骨髓间充质干细胞下调免疫性血小板减少症患者CD8~+T淋巴细胞及Th1类细胞因子表达的体外研究

[目的]观察并分析健康供者的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患者外周血T淋巴细胞亚群及T淋巴细胞因子分泌水平的影响,探讨MSCs对ITP患者T淋巴细胞分化及分泌功能的影响。[方法]Ficoll液密度离心法联合尼龙毛柱法分离健康供者/ITP患者外周血T淋巴细胞;离心法分离外周血血清;Ficoll液密度离心法分离健康供者骨髓液单个核细胞,贴壁法分离培养出MSCs;以健康供者/ITP患者的T淋巴细胞和自身血清为基础,加入不同浓度的MSCs,设为试验组(T淋巴细胞和MSCs比值:1∶0.01、1∶0.02、1∶0.08)、空白组(单纯健康供者/ITP患者T淋巴细胞),培养72h;流式细胞仪检测MSCs纯度及共培养体系中的T淋巴细胞亚群比例;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测培养上清液中淋巴细胞因子白介素-2(interleukin-2,IL-2)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、IL-4水平变化。[结果]加入MSCs共培养后,健康供者和ITP患者各组内CD4+T淋巴细胞变化均无统计学意义,健康供者组内调节性T淋巴细胞(regulatory T cell,Treg)比值随MSCs浓度的增加而升高(P=0.012),而ITP患者组内Treg比值差异无统计学意义;未加MSCs的情况下,ITP患者空白组的IL-2、TNF-α及IFN-γ水平高于健康供者空白组,差异有统计学意义(P0.01),IL-10水平低于健康供者空白组,差异有统计学意义(P=0.002);加入MSCs(1:0.08比例)共培养后,ITP患者组的CD8+T淋巴细胞低于空白组,差异有统计学意义(P=0.003),IL-2、TNF-α、IFN-γ水平低于空白组,差异有统计学意义(P0.01),IL-10水平显著上升(P0.01)。[结论]与健康供者相比,ITP患者IL-2、TNF-α及IFN-γ的分泌增多,IL-10分泌减少。MSCs在体外可下调ITP患者CD8+T淋巴细胞增殖,抑制ITP患者Th1类细胞因子的表达。     

鼻咽癌免疫抑制因子研究——鼻咽癌细胞培养上清对正常人淋巴细胞cAMP、IL-2及对IL-2增殖活性的影响

在正常人淋巴细胞加入鼻咽癌低分化细胞培养上清(CNE-2S)。分别测定不加入和加入CNE-2S的淋巴细胞内环磷腺苷(cAMP)、白细胞介素-2(IL-2)及对IL-2的增殖活性。绪果,11例正常人淋巴细胞内cAMP含量加入CNE-2S后比未加入前有明显升高(P<0.05)。9例正常人的IL-2活性加入后比未加入前有明显降低(P<0.05)。9例正常人的IL-2受体的增殖活性加入后无显著差异(P>0.05)。结果表明,CNE-2S可提高正常人淋巴细胞内cAMP水平。与此同时,IL-2活性受到明显抑制,但淋巴细胞IL-2受体增殖活性的变化不显著。     

急淋患者骨髓有核细胞对正常人淋巴细胞转化的影响

人血淋巴细胞在丝裂原刺激下发生母细胞化,即淋巴细胞转化。在此转化过程中伴随细胞代谢活跃。本文探索在淋巴细胞转化过程中加入急淋患者骨髓有核细胞对此转化的影响,以及探索在此混合细胞培养过程中是否因细胞代谢活跃而产生超氧自由基。一、材料骨髓有核细胞取自附属儿童     

白血病患者化疗后应用白介素-2治疗的临床观察

目的：探讨白血病患者化疗后应用白介素-2（IL-2）治疗的临床疗效.方法：将50例白血病患者随机分治疗组和对照组,治疗组化疗后加入IL-2 100万U/d×14 d,对照组单用化疗,监测两组治疗前、后T淋巴细胞亚群及化疗后患者的临床疗效、不良反应.结果：治疗组治疗2周后T淋巴细胞亚群水平明显高于治疗前及对照组化疗后（P＜0.05）.治疗组完全缓解（CR）率与总有效（OR）率与对照组相近,但粒细胞缺乏发生率、持续时间及感染发生率低于对照组（P＜0.05）.结论：应用IL-2对化疗后患者进行治疗可明显提高T淋巴细胞亚群水平,并可减少化疗后不良反应.     

