI组以上指标则明显低于模型组（P〈0.05）; 而Tempol组的左心室、心脏指数、H2O2含量明显低于模型组（P〈0.05）,但NOX4mRNA含量与模型组无明显差异.结论：心肌NOX4与大鼠高血压性心肌肥大的发展密切关联,其作用是通过它下游的活性氧而介导的.