沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

探讨bcl-2下调后对胶质瘤细胞系的增殖、凋亡和侵袭能力的影响

目的 研究下调bcl-2基因表达后对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法 利用小分子RNA干扰（Small interfering RNA,siRNA）技术人工合成bcl-2靶向siRNA,转染神经胶质瘤细胞系SHG44和TJ905细胞,特异性沉默神经胶质瘤细胞SHG44和TJ905细胞bcl-2基因表达。通过蛋白质印迹（Western blot）分析、噻唑蓝（MTT）实验、Transwell实验和流式细胞仪（FCM）检测,观察bcl-2 siRNA对转染细胞bcl-2基因抑制效果、增殖能力的变化、侵袭能力的改变和细胞凋亡的影响。结果 bcl-2 siRNA可特异性下调神经胶质瘤细胞系SHG44和TJ905细胞bcl-2基因表达。bcl-2下调的神经胶质瘤细胞增殖能力在不同时间点都受到抑制,侵袭能力也明显下降,但实验中未见细胞明显凋亡。结论 下调bcl-2基因表达可有效抑制神经胶质瘤细胞生长,降低细胞增殖和侵袭能力。     

沉默BRG1基因对人胶质瘤细胞增殖的影响及其机制北大核心CSCD

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默胶质瘤细胞BRG1基因表达对其增殖的影响及其机制。方法化学合成BRG1 siRNA,脂质体介导转染胶质瘤U251和U87细胞。CCK-8细胞增殖实验检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期变化,Western blot检测BRG1、cyclin家族、CDK抑制剂蛋白表达水平。结果转染BRG1 siRNA可以有效减少胶质瘤U251和U87细胞BRG1表达,细胞增殖下降,G1期细胞增加。BRG1沉默后cyclin D1和cyclin B1表达降低,CDK抑制剂p21和p27没有明显变化。结论沉默胶质瘤细胞BRG1表达影响细胞周期蛋白使细胞停滞在G1期,最终抑制胶质瘤细胞增殖。     

HMGB1在脑胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生物学功能的影响

目的:检测高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)在胶质瘤组织和细胞中的表达情况,了解HMGB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭迁移以及细胞周期的影响。方法:将HMGB1 siRNA真核表达质粒在脂质体介导下转染胶质瘤细胞U373、U87（HMGB1 siRNA组）,以转染无关序列siRNA质粒的细胞（negative control,NC）和未转染的胶质瘤细胞（Control,Con）作为对照。采用RT-PCR和Western blot检测HMGB1 mRNA和蛋白表达,通过CCK-8实验、Transwell实验和细胞划痕实验分别检测胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力,用流式细胞仪检测胶质瘤细胞周期的变化。结果:HMGB1 mRNA在胶质瘤组织和细胞水平上都较非肿瘤性脑组织和正常胶质细胞明显高表达,差异有统计学意义（P＜0.05）,CCK-8和划痕实验提示HMGB1 siRNA组细胞增殖和迁移能力受到明显抑制（P＜0.05）,Transwell实验显示HMGB1 siRNA组穿膜侵袭到基质胶的细胞数明显低于Con组和NC组,细胞侵袭能力减弱（P＜0.05）,流式细胞分析提示HMGB1 siRNA组位于S期细胞比例较Con和NC组明显减少（P＜0.05）,提示细胞周期发生S期阻滞。结论:应用RNAi能有效抑制HMGB1基因表达,HMGB1低表达后能抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,并使得细胞周期中进入S期的细胞比例明显减少,细胞周期发生阻滞,这可能为胶质瘤的基因治疗提供了新思路。     

PDCD4基因在胶质瘤细胞系的稳定表达及其对肿瘤细胞生长的影响

目的:建立稳定表达程序性死亡4基因(programmed cell death 4, PDCD4)的人神经胶质瘤U251细胞系,观察PDCD4基因对人神经胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响.方法:将构建好的携带PDCD4重组真核表达载体pEGFP-PDCD4转染U251细胞,经过G418筛选获得稳定细胞系;用RT-PCR及Western blotting检测PDCD4 mRNA和蛋白的表达情况,通过锥虫蓝染色活细胞计数法及克隆形成实验检测外源PDCD4转染对细胞增殖和克隆形成能力的影响,以流式细胞术检测细胞周期.结果:成功建立稳定表达PDCD4的胶质瘤细胞U251-PDCD4.未转染的U251及空载体转染的U251细胞均不表达PDCD4,而pEGFP-PDCD4转染的U251-PDCD4细胞表达高水平的PDCD4 mRNA和蛋白质;转染PDCD4基因的细胞生长速度明显减慢(P<0.01)、克隆形成率明显降低(P<0.01);细胞周期检测显示,转染PDCD4的细胞较其他两对照组细胞S期升高、G2/M期明显降低(P<0.05).结论:PDCD4通过干扰细胞周期明显抑制胶质瘤U251细胞的细胞增殖及克隆形成能力.     

VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

  目的   研究VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响   方法   使用VHL表达质粒转染胶质瘤细胞,采用RT-PCR检测VHL mRNA表达,Western blot检测VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达,应用Transwell体外侵袭实验、划痕实验检测上调VHL基因后对U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响。使用VHL表达质粒处理后的U251细胞建立裸鼠颅内模型,利用免疫组织化学染色法对颅内模型组织切片中VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达进行检测。   结果   VHL表达质粒转染胶质瘤细胞后VHL mRNA、VHL蛋白表达增高,MMP-2、MMP-9蛋白表达下降;并抑制U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力。对染色后的组织切片进行分析,VHL表达质粒处理组中VHL的表达较对照组明显升高,MMP-2、MMP-9蛋白较对照组表达减少。   结论   VHL基因能够有效抑制U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力,VHL基因可成为治疗胶质瘤的一个有效靶点。      

Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

目的 研究细胞周期分裂蛋白 Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法 Western blot检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达.设计并合成靶向CAc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine~(TM)2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48 h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达.Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化.结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,CAc42-siRNA能显著下调CAc42 mR-NA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNAl;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低.结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点.     

沉默circRNA hsa_circ_0103809表达抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的:通过研究环状RNA(circRNA) hsa_circ_0103809对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响,来明确 hsa_circ_0103809在胶质瘤进展中所起到的作用。方法:采用qRT-PCR检测hsa_circ_0103809在胶质瘤细胞系U251和正常脑胶质细胞系HEB中表达水平的差异。U251细胞经小干涉RNA（siRNA）介导下调hsa_circ_0103809的表达水平后,采用qRT-PCR检测沉默效率。将U251细胞分为两组,即siRNA-circ沉默实验组和siRNA-NC阴性对照组,实验组转染hsa_circ_0103809的siRNA,对照组转染siRNA对照序列,后续分别使用CCK-8实验、EdU实验和Transwell实验检测hsa_circ_0103809的表达下调对U251细胞增殖和侵袭的影响。结果:hsa_circ_0103809在胶质瘤U251细胞中的表达水平明显高于正常脑胶质HEB细胞（P＜0.01）。在U251细胞中转染siRNA-hsa_circ_0103809后其表达水平明显降低（P＜0.01）。CCK-8实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞在24 h和48 h的光密度（OD）值和对照组无明显差异,但实验组在72 h的OD值明显低于对照组（P＜0.01）。EdU实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞的增殖能力较对照组明显降低（P＜0.01）。Transwell实验结果显示,沉默hsa_circ_0103809的表达后,U251细胞的侵袭能力较对照组明显降低（P＜0.001）。结论:hsa_circ_0103809在胶质瘤U251细胞中高表达,沉默hsa_circ_0103809表达可显著抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

小干扰RNA抑制CXCR4基因表达对人肺癌细胞体外侵袭力的影响

目的：研究趋化性细胞因子受体CXCR4小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）对人肺癌细胞体外侵袭力的影响。方法：利用T7 RNA聚合酶体外合成CXCR4特异性siRNA，用脂质体转染A549细胞。于转染后72h采用RT-PCR方法检测CXCR4 mRNA水平，用Western印迹方法检测CXCR4蛋白质水平，用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力的变化，通过MTT法测定细胞增殖能力，用FCM法检测细胞周期的分布情况。结果：转染CXCR4 siRNA 72h后，CXCR4 mRNA及蛋白质水平明显下调，细胞的体外侵袭力减弱，增殖活性降低，细胞周期分布无明显改变。结论：特异的siRNA能够有效下调CXCR4基因，降低人肺癌细胞体外侵袭能力。     

Cdc42 小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

 目的 研究细胞周期分裂蛋白Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响. 方法 Western blot 检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine^TM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western blot分别检测48h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。 结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42 mRNA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。 结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。