用动物血代替人血做E花环形成实验

为了进一步提高实验教学质量,我们在81年级实验课中的 T 淋巴细胞 E 花环试验由示教改为同学亲自操作。此实验要当堂从同学静脉中抽取血液,有的同学因精神紧张而出现晕针现象。为了避免这一现象的发生,节省人血,减少同学们的痛苦,增加同学自己操作机会,我们利用豚鼠血中 T 淋巴细胞能与家兔红细胞形成 RE 花环的原理代替人血中的 T 淋巴细胞与绵羊红细胞形成 E 花环,经过多次试验,结果比较满意,现将操作方法介绍如下:1.肝素防凝豚鼠血1毫升,加入无钙镁的 Hank’s液1毫升,混匀.2.吸取以上已稀释的血液2毫升,加入盛有2毫升淋巴细胞分层液的华氏管中     

氧化锌纳米材料对小鼠混合培养的脾淋巴细胞的影响

目的评价氧化锌（ZnO）纳米材料对不同品系小鼠脾淋巴细胞混合培养的影响。方法提取BALB／O和057BL／6小鼠脾细胞进行混合淋巴细胞培养，通过对细胞增殖率、IL-2水平的检测及电镜观察来研究氧化锌纳米材料对混合淋巴细胞培养的影响。结果氧化锌纳米材料的加入提高了淋巴细胞增殖率及上清液IL－2水平，电镜下可见纳米材料吸附于淋巴细胞表面并促进淋巴细胞间的接触。结论氧化锌纳米材料促进混合淋巴细胞培养中淋巴细胞的增殖，增强了免疫应答的强度。     

原因不明习惯性流产患者封闭抗体活性与肿瘤坏死因子-α的关系

目的观察原因不明习惯性流产(RSA)患者的封闭抗体效应与辅助性T细胞(Th)1型免疫之间的关系。方法以20例连续发生过3次以上早期自然流产的患者作为观察对象。采用比重离心法从外周血中提取淋巴细胞,以1×106/ml浓度加入含有1%小牛血清的RPMI中。每毫升淋巴细胞悬浮液中加入植物血凝素(PHA)2μg培养72 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测培养液中肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平。采用混合淋巴细胞培养方法检测研究对象的封闭抗体效应(MLR-BE),>22%为阳性,≤22%为阴性。分析TNF-α水平与MLR-BE的关系。结果20例患者TNF-α的平均浓度为(561.0±522.9)pg/ml,平均MLR-BE为(-6.5±37.6)%(阴性14例、阳性6例)。MLR-BE阴性患者的TNF-α水平为(676.1±585.0)pg/ml,显著高于MLR-BE阳性患者的(292.5±159.5)pg/ml(P<0.05)。TNF-α水平与MLR-BE不相关(R2=0.015,P>0.05)。结论MLR-BE可能影响母体Th1/Th2的平衡,从而导致习惯性流产的发生。     

肿瘤患者血细胞粘连试验

根据人体淋巴细胞和其他细胞通过密度梯度离心后在不同比重分离液中有不同的沉淀率,我们用Isopaque-Ficoll淋巴细胞分离液(下称IF液)分离外周血,发现正常人可获得纯净而不混有红细胞的淋巴细胞层,恶性肿瘤患者却产生少量红细胞与淋巴细胞粘连现象(图1)。现将正常人、肿瘤和非肿瘤患者的观察结果,初步报道于后。一、材料和方法 (一)采血对象:正常人187例,恶性肿瘤患者201例,良性肿瘤患者15例,非肿瘤患者133例。 (二)操作方法:抽取静脉血0.5毫升。置于有抗凝剂(草酸钾或肝素)的试管内,加入Hanks溶液0.5毫升,混     

口腔癌患者手术前后细胞免疫功能变化的检测及临床意义

目的 分析口腔癌患者T淋巴细胞免疫的特点及手术对口腔癌患者免疫功能的影响.方法 选用20例口腔癌患者和15例健康志愿者为试验组和对照组, 试验组于手术前、后各1周分2次采取新鲜外周静脉血1mL,对照组采取新鲜外周静脉血1mL,均以肝素抗凝.每份样本取血100μL,分别加入CD3、CD4、CD8、CD56单克隆抗体10μL,检测T淋巴细胞各表型占淋巴细胞总量的百分比,并计算CD4/CD8的比值.再分取抗凝静脉血100μL,分别加入10μL 白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、CD4、干扰素-γ(interferon-γ,INF-γ)单克隆抗体,检测IL-2阳性,INF-γ阳性,IL-2、CD4双阳性及INF-γ、CD4双阳性T细胞占总细胞的百分比.结果 试验组手术前1周与对照组比较CD3、CD4的表达降低,CD8的表达增加,CD4/CD8比值下降(P<0.05).试验组术前淋巴细胞内各细胞因子含量较对照组均明显下降,术后各因子水平有了不同程度的回复.结论 口腔癌患者体内抗肿瘤免疫处于抑制状态,手术对其有一定的改善作用,但仍有必要配合免疫治疗.     

蛋白激酶C对哮喘患者T淋巴细胞核因子—кB活化的调控

为探讨蛋白激酶 C对哮喘患者 T淋巴细胞核因子 - кB(NF- кB)活化的调控作用 ,分别从 16例急性发作期哮喘患者及 16名正常对照者的外周血中分离出 T淋巴细胞并分成 3组培养 ,即空白对照组 ,加入 PKC激动剂 12 -肉豆蔻酰 - 13-乙酸佛波酯 (PMA)的 PMA组 ,同时加入 PMA和 PKC抑制剂 Ro31- 82 2 0的 PMA+Ro31- 82 2 0组。用免疫组织化学染色方法和 Western印迹检测 NF- кB和抑制蛋白 - кB(I- кB)的表达。结果显示 :哮喘 PMA组 NF- кB活化的细胞百分比显著高于空白对照组和正常 PMA组 (P<0 .0 1) ,且 I- кB水平显著低于上述 2组 (P<0 .0 1) ;而哮喘 PMA+Ro31- 82 2 0组 NF- кB活化的细胞百分比显著低于哮喘 PMA组 (P<0 .0 1) ,且 I- кB水平显著高于该组 (P<0 .0 1)。提示哮喘 T淋巴细胞 NF- кB的活化可能受 PKC调控 ,T淋巴细胞 PKC— NF- кB信号传导途径的激活可能是哮喘的发病机制之一     

特发性血小板减少性紫癜患者外周血淋巴细胞的CD_4、CD_(28)表达

目的 :探讨T淋巴细胞表面分子CD4 、CD2 8在特发性血小板减少性紫癜 (ITP)的变化。方法 :用流式细胞术检测 2 1例ITP患者和 9例正常对照外周血淋巴细胞CD+4、CD+2 8、CD+4CD+2 8的表达率以及CD+4T淋巴细胞中的CD+2 8表达率。结果 :ITP患者外周血CD+4、CD+2 8、CD+4CD+2 8表达明显低于正常对照 ,但CD4 细胞中CD+2 8表达与正常对照相比无显著差异。ITP患者外周血淋巴细胞中的CD+2 8表达率与CD+4表达率呈正相关。结论 :ITP患者CD+4T淋巴细胞减少并非因协同刺激信号分子CD2 8表达下降所致 ,CD+4T淋巴细胞无协同刺激信号分子CD2 8表达缺陷     

离体大鼠脾淋巴细胞在高分压氧下产生羟自由基

目的 :探讨高分压氧暴露时离体脾淋巴细胞是否产生自由基及其产生类型。 方法 :(1)在大鼠脾脏淋巴细胞培养液中分别加入超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)和甲酸钠 ,置于压力舱内以 4 0 0 k Pa含 1.5 % CO2 氧气培养 4 h后 ,测定细胞经刀豆球蛋白 (Con A)作用后分泌 IL- 2的能力 ;(2 )在大鼠脾脏淋巴细胞悬液内加入自旋捕捉剂四特丁氮酮 (PBN) ,在6 0 0 k Pa含 1% CO2 的氧气下暴露 1h,以电子自旋共振 (ESR)技术检测自由基。 结果 :高分压氧暴露后脾淋巴细胞经 Con A刺激分泌的 IL- 2显著减少 (P<0 .0 1) ,培养液中添加 CAT和甲酸钠后 ,细胞分泌 IL- 2的能力恢复 (P<0 .0 1和 P<0 .0 5 ) ,SOD没有上述作用 ;ESR检测到淋巴细胞在高分压氧下产生自由基 ,其谱型为一组峰强度比约 1∶ 2∶ 2∶ 1的四峰波谱 ,波谱学分析为 HO·加合物的谱线。 结论 :高分压氧体外暴露时 ,大鼠脾淋巴细胞产生自由基 ,HO·可能是最主要的一种     

尖锐湿疣患者外周血Th1/Th2淋巴细胞比的改变

目的探讨CA患者Th1/Th2淋巴细胞分布失衡情况及其与发病的相关性。方法采用流式细胞分析技术检测40例CA患者及20例健康志愿者的外周血CD4 T淋巴细胞中胞内细胞因子(IFN-γ、IL-4),并分析Th1/Th2比值在CA发病中的作用。结果CA患者外周血分泌IFN-γ的Th1细胞显著减少(P<0.05),而分泌IL-4的Th2细胞显著增高(P<0.05);Th1/Th2比值降低,与健康对照组相比有显著差异(P<0.01)。结论CA患者存在Th1/Th2淋巴细胞分布失衡情况。外周血中Th1细胞减少,Th2细胞增多并相对占优势。Th1/Th2淋巴细胞平衡在CA发病机制及复发中具有重要作用。     

甜杏仁对H2O2诱导大鼠外周淋巴细胞DNA损伤的影响

目的观察甜杏仁对过氧化氢(H2O2)诱导淋巴细胞DNA损伤的影响。方法提取大鼠淋巴细胞并进行分组。除空白、阳性对照组外,实验组分别加入不同浓度的甜杏仁匀浆液(终浓度分别为50、100、150mg/L);在CO2孵育箱继续温孵24h,当细胞在培养瓶中生长近饱和时,除空白对照组外,其余各组均加入H2O2(终浓度为50μmol/L)作用5min。用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术观察各组淋巴细胞DNA损伤情况。结果与空白对照组比较,阳性对照组,加入高、中、低剂量甜杏仁组细胞DNA损伤的程度明显增强(P<0.05);与阳性对照组比较,加入高、中、低不同剂量甜杏仁匀浆液后,细胞DNA的损伤程度明显降低(P<0.05);与低剂量甜杏仁匀浆液组比较,中、高剂量甜杏仁匀浆液组细胞DNA的损伤程度明显减轻,差异均有统计学意义(P<0.05),其中高剂量甜杏仁匀浆液对细胞DNA损伤的保护作用优于中剂量组,但2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论甜杏仁具有一定的抗氧化作用。     

狼毒大戟多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响

目的:探讨狼毒大戟多糖(EFP-AW1)对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子白介素2(IL-2)和干扰素γ(IFN-γ)分泌的影响。方法:制备小鼠脾淋巴细胞,加入EFP-AW1,使终质量浓度分别为0、25、50、100、200 mg/L,再加入Con A,培养60 h后,采用MTT法检测不同质量浓度狼毒大戟多糖EFP-AW1对Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响;将5种不同浓度的EFP-AW1分别加入小鼠脾淋巴细胞培养体系,再加入Con A,培养48 h后,收集培养上清,ELISA法检测不同质量浓度EFP-AW1对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ的影响。结果:与空白组比较,50、100、200 mg/L的狼毒大戟多糖能够促进Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应(P0.05),并能够提高脾淋巴细胞产生IL-2和IFN-γ的水平(P0.05)。结论:狼毒大戟多糖具有一定的免疫增强作用。     

肠道病毒71型手足口病患者外周血淋巴细胞增殖反应

目的 研究肠道病毒71型(EV71)手足口病患者外周血淋巴细胞对不同EV71抗原刺激的增殖反应. 方法 将38例研究对象分为手足口病EV71阳性重症组8例、轻症组10例、EV71阴性组10例、健康对照组10例.外周血单核细胞(PBMC)与EV71合成多肽SP1、SP2、SP3、灭活EV71和植物血凝素(PHA)分别共同孵育,加入胸腺嘧啶核苷(3H-TdR),然后收集细胞于液闪仪测定每分钟脉冲数(cpm). 结果 对不同EV71抗原的淋巴细胞增殖反应发现,以灭活病毒EV71免疫原性最强,SP2次之.EV71轻症和重症患者淋巴细胞增殖反应比较差异无统计学意义(P＞0.05),EV71阴性手足口病患者及健康对照组对EV71抗原未能显示有效的淋巴细胞增殖反应. 结论 灭活EV71免疫原性最强,感染EV71的患者淋巴细胞对EV71抗原刺激呈特异性增殖反应.     

有、无淋巴结转移食管癌患者外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达比较

目的 :比较有、无淋巴结转移食管癌患者手术前、后外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达水平。方法 :采用逆转录聚合酶链反应技术对 2 1例有淋巴结转移、33例无淋巴结转移的食管癌患者手术前、后外周血及 7例正常人外周血中淋巴细胞肝素酶表达水平进行检测。结果 :2 1例淋巴结转移患者 1 9例肝素酶基因阳性表达 ,33例无淋巴结转移的食管癌患者 1 0例肝素酶基因阳性表达。 1 9例有淋巴结转移的肝素酶基因阳性食管癌患者手术前、后外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达水平 (9.91± 2 .4 8,9.33± 2 .2 5 )高于 1 0例未发生淋巴结转移的肝素酶基因表达水平 (8.98±2 .0 1 ,8.87± 1 .97) (P <0 .0 1 ) ;而手术前后外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达水平差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。 7例正常人外周血中淋巴细胞肝素酶均呈阴性表达。结论 :食管癌患者外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达水平与食管癌淋巴结转移有关 ,对食管癌患者外周血中此基因表达水平的检测可能成为预测其转移与否的指标     

瘢痕子宫患者外周血T淋巴细胞Th1/Th2型细胞因子分泌水平检测及意义

目的:检测瘢痕子宫患者外周血T淋巴细胞Th1/Th2型细胞因子分泌水平,探讨瘢痕子宫形成的可能免疫学机制.方法:选择108例瘢痕子宫患者作为瘢痕子宫组,126例非瘢痕子宫患者作为对照组,分别测定并比较两组外周血T淋巴细胞分泌Th1/Th2型细胞因子水平.结果:瘢痕子宫患者组外周血中T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-12水...     

放射治疗对肺癌患者细胞免疫功能的影响

探讨放射治疗（放疗）对非小细胞肺癌（NSCLC）患者细胞免疫功能的影响。方法对比分析48 例接受三维适形放疗的NSCLC 患者放疗前以及放疗第2、4、6 周及放疗后2 周血液中淋巴细胞、白细胞、中性粒细胞的水平的变化情况,计算不同时期淋巴细胞、白细胞、中性粒细胞水平低于正常范围的百分率。结果48 例肺癌患者的临床有效率为72.92%;接受放疗的大部分肺癌患者白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数目与放疗前相比出现下降;放疗结束后2 周白细胞、粒细胞可恢复正常水平,但部分患者淋巴细胞仍未能升至正常范围。结论三维适形放疗会对非小细胞肺癌患者免疫功能造成一定的损害,经过升白细胞治疗可提高白细胞、中性粒细胞水平,但对淋巴细胞无明显作用。放疗后肺癌患者淋巴细胞水平低下的现象值得进一步深入研究。     

p53基因与川崎病患者淋巴细胞凋亡关系探讨

目的：进一步探讨川崎病(KD)急性期患者外周血淋巴细胞凋亡延迟的机理。方法：采用斑点杂交(Dot-blot)检测淋巴细胞p53基因mRNA表达水平;流式细胞仪(FCM)检测p53蛋白质表达阳性细胞百分率。结果：KD患者外周血淋巴细胞p53基因mRNA和p53蛋白质表达水平降低,与正常儿童比较差异显著(P＜0.005);当给予静脉注射免疫球蛋白(IVIG)治疗后或加入抗IL-6单抗培养时,外周血淋巴细胞p53基因mRNA和P53蛋白质表达水平提高。结论：KD急性期患者外周血淋巴细胞p53基因表达水平降低,其原因可能与本病患者异常升高的IL-6有关。p53基因具有促进细胞凋亡的作用,KD患者外周血淋巴细胞凋亡延迟可能与高浓度IL-6抑制p53基因的表达有关。